WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 | 8 |   ...   | 11 |

35,7+4,11**

74,9+5,67

Апудоцитов

4,1+0,89

1,4+0,61

3,2+0,64

Примечание - *МЭЛ – межэпителиальные лимфоциты

** Достоверность различий по отношению к ИК р<0,05

Таким образом, по результатам морфометрического анализа испытуемый штамм, введенный однократно в дозе 5х109 м.к., обладал достаточной протективной активностью и защищал биомоделей от контрольного заражения 1х109 м.к. вирулентного штамма V. cholerae eltor Ogawa Р3122.

Исследование рекомбинантного штамма V. cholerae КМ182, проведенное по разработанной схеме, позволило дать более точную характеристику результата взаимодействия вирулентных холерных вибрионов О139 серогруппы с кишечником предварительно иммунизированных животных (таблица 11).

При ультрамикроскопическом анализе, несмотря на общую схожесть и относительную доброкачественность изменений, наблюдаемых после введения биомоделям рекомбинантных штаммов холерных вибрионов как 01, так и 0139 серогрупп, был выявлен ряд особенностей в развитии у них компенсаторных реакций. Так, после введения V.cholerae КМ182 имело место длительное обнаружение единичных микробных клеток как на поверхности слизистой оболочки тонкого кишечника животных, так и в составе фагоцитированных включений в гистиоцитах. Факт длительного (14-е сутки после инокуляции) пребывания холерных вибрионов 0139 серовара в слое кишечной слизи у подопытных животных объяснял наличие инфильтрации слизистой и СПС оболочки кишечника биомоделей

Таблица 11. Характеристика клеточных элементов слизистой оболочки ЖКТ взрослых кроликов, зараженных вирулентными холерными вибрионами на фоне предварительной иммунизации V. cholerae КМ 182

Показатель

Опытная группа

Контроль заражения

Интактный контроль (ИК)

Двенадцатиперстная кишка

МЭЛ*

36,5+4,74

51,3+4,92

32,1+6,59

Бокаловидные клетки

37+8,41

68,8+4,26

59,9+7,79

Апудоциты

3,8+1,03

2,9+0,89

3,6+0,64

Подвздошная кишка

МЭЛ*

79,7+9,87

94,8+14,14

76,4+15,8

Бокаловидные клетки

62,0+7,32

47,5+6,22

47,6+3,44

Апудоциты

4,4+1,34

1,8+0,32**

3,0+0,19

Начальные отделы толстого кишечника

МЭЛ*

56,6+7,06

60,5+5,7

46,7+14,4

Бокаловидные клетки

71,1+6,47

60,5+5,7

84,9+5,67

Апудоциты

5,1+1,72**

2,7+0,54

3,6+1,12

Примечание - * МЭЛ – межэпителиальные лимфоциты

** достоверность различий по отношению к ИК р<0,05

значительным количеством эозинофильных гранулоцитов в стадии активного синтеза и умеренное мембраноповреждающее действие рекомбинантного штамма.

Но, несмотря на усиление активности функциональных систем макроорганизма в ответ на введение холерных вибрионов 01 и 0139 серогрупп рекомбинантных штаммов, в клетках сохранялось равновесие между процессами синтеза и распада, что свидетельствовало о доброкачественности происходящих в них изменений и, следовательно, об определенной клеточной адаптации к воздействию этими агентами.

Таким образом, применение ультрамикроскопического анализа изменений в клетках подопытных животных на этапах авторского изучения рекомбинантных штаммов холерных вибрионов, направленного на уточнение значимости тех или иных адаптационно-компенсаторных процессов, выявляемых при световой микроскопии, способствовало повышению информативности проводимых исследований.

По представленной ранее схеме было проведено исследование особенностей течения инфекционного процесса у биомоделей, предварительно иммунизированных коммерческими (холерной химической бивалентной таблетированной вакциной производства РосНИПЧИ «Микроб», коммерческой вакциной Cholera-Impstoff) и экспериментальными препаратами (препараты «теней» V.cholerae О1 и О139 с токсинкорегулируемыми пилями адгезии -VCG-TCP- и без них, полученные путем контролируемой экспрессии гена E фага PiX174, кодирующего синтез мембранного протеина Е).

Оценку протективных свойств коммерческой холерной вакцины производства РосНИПЧИ «Микроб» проводили с использованием 2-х биомоделей: половозрелых беспородных мышей (модель - «запечатанные мыши») [Richardson S.H., et al., 1984] и взрослых кроликов (RITARD) [Spira W.M. et al., 1981].

Инфекционный процесс у предварительно иммунизированных мышей протекал доброкачественно, сопровождался явлениями иммунологической перестройки в иммунокомпетентных органах, чему соответствовали компенсаторные защитные реакции со стороны апудоцитов кишечника в виде некоторого повышения их функциональной активности. Независимо от используемой биомодели (беспородные мыши или взрослые кролики) общие тенденции в реакции этих клеток отличались от той, что развивается при инфекционном процессе в интактном организме.

У предварительно иммунизированных животных вирулентные холерные вибрионы вызывали умеренное функциональное напряжение апудоцитов кишечника в виде незначительного увеличения их количества и относительного опустошения клеток.

Анализ морфометрических показателей, характеризующих изменения у зараженных на фоне предварительной иммунизации кроликов (рис.1), выявил определенную зависимость между количеством НЭК в лимфоидных органах биомоделей и степенью их иммунологической перестройки. В частности, имела место средней силы прямая корреляционная связь (r = 0,4) между количеством аргирофильных клеток и величиной гиперплазии фолликулов в мезентериальных лимфатических узлах животных. Описанные изменения количества и морфофункционального состояния апудоцитов в этих органах отчасти отражали регуляторные свойства синтезируемых ими гормонов (серотонин, гистамин). Мобилизация нейроэндокринного окружения иммунокомпетентных органов привитых животных, заключающаяся в достоверном (р < 0,05) увеличении числа апудоцитов по отношению к контролю, свидетельствовала об усилении синтеза ими БАВ и характеризовала стадию ограничения интенсивности иммунопатологических реакций при введении вирулентных холерных вибрионов, что укладывалось в общую закономерность изменений апудоцитов при вторичном иммунном ответе.

Таким образом, вирулентные холерные вибрионы в организме предварительно иммунизированных коммерческими препаратами биомоделей, вызывая развитие минимальных изменений со стороны внутренних органов, в ЖКТ сталкивались с функционирующим вследствие иммунизации «защитным барьером» из плазматических клеток, МЭЛ, активных зон в лимфоидной ткани, ассоциированной с кишечником, и клеток APUD-системы.

При испытании эффективности экспериментальных препаратов были выявлены определенные закономерности в изменении числа, морфофункционального состояния апудоцитов кишечника и НЭК в лимфоидных органах в зависимости от используемого препарата, способа и кратности его введения, степени выраженности иммунологической перестройки в органах иммунной системы на момент заражения, характера последующей обработки биомоделей. Впервые было показано, что оценка состояния апудоцитов кишечника в совокупности с другими морфометрическими показателями изменений ЖКТ является достаточно информативным критерием для характеристики инфекционного процесса у предварительно иммунизированных животных.

На основании этого была разработана система оценки показателей морфофункционального состояния клеток APUD-системы организма подопытных животных при первичном и вторичном иммунном ответе. Проведено сравнение двух групп экспериментальных препаратов, полученных на основе холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп и показаны преимущества первых перед вторыми.

По результатам проведенных исследований был предложен способ оценки качества противохолерных вакцин, заключающийся в использовании минимального набора хорошо воспроизводимых гистологических и гистохимических методик в сочетании с морфометрическим анализом для характеристики морфофункционального состояния систем макроорганизма, реагирующих на патоген. Эффективность местной защитной реакции макроорганизма при противохолерной вакцинации оценивали по изменению состояния клеток: МЭЛ, апудоцитов, бокаловидных клеток. Полученные количественные характеристики, отражающие характер и направленность адаптационно-компенсаторных реакций у биомоделей, представляли в виде ассоциаций показателей (коэффициентов, индексов), что значительно упрощало дальнейшую трактовку результатов по выявлению преимуществ тех или иных вакцинирующих препаратов, повышало информативность и объективность доклинических исследований новых противохолерных препаратов (таблица 12). Согласно полученным данным, наибольшей протективной активностью среди коммерческих препаратов обладала вакцина бивалентная таблетированная производства РосНИПЧИ «Микроб», среди экспериментальных препаратов - препараты «VCG+TCP».

Во второй части работы были проведены исследования по количественной оценке изменений в организме биомоделей, обусловленных влиянием чумного и туляремийного микробов штаммов с различной генетической характеристикой, охарактеризованы реакции функциональных систем экспериментальных животных, зараженных вирулентными культурами указанных возбудителей на фоне приобретенной резистентности к чуме и туляремии, проведено комплексное исследование противочумного и противотуляремийного вакцинного процессов.

Для сравнительного морфометрического исследования были взяты культуры вирулентного штамма Y.pestis 231 (pFra+, pPst+, pCad+, Pgm+); штаммов, выделенных в 2006 г. на территории Прикаспийского природного очага чумы - Y.pestis 770, 6205, 6215 (pFra+, pPst+, pCad+, Pgm-) и вакцинного штамма Y.pestis EV (pFra+, pPst+, pCad+,Pgm-) линии НИИЭГ.

Алгоритм исследования включал анализ изменений в месте входных ворот инфекции, морфометрическую характеристику адаптационно-компенсаторных реакций макроорганизма с учетом реакции клеток нейроэндокринной системы.

Наиболее показательными были изменения со стороны НЭК в лимфоидных органах. На введение культур вирулентного штамма Y.pestis 231 отмечали резкое угнетение НЭК. Инокуляция мышам Pgm- природных штаммов чумного микроба приводила к относительной активации НЭК в лимфоидных органах, но менее выраженной, чем при введении вакцинного штамма Y.pestis EV.

Резкое угнетение ПВО у животных, зараженных Y.pestis 231 сопровождалось относительной активацией НЭК в легких. Аналогичная зависимость прослеживалась и на введение Pgm- штаммов, но диапазон изменения учитываемого показателя был близок к значению у контрольных животных.

А

Б

Рис.1. Морфометрическая характеристика состояния: А.- селезенки; Б.- мезентариальных лимфатических узлов взрослых кроликов, зараженных холерными вибрионами по методу RITARD на фоне предварительной иммунизации: 1.- холерной химической бивалентной таблетированной вакциной производства РосНИПЧИ «Микроб»; 2.- коммерческой вакциной Cholera-Impstoff ; ГС - группа сравнения

Таблица 12. Результаты оценки качества различных вакцинных препаратов по разработанным показателям

Название препарата

Схема иммунизации

Доза препарата

Заражение на 14-е сутки после окончания иммунизации

Показатели

Двенадцатиперстная кишка

Подвздошный отдел тонкого кишечника

Восходящий отдел ободочной кишки

КА

КС

ИР

КА

КС

ИР

КА

КС

ИР

Коммерческая холерная бивалентная таблетированная вакцина (РосНИПЧИ «Микроб»)

Per os

однократно

3 таблетки (1 ч/д)

Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 | 8 |   ...   | 11 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»