WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Для иммуногистохимического анализа исполтзованы моноклональные антитела (DAKO, Novocastra к CD68, CD34 (QBEnd/10), SMA (sm-1), Fibronectin (FNC) (568), VEGF(sc-7269), TGF1 (8A11), TGF1 R1. В ходе исследования использовалась полимерная поливалентная система детекции (базисный фермент пероксидаза хрена) (BioGenex). Для визуализации реакции использовался 3’3 диаминобензидин (DAB).

Для контрокрашивания ядер использовался гематоксилин Майера (DAKO). Затем выполнялось обезвоживание, просветление, заключение срезов под покровное стекло по стандартным методикам.

Морфологическое исследование проводилось на световом уровне при окраске гематоксилин - эозином и по Ван Гизону (Van Gisson).

При анализе данных иммуногистохимического исследования учитывались как интенсивность экспрессии маркера, так и количество выявленных структур.

Результаты исследований и их обсуждение

Результаты клинических наблюдений

Клинический эффект оценивался в раннем послеоперационном периоде (до 7-10 суток после операции) и в отдаленном (через 6-18 месяцев). Критериями удовлетворительного течения послеоперационного периода являлось отсутствие выраженного воспаления и очагов некроза в области рубца, его состоятельность.

При сравнении течения послеоперационного периода у детей с рубцовыми деформациями кожных покровов после реконструктивных оперативных вмешательствах в группах детей прошедших предоперационный курс низкоэнергетической лазерной терапии и без него, можно отметить, что в группе исследования общее количество осложнений было ниже – 5 случаев из 26 (19%), по сравнению с контрольной группой, где этот показатель составил 13 случаев из 26 (50%). Кроме того, эти осложнения носили менее выраженный, чаще транзиторный характер. В большинстве случаев нарушения корригировались назначением сосудостимулирующей инфузионной или местной терапией. Время госпитализации в связи с выявленными нарушениями увеличилось лишь в одном случае на 2 суток, остаточные дефекты долечивались в амбулаторных условиях (таблица 1).

В группе сравнения, наиболее типичным осложнением явились краевые некрозы перемещенных лоскутов. Таких случаев зафиксировано 10 (77%). Необходимое для коррекции время ребенок наблюдался в стационаре. Продолжительность госпитализации при этом увеличилась на 3-14 (в среднем 3,6) суток в зависимости от тяжести осложнения. Всего, для лечения возникших осложнений в контрольной группе больных из 26 человек, потребовалось 92 суток стационарного лечения.

Таблица 1. Количество осложнений на послеоперационном этапе и удлинение продолжи- тельности госпитализации в контрольной группе (n=26) и группе исследования (n=26)

Тип операции

Всего

Осложнений

Продолжительность госпитализации (сут)

Местная пластика

19

8

(42%)

6- частичный некроз

+ 4-12

(6,9)

2 - инфицирование

17

3 - цианоз лоскута (18%)

+ 0

Свободная пластика

5

3 - лизис свободного лоскута 10-20%

(60%)

+ 3-7

(4,6)

4

1 - лизис свободного лоскута 5%

(25%)

+ 2

Пластика лоскутом на сосудах

2

1 - частичный некроз (50%)

+ 14 (14)

2

1 - цианоз (50%)

+ 0

Экспандерная пластика

2

1 - частичный некроз (50%)

+ 9 (9)

4

0

+ 0

Катамнестическое наблюдение составило от 6 до 18 месяцев. При осмотре больных, участвующих в исследовании оценивались физические характеристики рубца, его цвет, плотность, высота, наличие деформации окружающих тканей, однако основное внимание уделялось субъективной оценке внешнего вида послеоперационного рубца как ребенком и его родителями, так и лечащим врачом. При неудовлетворенности результатом лечения больной направлялся на повторную госпитализацию для проведения очередного этапа хирургической пластики рубца, либо рекомендовались малоинвазивные манипуляции (дермабразия, криодеструкция, пилинг).

В группе исследования из 26 детей на дермабразию были направлены 4 пациентов (15%), повторных оперативных вмешательств не потребовалось. В контрольной группе в общей сложности у 8 (35%) ребенка потребовалась повторная коррекция рубцов, из которых 3 детям (11%) были выполнены корригирующие операции и 6 (26%) пациентов были направлены на косметологические манипуляции. Очевидно, что эстетические результаты лечения в группе детей, которым в предоперационном периоде был проведен курс НЛТ, оказались значительно лучше с точки зрения как пациентов, так и лечащего врача.

Таблица 2. Количество корригирующих манипуляций (контрольная группа)

Вид пластики

Всего случаев

Повторные операции

Повторные манипуляции

Всего

относительно

Местными тканями

19

1

3

4

21%

Полнослойный свободный кожный трансплантат

5

1

2

3

60%

Лоскут на питающих сосудах

2

1

0

1

50%

Экспандерная пластика

2

0

1

1

50%

Результаты функционального исследования

На втором этапе проведена оценка влияния лазерной терапии на показатели микроциркуляции. Выполнена оценка состояния дермального кровотока в околорубцовой зоне (1 см от визуальной границы рубца) до- и после проведения курса НЛТ. Динамика изменения основного параметра физиологической активности капилляров - коэффициента вариации показателя микроциркуляции (К(v)) - сопоставлялась с аналогичным параметром сходной по строению кожи, находящейся на отдалении от рубца (5 см от визуальной границы рубца). Функциональная активность капилляров околорубцовой зоны оказалась снижена, в сравнении с показателями неповрежденной кожи (в среднем 10,77 единиц против 18,84 единиц). После проведения курса НЛТ при выполнении измерений в тех же кожных локусах значения коэффициента вариации перфузии значительно увеличились, вплотную приблизившись к показателям неповрежденной кожи, и составили в среднем 18,76 единиц.

Рисунок 1. Относительные показатели K(v) до и после курса НЛТ (в %) (за ноль принят показатель K(v) в области отдаленной от рубца)

Увеличение коэффициента вариации микрососудистого кровотока после проведения курса лазерной терапии доказывает положительное воздействие лазерного излучения на показатели микроциркуляции, связанные с тонусом сосудов. Улучшение функциональных свойств микроциркуляторного звена, позволяет в полном объеме изменять кровоток в мягких тканях и снижает риск возникновения патологического рубцевания в критических условиях течения послеоперационного раневого процесса.

Результаты морфологического исследования

На заключительном, третьем, этапе исследования выполнено сравнение морфологической картины мягких тканей околорубцовой и отдаленных зон у 6 пациентов, прошедших предоперационный курс низкоэнергетической лазерной терапии и 6 пациентов, которым такая подготовка не проводилась.

Обнаружение в образцах околорубцовых тканей очагов акантоза, периваскулярной инфильтрации и характерного расположения коллагеновых волокон позволило подтвердить факт распространения границ поражения за видимые пределы рубцовой ткани.

Для оценки микрососудистого кровотока гистологически важным параметром является плотность васкуляризации, отражающая общее количество сосудов на единицу площади среза. При сравнении препаратов взятых вблизи рубца и на отдалении, этот параметр оказался сходен (в среднем 78,6 условных единиц в околорубцовой зоне и 75,0 условных единиц - в отдаленной). В препаратах мягких тканей околорубцовой зоны после проведения курса лазерной терапии отмечается значительное увеличение плотности кровоснабжения- до 123,6 условных единиц. (+57% относительно неповрежденных тканей), при показателях отдаленной зоны -53,3 ед.

Таблица 3. Средние морфометрические показатели гемодинамики в сосочковом и подсосочковом слоях дермы в биоптатах больных с воздействием НЛТ и без него (в условных единицах)

Количество сосудов в поле зрения

Плотность васкуляризации

Средний диаметр сосудов

общая

средняя

Контрольная группа (без НЛТ)

Около рубца

7

380,4

78,6

7

В отдалении

8

359,6

75,0

8

Группа исследования (после НЛТ)

Около рубца

12

551,3

123,6

12

В отдалении

7

233,3

53,3

12

Отмечено, что лазерная терапия увеличила экспрессию ангиогенез-зависимых факторов- VEGF, CD 34, что свидетельствует о начале процесса неоангиогенеза и активации кератиноцитов. В гистопрепаратах группы исследования, в дерме, обнаруживаются цепочки FNC-позитивных клеток, что характерно для вновь образующихся капилляров.

С другой стороны, концентрация TGF 1 после курса НЛТ увеличилась незначительно. Этот фактор имеет двоякое значение в процессе формирования рубца: на ранних этапах это стимулятор репарации, на поздних - одна из причин образования гипертрофических рубцов.

Важно отметить появление после курса лазерной терапии Alpha SMA. Это маркер активации фибробластов, одного из важнейших компонентов заживления раны.

Таблица 4. Интенсивность экспрессии иммуногистохимических маркеров

Маркеры

Контрольная группа

Экспериментальная группа

Около рубца

В отдалении

Около рубца

В отдалении

VEGF

+-

+-

++

+-

CD 34

+

+-

++

+-

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»