WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 |

В 52% (14 из 27) АК ТК II клинической стадии интенсивность экспрессии MUC2 была 1-2 балла, в III стадии - 48% (12 из 25), в IV - 37,5% (3 из 8) случаев.

В результате исследования было показано, что при снижении степени дифференцировки опухолей и увеличении клинической стадии заболевания интенсивность экспрессии муцина 2, в норме выявляющегося в бокаловидных клетках слизистой ТК, уменьшается, а муцина 1 - увеличивается.

Исследование адгезивных свойств клеток эпителиальных опухолей ТК

В процессе эмбрионального развития и гистогенеза тканевых структур важная роль принадлежит межклеточным контактам, которые осуществляются при помощи ряда адгезивных факторов. Аномалии межклеточных контактов в опухолевой ткани могут стать пусковым механизмом инвазии и опухолевой прогрессии.

Экспрессия Е-кадхерина Е-кадхерин – адгезивная молекула, характерная для клеток эпителия, в том числе, слизистой кишечника [T.Omelchenko et al, 2001]. В неизмененном эпителии слизистой ТК Е-кадхерин выявлялся в 100% клеток в виде равномерного мембранного окрашивания.

В опухолевой ткани реакция с антителами к Е-кад имела ряд особенностей. Поэтому анализ производился с учетом количества позитивных клеток и типа экспрессии молекул. Нами были выделены следующие типы иммунореативности к Е-кад.: 1) мембранный, нормальный, тип экспрессии с равномерным распределением по мембране; 2) мембранно-редуцированный тип экспрессии при распределении иммунореактивности на отдельных участках клеток; 3) цитоплазматический тип – равномерное распределение экспрессии в цитоплазме; 4) гетерогенный тип – сочетание мембранного и цитоплазматического типов экспрессии; 5) отсутствие иммунореактивности. В соответствии с интенсивностью реакции и локализацией экспрессии Е-кад была разработана шкала оценки: 1 балл – нормальный, мембранный тип экспрессии в 100% клеток; 2 балла - цитоплазматический и гетерогенный типы экспрессии в 100% клеток; 3 балла - редуцированный мембранный, диффузный цитоплазматический и гетерогенный типы в менее 50% клеток.

В клетках исследованных нами ТВА экспрессия Е-кад соответствовала 1 баллу, т.е. была мембранной, равномерной по интенсивности, аналогичной экспрессии прилежащей к опухоли непораженной слизистой ТК.

По типу экспрессии Е-кад все исследованные опухоли толстой кишки были разделены на 2 большие группы: с нормальной, мембранной, экспрессией и с аномальной (цитоплазматической, гетерогенной и мембранно-редуцированной) экспрессией этих адгезивных молекул в клетках. В зависимости от клинической стадии опухоли доля клеток с мембранной экспрессией снижался. В клетках ТВА мембранная экспрессия Е-кад выявлялась в 100% случаев, в АК II стадии количество случаев с нормальной экспрессией Е-кад соответствовало уже 30%, в АК III стадии – 8%, а в IV стадии – мембранный тип экспрессии не отмечался вообще.

Напротив, аномальная экспрессия Е-кад в клетках ТВА отсутствовала, в АК II стадии отмечалась в 70% случаев, в АК III стадии - в 89%, а в АК IV стадии – в 100%.

При снижении степени дифференцировки опухолевых клеток также меняется характер экспрессии Е-кад. Интенсивная мембранная реакция Е-кад в 100% случаев отмечалась в клетках ТВА, в 54% случаев – в клетках ВД АК, в 11% случаев – УД АК, а в клетках НД АК экспрессия Е-кад была аномальной.

Снижение степени дифференцировки эпителиальных опухолей ТК и возрастание их инвазивного потенциала сопровождалось уменьшением, а также изменением типа экспрессии Е-кадхерина в опухолевых клетках. Очевидно, что аномальная экспрессия Е-кадхерина в клетках АК ТК, которая является следствием клеточных мутаций, ведет к изменению клеточной дифференцировки и способствует прогрессированию опухолей.

Экспрессия -катенина. -катенин – это цитоплазматический протеин, который, связываясь с Е-кад, обеспечивает стабильные межклеточные адгезивные связи [N.A.Chitaev et al, 1998; M.F.McEntee et al, 1999 ]. В слизистой толстой кишки -катенин равномерно выявлялся на клеточной мембране и в цитоплазме клеток поверхностных и базальных отделов крипт.

Во всех исследованных нами эпителиальных опухолях ТК отмечалась экспрессия -кат в подавляющем большинстве клеток, которая варьировала в зависимости от локализации молекул в клетке. Наблюдались следующие типы экспрессии -кат: А). нормальный - мембранный - экспрессия на поверхности клеточной мембраны, Б). аномальные типы экспрессии: 1) цитоплазматический - локализация в цитоплазме клеток; 2) гетерогенный - сочетание мембранного и цитоплазматического типов; 3) ядерный – экспрессия протеина в ядре.

В неповрежденной слизистой ТК и в клетках ТВА выявлялся мембранный и цитоплазматический типы экспрессии. В 3 из 5 случаев (60%) ТВА отмечалась гетерогенная экспрессия к -кат, представленная и мембранным, и цитоплазматическим типами.

В результате проведенного исследования было установлено, что -кат может выявляться в различных клеточных структурах: на мембране, в цитоплазме, а также в ядре опухолевых клеток. При этом мембранный, а также цитоплазматический типы экспрессии, помимо АК ТК, были обнаружены в эпителии слизистой ТК и ТВА, тогда как ядерный тип экспрессии проявлялся только в клетках АК ТК, в основном, в III-IV клинических стадиях опухолей. Характерно также, что ядерный тип экспрессии чаще выявлялся в участках инвазивного роста. В солидных участках НД АК экспрессия этих молекул также была ядерной.

Экспрессия CD44H. CD44H – трансмембранный гликопротеин, участвующий в межклеточных и клеточно-матриксных взаимодействиях [P.Herrlich et al, 1995; H Gorham, 1996]. В нормальной слизистой ТК экспрессия CD44H отмечалась в эпителии базальных отделов крипт ТК на поверхности клеточных мембран.

Однако в ткани опухолей ТК иммунореактивность CD44H также имела различную локализацию. В связи с этим были предложены следующие критерии оценки: апикальный мембранный тип – мембранная экспрессия, преимущественно в апикальной части клетки; базальный и базолатеральный типы – мембранная экспрессия, преимущественно в базальных и базолатеральных отделах клеток; мембранный равномерный тип - равномерная экспрессия по всей поверхности мембраны клеток; цитоплазматический тип – распределение молекул в цитоплазме клеток ; отсутствие экспрессии молекул.

Установлено, что в зависимости от степени дифференцировки опухоли и стадии опухолевого процесса экспрессия CD44Н имела различную интенсивность и локализацию в клетке. В клетках ТВА ТК и части ВД АК отмечалась выраженная равномерная базолатеральная и базальная экспрессия адгезивных молекул в опухолевых клетках, тогда как в низкодифференцированных (87,5%) и в ряде умереннодифференцированных (53%) АК реакция была цитоплазматической или отсутствовала.

Изучение факторов, участвующих в регуляции клеточного цикла р 53, ВАХ и Bcl-X, Ki67

Экспрессия ВАХ и Bcl-X. Нами были исследованы особенности экспрессии протеинов индуктора и ингибитора апоптоза ВАХ и Bcl-X в эпителиальных опухолях ТК [W.M.Boedefeld et al, 2003; A.Gradiolone et al, 2003]. Реакция оценивалась по локализации протеинов, интенсивности экспрессии и проценту позитивных клеток опухоли. Для оценки локализации экспрессии ВАХ и Bcl X была предложена следующая система: экспрессия в виде мелких гранул в апикальной зоне клеток - 1 балл; сочетание крупногранулярной или диффузной цитоплазматической экспрессии с апикальной зернистостью - 2 балла; крупногранулярная и диффузная цитоплазматическая экспрессия - 3 балла.

Было выявлено, что при возрастании инвазивного потенциала АК изменяется тип экспрессии протеинов, а также уменьшается количество, главным образом, Bcl-X-положительных клеток, особенно в зоне инвазии опухоли.

Экспрессия ВАХ и Bcl-X в нормальной слизистой, ТВА и части АК ТК выявлялась в цитоплазме апикальной зоны клеток в виде мелких гранул. В клетках УД и НД АК отмечались и другие типы экспрессии, которые были расценены нами как аномальные – цитоплазматическая, в виде крупных гранул в перинуклеарных или базальных отделах клеток и диффузное распределение экспрессии по всей цитоплазме клеток.

Учитывая выраженную гетерогенность экспрессии протеинов Вcl X и ВАХ, нами была разработана формула для оценки экспрессии ВАХ и Вcl X, в которой учитывались процент позитивных клеток (ППК), интенсивность (И) реакции (в баллах) и локализация (Л) экспрессии протеинов ВАХ и Bcl X (в баллах): ППК х И х Л

Для сравнительной оценки экспрессии протеинов ВАХ и Bcl-X мы использовали условный «коэффициент апоптоза» как отношение интенсивности экспрессии Bcl-X к ВАХ, выраженных в баллах. В результате исследования показано, что коэффициент апоптоза снижался по мере возрастания инвазивного потенциала опухоли. Количество наблюдений с коэффициентом апоптоза менее 1 резко возрастало в группе АК с низкой степенью дифференцировки ( 86%, 6 из 7), тогда как случаев с коэффициентом апоптоза более 1 выявлено не было.

Экспрессия р53. Р53 – белок-регулятор апоптоза и клеточного цикла [Б.П.Копнин и соавт., 2000; N.J.Carr et al, 2002]. В клетках слизистой ТК и ТВА экспрессии протеина р53 выявлено не было, тогда как в АК ТК она наблюдалась в 68% случаев.

В клетках АК II клинической стадии экспрессия протеина р53 наблюдалась в 59% ( 16 из 27) случаев, из них только в 33% (9 из 27) случаев отмечалась интенсивная реакция (более 40% меченых ядер). На III клинической стадии количество позитивных наблюдений составило 73% ( 16 из 22), при этом количество случаев с выраженной иммунореактивностью р53 достигло 50% (11 из 22). В IV стадии в клетках всех АК выявлялась экспрессия протеина.

Соответственно, отсутствие экспрессии р53 в клетках АК II клинической стадии было обнаружено в 41% (11 из 27) случаев, в III стадии – в 27% (6 из 22) случаев, а в IV клинической стадии р53-негативных опухолей не было выявлено вообще.

В группе ВД АК отсутствие экспрессии р53 в клетках отмечалось в 42% (5 из 12), в УД АК – в 33% (11 из 33), а в НД АК – в 14% (1 из 7) случаев. При снижении степени дифференцировки опухолевых клеток отмечается увеличение р53-позитивных случаев.

Была выявлена зависимость между наличием экспрессии протеина р53 в клетках АК ТК и клинической стадией опухоли, а также степенью дифференцировки опухолей. При увеличении клинической стадии и снижении степени дифференцировки опухолей количество р53-позитивных случаев увеличивается.

Изучение пролиферативной активности эпителиальных опухолей ТК. Пролиферативная активность клеток 71 опухоли оценивалась с помощью индекса пролиферации Ki67 [Y.Suzuki et al, 2002; M.Parton et al, 2002], способ оценки которого описан выше. В прилежащей к опухоли слизистой ТК Ki 67 выявлялся в базальных отделах крипт (камбиальной зоне), где индекс пролиферации был не менее 40%. В ТВА он был достаточно высоким, максимальное значение его достигало 47%. В исследованных АК ТК индекс Ki67 варьировал в широких пределах 12-81%. Таким образом, исследование пролиферативной активности клеток нормальной слизистой и эпителиальных новообразований ТК показало, что четкой корреляции между этим показателем, степенью дифференцировки опухоли и стадией опухолевого процесса не выявляется.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изучение молекулярно-биологических механизмов канцерогенеза открывает новые возможности диагностики и профилактики рака толстой кишки, помогает в определении инвазивных свойств и злокачественного потенциала опухолей этой локализации.

В связи с этим, в последнее время возрастает интерес к изучению закономерностей гистогенеза рака толстой кишки, фенотипических и ультраструктурных особенностей дифференцировки опухолевых клеток [Ю.И.Патютко, И.В.Сайгадак, 2001].

Экспрессия цитокератина 20, в большей степени, и цитокератина 19, в меньшей степени, характеризует особенности дифференцировки эпителия ТК. Эти молекулы являются тканеспецифическими маркерами клеток эпителиальных опухолей ТК – аденом и аденокарцином. Однако, помимо дифференциально-диагностической значимости, выявление этих протеинов может быть использовано в качестве фактора прогноза клинического течения опухолей, как показателя степени дифференцировки опухолевых клеток. В результате проведенного исследования было установлено, что в АК ТК при уменьшении степени клеточной дифференцировки интенсивность экспрессии этих цитокератинов прогрессивно снижалась. Экспрессия цитокератинов 19 и 20, характерная для дифференцированных энтероцитов неизмененной слизистой, отмечалась в клетках 43% и 11% случаев ВД АК, 35% и 10% - УД АК и 14% и 0% - НД АК. Однако зависимости между клинической стадией опухолей и особенностями экспрессии цитокератинов 19 и 20 выявить не удалось.

Другими тканеспецифическими маркерами эпителиальных опухолей ТК являются муцины – гликопротеины, которые синтезируются в клетках опухолей ТК. В норме в клетках слизистой ТК выявляется муцин 2, тогда как экспрессия муцина 1 является одним из признаков злокачественной трансформации клеток. Уменьшение степени дифференцировки клеток сопровождалось уменьшением экспрессии муцина 2 и накоплением муцина 1 в просвете железистоподобных структур и в цитоплазме клеток опухолей. Та же картина отмечалась и по мере увеличения клинической стадии АК ТК. Следовательно, при увеличении инвазивных свойств опухолей продукция муцина 2 клетками уменьшается, а муцина 1 - увеличивается.

Роль молекул межклеточной адгезии в канцерогенезе ещё недостаточно хорошо изучена. В результате проведенного исследования были описаны характерные особенности локализации молекул межклеточной адгезии в норме и в опухолях. В неизмененной слизистой Е-кадхерин выявлялся на поверхности клеточной мембраны в 100% клеток, -катенин – на поверхности клеточной мембраны и в цитоплазме клеток, а CD44H – на мембране клеток преимущественно базальных отделов крипт. Появление аномальных типов экспрессии Е-кадхерина (цитоплазматического, мембранно-редуцированного), а также уменьшение интенсивности экспрессии этого протеина отмечалось на более поздних клинических стадиях заболевания. Ядерная аккумуляция -катенина и цитоплазматический тип экспрессии СD44H, а также полное отсутствие иммунореактивности к Е-кадхерину и CD44H в клетках характеризуют наиболее злокачественные опухоли и указывают на плохой прогноз.

В эпителиальных опухолях ТК функции генов, регулирующих клеточный цикл, изучались достаточно широко, однако полученные результаты противоречивы.

Pages:     | 1 | 2 || 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»