WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 8 |

Низинный древесно-травяной

т/м «Клюквенное»

10-50

25

8,1

Примечание: т/м – торфяное месторождение.

Обнаружение основных групп БАВ в торфе проводили общепринятыми в фитохимическом анализе качественными реакциями, количественное определение БАВ проводили титриметрическим, гравиметрическим и спектрофотометрическим методами. Групповой состав органического вещества торфов определяли по методу Н.Н. Бамбалова (1998 г). В результате химического анализа были выделены следующие группы соединений: липиды (битумы), водорастворимые (ВРВ), легкогидролизуемые (ЛГВ), гуминовые вещества (ГВ): гуминовые кислоты (ГК) и фульвокислоты (ФК), трудногидролизуемые (ТГВ) вещества и лигнин (негидролизуемый остаток).

Методы исследования химической структуры гуминовых кислот

Элементный состав образцов ГК определяли методом пиролиза на С,Н,N – анализаторе «Carlo Erba Strumentazione» модель 1106 (пр-во Италия), содержание кислорода определяли по разности. Регистрацию электронных спектров поглощения 0,001 %-ных водных растворов ГК проводили на УФ - спектрофотометре Uvikon 943 (пр-во Италия) в диапазоне длин волн 190-700 нм в кварцевой кювете толщиной 1 см. Регистрацию ИК-спектров ГК проводили на ИК – Фурье - спектрометре Nicolet 5700 (пр-во Thermo Electron corp., США). Анализ образцов проводили по методу прессования с KBr в соотношении 1:100 соответственно, в интервале значений частоты от 500 до 4000 см-1. Регистрацию ЭПР спектров осуществляли при 20-25°С в атмосфере воздуха на Bruker EMX EPR спектрометре Х-частотного диапазона (пр-во Германия). Регистрацию спектров ПМР и ЯМР осуществляли в растворе на радиоспектрометре ЯМР фирмы Bruker (пр-во Германия) с использованием методики Фурье-преобразования с накоплением сигнала в интервале времени от нескольких часов до суток. ВЭЖХ анализ выполняли на эксклюзионной колонке Supelco PROGEL-TSK GMPXL 300x7.8mm (пр-во Япония), сорбент – 13 микрон, эффективность колонки – 11000 т.т. Подвижная фаза - вода, 1 мл/мин. Использовался хроматограф Agilent 1100 (пр-во Германия) с вакуумным дегазатором, четырехканальным градиентным насосом и колоночным термостатом. Регистрация компонентов проводилась с помощью спектрофотометрического детектора – детекция на длине волны 190 нм. Содержание кислых функциональных групп определяли методами обратного титрования: баритовым (сумма фенольных и карбоксильных групп) и кальций-ацетатным (содержание карбоксильных групп) согласно стандартным методикам (Данченко Д.Д., 1998). Содержание фенольных гидроксилов находили по разности между суммарным содержанием функциональных групп и содержанием карбоксильных групп.

Методы исследования биологической активности гуминовых кислот

Экспериментальные животные. Эксперименты проведены на 450 половозрелых белых беспородных мышах-самцах массой 18-22 г и 250 половозрелых белых беспородных крысах-самцах массой 180-200 г из питомника Рассвет (г. Томск). Содержание лабораторных животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных. Животные содержались на стандартном лабораторном рационе в условиях свободного доступа к пище и воде. Все манипуляции с животными осуществлялись в осенне-зимний период, в первой половине дня. Экспериментальные исследования проведены в соответствии с правилами лабораторной практики (GLP), Приказом МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г «Об утверждении правил лабораторной практики», Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (2005 г).

Оценка острой токсичности проведена в соответствии с Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (2005 г). Эксперименты проведены на 100 половозрелых белых беспородных мышах-самцах массой 18-22 г и 100 половозрелых белых беспородных крысах-самцах массой 180-200 г. Острую токсичность оценивали при внутрижелудочном и внутрибрюшинном способах введения.

Патоморфологическое исследование. Проводили вскрытие погибших животных – крыс, макроскопическое и микроскопическое исследование внутренних органов. Кусочки органов фиксировали в формалине и заливали в парафин. Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином и эозином.

Исследование динамики концентраций в сыворотке крови. Эксперименты проведены на белых беспородных крысах-самцах массой 180-200 г, при двух способах введения: внутрижелудочном и внутрибрюшинном. В сыворотке крови экспериментальных животных проводили определение концентрации ГК спектрофотометрическим методом при длине волны =465 нм (спектрофотометр Uvikon 943). Концентрацию ГК рассчитывали по калибровочной кривой.

Исследование влияния на реологические свойства крови. О влиянии на реологические свойства крови судили по изменению показателей обратимой агрегации эритроцитов (ОАЭ) крыс при внесении исследуемого препарата in vitro в пробу цельной крови крыс. Регистрацию показателей ОАЭ осуществляли фотометрическим вибрационным методом (Тухватулин, 1986). Расчетным путем определялся индекс агрегации – Ja = Ud / , характеризующий соотношение агрегационных и дезагрегационных процессов.

Оценка антигипоксической активности проведена на половозрелых белых беспородных мышах-самцах массой 18-22 г. Антигипоксическую активность исследуемого препарата ГК оценивали на модели гемической гипоксии (Хабриев Р.У., 2005) и модели гипоксии объема (Островская Р.У., 1982; 1993) при внутрижелудочном профилактическом 5-кратном введении исследуемых ГК в диапазоне доз 25-100 мг/кг. Контролем служила группа интактных животных.

Гепатозащитную активность исследуемого препарата оценивали на модели острого токсического гепатита у крыс-самцов. Острый токсический гепатит вызывали подкожным введением крысам 50 % масляного раствора четыреххлористого углерода (CCl4) из расчета 0,4 мл CCl4 на кг массы в течение 4 дней один раз в сутки. Исследуемый препарат вводили внутрижелудочно в дозах 25-100 мг/кг 2 раза в сутки, по лечебно-профилактической схеме. В качестве препарата сравнения использовали гепатозащитный препарат Карсил. На 5-ые сутки эксперимента животных декапитировали под легким эфирным наркозом и осуществляли забор образцов крови и печени. В сыворотке крови определяли уровень общего билирубина и малонового диальдегида, активность печеночноспецифических ферментов :аспартат- и аланин- аминотрансфераз (АсАТ и АлАТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), гамма-глутамил-транспептидазы (-ГГT), по общепринятым методам, используя стандартные наборы фирм Cormay, Biocon (Германия), Vital Diagnostics (Санкт-Петербург), Вектор-Бест (Новосибирск). В гомогенате печени определяли МДА, содержание МДА рассчитывали в нмоль/г ткани. При расчете использовался коэффициент молярной экстинкции 1,56 х I0 5 ммоль-1 см2. Кусочки печени фиксировали в формалине и заливали в парафин. Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Проводили микроскопическое исследование образцов печени.

Оценка влияния ГК на окислительное фосфорилирование в митохондриях печени и головного мозга мышей проведена на 72 белых беспородных мышах-самцах массой 18-22 г. в условиях нормобарической гиперкапнической гипоксии при курсовом профилактическом внутрибрюшинном введении ГК в сравнении с дигидрокверцетином. Контролем служила группа интактных животных. Функциональное состояние митохондрий (МХ) оценивали по дыхательной активности гомогената головного мозга и печени полярографическим методом на анализаторе «Эксперт-001-401» (Эконикс-Эксперт, Москва), имеющем датчик измерения растворенного в воде кислорода. Рассчитывали скорости потребления кислорода МХ в метаболических состояниях до (V4п), во время (V3) и после (V4о) цикла фосфорилирования 1·10-4 М АДФ при окислении сукцината (ЯК, 5·10-3 М) или НАД-зависимых субстратов малата и глутамата (МГ, по 3·10-3 М) в присутствии ингибитора СДГ малоната (МЛН, 2·10-3 М) или ингибитора аминотрансфераз аминооксиацетата (АОА, 5·10-4 М). Для оценки энергетического статуса вычисляли коэффициенты стимуляции дыхания (СД=V3/V4п), дыхательного контроля (ДК=V3/V4о) и сопряженности окислительного фосфорилирования – АДФ/О. Во всех измерениях абсолютные значения скоростей потребления кислорода выражены в нгат. о/мин мг белка (нанограмм атомарного кислорода в минуту на 1 мг белка МХ)

Статистическая обработка результатов. При обработке результатов исследований использовали параметрический (t-критерий Стьюдента) и непараметрические (U-критерий Манна-Уитни, W-критерий Вилкоксона и 2 -критерий) методы с определением средней арифметической (X) и ее стандартной ошибки (х). Значимость различий считали достоверной при Pt, Pu < 0,05. Расчёты проводили с использованием программы Statistica 6.0 для Windows.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследования показали (табл. 2), что в каждом случае ботанический состав отражает принадлежность исследуемых торфов к конкретной единице растительных ассоциаций, развивающихся в определенных условиях, в зависимости от трофности болотной среды, в которой происходило образование торфа.

Таблица 2

Ботанический состав исследуемых торфов

Описание объекта исследования

Ботанический состав

Характеристика торфа

Большое Васюганское болото, участок «Высокий рям», l=10-50см, R=35%, А=6,3%.

Pinus sylvestris (15); Carex lasiocarpa (5); Eriophorum vaginatum (25); Sphagnum magellanicum (15); Sphagnum angustifolium (25); Кустарнички (10)

Верховой тип сосново-пушицевый вид

Большое Васюганское болото, участок «Низкий рям», l=150-200см, R=45%, А=4,8%.

Pinus sylvestris (5); Carex limosa (5); Carex lasiocarpa (55); Eriophorum vaginatum (5); Menyanthes trifoliate (5); Sphagnum magellanicum (10); Кустарнички (10)

Переходный тип осоковый (лазиокарпа) вид

Большое Васюганское болото, участок «Низкий рям», l=200-250см, R=40%, А=4,3%.

Betula nana (5); Carex lasiocarpa (15); Carex rostrata (10); Eriophorum polystachyon (5); Menyanthes trifoliate (10); Equisetum sp. (10); Sphagnum centrale (10); Drepanocladus sendtneri (20)

Низинный тип Травяно-моховый вид

Большое Васюганское болото, участок «Осоково-сфагновая топь», l=230-250см, R=45%, А=10,4%.

Pinus sylvestris (5); Betula nana (5); Carex lasiocarpa (20); Carex omskiana (5); Menyanthes trifoliate (5); Equisetum sp. (30); Sphagnum sect.cuspidata (5); Sphagnum centrale (5); Drepanocladus sendtneri (10)

Низинный тип Травяной вид

Торфяной месторождение «Клюквенное», l=10-50см, R=25%, А=8,1%.

Carex lasiocarpa (10); Carex cespitosa (5); Carex omskiana (15); Menyanthes trifoliate (25); Equisetum fluviatile (10); Sphagnum centrale (5); Древесина кустарников (30)

Низинный тип Древесно-травяной вид

Примечание: l, см – глубина образца; R, % – степень разложения торфа; А, % – зольность торфа.

Исследуемые торфа относятся к трём типам - верховой, переходный и низинный, и согласно процентным соотношением растительных остатков, представлены пятью различными видами: сосново-сфагново-пушицевым, осоковым, травяно-моховым, травяным и древесно-травяным.

Из результатов анализа группового состава органического вещества (табл. 3) пяти видов торфа следует, что все отклонения в содержании основных групп связаны с ботаническим составом, наиболее представительной в количественном отношении является группа ГК, содержание которой во всех торфах максимально.

Таблица 3

Групповой состав органического вещества исследуемых торфов (%, ОВ)

Содержание ОВ, % от СВ

Липиды

Гуминовые вещества

ВРВ+ЛГВ

ТГВ

НГВ (лигнин)

всего

ГК

ФК

Сосново-сфагново-пушицевый верховой торф, R=35%

93,70±0,13

9,51

±0,33

43,48

±0,28

38,41

±0,14

5,07

±0,30

14,72

±0,52

4,92

±0,13

27,37

±0,28

Осоковый (лазиокарпа) переходный торф, R=45%

95,11±0,13

6,74

±0,23

44,91

±0,30

40,40

±0,11

4,51

±0,35

15,41

±0,44

6,50

±0,12

26,44

±0,36

Травяно-моховый низинный торф, R=40%

95,74±0,12

3,62

±0,10

42,78

±0,25

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 8 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»