WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 11 |

Для оценки стадии заболевания пользовались классификацией К.С. Симоняна (1971). При этом выделяли реактивную стадию, токсическую и терминальную, что по классификации Е.Г. Григорьева (1996) и В.С. Савельева (1999) соответствует следующим градациям по фазам: перитонит с отсутствием признаков сепсиса, перитонеальный сепсис, (при наличии более двух признаков синдрома системной воспалительной реакции – ССВР), тяжёлый перитонеальный сепсис (ПОН), инфекционно-токсический шок (ИТШ), а его развитие характеризует переход процесса в терминальную фазу. Наиболее информативными диагностическими критериями РГП были: тахикардия, тошнота, рвота, нарастающий парез кишечника, появление патологического отделяемого из дренажей при послеоперационном перитоните, полиорганная недостаточность. Проводили оценку тяжести состояния больных по общепринятым лабораторным и клиническим критериям. У всех больных состояние перед операцией оценивалось как тяжелое. У больных в реактивной стадии перитонита тяжесть состояния была обусловлена меньшей по выраженности интоксикацией, чем у больных в токсической стадии. Для оценки тяжести течения перитонита применили бальную оценку для определения индекса тяжести, разработанную в НЦРВХ ВСНЦ СО РАМН (Григорьев Е.Г., Коган А.С., 1996).

При этом выделяли:

1) фазу умеренной эндогенной интоксикации (соответствует 1 степени тяжести);

2) фазу выраженной эндогенной интоксикации без явлений инфекционно-токсического шока (соответствует 2 степени тяжести);

3) фазу выраженной эндогенной интоксикации с явлениями гипер- или гиподинамической стадии инфекционно-токсического шока.

Оценивая тяжесть состояния пациентов, выделяли средне-тяжелое течение заболевания (показатель индекса тяжести до 6 баллов), тяжелое (индекс тяжести от 7 до 12 баллов), крайне тяжелое (показатель индекса тяжести от 13 баллов и выше).

Бактериологические исследования

Бактериологические исследования включали в себя верификацию состава микрофлоры, чувствительность к антибиотикам. Бактериологические исследования проводились во время первичной операции и во время программированных санаций. Выпот из брюшной полости забирали в стерильную пробирку с виноградно-сахарным бульоном в количестве 2–3 мл, затем переносили на твёрдые среды (среда Эндо, 5% кровяной агар, желточно-солевой агар) методом секторных посевов по Gould в модификации Рябинского-Родомана не позже 6 часов с момента забора материала. Чашки инкубировали при температуре 37С в течение 18–24 часов, после чего подсчитывали количество колоний

Морфологические исследования

Из 57 умерших у 49 (85,9 %) проведены паталогоанатомические исследования, в т. ч. у 14 умерших больных при аутопсии провели патоморфологическое исследование различных анастомозов. Препарат фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине. Для исследования брали 3 – 4 участка из анастомоза. Всего изготовлено 63 гистологических препарата, окрашенных гематоксилин-эозином по Ван-Гизону.

Морфологическое исследование состава клеточного инфильтрата тканей проводили в 10 полях зрения при увеличении 7х40.

Принцип действия и порядок работы аппарата «ОБЕРОН»

Перед проведением исследования на пациента, сидящего за аппаратом, надеваются наушники, в корпусе которых размещены магнитоиндукторы, в соответствии с маркировкой, R на правую височную область, L на левую. Инфракрасный излучатель устанавливается симметрично относительно глаз на расстоянии не более 80 см. Стандартное исследование включает изучение отдельных гистоцитологических и генетических структур при наличии патологических изменений в них в течение 50–60 мин. Детальное исследование предполагает оценку структуры всех тканей организма на уровне гистологических, цитологических и генетических образований в течение 2-х часов. В программах заложена балльная оценка результатов NLS-анализа:

1 – уровень латентной функциональной активности (нет патологии);

2 – оптимальная регуляция;

3 – смещение характеристик на более высокий уровень, состояние напряжения регуляторных систем;

4 – астенизация регуляторных механизмов;

5 – компенсированные нарушения механизмов адаптации (обратимые изменения в органах и тканях);

6 – уровень декомпенсации механизмов адаптации, выраженные патологические состояния (полиорганная недостаточность).

Оценку иммуностимулирующего действия модуляторов в сравнении с действием аппарата «Оберон» проводили по формуле:

,

где Ро лечение на аппарате «ОБЕРОН», Рис значение параметра в абсолютных величинах до начала лечения, Рм то же после проведения традиционного лечения с модулятором.

Характеристика экспериментального материала и методы исследования в эксперименте

Все исследования с использованием животных проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР№755 от 12.08.77).

Место проведения совместного исследования: база лаборатории БНЦ г. Улан-Удэ, к.м.н. П.В. Алексеевым (научные консультанты: зав. лабораторией доктор биологических наук, проф. И.О. Убашеев, зав. кафедрой факультетской хирургии, доктор медицинских наук А.Н. Плеханов). Применение дренажа из полупроницаемой мембраны при распространённом гнойном перитоните в эксперименте исследования проведены под руководством ассистента кафедры госпитальной хирургии ИГМУ д.м.н., проф. К.А. Апарцина совместно с сотрудниками НЦРВХ ВСНЦ СО РАМН А.В. Шелеховым, Р.А. Виноградовым и М.В. Садах на базе лабораторного помещения центра радионуклидной диагностики ИГОКБ № 1 г. Иркутска и научного отдела экспериментальной хирургии НЦ РВХ ВСНЦ СО РАМН. Исследование эффективности наложения кишечных швов в условиях перитонита в эксперименте проведено на базах лабораторного помещения Бурятской сельхозакадемии (ректор академик РАН, А.П. Попов), ветеринарного факультета (декан к.м.н., Р.С. Цыдыпов).

Экспериментальный раздел исследования выполнен в нескольких сериях опытов.

Первая серия. Исследование саногенных эффектов применения экстракта зубчатки обыкновенной при перитоните. Эта серия опытов выполнена в 2003 г. на белых беспородных крысах обоего пола массой 160–180 г.

1а группа: оценка противовоспалительного действия экстракта зубчатки обыкновенной.

Эксперименты проведены на 21 белых беспородных крысах обоего пола массой 160–180 г. Перитонит вызывали внутрибрюшинным введением животным 1 мл 0,2% раствора нитрата серебра в дозе 100 мг/кг массы крысы за 30 мин до инъекции и через 1 час после инъекции. Животные контрольной группы получали эквиобъёмное количество дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали калефлон в дозе 100 мг/кг массы животного. Через 24 часа после мгновенной декапитации под гексеналовым наркозом определяли объём экссудата в брюшной полости и количество дегранулированных тучных клеток в брыжейке. Для этого последнюю фиксировали смесью Carnue и окрашивали 0,05% раствором толуидинового синего. Подсчёт количества дегранулированных тучных клеток осуществляли в 100 полях зрения при увеличении 20. Развитие перитонита сопровождалось появлением в брюшной полости экссудата красновато-бурого цвета и тотальной дегрануляцией тучных клеток.

Оценку мембраностабилизирующей активности фитоэкстракта осуществляли по степени гемолиза эритроцитов, вызываемого реактивом Фентона (перекисный гемолиз) и добавлением дистиллированной воды (осмотический гемолиз). Компоненты, входящие в состав реактива Фентона, были использованы в минимальных концентрациях, вызывающих полный лизис 1% суспензии эритроцитов: FeSO4 x 7 H2O- 0,01 мг/мл; Н2О2-0,2 мг/мл (в пересчете на 100% раствор перекиси водорода). Для получения осмотического гемолиза к суспензии эритроцитов добавляли равный объем дистиллированной воды. Степень гемолиза измеряли через 24 часа по поглощению длины волны при 420 нм.

Для оценки антиоксидантных свойств экстракта зубчатки обыкновенной определяли концентрацию малонового диальдегида спектрофотометрическим методом по степени образования окрашенного комплекса с тиобарбитуровой кислотой в сыворотке крови и в гомогенате грануляционной ткани; активность каталазы сыворотки крови определяли спектрофотометрическим методом. Содержание SH-групп в сыворотке крови определяли по методу Ф.П. Фоломеева. Содержание нуклеиновых кислот в гомогенате грануляционно-фиброзной ткани определяли по Шмиту и Тангаузеру в модификации М.Г. Трудолюбовой.

1б группа: исследование антибактериальной активности экстракта зубчатки обыкновенной в эксперименте при РГП.

Острый перитонит вызывали внутрибрюшинным введением крысам (n=305) 1 мл 0,2% раствора нитрата серебра. Оценку антибактериальной активности экстракта зубчатки обыкновенной проводили методом двухкратных серийных разведений в жидкой питательной среде (Першин Г.Н., 1971). Готовились серийные разведения фитоэкстракта с концентрациями от 50,0 до 0,78 мг/мл. В качестве тест-объектов использовали музейные культуры условно-патогенных бактерий: Escherichia coli 408 Новгородская, Staphylococcus aureus 209P, Proteus vulgaris H50, Streptococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa АТСС 10145, полученные из ГИСК им. Л.А. Тарасевича (Москва). Из суточных культур бактерий, выращенных на косяках с мясопептонным агаром, готовили по стандарту мутности рабочую суспензию в физиологическом растворе с титром 109 клеток в 1 мл. Микробная нагрузка для каждой культуры и для каждого варианта опыта составляла 250 тыс. клеток в 1 мл. Бактерии с различными концентрациями препарата выращивали в термостате при 37С в течение 18–24 часов. Контролем служили пробирки со средой без препарата, куда также вносили суспензию бактерий.

1в группа: влияние экстракта зубчатки обыкновенной на сосудистую проницаемость.

Эксперимент проведен на 14 белых беспородных крысах обоего пола массой 160–180 г. Перитонит вызывали внутрибрюшинным введением уксусной кислоты. Испытуемый фитоэкстракт в дозе 100 мг/кг массы животного вводили за 1 час до исследования, животным контрольной группы вводили дистиллированную воду в объёме 1 мл на 100 г массы крысы. Через 1 час после инъекции уксусной кислоты и введения метиленового синего определяли степень проницаемости сосудов брюшной полости по интенсивности окраски перитонеального экссудата фотоколориметрическим методом при длине волны 540 нм.

Вторая серия. Применение дренажа из полупроницаемой мембраны при распространённом гнойном перитоните в эксперименте.

2 МДСК (ОГ) группа – основная группа испытуемых животных, где устанавливали МДСК в брюшную полость после моделирования перитонита и укладывали конструкцию между петлями тонкой кишки.

2 (ГК) группа – контрольная группа животных без сорбционной композиции. Животным обеих групп в брюшную полость вводили БИК через дренаж, установленный в малый таз. Динамическую гамма-сцинтиграфию с Е. colli, меченной 99 мТс, начинали тотчас после введения бактериально-изотопного комплекса в полость брюшины животного с индуцированным перфоративным перитонитом. Эвтаназию животного проводили через 6 часов после контаминации брюшной полости БИК, введением запредельных доз тиопентала-натрия (5 мг/кг).

В эксперименте использованы беспородные собаки (n=12), массой 6–7 кг, длинной тела 60–70 см. Возраст животных – свыше 1 года. В качестве меченного радиопрепаратом патогена использована E. сoli, штамм О151. Маркировка бактерии 99mTc пертехнетатом в дозе 120 Ci выполнялась по оригинальной методике, разработанной в НЦ РВХ ВСНЦ СО РАМН (заявка на изобретение М. кл. 6 А61 В6/00 № 96122238/14 (028770) от 16 ноября 1996 г.). В качестве мембраны для дренажной композиции использована целлофановая упаковка, применяемая в пищевой промышленности (ГОСТ - 7730-63).

Компонентами сорбционной композиции являлись сухая плазма в дозе 15 г/кг массы тела, гентамицина сульфат 10 мг/кг, физиологический раствор 15 мл/кг.

Расчет размеров мембранного дренажа проводили, исходя из площади брюшинного покрова собаки, по формуле Драбкина, с поправкой Е.В. Гублера и соавт. (1973). В обеих экспериментальных группах, проводили видовую идентификацию микробных тел в содержимом МДСК на автоматическом анализаторе «Autosceptor» («Becton-Dickinson», США). Полученные материалы помещали в вакуумные флаконы, далее осуществляли пересев на твердые среды (кровяной агар, анаэробный кровяной агар) не позже 6 часов с момента забора материала. Чашки для определения аэробных культур инкубировались при температуре 37°С в течение 18–24 часов. Для идентификации анаэробных культур инкубировали среды в анаэростате в течение 42 часов. После инкубирования готовили бактериальную взвесь в соответствующих бульонах. Приготовленный раствор разливали по 100 мкл в стандартные планшеты. Планшеты помещали в камеру автоматического анализатора.

Для радиометрии образцы помещали в стерильные пробирки с последующим измерением уровня радиоактивности дозкалибратором колодезного типа CRS-5 («Capintec inc.», США).

Сцинтиграфию выполняли на гамма-камере Multispect с системой обработки данных Icon («Siemens», Германия) в динамическом режиме с длительностью фрейма 1 минута на протяжении 1 часа эксперимента и 2 минуты в течение последующих 5 часов опыта. Животное фиксировали на препаровочном столике Сеченова в лежачем положении на спине. Выполняли подсчет количества сцинтилляций в секунду на участке в форме квадрата площадью 0,25 см2 в проекциях правого и левого поддиафрагмальных пространств, левого и правого латеральных каналов, малого таза, щитовидной железы, средостения, МДСК.

Радиометрический контроль перфузии мышечной ткани осуществляли подсчетом количества сцинтилляций в секунду на участке передней конечности животного площадью 0,25 см2. На 365 минуте эксперимента, после извлечения из брюшной полости МДСК, проводили дополнительное сканирование животного в течение 2 минут. Определяли уровень радиоактивности в проекции предшествующего размещения дренажной конструкции.

Третья серия. Исследование эффективности наложения кишечных швов в условиях перитонита в эксперименте.

3а-ОГ (n=6) Моделирования перитонита методом перфорации 12-перстной кишки (по Будашееву В.П., 2005) с применением атравматичного шовного материала (основная группа)

3а-ГК (n=6) Моделирование перитонита методом перфорации 12- перстной кишки с применением травматичного шовного материала (группа клинического сравнения).

3б-ОГ (n=6) Моделирования перитонита методом перфорации тонкой кишки с анастомозом «конец» в «бок» и энтеростомией с ТМА атравматичными нитями «Джонсон и Джонсон» викрил - 4/0 (основная группа).

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 11 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»