WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 |

2 МПС II

3 МПС VI

4 МПС II

5 МПС II

1

Гоше

2

Гоше

3

Гоше

4

Гоше

- галактозидаза

186

301

130

286

171

26

136

228

98

– N - гексозаминидаза

275

168

171

143

183

181

208

- глюкуронидаза

208

60,5

49

63

86

118

- глюкоцереброзидаза

129

192

0

31

15

22,6

- идуронидаза

137

64

79

Идуронат-сульфатаза

0,02

0

0

0,04

Арилсульфатаза А

279

111

179

50

98

94

Арилсульфатаза В

120

0,9

162

133

223

3. Активность хитотриозидазы плазмы крови у больных мукополисахаридозами

Хитотриозидаза человека идентифицирована относительно недавно, является ферментом, принадлежащим к семейству хитиназ, которые расщепляют хитин. Хитин это полимер, структурной единицей которого является N-ацетилглюкозамин (Fusetti et al., 2002). При болезни Гоше происходит повышение активности хитотриозидазы сыворотки в сотни и тысячи раз по сравнению с группой здоровых людей (Hollak et al., 1994, 2001; Guo et al., 1995). Исследовали активность хитотриозидазы в плазме крови у больных с мукополисахаридозами в сравнении с соответствующими данными пациентов с болезнью Гоше и группой контроля (рисунок 2).

Примечание: * - р < 0,01

Рисунок 2. Концентрация сульфатированных гликозаминогликанов в моче и активность хитотриозидазы в плазме крови у больных мукополисахаридозами и болезнью Гоше

Обнаружено, что активность хитотриозидазы плазмы крови у пациентов с мукополисахаридозами составила 41,3 ±12,16 нмоль МУФ/мл в час, что не отличалось от активности хитотриозидазы у здоровых людей (р > 0,05); у пациентов с болезнью Гоше активность хитотриозидазы в плазме крови превышала показатель у здоровых лиц более чем в 500 раз (рисунок 2), что имеет важное значение для дифференциальной диагностики МПС и болезни Гоше.

  1. Экскреция сульфатированных гликозаминогликанов с мочой у больных сахарным диабетом

Нарушение углеводного обмена – СД – встречается намного чаще, чем мукополисахаридозы. Анализ содержания ГАГ в моче у больных сахарным диабетом с различной степенью выраженности диабетической нефропатии показал значительное (в 2,5 раза) увеличение суммарной экскреции с мочой сульфатированных ГАГ у больных СД в сравнении с контролем (5,90+0,38 и 2,7+0,19 мг/ммоль креатинина соответственно, р<0,001) (рисунок 3). Повышенная концентрация ГАГ в моче обнаружена у большинства пациентов: в 87,3% случаев показатель превышал верхнюю границу доверительного интервала в контроле (1,39-3,25 мг/ммоль). Гиперэкскреция сульфатированных ГАГ наблюдалась у больных СД с нормальной экскрецией белка. У больных СД с микроальбуминурией гиперэкскреция ГАГ была еще более выражена. Эти результаты согласуются с литературными данными (De Muro et al., 2002).

У большинства больных сахарным диабетом с нормальной экскрецией белка с мочой состав и соотношение фракций сульфатированных ГАГ существенно не менялись. У всех больных СД с нормальной экскрецией белка с мочой основным компонентом являлся хондроитинсульфат. Гепарансульфат присутствовал у 4-х человек в моче, причем только у двух - в концентрации, близкой хондроитинсульфату. Больные СД с микроальбуминурией характеризовались значительным увеличением экскреции с мочой гепарансульфата. Гепарансульфат обнаружен у 28 больных этой группы, причем в 17 случаях гепарансульфат становился основной фракцией: его экскреция приближалась к таковой хондроитинсульфата или даже превышала ее. У 7 пациентов данной группы в моче обнаружен дерматансульфат.

Рисунок 3. Экскреция сульфатированных ГАГ с мочой у больных сахарным диабетом в зависимости от стадии диабетической нефропатии

Примечания: К –контрольная группа; 1-я (n = 12) – с нормальной экскрецией белка; 2-я (n = 31) – с микроальбуминурией и 3-я (n = 12) с выраженной протеинурией.

* - р < 0,001 по сравнению с контролем.

У больных СД с выраженной протеинурией качественный состав ГАГ мочи отличался от такового в группе контроля. Гепарансульфат был выявлен у 11 больных из 12, при этом у 7 больных в качестве основного ГАГ. У 4 больных в заметных количествах выделялся с мочой дерматансульфат. Типичные изменения качественного состава ГАГ у больных СД с выраженной протеинурией представлены на рисунке 4.

Обнаруженные изменения экскреции и качественного состава ГАГ мочи у больных сахарным диабетом отражают нарушения обмена протеогликанов в тканях, найденные в базальной мембране клубочков почек (Дедов, Шестаков, 2000; Schaefer et al., 2001), в межпозвонковых дисках (Robinson et al., 1998), в капиллярах скелетных мышц (Jensen et al., 1997; Russo, 2004) и сопровождают прогрессирование нефропатии у больных СД.

Рисунок 4. Электрофорез ГАГ мочи больных сахарным диабетом.

Линия 1, 2, 3, 4: ГАГ, выделенные из мочи больных сахарным диабетом.

Линия 6: Стандарты: ХС – хондроитинсульфат; ГС – гепарансульфат.

5. Анализ содержания гликозаминогликанов в моче у крыс с мукополисахаридозами

Согласно литературным данным, введение сурамина крысам и мышам сопровождается снижением активности лизосомных ферментов печени, участвующих в деградации ГАГ (идуронатсульфатазы, -глюкуронидазы, - гиалуронидазы, N- ацетил--D-гексозаминидазы), однако активность других ферментов в печени повышена (-идуронидазы, гепаран-N-сульфатазы и арилсульфатазы В (Короленко, 1990, 2001; Constantopolos et al., 1980; Schneider et al., 1997).

Электронно-микроскопически при изучении срезов печени крыс через 24 ч после введения сурамина в клетках паренхимы не обнаружено заметных изменений клеточных органоидов за исключением лизосом. Наблюдалось преобладание аутофагосом и вторичных лизосом, содержащих нерасщепленные или частично лизированные клеточные органоиды. Результаты экспериментов показали, что введение сурамина однократно в дозе 250 мг/кг крысам Вистар вызывает усиление экскреции сульфатированных ГАГ с мочой (рисунок 5). Через 2 суток после введения сурамина концентрация сульфатированных ГАГ в моче увеличивалась в три раза (304,6 ± 28,36 мг/л; р=0,006), через 5 суток и 14 суток высокая концентрация ГАГ сохранялась (333,6 ± 95,34 мг/л и 321,7 ± 53,79 мг/л; р=0,006, соответственно) по сравнению с интактными крысами (104,9 ± 10,25 мг/л). В моче крыс после введения сурамина был обнаружен дерматансульфат, у интактных крыс он не выявлялся, а также было установлено увеличение выделения всех типов ГАГ: хондроитинсульфатов, гепарансульфата и дерматансульфата (рисунок 6).

Примечание * - р < 0,01; n – количество крыс в группе.

Рисунок 5. Концентрация ГАГ в моче крыс после введения сурамина однократно внутрибрюшинно (250 мг/г).

Рисунок 6. Электрофореграмма ГАГ мочи крыс после введения сурамина, 7 сут спустя.

Линия 1, 2: ГАГ мочи крыс контрольной группы.

Линия 3, 5: ГАГ мочи крыс на 7 день после введения сурамина.

Линия 4: Стандарты: ХС – ходроитинсульфат, ГС – гепарансульфат.

ВЫВОДЫ

1. Гиперэкскреция гликозаминогликанов с мочей у пациентов, обследованных на наличие наследственных болезней обмена, в 60 % случаев связана с нарушением обмена протеогликанов. При этом лизосомальные болезни накопления (мукополисахаридоз и болезнь Гоше) выявлены у 0,9% пациентов, а сахарный диабет - у 8%.

2. У больных мукополисахаридозами наблюдается выраженное повышение экскреции гликозаминогликанов (в 3-10 раз), сопровождающееся появлением в моче дерматансульфата, хондроитинсульфата и гепарансульфата, в то время как активность лизосомального фермента хитотриозидазы в плазме крови не изменяется.

3. Экскреция гликозаминогликанов с мочей при болезни Гоше менее выражена, чем при мукополисахаридозах, но активность хитотриозидазы в плазме крови возрастает в сотни раз, что может служить маркером при дифференциальной диагностике болезни Гоше и мукополисахаридозов.

4. При сахарном диабете суммарная экскреция сульфатированных гликозаминогликанов возрастает более чем в 2 раза. В зависимости от стадии диабетической нефропатии изменяется соотношение хондроитинсульфатов и гепарансульфатов в сторону возрастания доли гепарансульфатов.

5. Введение крысам сурамина вызывает изменения в экскреции сульфатированных гликозаминогликанов, наблюдаемые у больных мукополисахаридозами, что позволяет использовать сурамин для воспроизведения модели мукополисахаридозов у животных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Пауль Г.А., Русова Т.А. Определение сульфатированных гликозаминогликанов в моче // Клиническая лабораторная диагностика. – 1995. - №2., - С. 13 – 14.
  2. Пауль Г.А., Китайник Г.П. Проблемы обследования больных при патологии соединительной ткани // Тезисы докладов 6-ой научно-практической конференции врачей, Новосибирск, 24 – 26 апреля 1996 г. - С.88 – 89.
  3. Василькова Н.Ю., Пауль Г.А., Китайник Г.П. Случай диагностики мукополисахаридоза // Тезисы докладов 6-ой научно-практической конференции врачей, Новосибирск, 24 – 26 апреля 1996 г. - С.89 – 90.
  4. Пупышев А.Б., Шкурупий В.А., Короленко Т.А., Власенко Л.П., Пауль Г.А. Синдром лизосомного накопления: от исследования фармако-индуцируемых форм к энзимодиагностике лизосомных болезней // Материалы научно-практической конференции, Томск, 9-10 июня 1998 г. - С. 85 - 87.
  5. Пауль Г.А. Новые подходы к энзимоанализу мукополисахаридозов // Тезисы докладов 9-ой научно-практической конференции врачей, Новосибирск, 1999. – С. 364.
  6. Paul G.A., Rusova T.V., Zaidman A.M., Kitainik G.P. Peculiarities glycosaminoglycan and proteoglycan excretion in human with mucopolysaccharidoses // Book of Abstracts, 5th International Symposium on Mucopolysaccharidoses and Related Diseases, Vienna, March 18 – 21, 1999. - P. 136.
  7. Короленко Т.А., Жанаева С.Я., Фаламеева О.В., Каледин В.И., Филюшина Е.Е., Бузеева И.И., Пауль Г.А. Хитотриозидаза как маркер стимуляции макрофагов// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2000. - №10. - С. 391-394.
  8. Пауль Г.А., Амбросова С.М., Бондарь И.А., Климонтов В.В., Короленко Т.А. Количественные и качественные изменения гликозаминогликанов мочи при различных заболеваниях // Тезисы докладов 11-ой научно-практической конференции врачей, Новосибирск, 2001. – С. 397.
  9. Klimontov V., Bondar I., Paul G., Pupyshev A. Serum activity of lysosomal enzymes and urinary glycosaminoglycan excretion in diabetic nephropathy // Diabetologia. – 2001. – V.44, suppl. 1. – P. A269.
  10. Пауль Г.А., Пупышев А.Б., Китайник Г.П., Шорина А.Р., Куприянова Л.Я., Власенко Л.П. Селективный скрининг лизосомных болезней накопления в условиях медико-генетического отдела областного диагностического центра // Бюллетень СО РАМН, 2001. - №1. - С.20-22.
  11. Короленко Т.А., Фаламеева О.В., Жанаева С.Я., Каледин В.И., Пауль Г.А., Куторгин Г.Д., Гаврилова Н.И. Хитотриозидаза – новый фермент макрофагов: биологическая роль и значение в диагностике лизосомных болезней накопления // Бюллетень СО РАМН. - 2001. - №1.- С.28-34.
  12. Korolenko T., Falameyeva O., Djanaeva S., Paul G., Wevers R., Sandula J. Chitotriosidase activity in models of lysosomal storage and macrophage stimulation // Book of Abstracts, 13th ESGLD Workshop, The Netherlands, September 20 – 23, 2001. - P.108.
  13. Korolenko T., Filushina E., Levina O.,Falameyeva O., Djanaeva S., Dergunova M., Paul G., Plotnikova G.I., Petrova E.A.
    Pages:     | 1 | 2 || 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»