WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

Выделение мембран лейкоцитов проводили в лаборатории энзимологии питания путем осаждения на ультрацентрифуге BECKMAN L7 (при участии к.м.н. Л.В.Кравченко).

Спектр и количество лейкотриенов, высвобождаемых из лейкоцитов периферической крови, определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии совместно с д.м.н. Н.Н.Погомий на колонке Kromasil 5M С 18 (0,5х250) с использованием насосов Binary HPLC Pump 1525 (Waters), УФ детектора Waters 2487, хроматографического программного обеспечения «Бриз». Определение проводили в системе ацетонитрил – уксусная кислота – вода в соотношении 50:0,05:50 по объему (рН=3,7), при скорости потока 1,5 мл/ мин. и чувствительности детектора 0,01-0,02 ед. при 280 нм. В качестве стандартов использовали препараты синтетических ЛТ В4, С4, Д4, Е4, В5, Д5 ("Sigma ", США). Количество лейкотриенов выражали в нг на 107 лейкоцитов.

Состав метиловых эфиров жирных кислот выделенных липидов изучен методом газожидкостной хроматографии в лаборатории обмена веществ и энергии (совместно с к.б.н. С.Н.Кулаковой и к.х.н. Ф.А.Медведевым) на хроматографе «DANI 1000» (колонка капиллярная 60м х 0,25мм с фазой НР-23, Т0 испарителя колонки и детектора (230:110 – 230:240), с плазменно-ионизационным детектором, газ-носитель – азот). Обработка результатов произведена микропроцессором по программе внутреннего нормирования. Идентификация хроматограмм осуществлена с использованием величины времени удерживания насыщенных жирных кислот.

Уровень малонового диальдегида в крови определяли по реакции с тиобарбитуровой кислотой с флюориметрической детекцией бутанольного экстракта. Суммарную антиоксидантную активность сыворотки крови (в относительных единицах) определяли по модифицированному методу Клебанова (Н.М.Шилина и др.). Содержание трансферрина и церулоплазмина в сыворотке крови определяли методом простой радиальной иммунодиффузии по Манчини. Содержание витаминов А и Е в сыворотке крови изучали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, витамина С – методом визуального титрования в лаборатории витаминов и минеральных веществ (зав. лаб. - профессор В.Б. Спиричев).

Фактическое питание больных бронхиальной астмой изучали анкетно-опросным методом суточного воспроизведения питания (совместно с к.м.н. Л.Ю.Волковой).

Результаты исследований обработаны с помощью лицензионного пакета стандартных статистических программ SPSS 14. Использованы методы вариационной статистики, корреляционного анализа по Спирмену, вычисление критерия Краскела-Уоллиса и непараметрического критерия Манна-Уитни.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение роли пищевой сенсибилизации при бронхиальной астме

у детей

У 88 из 128 обследованных больных выявлена сопутствующая аллергическая патология, среди которой у 64 больных на основании анамнестических данных была диагностирована пищевая непереносимость. Однако, роль пищевых аллергенов в возникновении обострений бронхиальной астмы была доказана лишь у 12 из 64 обследованных детей. Чаще всего бронхоспазм возникал при употреблении в пищу рыбы и при вдыхании паров при термической обработке этого продукта.

Среди других клинических проявлений пищевой непереносимости преобладающим было поражение кожных покровов в виде острой крапивницы, кореподобной зудящей сыпи, обострения атопического дерматита, которые отмечались у большинства детей при употреблении в пищу окрашенных фруктов и овощей, рыбы, яиц, в меньшей степени меда, шоколада, круп.

Определение антител к специфическим IgE выявило сенсибилизацию к пищевым аллергенам у 66% обследованных больных с сопутствующей аллергической патологией, при этом у 50% детей обнаружена латентная сенсибилизация к ряду пищевых продуктов – рыбе, креветкам-крабам, томату-моркови, пшенице, лесным орехам. У 89% обследованных детей отмечена сочетанная сенсибилизация к пищевым и пыльцевым аллергенам и у 59% - к тараканам и креветкам-крабам.

Таким образом, полученные данные подтверждают необходимость использования элиминационных диет при бронхиальной астме с целью уменьшения антигенной нагрузки на организм больного и предупреждения возникновения перекрестных аллергических реакций, в частности, между пищевыми-пыльцевыми и пищевыми-эпидермальными антигенами. Однако, так как элиминационный рацион может способствовать развитию дефицита ряда пищевых веществ, включая витамины и микронутриенты, следующим разделом работы явилась оценка фактического питания детей с бронхиальной астмой. При этом, учитывая важную патогенетическую роль при данном заболевании жирового компонента рациона питания, особое внимание было уделено изучению фактического потребления детьми с бронхиальной астмой различных классов жирных кислот.

Фактическое потребление основных пищевых веществ и различных

классов жирных кислот детьми, больными бронхиальной астмой

Анализ фактического питания детей с бронхиальной астмой, наблюдавшихся в стационаре и амбулаторно, показал, что потребление основных пищевых веществ соответствовало рекомендуемым нормам потребления, за исключением выраженного дефицита витаминов - А, В1 и микроэлементов - йода, кальция.

Потребление общего жира составило 74,3±5,53г, в том числе насыщенных жирных кислот - 30,6±2,28г, мононенасыщенных жирных кислот - 29,1±2,4г, полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) - 10,2±1,29г. Содержание -6 ПНЖК составило 8,45 г/сут, -3 ПНЖК - 0,965 г/сут. Их соотношение равнялось 8,7(-6):1(-3), что существенно выше рекомендуемого соотношения 1,8:1 – 2,6:1 [ISSFAL, 2004]. При этом содержание в рационе основного представителя -3 ПНЖК - -линоленовой кислоты – было в 2,3 раза ниже рекомендуемых норм [Food and Nutrition Board of Institute of the National Academies, 2005]. В еще большей степени (в 16 раз) было снижено, в сравнении с указанными рекомендациями, содержание длинноцепочечных жирных кислот -3 класса – эйкозапентаеновой (ЭПК, 20:5) и докозагексаеновой (ДГК, 22:6). Важно отметить, что основным источником этих длинноцепочечных жирных кислот являются морская рыба и морепродукты. Так как эти продукты обладают высокой сенсибилизирующей активностью, то у 95% обследованных детей с бронхиальной астмой их исключали из рациона питания, и основными источниками длинноцепочечных жирных кислот у них были желток куриного яйца и мясо курицы.

Результаты изучения жирнокислотного состава крови и

мембран лейкоцитов у детей, больных бронхиальной астмой

Анализ жирнокислотного состава плазмы крови и мембран лейкоцитов у детей, больных бронхиальной астмой, выявил в сравнении с практически здоровыми детьми увеличение содержания в плазме крови насыщенных жирных кислот, в частности, достоверное увеличение содержания 14:0 (р=0,02) и 17:0 (р=0,00001), что отражает отмеченное превышение поступления с пищей насыщенных жиров в сравнении с ненасыщенными. Обнаружена также тенденция к снижению у детей с бронхиальной астмой уровня арахидоновой кислоты (АК, 20:4) – одного из основных субстратов перекисного окисления липидов и предшественницы провоспалительных лейкотриенов 4 серии в сочетании с нарастанием уровня дигомо--линоленовой кислоты (ДГЛК), что приводило к снижению соотношения АК/ДГЛК (рис.1).

Однако, наиболее существенные изменения выявлены в содержании в крови детей с бронхиальной астмой -3 ПНЖК. Обнаружено парадоксальное увеличение в плазме крови и мембранах лейкоцитов детей с бронхиальной астмой по сравнению со здоровыми детьми суммы -3 ПНЖК (в 2,5 и 1,5 раза соответственно) и уровня ЭПК (в 5,5 и 1,5 раза соответственно), несмотря на выявленное нами недостаточное поступление -3 ПНЖК с пищевым рационом. При этом соотношение ЭПК/ДПК+ДГК в плазме крови было достоверно ниже у здоровых детей, чем у детей с бронхиальной астмой (р=0,00002).

* - р; дц – длинноцепочечные жирные кислоты.

Рис.1. Относительное содержание (в %) и соотношение отдельных жирных кислот плазмы крови у больных бронхиальной астмой и здоровых детей.

Это указывает на превращение ЭПК в более длинноцепочечные и полиненасыщенные ДПК и ДГК у здоровых детей и, напротив, о блоке такого превращения и накоплении ЭПК у больных бронхиальной астмой. Причины этого явления не ясны и требуют дальнейшего изучения.

Анализ спектра жирных кислот плазмы крови у детей с разной тяжестью бронхиальной астмы показал, что уровень АК в плазме крови детей с тяжелой бронхиальной астмой снижался в меньшей степени, чем при легкой бронхиальной астме. Содержание в плазме крови ЭПК так же, как и при легкой бронхиальной астме, было достоверно повышено по сравнению со здоровыми детьми, но в меньшей степени (в 5,5 раз против 10). При этом соотношение ЭПК/ДПК+ДГК у тяжелых больных было ниже, чем у детей с легкой бронхиальной астмой и приближалось к его величине у здоровых детей. Эти данные отражают, очевидно, положительное влияние терапии ингаляционными кортикостероидами, проводимой у детей с тяжелой бронхиальной астмой и способствующей нормализации жирнокислотного состава плазмы крови у детей с бронхиальной астмой.

Изучение образования лейкотриенов 4 и 5 серии лейкоцитами периферической крови у детей с бронхиальной астмой в сравнении со здоровыми детьми

Изучение продукции лейкотриенов 4 и 5 серии лейкоцитами периферической крови у 63 детей (7-13 лет) с бронхиальной астмой в сравнении с 8 практически здоровыми детьми того же возраста, проведенное с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, выявило повышение образования всех классов лейкотриенов при бронхиальной астме. При этом наиболее значительно возрастала продукция сульфидопептидных лейкотриенов, в особенности, у детей с легкой формой бронхиальной астмы, не получавших медикаментозной терапии (рис.2). У этих детей наблюдался также максимальный уровень высвобождения лейкотриена С4. У детей со средне-тяжелой и тяжелой бронхиальной астмой, получавших терапию соответственно кромогликатами и ингаляционными кортикостероидами, отмечалось снижение уровня лейкотриена С4 в сравнении с детьми с легкой бронхиальной астмой, не получавшими медикаментозной терапии и, напротив, повышение продукции метаболитов лейкотриена С4 – лейкотриена Д4 и особенно, лейкотриена Е4, который проявляет наименьшую бронхоконстрикторную активность в ряду сульфидопептидных лейкотриенов. Однако, лейкотриену Е4 приписывают важную патогенетическую роль в формировании неспецифической гиперреактивности бронхов при аллергических заболеваниях.

Можно предполагать, что выявленный нами высокий уровень лейкотриена Е4 у больных с тяжелой бронхиальной астмой отражает персистирующий характер аллергического воспаления, сопровождающегося постоянным синтезом лейкотриенов, в силу чего у этих больных сохраняется высокий уровень секреции лейкотриена Е4 (несмотря на интенсивную терапию), что, вероятно, и поддерживает длительную бронхоконстрикцию у этих детей.

* - отличия достоверны по сравнению с группой здоровых детей, * - р=0,002; **- р=0,04; *** - р=0,03;

- отличия достоверны по сравнению с группой тяжелых больных, р=0,0004, группой больных средней тяжести, р=0,0004;

- отличия достоверны по сравнению с группой больных средней тяжести, р=0,05.

Рис.2. Уровень лейкотриенов (ЛТ) у здоровых детей и больных бронхиальной астмой разной степени тяжести.

Следствием сдвига метаболизма в сторону образования сульфидопептидных лейкотриенов у больных бронхиальной астмой является уменьшение уровня лейкотриенов (ЛТ) В4 и В5 и снижение соотношения ЛТВ4/ЛТВ5 с 6:1 у здоровых детей до 3,5:1 и 2:1 у детей, получавших соответственно кромогликаты и ингаляционные кортикостероиды. Вместе с тем, соотношение ЛТД4/ЛТД5 возрастало в 3-11 раз в сравнении со здоровыми детьми.

Таким образом, лечение больных бронхиальной астмой кромогликатами и ингаляционными кортикостероидами частично подавляет продукцию лейкотриенов, активно участвующих в реализации аллергического воспаления, но не предотвращает продукцию лейкотриена Е4, обладающего длительным бронхоконстрикторным эффектом, и преобладание образования лейкотриенов 4 серии над лейкотриенами 5 серии. Это служит, очевидно, одним из факторов пролонгации патологического процесса в легких у детей с бронхиальной астмой. Полученные данные указывают на необходимость дальнейшего поиска новых фармакотерапевтических и диетологических подходов к нормализации обмена лейкотриенов и, в частности, стимуляции синтеза лейкотриенов 5 серии, что может, очевидно, способствовать уменьшению аллергического воспаления и снижению уровня сенсибилизации. В пользу этого положения говорят также впервые полученные данные об уровне лейкотриенов 5 серии у здоровых детей. Было установлено, что у них образуются лейкотриены не только 4, но и 5 серии, причем лейкотриен Д5 выявлялся у всех обследованных здоровых детей и его уровень был выше, чем уровень лейкотриена Д4. Эти результаты указывают на низкую бронхоконстрикторную активность лейкотриена Д5 в сравнении с лейкотриеном Д4, что согласуется с представлениями о целесообразности переключения метаболизма лейкотриенов у больных бронхиальной астмой в сторону образования лейкотриенов 5 серии.

Исследование показателей перекисного окисления липидов, антиоксидантной активности и содержания витаминов-антиоксидантов в крови у детей с бронхиальной астмой

Изучение активности перекисного окисления липидов (по уровню малонового диальдегида) и антиоксидантной активности крови у детей с бронхиальной астмой выявило достоверное снижение уровня малонового диальдегида в крови при всех формах бронхиальной астмы (табл.1). Можно полагать, что это снижение связано с показанным нами уменьшением уровня в крови детей с бронхиальной астмой одного из основных субстратов перекисного окисления липидов - АК, а также, возможно, с действием лекарственных препаратов. Полученные данные о снижении уровня малонового диальдегида в крови указывают на существенное изменение

Табл.1.

Уровень малонового диальдегида и показателей антиоксидантного статуса в крови детей с бронхиальной астмой (БА) и здоровых детей, М±SD.

Показатель

Здоровые (n=19)

Легкая БА

(n=14)

Средне-тяжелая БА (n=17)

Тяжелая БА (n=36)

Pages:     | 1 || 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»