WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 11 |

В первойглаве на основе анализалитературных данных обобщены сведения орадиофармпрепаратах, использующихся внастоящее время в медицинской практике длядиагностики легких, исследованиягемодинамики и изучения костной системы.Рассмотрены методы синтеза и анализарадиофармпрепаратов с технецием-99м.Рассмотрена взаимосвязь аналитическихпоказателей качества и клиническихтребований для РФП.

Вторая глава посвящена разработке методованализа микросфер альбумина; микросферальбумина, модифицированных оловом(II);реагента и РФП на основе микросферальбумина.

Третья глава посвящена разработке методованализа реагента и РФП на основе альбумина.

В четвертой главеприведены результаты исследований поразработ­кеметодов анализа субстанции ОЭДФ, реагентаи РФП на основе ОЭДФ.

В пятойглаве изложено краткоеобсуждение итогов работы.

СОДЕРЖАНИЕРАБОТЫ

  1. Исходные вещества и методыисследования

Объектами исследованияявлялись: 1) микросферы альбумина (МСА)сыворотки крови человека; микросферыальбумина, модифицированные оловом(II)(МСА(Sn)); реагент на основе МСА(Sn);радиофармпрепарат "Микросферы альбумина, 99мТс";

2) реагентна основе альбумина сыворотки кровичеловека; радиофармпрепарат «Альбумин,99мТс»; 3)субстанция ОЭДФ; реагент на основе ОЭДФ;радиофармпрепарат «ОЭДФ,99мТс».

МСА, МСА(Sn), реагентна основе МСА(Sn), реагент на основеальбумина, реагент на основе ОЭДФ былиполучены в лаборатории экспериментальнойядерной медицины ГУ-МРНЦ РАМН (г. Обнинск).РФП "Микросферы альбумина,99мТс", «Альбумин,99мТс»,«ОЭДФ,99мТс»получали из соответствующихреагентов добавлением к ним элюата 99мТс изгенератора 99Мо/99мТспроизводства ФГУП ГНЦ РФ -Физико-энергетический институт, г.Обнинск.

В качестве препаратовсравнения использовали«Альбумин,131I» (ФГУП«НИФХИ им. Л.Я. Карпова»,Россия), TСK-2,ТСК-5 («CisBio», Франция), «Технефор,99мТс» («Диамед»,Россия), разрешенные кклиническому применению.

В работе использованыреактивы, которые описаны в ГФ XI, вып. 2,квалификации х.ч. и о.с.ч. (длястандартизации исходных раствороволова(II); для разбавления элюатов 99мТс с объемнойактивностью 200-1600 Мбк (5-40 мКи/мл) доактивности 40Мбк ( 1 мКи/мл)0,9% раствором хлорида натрия).

Для приготовлениярастворов использовали дистиллированнуюводу, полученную в системе Milli-IIQ(Япония).

Исходные растворыолова(II) с концентрацией 0,8·10-2 - 4,2·10-2 М (1-5 мг/мл) готовилирастворением навески безводного хлоридаолова(II) с содержанием олова(II) не менее 95% в0,1 М растворе соляной кислоты в атмосфереаргона. Содержание олова(II) в исходныхрастворах определяли титрованием йодатомкалия, а в разбавленных растворах -спектрофотометрически с перренатом калия.Растворы олова(II) меньших концентрацийготовили разбавлением исходных ииспользовали свежеприготовленными.

Биуретовый реактивготовили по методике, описанной в ГФ XI [вып.2, С. 34].

Для фильтрованиясуспензии при определении РХПиспользовали мембранные фильтры “Millipore” сразмером пор не более 1 мкм, а такжебумажные фильтры “синяя лента” фирмы“Filtrak” (Германия).

Использовалихроматографическую бумагу FN 17 фирмы «Filtrak»(Германия), Whatman 1, Whatman 31ET (Англия);хроматографические пластинки фирмы «Merck»(Германия) и «Sorbfil» (Россия).

Для определения олова(II)были использованы индикаторные трубкипроизводства ООО «МедЭкоТест» (Россия)(свидетельство о государственнойметрологической аттестации УНИИМГосСтандарта РФ ТС-224.09/009-2004).

Определение диаметров иколичества частиц проводили с помощьюоптического микроскопа МБИ-6, снабженногоокулярным микрометром МОВ-1. Дляопределения количества частиц в реагентеиспользовали камеру Горяева для счетаформенных элементов крови, модель 851 (ТУ64-1-816-88).

Взвешиваниеосуществляли на аналитических весах фирмы"Sartorius" (Германия), модель A 200 S, с точностью ±0,1 мг.

Регистрацию УВИспектров поглощения и измерениеоптической плотности растворов проводилина спектрофотометрах: СФ-26 (Россия) и «PhilipsScientific UV-VIS» модель PU 8745 (Англия).

ИК-спектрырегистрировали на приборе «Philips», модель PU9512 (Англия).

Спектры ПМРрегистрировали на приборе «Bruker АМ-300» начастоте 300 МГц, спектры ЯМР 31Р – на «Bruker АС-200» начастоте 81 МГц.

Спектральный анализпроводили с использованием спектрографаИСП-30.

Для определенияостаточных органических растворителей всубстанции ОЭДФ использовали газовыйхроматограф фирмы «Perkin Elmer».

Значения рН растворовизмеряли на ионометре «Эксперт-001» (Россия)со стеклянным комбинированным электродом«ЭСК-10601/7» ГОСТ 22261 и ТУ 4215-004-35918409-97.Потенциал асимметрии устанавливали пооксалатному (рН 1,68) и боратному (рН 9,18)буферным растворам. Потенциометрическоетитрование проводили с помощьюавтоматической установки RTC822 фирмы“Radiometer” (Дания).

Температуру плавленияопределяли на «Приборе для определениятемпературы плавления с диапазономизмерений в пределах от 20 до 360С» (ПТП)(Россия).

Измерениерадиоактивности проводили насцинтилляционном счетчике фирмы "MesselectronicDresden GMBH" (Германия).

Функциональнуюпригодность РФП "Микросферыальбумина, 99мТс" изучали на 620 здоровых беспородныхкрысах-самцах, массой 180-200 грамм, 13 кроликахпороды Шиншилла массой 2,5-3,0 кг. На крысахизучали распределение РФП по органам итканям в различные сроки (от 3 мин до 24 ч)после внутривенной инъекции в объеме 0,2 мл(10-15 Мбк) препарата. За 100%-ный эталонпринимали тушку животного, а накоплениерадиоактивности в органах и тканях считалипо отношению к тушке. Биопробы органов итканей радиометрировали в колодезномсчетчике с пересчетным устройством NK-350(Венгрия). Результаты подвергалистатистической обработке.

Статическиесцинтиграммы легких кроликоврегистрировали на гамма-камере DSX фирмы "SophaMedical" (Франция) в двух прямых проекциях(передней и задней) через 2-5 мин послевведения 25-30 МБк РФП в краевую вену уха подвнутривенным нембуталовым наркозом (40мг/кг).

  1. Разработка методов анализамикросфер альбумина; микросфер альбумина,модифицированных оловом(II); реагента и РФПна основе микросфер альбумина

Разработана схемахимико-фармацевтического анализа МСА,выбраны параметры МСА, позволяющиенаиболее полно осуществлять иххарактеристику: описание, размер частиц(диаметр), растворимость, подлинность,количественное определение, потеря массыпри высушивании, прозрачность и цветностьраствора МСА, рН 1%-ной водной вытяжки,набухание, удельный объем (насыпнаяплотность). Разработаны методикиопределения указанных параметров.

МСА представляют собойсыпучий порошок светло-желтого цвета.Отбор проб МСА для проведения анализаосуществляли методом квартования.

Микроскопическоеисследование МСА показало, что они имеютсферическую форму. При исследовании 20образцов МСА установлено, что в каждом изних не менее 95% частиц имеют диаметр от 10 до30 мкм (n=3, P=0,95). Средний диаметр микросферсоставляет 18,1 ± 1,2 мкм.

МСА практическинерастворимы в воде, 95%-ном этаноле,хлороформе и эфире; умеренно растворимы в 2М растворе NaOH при нагревании на кипящейводяной бане. Получаемый при этом растворпрозрачен, имеет желтую окраску,находящуюся между окраской 3 и 4 эталоновшкалы "б" эталонов желтых оттенков.

Показана возможностьприменения для МСА известныхспектрофотометрических методик,используемых для определения белка внативном альбумине. Одна из них основана насветопоглощении водных растворов белка вобласти 260-300 нм с максимумом при 278 нм.Другая методика основана на образовании вщелочной среде фиолетового комплекса Сu(II)с пептидными связями молекулы белка смаксимумом поглощения при 540 нм.

Изучены УФ спектрыпоглощения щелочных растворов (в 2 Мрастворе NaOH) более 60 серий альбуминасыворотки крови человека и МСА. Спектрыпоглощения растворов альбумина и МСА в 2 Мрастворе NaOH практически совпадают и имеютмаксимум при 290 нм. Эти наблюдения хорошосогласуются с литературными данными,описывающими батохромный сдвиг на 12 нм (от278 до 290 нм) максимума поглощения белка всильно щелочной среде. Такое явлениеобъясняется ионизацией фенольных групптирозиновых остатков белка; известно, что вслучае триптофана такой сдвиг не имеетместа, а вкладом фенилаланина в поглощениебелков в области 270-300 нм можно пренебречь.Линейная зависимость оптической плотностирастворов альбумина и МСА в 2 М NaOH от ихконцентрации при 290 нм наблюдается вдиапазоне 0,1-1,0 мг/мл. Вычислены удельныепоказатели экстинкции для 1% щелочныхрастворов альбумина и МСА при 290 нм, равные10,2 ± 0,4 (n=5, P=0,95) и 10,1 ± 0,4 (n=5, P=0,95),соответственно. Относительная погрешностьопределения не превышает ± 5,0%.

Изучены спектрыпоглощения щелочных растворов альбумина иМСА с биуретовым реактивом. В спектрахнаблюдается широкая полоса поглощенияс максимумомпри 540 нм. Спектры биуретовых комплексовальбумина и МСА практически совпадают между собой исо спектрами, описанными в литературе.Соблюдение закона Бугера-Ламберта-Бееранаблюдается как для биуретовых комплексовальбумина, так и для растворов МСА присодержании от 0,25 до 2,5 мг основноговещества в 1 мл измеряемого раствора при 540нм. Вычислены удельные показателиэкстинкции 1% щелочных растворов альбуминаи МСА с биуретовым реактивом: 2,75 ± 0,10 (n=5,P=0,95) и 2,81 ± 0,13 (n=5, P=0,95), соответственно. Онипрактически совпадают друг с другом и сизвестным из литературы для комплексанативного белка с биуретовым реактивом.Относительная погрешность определения непревышает ± 7,2%.

Потерю массы привысушивании определяли при нагреванииобразцов микросфер до 100-105 С; она не превышает3,0%.

Удельный объем МСАизменялся в пределах от 1,1 до 1,4 см3/г.

Набухание МСАпроисходит практически мгновенно. Размерих увеличивается в среднем на 15%, но приэтом не менее 95% набухших МСА имеютдиаметры от 10 до 35 мкм. Средний диаметрнабухших МСА составляет 20,9 ± 1,4 мкм (n=3,P=0,95).

рН фильтратов 1%-нойводной вытяжки изменяется от 4,8 до 5,2.

Исследованастабильность МСА. МСА могут храниться втечение 12 месяцев при температуре +2 -8 С в условиях холодильника безизменения их свойств.

Характеристики и нормыпоказателей качества МСА приведены в табл.1.

Таблица 1.Характеристики и нормы показателейкачества МСА

Наименование показателей

Характеристика показателей инорм

Описание

Сыпучийпорошок светло-желтого цвета,

без запаха

Растворимость

Практически нерастворим в воде, 95%этиловом спирте, хлороформе, эфире (1:10000)

Реакции подлинности

Е1%1см при max = 290 нм от 9,7 до 10,5;
Е1%1см при max = 540 нм от 2,7 до2,9

Прозрачность и цветность1% раствора МСА

в 2 Н NaOH

Прозрачныйраствор, цветность между 3 и 4 эталонамишкалы "б" эталонов желтых оттенков

рН 1% водной вытяжки

4,8 -5,2

Диаметр 95% МСА, мкм

10 - 30

Средний диаметр МСА, мкм

18,1 ± 1,2

Потеря массы при высушивании,%

Не более3,0

Диаметр 95% МСА (набухших) в 0,9% NaCl,мкм

10 - 35

Средний диаметр набухших МСА в 0,9%NaCl, мкм

20,9 ± 1,4

Удельный объем, см3/г

1,1 -1,4

Срок годности

12месяцев

При разработке методиканализа МСА(Sn) целесообразно осуществлятьих контроль по схеме, разработанной дляМСА, включающей параметры, выбранные ранеедля МСА. Определение показателей проводилипо методикам, аналогичным описанным дляМСА. В связи с тем, что МСА(Sn) содержат олово,возникла необходимость в разработкеметодики его определения вмодифицированных микросферах.

Микросферы альбумина,модифицированные Sn(II), представляют собойсыпучий порошок светло-желтогоцвета.

Исследование подмикроскопом показало, что МСА(Sn)представляют собой частицы сферическойформы. При исследовании 15 образцов МСА(Sn)установлено, что в каждом из них не менее 95%частиц имеют диаметры от 10 до 30 мкм. Среднийдиаметр модифицированных микросферсоставляет 19,2 ± 1,3 мкм (n=3, P=0,95).

МСА(Sn) практическинерастворимы в воде, 95%-ном этаноле,хлороформе и диэтиловом эфире; умереннорастворимы в 2 М растворе гидроксида натрияпри нагревании на кипящей водяной бане.Получаемый при этом раствор прозрачен,имеет желтую окраску, находящуюся междуокраской 3 и 4 эталонов шкалы "б" эталоновжелтых оттенков.

Показана возможностьприменения спектрофотометрическихметодик для определения белка в МСА(Sn) ивыбраны экспериментальные условия для ихпроведения.

Изучены УФ спектрыпоглощения растворов более 30 образцовМСА(Sn) в 2 М NaOH в сравнении со спектрамищелочных растворов альбумина и МСА.Спектры поглощения растворов альбумина,МСА и МСА(Sn) в 2 М NaOH практически совпадаютмежду собой и имеют максимум при 290 нм.Линейная зависимоть оптической плотностирастворов альбумина, МСА и МСА(Sn) в 2 М NaOH отих концентрации при 290 нм наблюдается вдиапазоне 0,1-1,0 мг/мл. Определены удельныепоказатели экстинкции для 1% щелочныхрастворов альбумина, МСА и МСА(Sn) при 290 нм,которые составляют: 10,2 ± 0,4 (n=5, P=0,95), 10,1±0,4 (n=5,P=0,95) и 10,3 ± 0,5 (n=5, P=0,95), соответственно.Относительная погрешность определения непревышает ± 5,0%.

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 11 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»