WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

Клиническое и психологическое обследование 31 пациента, прошедшего курс лечения психотропными препаратами. Исследование Fe2+-зависимой ХЛ плазмы крови, люминол-зависимой спонтанной и индуцированной ХЛ цельной крови в обеих группах.

6. Статистическая обработка результатов клинико-экспериментального исследования

Стандартный пакет компьютерных программ

Первым этапом работы было исследование состояния СРО в коре головного мозга и сыворотке крови, а также поведенческих реакций у экспериментальных животных в условиях хронического стресса и интактных особей.

Далее изучали влияние четырех психотропных препаратов (валериана, гидроксизин, феназепам, флупентиксол) на поведенческие реакции и процессы СРО в коре головном мозге и сыворотке крови экспериментальных животных в условиях хронического стресса.

Опыты проводились на 60 нелинейных крысах-самцах массой 200–250 г. (6 групп по 10 животных). Животных содержали в пластмассовых клетках при температуре 18–20°С в условиях свободного доступа к воде и пище. В качестве подстилки использовались древесные опилки. Освещение было естественным.

Крысы были разделены на 6 групп. Первая служила контролем, остальные в течение трех недель ежедневно подвергались стрессорной нагрузке на фоне введения изотонического раствора NaCl внутримышечно или воды внутрижелудочно, либо на фоне воздействия психотропных препаратов. Использовались следующие препараты: феназепам (внутримышечно 0,000025 г/кг веса), атаракс (гидроксизина гидрохлорид) (внутримышечно 0,001 г/кг), валериана лекарственная (внутрижелудочно 2%-ный настой, в дозе 0,1 г/кг), флюанксол-депо (цис(Z)-флюпентиксола деканоат) (внутримышечно один раз в две недели в дозе 0,002 г/кг). В качестве стрессора использовалось принудительное плавание ежедневно по 25 мин при температуре воды 25°С (Burgin A. et al., 1996).

Степень выраженности стресса оценивалась по нарушению индивидуального поведения животных в тесте открытого поля. Рассчитывались интегральные критерии: коэффициент подвижности (КП), ориентировочно-исследовательская активность (ОИА), эмоциональная тревожность (ЭТ) (Атрошенко О.Н., 1999).

В конце эксперимента животных декапитировали с соблюдением правил эвтаназии, согласно Хельсинкской декларации о гуманном отношении к животным.

Для исследования процессов СРО использовали метод регистрации ХЛ возникающей при взаимодействии свободных радикалов. Свечение измеряли на приборе ХЛМ-003, стабильность работы которого проверяли по излучению вторичного эталона СФХМ – 1 с интенсивностью свечения 5,1х105 квантов/сек. Эта величина принята за 1 условную единицу. Показатели ХЛ регистрировались в течение 5 минут. Интегральными показателем ХЛ являлась светосумма свечения (Фархутдинов Р.Р., 2005).

На льду извлекали мозг, отделяли кору, забирали кровь. Для приготовления гомогената коры мозга навеску ткани отмывали охлажденным фосфатным буфером в соотношении 1:5 (вес:объем), гомогенизировали в механическом гомогенизаторе 5 минут при температуре +4 С. Полученный гомогенат фильтровали через капроновый фильтр, определяли содержание белка микробиуретовой пробой (Пушкина Н.Н., 1983). К 0,5 мл гомогената, пропущенного через капроновый фильтр, добавляли 19,5 мл солевого буфера и исследовали на хемилюминомере. Кровь собирали в центрифужную пробирку. Форменные элементы крови осаждали центрифугированием при 3000 об. 15 минут, 0,5 мл сыворотки прибавляли к 19,5 мл фосфатного буфера и также исследовали на хемилюминомере. Свечение в исследуемых образцах инициировали введением 1 мл 50 мМ раствора сернокислого железа (Фархутдинов Р.Р., 2005).

Дополнительно для изучения процессов липопероксидации в гомогенате коры головного мозга и сыворотке крови определялось содержание ТБК-активных продуктов по цветной реакции с 2-тиобарбитуратовой кислотой в присутствии трихлоруксусной кислоты методом спектрофотометрии при длине волны 532 нм. В качестве контроля использовали дистиллированную воду (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977).

Третьим этапом работы было исследование влияния различных психотропных препаратов (феназепам, гидроксизин, настой валерианы, мидазолам, пропофол, вальпроат натрия и тиоктовая кислота) на процессы генерации АФК и ПОЛ в трех модельных системах.

Концентрацию препарата в пробе рассчитывали соответственно средней терапевтической дозе, создаваемой в организме, и варьировали для определения дозозависимого эффекта на процессы СРО.

В качестве первой модели использовали 20 мл фосфатного буфера с добавлением цитрата и люминола. Состав буфера: 2,72 г. KH2PO4, 7,82 г. KCL, 1,5 г. цитрата натрия C6H8O7Na3*5,5H2O на 1 литр дистиллированной воды. Величину рН полученного раствора доводили до 7,45 ед. титрованием насыщенным раствором КОН и добавляли 0,2 мл маточного раствора люминола (10-5 М). Образование АФК инициировали введением 1мл 50 мМ раствора сернокислого железа.

Для оценки действия препаратов на ПОЛ их добавляли к липидам, полученным из куриного желтка, содержащего липопротеиновые комплексы, сходные с липидами крови (Клебанов Г.И., 1993). Желток смешивали с фосфатным буфером в соотношении 1:5, гомогенизировали, доводили содержание белка до 1 мг на мл дальнейшим разведением (в среднем 25 мл полученного гомогената на 1л буфера). Отбирали 20 мл, ХЛ инициировали добавлением 1мл 50 мМ раствора сернокислого железа при постоянном перемешивании, что приводило к окислению ненасыщенных жирных кислот, входящих в состав липидов, развивалась ХЛ, по интенсивности которой судили о процессах ПОЛ.

Дополнительно исследовали влияние препаратов на ХЛ гомогенатов головного мозга крыс (1 г гомогената ткани на 5 мл фосфатного буфера). К 20 мл раствора добавляли 1 мл 50 мМ раствора FeSO4, что приводило к окислению ненасыщенных жирных кислот и развитию свечения.

В клинической части исследования приняли участие 33 пациента из г. Уфы и Республики Башкортостан с ГБН и 31 здоровый человек. Пациенты были отобраны на базе стационарного неврологического отделения и поликлиники Республиканской клинической больницы им. Г.Г. Куватова с 2003 по 2005 гг. Диагноз хронической ГБН устанавливался в соответствии с диагностическими критериями 2 редакции Международной классификации головной боли (The International>. Критериями включения в группу контроля являлись: 1) отсутствие жалоб на состояние здоровья и нарушения сна, 2) возраст от 20 до 50 лет, 3) отсутствие клинических признаков соматических, неврологических и психических заболеваний, 4) отсутствие ночной работы, 5) отсутствие систематического приема лекарственных препаратов (в т.ч. анальгетиков) или психоактивных веществ, 6) формальное согласие испытуемого на участие в исследовании.

Исследовали железоиндуцированную ХЛ плазмы и спонтанную и индуцированную зимозаном ХЛ цельной крови.

Исследование ХЛ крови проводилось два раза: перед лечением (после постановки клинического диагноза), и после курса стандартной психофармакотерапии через 3 месяца.

Исследовались уровень депрессии с помощью шкалы Гамильтона, Бека (Смулевич А.Б., 2003), тревоги с помощью опросника Ч.Спилбергера, адаптированного Ю.Л. Ханиным, позволяющего дифференцированно измерять тревожность и как личностное свойство (уровень личностной тревожности), и как состояние (уровень ситуативной тревожности) (Ханин Ю.Л. 1976).

Все полученные данные обработали на ЭВМ с помощью специального пакета программ вариационной статистики “Statistica”. Использовался критерий Фишера-Стьюдента. Однофакторный дисперсионный анализ проводили для сравнения антиокислительного эффекта различных доз препаратов в модельных системах. За вероятность различий принимались значения P<0,05 (Лапач С.Н. и др. 2000).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Свободнорадикальное окисление в коре головного мозга и поведение крыс при хроническом стрессе и введении психотропных препаратов.

Стресс характеризуется комплексным воздействием на нейрогуморальные механизмы организма и сопровождается выраженными изменениями поведения человека и животных. Одним из универсальных механизмов реакции организма на стресс является активация СРО. Были исследованы поведенческие реакции и состояние СРО у животных на фоне хронического стресса и введения психотропных препаратов.

Для оценки состояния СРО в коре головного мозга была исследована ХЛ. Определялось содержание конечных продуктов ПОЛ – ТБК-активных продуктов.

На рис. 1 (слева) представлена запись ХЛ гомогената коры головного мозга экспериментального животного в норме и в условиях хронического стресса. Справа – типичная запись ХЛ головного мозга животных при стрессе и введении психотропных.

На кривой записи ХЛ можно выделить спонтанное свечение (а), быструю вспышку (б), возникающую после добавление солей железа, за которой следовал латентный период (в,г) с переходом в медленную фазу свечения (д).

Рис. 1. Типичная запись ХЛ головного мозга интактного животного (1) и при хроническом стрессе (2). Параметры хемилюминограммы: спонтанное свечение (а), быстрая вспышка (б), латентный период (в-г), медленная вспышка (д) (слева). Типичная запись ХЛ головного мозга животного при стрессе (1), введении валерианы (2), гидроксизина (3), феназепама (4), флупентиксола (5) (справа).

В результате хронического стресса в коре головного мозга животных произошло повышение интенсивности ХЛ в среднем в 2 раза относительно контроля (табл.2.), и незначительно (в 1,1 раза) – сыворотки крови.

Содержание ТБК-активных продуктов было повышено в коре головного мозга стрессированных животных в 1,3 раза, в значительно меньшей степени (в 1,1 раза) – в сыворотке крови.

У крыс получавших на фоне стрессового воздействия настой валерианы лекарственной, интенсивность ХЛ гомогената коры головного мозга повысилась только в 1,5 раза, по сравнению с контролем. Уровень ХЛ гомогената головного мозга крыс получавших гидроксизин и феназепам был выше показателей интактных животных лишь в 1,14 и 1,16 раза соответственно. Такая же тенденция наблюдалась в отношении содержания ТБК-активных продуктов.

Флупентиксол также предотвратил повышение интенсивности ХЛ гомогената головного мозга (табл.2.) и сыворотки. Причем в данном случае достоверных отличий от контроля не было. Содержание ТБК-активных продуктов в мозге и сыворотке крови соответствовало показателям контрольных животных.

Табл.2.

Влияние хронического стресса и некоторых психотропных препаратов

на свободнорадикальное окисление в коре головного мозга и индивидуальное поведение крыс.

Условия

опыта

Светосумма ХЛ гомогената коры головного мозга,%

Светосумма ХЛ сыворотки крови, %

КП, %

ОИА, %

ЭТ, %

Контроль

100±2,6

100±4,3

100±7,2

100±8,7

100±5,9

Стресс

198±2,9*

110±2,2*

176,4±16,4*

80,5±1,77*

154±15,3*

Стресс+

Валериана

156±3,8*

104±5,4

130,3±11,3*

84,19±3,9*

141±12,5*

Стресс+

Гидроксизин

114±2,6*

102±4,6

98,8±8,8

95,9±2,1

118±10,1

Стресс+

Феназепам

116±4,5*

105±5,7

92,1±9,9*

93,3±1,85*

110±12,9

Стресс+

Флупентиксол

104±2,5

102±3,2

82,1±7,2*

91,2±1,99*

98±8,35

Приведены средние значения, в % от контроля, * - p<0,05 по сравнению с показателями контрольной группы

Корреляционный анализ выявил наличие достоверной связи (P<0,05) между показателями ХЛ и содержания ТБК-активных продуктов в головном мозге и сыворотке крови, r=0,6 и r=0,47 соответственно.

Хронический стресс приводил к развитию стойких изменений в индивидуальном поведении животных, соответствующих тревожно-депрессивному синдрому. ОИА снизилась в 1, 25 раза, ЭТ и КП повысились соответственно в 1,5 и 1, 7 раза, относительно контроля.

Поведение животных, которые получали валериану, изменилось меньше и соответствовало более легкой степени тревожно-депрессивного синдрома. Применение гидроксизина предотвратило развитие подобных изменений в поведении животных. Интегральные показатели достоверно не отличались от таковых контрольной группы. Феназепам незначительно снизил КП и ОИА, а также ЭТ животных. Аналогичные, но более выраженные изменения произошли в поведении животных получавших флупентиксол (табл.2.).

Имелась достоверная корреляционная связь (P<0,05) между показателями ХЛ гомогената коры головного мозга и показателями КП (r=0,43) и ЭТ (r=0,56) в группе животных подвергавшихся стрессу и не получавших препараты.

Pages:     | 1 || 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»