WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 11 |

где Иса – индекс секреторной активности, определяемый по отношению клеток, содержащих КМПС к сумме клеток содержащих НМПС и смешанный продукт реакции, выраженная в процентах.

При выполнении морфометрического исследования строго следовали принципу соблюдения стандартных условий: забора и фиксации материала, приготовления и окраски срезов, определения учитываемых параметров.

Для морфометрической оценки интересующих характеристик использовали окулярные сетки Автандилова [Автандилов Г.Г., 1990] и (или) возможности денситоморфометрической программы аппаратно-программного комплекса МЕКОС-Ц.
Препараты, приготовленные по общепринятой схеме обработки тканей для электронной микроскопии (Уикли Б., 1975), просматривали в электронном микроскопе JEM 7

Полученные результаты были статистически обработаны общепринятыми методами с вычислением средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (m), коэффициента достоверности (р) и корреляционной зависимости(r). Графическая обработка результатов проводилась с использованием Microsoft Office Excel 2003. Морфометрические характеристики, полученные с помощью программы «Денситоморфометрия» (версия 2.1.0.0), статистически обрабатывались в рамках возможностей, предусмотренных программой.

Результаты исследований и их обсуждение

Основным показателем проявления функционирования тех или иных генов микроорганизма в макроорганизме являются изменения, возникающие в ответ на инокуляцию патогена, морфологическими эквивалентами которых можно считать развитие различных патологических или адаптационно-компенсаторных реакций.

Для исследований были отобраны типичные по родовым и видовым свойствам штаммы V.cholerae О1 серогруппы, культуры которых при внутрикишечном введении крольчатам-сосункам приводили к развитию холерогенной (вирулентные), энтеропатогенной (слабо вирулентные) реакции или вообще не вызывали видимых изменений со стороны ЖКТ биомодели (авирулентные). Методом ПЦР, в геноме, отобранных штаммов определяли наличие основных генов, связанных с вирулентностью (ctxА и tcpА) и дополнительных (zot и ace) и проводили морфометрический анализ гистологических изменений, выявляемых у зараженных ими крольчат-сосунков. Полученные количественные параметры сопоставили с особенностями генетической характеристики штаммов V.cholerae О1 серогруппы (таблица 1).

Согласно полученным данным реакция клеток APUD-системы у подопытных животных находилась в за­висимости, с одной стороны, от отдела кишечника, а с другой - от особенностей фено- и генотипической характеристики штаммов холерных вибрионов, используемых для заражения, и коррелировала со степенью выраженности морфологических изменений в ЖКТ и внутренних органах биомоделей (таблица 2). Для удобства оценки степени функциональной активности апудоцитов использовали разработанный нами индекс функциональной активности (Иап). Так, Иап в тонком кишечнике крольчат, зараженных холерными вибрионами, содержащими полный набор генов патогенности, в 24 раза превышал аналогичный показатель у интактных контрольных животных. При этом наибольшее изменение Иап было характерно для введения холерных вибрионов классического биовара вирулентного штамма V. cholerae 569В. Введение холерных вибрионов штаммов, лишенных ctxА гена, также влияло на изменение Иап у крольчат, но в этом случае показатель не более чем в 3 раза превышал Иап у интактных контрольных животных (таблица 2). Штаммы с полным набором основных генов, обусловливающих их вирулентность, вызывали у подопытных животных почти 3-х кратное превышение учитываемых морфометрических параметров в почках по сравнению с интактными крольчатами, изменение в большей степени, чем в других группах, показателей функционального состояния печени (таблицы 3, 4). Причем внутри группы у животных, зараженных культурами этих штаммов, имел место определенный разброс величин определяемых показателей, позволяющий выделить среди отобранных культур штаммы, вызывающие максимально выраженные изменения у биомодели. Что касалось штаммов, лишенных ctxА гена, то среди них наибольшие изменения во внутренних органах подопытных животных вызывали V.cholerae, в геноме которых определялись гены zot и ace, кодирующие продукцию Zot и Ace токсинов.

Таким образом, на основании выявленных по результатам морфометрического анализа особенностей в реакции крольчат-сосунков на внутрикишечное введение различных по набору детерминант вирулентности холерных вибрионов были отобраны морфометрические параметры, позволяющие с большей долей достоверности характеризовать морфофункциональное состояние систем организма биомодели.

Несмотря на схожесть экспрессируемых факторов патогенности (подвижность, колонизирующая способность, токсические субстанции) у холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, последние имеют целый ряд особенностей. Аналогичным образом, отобрав штаммы холерных вибрионов О139 серогруппы, провели анализ морфофункциональных изменений апудоцитов и клеток эффекторной зоны иммунной системы у подопытных животных, зараженных ими.

Общая направленность ответной реакции APUD-системы кишечника биомоделей на инокуляцию холерных вибрио­нов заключалась в дегрануляции клеток, то есть в высвобождении того или иного количества биологически активных веществ (БАВ), принимающих непосредственное участие в патогенезе холерной инфекции. Для APUD-системы кишечника подопытных животных, зараженных холерными вибрионами О139 серогруппы, харак­терным было снижение количества апудоцитов и увеличение их функциональ­ного напряжения (таблица 5).

Таблица 1. Результаты внутрикишечного заражения крольчат-сосунков V. cholerae O1 в дозе 1х107 м.к.

Штаммы V.cholerae О1

Генетическая характеристика штаммов

Павшие с холерогенной реакцией (в %)

Павшие с энтеропатогенной реакцией (в %)

Оценка штаммов по холерогенной реакции

V.cholerae М1259, М1273, М1268, М674, 358, 569В, 410, 968

ctxA+, ace+,zot+, tcpA+

100

0

вирулентные

V.cholerae М1191

сtxA-, ace+, zot+, tcpA+

0

50

слабовирулентные

V.cholerae М661, М1183

сtxA-, ace+, zot+, tcpA-

0

0

авирулентные

V.cholerae 203, М1336, КМ27

сtxA-, ace-, zot-, tcpA+

0

0

авирулентные

V.cholerae М1397, М1398, М1257, М1280, М1242, КМ26

сtxA-, ace-, zot-, tcpA-

0

0

авирулентные

V.cholerae М1258, М1262, М1256, М1265

сtxA-, ace-, zot-, tcpA-

40

слабовирулентные

Таблица 2. Реакция апудоцитов кишечника крольчат-сосунков на внутрикишечное заражение V. cholerae О1 в дозе 1х107 м.к.

Группа штаммов

V. cholerae О1 с генетической характеристикой

Количество штаммов

Количество апудоцитов в одном поле зрения среза кишечника (М+m)

Морфофункциональное состояние апудоцитов кишечника

Индекс активности апудоцитов (Иап)

Тонкий кишечник

Толстый кишечник

Тонкий кишечник

Толстый кишечник

Тонкий кишечник

Толстый

кишечник

Опустошенные клетки

(в %)

Гистохимически активные клетки

(в % )

Опустошенные клетки

(в %)

Гистохимически активные клетки

(в % )

ctxA+, tcpA+

8

4,69+0,53*

2,34+0,57*

78,65+11,83

6,07+3,86

36,51+5,64

22,25+5,45

6,41

1,45

ctxA-, tcpA-

12

6,02+0,87

3,77+0,73

32,99+3,42

7,46+4,25

41,39+2,45

7,22+3,07

0,76

0,98

ctxA-, tcpA+

4

6,56+0,99

3,83+0,84

31,36+3,44

8,92+4,07

40,13+6,75

7,04+2,14

0,73

0,96

Интактный контроль

-

7,92+0,98

5,13+0,64

18,92

2,13

24,95

23,78

0,27

0,95

Примечание -* достоверность р<0,05

Таблица 3. Морфометрические параметры, характеризующие состояние почек, у крольчат-сосунков при внутрикишечном заражении V. cholerae О1 в дозе 1х107 м.к.

Группа штаммов

V. cholerae О1 с генетической характеристикой

Площадь почечного тельца (М+m)

Площадь сосудистого клубочка (М+m)

Суммарная площадь капилляров коры (М+m)

Суммарная площадь капилляров мозгового вещества (М+m)

Количество почечных телец на S = 317706мкм2 (М+m)

Отношение площади почечного тельца к площади сосудистого клубочка

ctxA+, tcpA+

2789,42+1096,08

1802,48+731,70*

9373,320+2684,13*

25426,01+5770,65

8,70+1,84*

1,56

ctxA-, tcpA-

1995,55+649,06

884,390+381,49

3635,900+579,500

12530,52+3029,04

11,88+3,34

2,42

ctxA-, tcpA+

2095,74+813,64

928,900+368,46

8961,29+3184,45

31867,12+8096,22*

12,79+2,55

2,32

Интактный контроль

1810,68+673,87

836,13+327,05

2978,64+975,60

19788,92+1098,24

19,8+1,24

2,17

Примечание - * достоверность р<0,05

Таблица 4. Морфометрические параметры, характеризующие состояние печени, у крольчат-сосунков при внутрикишечном заражении V. cholerae О1 в дозе 1х107 м.к.

Группа штаммов V. cholerae О1 с генетической характеристикой

Средняя площадь центральных вен печени (М+m)

Суммарная площадь печеночных капилляров (М+m)

Ядерно-цитоплазматический индекс (ЯЦИ) гепатоцитов

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 11 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»