WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Для определения иммунофенотипа клеток воспалительного инфильтрата использована панель антител (табл. 2). Иммуногистохимические реакции проводили на серийных парафиновых срезах. Для выявления белка срезы толщиной 4 мкм тщательно депарафинировали в 2-х порциях ксилола по 5 минут, с последующим обезвоживанием в батарее спиртов нисходящей концентрации - 950, 900, 800 – по 3 минуты в каждом. Так как наличие остаточного парафина в срезах приводило к увеличению фонового окрашивания, ксилолы и спирты использовали для обработки не более 20 стекол. После промывания срезов в дистиллированной воде (5 минут) и помещения их в трис-буфер на 5 минут с целью повышения специфичности реакции проводили демаскировку антигенов в водяной бане при температуре 900 -950 С в течение 45 минут. Давали срезам остыть до комнатной температуры, помещая их в трис-буфер на 20-25 минут.

Таблица 2.

Панель антител, использованных в работе.

Маркер

Клон (производитель)

Биологическая роль

CD4

1F6

(«Diagnostic Bio Systems»)

Маркер Т-лимфоцита-хелпера

CD8

144B

(«Diagnostic Bio Systems»)

Маркер Т-лимфоцита-киллера

CD20

L26

(“DakoCytomation”)

Маркер В-лимфоцита

С целью уменьшения фона и снижения неспецифического окрашивания осуществляли блокирование эндогенной пероксидазы 3%-ным раствором перекиси водорода в течение 5 минут и обработкой протеин-блоком - 20 минут. В дальнейшем проводили инкубацию с первичными антителами - 60 мин (370С), после которой срезы помещали в трис-буфер – 3 порции по 5 мин. Затем срезы обрабатывали вторыми (биотилинированными) антителами - 20 минут и инкубировали со стрептавидин-биотин-пероксидазным комплексом в течение 20 минут. Дальнейшая окраска хромогеном осуществлялась под визуальным контролем в течение 5-30 минут. В биоптатах, обработанных иммуногистохимическим методом, при увеличении 340 случайным образом выбирали 6-10 полей зрения и подсчитывали количество позитивно окрашенных клеток. Полученные значения пересчитывали на 1 мм2 среза. В качестве докраски использовали гематоксилин Майера.

Статистические методы исследования

Для определения минимально допустимого размера выборки использовали расчет по формуле Лера (Lehr R., 1992) относительно основных переменных интереса. Для клинической части основными переменными интереса являлись показатели папиллярно-маргинально-альвеолярного индекса – ПМА и индекса кровоточивости десневого края по Saxer и Muhlemann. За клинически значимый результат принималось снижение показателя индекса кровоточивости минимум на 2 балла (т.е. 2 балла от 4 баллов - 50% или 0,5). За клинически значимый результат при оценке индекса ПМА принималось снижение показателя индекса ПМА минимум на 1 балл (т.е. 1 балл от 3 баллов - 33,3% или 0,33). Таким образом, исходя из наибольшего из требуемых размеров выборки, необходимо наличие 41 человека (исходя из индекса ПМА), чтобы иметь 90% шанс обнаружения значимой разницы до и после лечения при 5% уровне значимости.

Распределение не соответствовало критериям нормального, что проверялось с использованием критерия Колмогорова-Смирнова. Для предварительной характеристики исследуемых показателей использовалось представление данных в форме М±, где М - среднее арифметическое; - стандартное отклонение, тогда как для расчета достоверности различий применялись непараметрические критерии, позволяющие обойтись без предположения о каком-либо распределении и имеющие вместе с тем высокую степень чувствительности. В частности, для проверки нулевой гипотезы об отсутствии разницы между генеральными параметрами, оцениваемой по выборочным показателям в случае сравнения выборок с попарно связанными вариантами использовался критерий Уилкоксона – W критерий (сравнение двух групп – данный 1 и 2 или 2 и 3 исследовательских точек), Крускала-Уоллиса – H критерий (сравнение трех групп – 1, 2 и 3 исследовательские точки), Манна – Уитни (U) и критерий Фридмана (F). За статистически значимую разницу принимали значение р<0,05. Также рассчитывался коэффициент корреляции рангов Пирсона (r) и Спирмана (), и критерий их достоверности.

Для расчетов и построения статистических графиков использован статистический пакет Microsoft Excel-2003 для операционной системы WindowsXP, а также статистические программные пакеты BIOSTAT (Primer of Biostatistics, version 4.03) и SPSS 11.5.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Клинико-морфологические сопоставления воспалительного процесса у больных хроническим генерализованным пародонтитом.

Всем больным было проведено базовое, местное медикаментозное противовоспалительное лечение, направленное на устранение инфекционных агентов с поверхностей зубов и из зоны пародонтальных карманов. Все пациенты, которым проводилось исследование в зависимости от степени тяжести генерализованного пародонтита, распределись на три группы ХГПТС - 17 человек, ХГПСС - 18 человек, ХГПЛС - 12 человек. На основании полученных нами данных динамики индексной оценки состояния тканей пародонта мы выявили статистически значимое снижение индексов гигиены, кровоточивости (рис. 2) и ПМА (рис. 3) во всех трех исследовательских точках вне зависимости от степени тяжести хронического генерализованного пародонтита.

Рисунок 2. Индексная оценка (ИГ,ИК) состояния тканей пародонта у пациентов с различной степенью тяжести заболевания на этапах исследования.

Рисунок 3. Значения индкса ПМА на этапах первичного обследования и лечения.

Изменение значений ПИ, КП, глубины пародонтальных карманов, патологической подвижности зубов, на фоне проводимой базовой терапии, оказались статистически не значимы. Но, несмотря на это, можно считать, что к окончанию исследования мы достигли клинической ремиссии воспалительного процесса в десне, на основании снижения значений динамических индексов оценки состояния пародонта.

Таблица 3

Корреляционные взаимоотношения между значениями динамических, деструктивных индексов и активностью воспалительного процесса в биоптатах десны больных хроническим генерализованным пародонтитом вне зависимости от степени тяжести.

ИЗН

ИЗК

ИГ

ИК

ПМА

ПИ

КП

активность воспаления

ИЗН

1

0,619

0,930

0,723

0,718

0,19

0,04

-0,393

Р

<0,001

<0,001

<0,001

<0,001

>0,05

>0,05

<0,001

ИЗК

0,619

1

0,833

0,615

0,744

0,319

-0,198

-0,513

Р

<0,001

<0,001

<0,001

<0,001

<0,001

>0,05

<0,001

ИГ

0,930

0,833

1

0,795

0,813

0,284

-0,105

-0,494

Р

<0,001

<0,001

<0,001

<0,001

<0,001

>0,05

<0,001

ИК

0,723

0,651

0,795

1

0,806

0,262

-0,09

-0,460

Р

<0,001

<0,001

<0,001

<0,001

<0,05

>0,05

<0,001

ПМА

0,780

0,744

0,813

0,806

1

0,278

-0,134

-0,590

Р

<0,001

<0,001

<0,001

<0,001

<0,05

>0,05

<0,001

активность воспаления

-0,396

-0,513

-0,494

-0,460

-0,590

-0,218

-0,110

1

<0,001

<0,001

<0,001

<0,001

<0,001

<0,05

>0,05

Анализ корреляционных взаимоотношений значений динамических, деструктивных индексов и степенью выраженности воспалительного процесса в биоптатах десны у больных хроническим генерализованным пародонтитом вне зависимости от степени тяжести хронического генерализованного пародонтита в динамике базового лечения коэффициентом Спирмана (), выявил, что для оценки выраженности воспалительного процесса в тканях десны наиболее информативными являются значения индексов ПМА, ИГ и ИК (табл. 3).

При проведении морфологического исследования биоптатов десны, мы обнаружили несоответствие между степенью выраженности воспалительного процесса с клиническими признаками пародонтита (табл. 4).

Таблица 4

Степень выраженности воспалительного процесса в биоптатах десны у пациентов на этапах лечения

Степень выраженности воспалительного процесса

I исследовательская точка (число пациентов)

II исследовательская точка (число пациентов)

III исследовательская точка (число пациентов)

Активное воспаление.

28

13

6

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»