WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 |

Действие ММП регулируется рядом ингибиторов – тканевые ингибиторы ММП (ТИММП). В наших препаратах ТИММП-1 присутствует в овоцитах и гранулезных клетках фолликулов разных стадий развития. Фолликулы ранних стадий развития выявляют слабую экспрессию. Наиболее ярко маркируются зрелые фолликулы. Более выражено маркируются фолликулоциты, theca interna, интерстициальные эндокриноциты и покровный эпителий. Экспрессия ТИММП-1 в соединительнотканной строме не выявляется и слабо определяется в атретических телах.

Экспрессия ТИММП-2 наиболее ярко проявляется в гранулезной оболочке и theca interna вторичных и третичных фолликулов и на ранних этапах атрезирующихся фолликулов. Интенсивность маркирования зависит от степени атрезии и давности существования атретических тел. Лютеоциты и клетки атретических тел метятся менее интенсивно. Отмечена экспрессия и в клетках покровного эпителия. В клетках и сосудах соединительной ткани специфическое мечение отсутствует, выявляется слабая реакция в отдельных эндотелиальных и гладкомышечных клетках.

Таким образом, матриксные металлопротеиназы и их тканевые ингибиторы вовлечены в процесс ремоделирования внеклеточного матрикса яичника, что является определяющим фактором в течение процесса фолликулогенеза и обратного развития фолликулов, обуславливая стремительный рост, дифференцировку, структурные изменения гонад в кратчайший промежуток времени. Помимо данных о способности ТИММП регулировать активность ММП в настоящее время существует предположение, что ТИММП определенным образом влияют на апоптоз, клеточный цикл, стимулируют стероидную продукцию в яичниках. Состояние мессенджерных соединений гормонтрансдукторной системы.

Активность иммуномечения гранулезных клеток на -субъединицы G-белков:

Специфического мечения -субъединиц G-белков в гранулезных клетках примордиальных фолликулов не отмечается, в первичных фолликулах – активность включения метки незначительна. С увеличением размеров фолликулов число меченых клеток возрастает до 44% и к преовуляторным стадиям достигает 75%. Эндокриноциты внутренней текальной оболочки фолликулов (начиная со стадии малых вторичных фолликулов) также включают метку.

Активность мечения клеток гранулёзной оболочки на аденилилциклазу (АЦ) возрастает прямо пропорционально степени развития фолликула и достигает максимума в клетках гранулёзы третичного фолликула.

Фосфолипаза-С не обнаруживается в клетках гистионов примордиальных и первичных овариальных фолликулов, но активно экспрессируется в гранулезных клетках фолликулов поздних стадий.

Позитивная динамика включения метки на активные -субъединицы G-белков свидетельствует об активации передачи гормональных сигналов в гранулезных клетках и текацитах в процессе роста фолликулов. Отсутствие экспрессии фосфолипазы-С в фолликулах ранних стадий развития и увеличение активности иммуномечения гранулезных клеток вторичных фолликулов может быть связано с увеличением внутриклеточного синтеза простагландинов, поддерживающих финальные стадии роста фолликулов и инициирующих преовуляторную перестройку.

Соответственно, вторичные мессенджерные соединения - G-белки, АЦ-комплекс и фосфатидилинозитольный механизм принимают участие в восприятии гормональных сигналов, стимулирующих и ингибирующих фолликулогенез.

Ростовые факторы

Экспрессия инсулиноподобного фактора роста I (ИПФР) ярко выражена в половых и фолликулярных клетках примордиальных фолликулов. В первичных фолликулах маркируется цитоплазма всех гранулезных клеток. Во вторичных фолликулах отмечается интенсивная экспрессия не только клеток гранулезной оболочки, но и формирующихся клеток внутренней теки. В малых полостных фолликулах позитивно маркируется цитоплазма всех клеток theca externa, в то время как в крупных полостных положительная реакция определяется только в отдельных клетках наружной соединительнотканной оболочки. Положительно маркируются клетки интраовариальной сети, покровного эпителия, эндотелиальные клетки и некоторые ядра гладкомышечных клеток сосудов. Иммунонегативны стромальные клетки и миоидные элементы. В желтых телах выраженная реакция в цитоплазме лютеоцитов.

ИПФР принимает активное участие не только в фолликулогенезе, но и в процессах атрезии фолликулов – его транскрипты были обнаружены в атретических фолликулах. В атретических телах, находящихся в стадии расцвета, регистрируется выраженное маркирование и в ядрах, и в цитоплазме эндокриноцитов. В погибающих атретических телах сохраняется метка в ядрах. Стромальные клетки обнаруживают иммунонегативность.

Наши материалы подтверждают данные, что инсулиноподобные факторы роста имеют широкие митогенные и метаболические эффекты в яичнике. ИПФР синтезируетя в фолликулах яичника, что подтверждает наличие рецепторов в клетках фолликулов и самого фактора в фолликулярной жидкости. Высокие концентрации ИПФР способствуют воздействию ФСГ на клетки гранулезы (Erickson G., Shimasaki S.,2001). Доминантный фолликул содержит ИПФР-I в большей концентрации, чем недоминантные когорты. Более того, уровень ИПФР-I в фолликулярной жидкости положительно коррелирует как с концентрацией эстрадиола и прогестерона, так и с объемом фолликулярной жидкости. ИПФР стимулирует рост, пролиферацию и дифференцировку различных клеточных элементов фолликула, усиливает продукцию эстрадиола. ИПФР, действуя синергично с ФСГ, стимулирует ароматазную активность в клетках гранулезы и таким образом увеличивает синтез эстрогенов.

При постановке иммуногистохимической реакции на выявление васкулярного эндотелиального фактора роста (ВЭФР) метка в структурах яичника распределялась следующим образом: на начальных этапах развития фолликулов, уже в примордиальных и затем в первичных, выраженно маркируется цитоплазма овоцитов. Также ярко маркируется и цитоплазма всех фолликулярных клеток. Положительная экспрессия ВЭФР отмечена в овоцитах, фолликулоцитах и в прилежащих к фолликулу клетках интерстициальной ткани (будущие клетки теки) первичных фолликулов. По мере роста фолликулов, начиная с вторичных, цитоплазма овоцитов и фолликулоцитов маркируется менее интенсивно. В третичных фолликулах метка обнаруживается во всех фолликулярных клетках и клетках theca interna, однако, по сравнению с вторичными активность включения метки менее выражена. В функционально активных желтых телах маркируется цитоплазма лютеиновых клеток. В формирующихся атретических телах выраженная реакция отмечена в цитоплазме эндотелия растущих сосудов. Позитивно реагируют локусы гормонопродуцирующих клеток, эндотелиоциты и ядра отдельных гладкомышечных клеток сосудов, ядра клеток покровного эпителия, цитоплазма клеток интраовариальной сети.

ВЭФР, стимулируя пролиферацию и ингибируя апоптоз овоцитов, обладает ангиогенной активностью. Образование сосудов и васкуляризация играют важнейшую роль в росте и формировании доминантного фолликула. С самого начала развития адекватное гемообеспечение примордиальных фолликулов играет важную роль в инициации большого роста овоцита, в дальнейшем ВЭФР способствует активной пролиферации клеток и дифференцировки во время роста фолликулов и формирования желтого тела.

Проведенное иммуногистохимическое исследование выявило наличие рецепции к эпидермальному фактору роста (ЭФР). Активно маркируются фолликулоциты и клетки theca interna вторичных фолликулов. В третичных фолликулах эффект неоднозначный: фолликулоциты corona radiatа и кумулюса слабо позитивны, а в клетках гранулезного слоя экспрессия более интенсивная. Максимально ярко маркируются гранулезные клетки преовуляторных фолликулов. Цитоплазма овоцитов созревающих фолликулов выявляет только слабое мечение. Активно метится цитоплазма лютеоцитов, клетки атретических тел и покровного эпителия.

Максимальное содержание рецепторов эпидермального фактора роста в гранулезных клетках приходится на стадию преовуляторной подготовки. Установлено, что ЭФР потенцирует эффект гонадотропных гормонов, подавляет апоптоз в клетках зернистого слоя путем стимуляции синтеза прогестерона и регуляции распределения внутриклеточного свободного кальция, стимулирует созревание овоцитов. ЭФР принимает участие в атрезии фолликулов. Избыточное образование ЭФР в регионе развивающегося фолликула способствует переключению внутрифолликулярного эстрогенобразования на синтез прогестерона. Такой фолликул не сможет закончить свое развитие и уйдет в атрезию.

Таким образом, активная экспрессия исследованных факторов роста как соматическими, так и половыми компонентами гонад подтверждает их функциональную необходимость в региональном механизме ауто- и паракринной регуляции текущих процессов в яичнике.

Обобщая полученные данные, следует заключить, что в основе физиологического течения фолликулогенеза и лютеогенеза лежит комплекс структурно-функциональных интрагонадных механизмов – различных химических соединений, которые синтезируются в яичнике и накапливаются в его структурах. К ним относятся ростовые факторы (васкулярный эндотелиальный, эпидермальный, инсулиноподобный фактор роста-1), белки пролиферации и апоптоза (PCNA, Ki-67, Bcl-2, p-53, каспаза-9), трансформирующие различные центральные сигналы, и, таким образом, паракринно регулирующие овофолликулогенез и лютеогенез.

Выводы

1) Использование метода иммуногистохимии позволило определить различия в активности ряда химических соединений в структурах яичников: ростовые факторы (инсулиноподобный, васкулярный эндотелиальный и эпидермальный), внутриклеточные белки пролиферации (PCNA, Ki-67) и апоптоза (вс1-2, р-53, каспаза-9), матриксные металлопротеиназы-1,9, тканевые ингибиторы матриксных металлопротеиназ-1,2, гормонтрансдукторная система.

2) Выявлена динамика экспрессии исследуемых внутриклеточных белков на стадиях позитивного и атретического процесса овофолликулогенеза и лютеогенеза:

  • В примордиальных фолликулах (в овоцитах и фолликулярных клетках)

на границе их начала роста уже выявляется положительное иммуномечение, что обеспечивает активный переход фолликулов в стадию большого роста.

  • В течение последующего роста фолликулов и, особенно, в антральных

стадиях и стадии расцвета желтых тел происходит прогрессирование экспрессии изучаемых белков с дальнейшим снижением их активности в финальных стадиях овофолликулогенеза.

  • В стадии преовуляторных фолликулов (и затем в начале овуляции в

период отрыва овоцита и лучистого венца) выявляется резкое снижение экспрессии внутриклеточных белков («опустошение»), в то время как в фолликулярной жидкости идентифицируется видимое накопление пептидов.

  • В ходе атретических процессов минимальная экспрессия белков отмечена в начале стадии атрезии с последующим максимальным содержанием в период завершения формирования атретического тела.

3)Выявлена перманентная экспрессия ростовых факторов: инсулиноподобного, васкулярного эндотелиального и эпидермального. Иммуномечение овоцитов, фолликулоцитов, стероидпродуцирующих клеток теки, интерстициальной ткани и желтых тел свидетельстует о постоянстве этих химических компонентов в обеспечении хода процессов развития и атрезии в яичнике.

Для фолликулов на начальных стадиях атрезии характерна волна снижения экспрессии ростовых факторов с последующим подъемом их количественного представительства при формировании активно продуцирующего гормоны атретического тела.

По своей динамике экспрессии эти факторы во многом тождественны динамике экспрессии внутриклеточных белков, активизирующих процессы пролиферации. Особенно функционально активны инсулиноподобный и васкулярный эндотелиальный факторы.

4) Наличие маркирования клеток покровного эпителия и интраовариальной сети предполагает возможность их функционального участия в жизнедеятельности структур яичника.

5) Соединительнотканная строма при иммуногистохимическом анализе на указанные белки и ростовые факторы иммунонегативна. В структурных компонентах сосудов экспрессия слабая и локусная. Более выраженное иммуномечение эндотелия обнаруживается при реакции на выявление васкулярного эндотелиального фактора роста.

6) Матриксные металлопротеиназы (ММП-1,9) и тканевые ингибиторы матриксных металлопротеиназ (ТИММП-1,2) параллельно нарастающие по мере роста фолликулов и желтых тел, в своем взаимодействии контролируют специфичность локального ремоделирования внеклеточного матрикса яичника, обуславливая адекватность условий как для роста и размещения значительно увеличивающихся в объеме фолликулов и желтых тел, так и для перестройки тека при атрезии.

7)Позитивная динамика иммуномечения компонентов гормонтрансдукторной системы свидетельствует об активации передачи гормональных сигналов фолликулярными клетками по мере роста фолликулов, достигая максимума к преовуляторной стадии.

8) Распределение и динамика экспрессии исследуемых внутриклеточных белков (белки пролиферации PCNA, Ki-67 и апоптоза вс1-2, р-53, каспаза-9), ростовых факторов (инсулиноподобный, васкулярный эндотелиальный, эпидермальный), матриксных металлопротеиназ-1,9, тканевых ингибиторов матриксных металлопротеиназ-1,2, состояния гормонтрансдукторной системы свидетельствуют о функционировании многогранной локальной регуляции функции яичников. Эти механизмы являются неотъемлемыми компонентами прогрессивного развития овофолликулогенеза, лютеогенеза и процесса атрезии, и их динамичное взаимодействие лежит в основе оптимального течения этих сложнейших, скоротечных процессов в яичнике.

Практические рекомендации

Полученные результаты могут быть использованы в лекционных курсах для студентов медицинских вузов на кафедрах гистологии, цитологии и эмбриологии, акушерства и гинекологии. Кроме того, полученные данные могут послужить основой для развития и совершенствования методов терапии дисфункциональных состояний женской репродуктивной системы, для разработки новых подходов при диагностике и лечении врожденной яичниковой формы бесплодия и комбинированной адьювантной терапии опухолей яичника.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Т.Г.Боровая, О.В.Волкова, И.А.Бичерова. Актуальные аспекты проблемы репродукции// Материалы конференции «Функциональная нейро-морфология – фундаментальные и прикладные исследования» - Минск. – 2001.- С.242-245.

2. О.В.Волкова, Т.Г.Боровая, Е.О.Погорельская, И.А.Бичерова. Актуальные аспекты ово-фолликулогенеза // Ж. «Успехи современного естествознания» - Москва. - 2003.- № 1.- с.45-47.

Pages:     | 1 | 2 || 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»