WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 | 4 |

На правах рукописи

Корсакова Нина Анатольевна

ОЦЕНКА СТЕПЕНИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОСТИ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ ТОЛСТОЙ КИШКИ НА ОСНОВЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОФЕНОТИПА ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК

14.00.15. патологическая анатомия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва 2007

Работа выполнена в Московском областном научно-исследовательском клиническом институте им. М.Ф.Владимирского (МОНИКИ)

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Ирина Александровна Казанцева

доктор биологических наук Лариса Евсеевна Гуревич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ Леонард Леонидович Капуллер

доктор медицинских наук, профессор, Юрий Георгиевич Пархоменко

Ведущая организация:

Кафедра патологической анатомии Российского Университета Дружбы Народов

Защита состоится

«-----» 2007г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д.001.004.01 ГУ НИИ морфологии человека РАМН по адресу: 117418 Москва, ул.Цюрупы, д.3

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РУ НИИ морфологии человека РАМН

Автореферат разослан «____»__________2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук Лилия Петровна Михайлова

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АК аденокарцинома(ы)

ВД АК высокодифференцированная аденокарцинома

Е-кад Е-кадхерин

ИГХ иммуногистохимия; иммуногистохимический

НД АК низкодифференцированная аденокарпцинома

ТК толстая кишка

УД АК умереннодифференцированная аденокарцинома

-кат -катенин

СК цитокератин(ы)

MUC муцин(ы)

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Проблема морфологической диагностики рака толстой кишки в настоящее время имеет особую актуальность, что связано с постоянным ростом заболеваемости раком этой локализации. В большинстве экономически развитых стран Европы и Северной Америки частота заболеваемости колоректальным раком среди злокачественных новообразований занимает второе-третье место у лиц обоего пола [ P.Buckhaults et al, 2001 ]. В России колоректальный рак в общей структуре онкозаболеваемости в 1999г. занял 5 место и составил 9,3%. Показатель неблагоприятного прогноза данного заболевания, «груз заболеваемости», т.е. соотношение показателей смертности к заболеваемости, по данным 1999 г. в России достиг 0,72 при раке ободочной и 0,76 при раке прямой кишки [Е.М.Аксель, Т.И.Ушакова, 2001; В.И. Кныш., 1997 ].

Высокий уровень смертности во многом связан с поздней диагностикой, что и определяет низкую эффективность лечения. Известно, что значительный процент опухолей выявляют в инкурабельном состоянии, поэтому 90% пациентов умирает от рецидива заболевания [Ю.И.Патютко, И.В.Сайгадак, 2001]. В связи с этим очень важной проблемой является изучение факторов прогноза, которые непосредственно влияют на выживаемость больных.

Основным критерием степени злокачественности в патоморфологической диагностике аденокарцином толстой кишки согласно «Международной Гистологической Классификации опухолей кишечника» (ВОЗ, Женева, 2000) является степень дифференцировки опухолевых клеток. Подобное подразделение опухолей по мнению большинства исследователей достаточно субъективно и не может характеризовать истинный злокачественный потенциал новообразования [ А.Г. Перевощиков, 1997;

C.C.Compton. et al, 2000; C.C.Compton, 2000; С.С. Compton et al, 1999]. Для того, чтобы оценить инвазивность опухоли и судить о ее прогнозе недостаточно рутинного гистологического исследования. Особое значение имеет изучение экспрессии ряда клеточных маркеров, участвующих в механизмах канцерогенеза, таких как онкобелки, протеины, связанные с апоптозом, межклеточной адгезией и пролиферацией.

С этих позиций исследование иммунофенотипа клеток эпителиальных опухолей толстой кишки имеет большое практическое значение, оно позволяет уточнить диагноз и более объективно судить о прогнозе заболевания.

Проведенное нами комплексное гистологическое и иммуногистохимическое исследование факторов, участвующих в механизмах канцерогенеза и опухолевой прогрессии с определением иммунофенотипа клеток разных гистологических вариантов опухолей толстой кишки направлено на совершенствование морфологической диагностики предраковых заболеваний и рака толстой кишки, а также уточнение прогноза заболевания, что может быть использовано при разработке оптимальной тактики их лечения.

Цель исследования:

На основе иммунофенотипирования клеток опухоли установить морфологические критерии дифференциальной диагностики и прогноза эпителиальных опухолей толстой кишки.

Задачи исследования

  1. Сравнительное изучение различных тканеспецифических маркеров, исследование особенностей экспрессии их в клетках эпителиальных опухолей толстой кишки разной степени дифференцировки.
  2. Исследование экспрессии молекул клеточной адгезии в различных гистологических вариантах опухолей толстой кишки.
  3. Изучение особенностей экспрессии в опухолевых клетках протеинов, участвующих в регуляции процессов апоптоза и клеточной пролиферации ( р53, ВАХ, Bcl-X и Ki 67).
  4. Выявление клинико-морфологических корреляций при раке толстой кишки с учетом фенотипической характеристики опухолевых клеток.

Научная новизна исследования

В работе впервые выполнено комплексное гистологическое и иммуногистохимическое исследование клеток доброкачественных и злокачественных эпителиальных новообразований толстой кишки с использованием специально разработанной панели молекулярно-биологических маркеров – антител. Осуществлен сравнительный анализ фенотипических особенностей клеток нормальной слизистой и новообразований толстой кишки – аденом и аденокарцином. Показано, что при изменении клеточной дифференцировки и инвазивных свойств аденокарцином менялся иммунофенотип клеток опухолей. На основе анализа результатов исследования иммунофенотипа опухолевых клеток проведена оценка биологического потенциала опухолей толстой кишки. В работе выявлены существенные различия в интенсивности и локализации экспрессии тканеспецифических протеинов (цитокератинов 19, 20 типа и муцинов 1, 2 типа), а также молекул межклеточной адгезии (Е-кадхерина, -катенина и CD44H) и протеинов - регуляторов клеточного цикла (ВАХ и Bcl-X, р53, Ki67) в клетках тубуло-ворсинчатых аденом и аденокарцином толстой кишки в зависимости от степени дифференцировки и клинической стадии заболевания. Показано, что при снижении степени дифференцировки и возрастании инвазивного потенциала опухолей интенсивность экспрессии антигенов, характерных для нормального эпителия толстой кишки, цитокератинов 19 и 20, муцина 2 типа в цитоплазме опухолевых клеток снижается, а муцина 1 типа возрастает. Для низкодифференцированных аденокарцином с высоким потенциалом злокачественности было свойственно появление аномальных типов экспрессии молекул межклеточной адгезии Е-кадхерина, -катенина и СD44H. Показано, что следствием нарушения дифференцировки клеток является и изменение локализации, а также и интенсивности экспрессии в клетках злокачественных опухолей протеинов-регуляторов апоптоза ВАХ и Bcl-X. Выявлено, что сверхэкспрессия белка р53 свидетельствует о неблагоприятном прогнозе течения заболевания. Уровень пролиферативной активности эпителиальных опухолей толстой кишки варьирует в широких пределах и, по нашим данным, индекс пролиферации Ki 67 не может служить безусловным признаком злокачественного потенциала опухолей этого типа. Полученные результаты могут быть использованы для диагностики и прогнозирования новообразований толстой кишки, а также для разработки более эффективных схем их терапии.

Теоретическая и практическая значимость работы

В работе показаны различные молекулярно-клеточные механизмы, лежащие в основе злокачественной трансформации клеток эпителиальных опухолей толстой кишки. Установлены иммуногистохимические маркеры, совокупность которых позволяет проводить дифференциальную диагностику этих новообразований. Полученные данные могут быть использованы для более точной оценки инвазивного потенциала и прогноза данной группы опухолей.

Результаты работы могут быть использованы для дифференциальной диагностики в практической деятельности патологоанатомических отделений, в работе отделений колопроктологии, онкологии, а также для научно-исследовательских разработок на кафедрах и в научно-исследовательских институтах.

Структура диссертации

Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, собственных результатов, обсуждения результатов исследования, выводов, практических рекомендаций и списка испльзованной литературы. Работа иллюстрирована 37 таблицами, 43 микрофотографиями, 6 графиками.

Апробация работы

Результаты работы доложены на IX научной конференции «Новые направления и разработки в онкоморфологии», посвященной 75-летнему юбилею академика РАМН, профессора Ю.Н. Соловьева (Москва, 2003); клинической межотделенческой конференции в МОНИКИ (октябрь, 2006 г.); межлабораторной конфереции ГУ НИИ Морфологии человека РАМН (февраль, 2007 г.).

ХАРАКТЕРИСТИКА МАТЕРИАЛА И МЕТОДОВ

В работе был использован операционный и аутопсийный материал эпителиальных опухолей толстой кишки от 71 пациента, из них 5 – тубуло-ворсинчатые аденомы, 66 - аденокарциномы различной степени дифференцировки.

АК толстой кишки были выявлены у 66 пациентов, из которых 30 случаев (45,5%) были отнесены ко II клинической стадии, 28 (42,5%) – к III, а 8 (12%) – к IV стадии. В соответствии с гистологическим строением в 13 наблюдениях (20%) установлена высокая степень дифференцировки, в 44 (66%) – умеренная степень, а в 9 (14%) – низкая степень дифференцировки опухолевых клеток. В качестве контроля была исследована внеопухолевая слизистая ТК, которая была получена при радикальной резекции фрагмента кишечника с опухолью.

Материал фиксировали в 10% растворе формалина, забуференном по Лилли при рН-7,4, затем заливали в парафин по обычной методике.

Серийные срезы толщиной 5 мкм депарафинировали по стандартной схеме и окрашивали гематоксилином и эозином.

Иммуногистохимический метод

ИГХ исследование проводили в соответствии со стандартным протоколом. Был использован набор маркеров, приведенный в таблице 1. Эти ИГХ маркеры (антитела) в соответствии с поставленными задачами разделили на 3 группы: 1 группа – тканеспецифические антитела, использованные для фенотипирования клеток опухолей; 2 группа – антитела к молекулам межклеточной адегезии; 3 группа – антитела к протеинам, регулирующим клеточный цикл.

Для ИГХ исследования ткани фиксировали в 10%-ном забуференном формалине (рН 7,2), проводили по спиртам и ксилолам, заливали в парафин. Использовали парафин с температурой плавления 54  С (Германия).

Затем с помощью одноразовых лезвий марки R35 готовили серийные парафиновые срезы толщиной 3-5 мкм и наносили их на стекла с адгезивным покрытием (полилизин), депарафинировали по стандартному протоколу.

Далее срезы по 5 минут промывали в деионизированной дистиллированной воде и фосфатном буфере (рН-7,4).

Исследование проводили в соответствии с методикой C.R.Taylor., R.Cote., [1994] и L.A.Sternberger. [1979]. Предварительная обработка срезов производилась по методу восстановления антигенных детерминант ткани по методике S-R.Shi и соавт. [1997] с помощью предварительной обработки срезов, погруженных в цитратный буфер (рН-6,0) в микроволновой печи при мощности 690 Вт 2 раза по 5 минут.

Таблица 1 Характеристика антител.

Антитела

Клон

Развед.

Фирма

Дифференциально-диагностические

1

Карциноэмбриональный антиген (КЭА)

кроличьи

Readу to use

DAKO

2

Эпителиально-мембранный антиген (ЭМА)

Е29/ЕР1

«

«

3

Цитокератины широкого спектра (А1/А3)

АЕ1/АЕ3

«

«

4

Цитокератин 19

RCK 108

1:100

«

5

Цитокератин 20

Ks 20.8

Readу to use

«

6

Муцин 1 типа

Ма695

1:100

«

7

Муцин 2 типа

Сср58

1:200

Novocastra

Адгезивные молекулы

8

Е-кадхерин

36В5

1:50

Novocastra

9

-катенин

17С2

Pages:     || 2 | 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»