WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 8 |

При изучении иммунобиологических свойств вирусов, необходимы были периодические исследования крови на наличие факторов клеточного и гуморального иммунитета. Использованные традиционные методы отбора проб крови из ушной и хвостовой вен животных не всегда были продуктивными и требовали затраты значительного времени и труда. Поэтому для облегчения указанного процесса нами разработана полезная модель «Станок для фиксации свиней». Эксперименты показали, что использование данной полезной модели обеспечивает взятие крови и проведение кастрации подсвинков со значительной производительностью труда. На данную полезную модель получен предварительный патент №54353 от 25.02.2008.

Разработанная полезная модель нашла применение в производственных условиях, в хозяйствующих субъектах Акмолинской и Павлодарской областей.

2.3.2 Изучение сохранения иммунобиологических свойств вирусов классической чумы свиней и болезни Ауески, пассированных в культурах клеток и кроликах

Результаты исследований показали, что овцы, привитые штаммом «УБ-95» вируса КЧС 1 и 5 пассажей в культуре клеток ВНК-21, 1 и 15 пассажей - в культуре клеток КФ, были устойчивы к контрольному заражению через 7 суток после вакцинации, в то время как животные контрольной группы заболели с ярко выраженными клиническими признаками БА.

Результаты ИФА с вирусом КЧС 5 пассажа показали, что в сыворотке крови опытных животных титры антител через 5 и 14 суток после вакцинации составили по степени потенциальной инертности >50%, что свидетельствовало о выработке иммунитета сравнительно высокой напряженности.

Таким образом, вирус БА штамма «УБ-95» сохраняет свои основные биологические свойства (цитопатическую активность, иммуногенные и антигенные свойства) в течение 5 последовательных пассажей в культуре клеток ВНК-21 и в течение 15 - в культуре клеток КФ (срок наблюдения). Вирус КЧС штамма «КТ» сохраняет свои основные биологические свойства (иммуногенные и антигенные свойства) в течение 5 последовательных пассажей в организме кроликов.

2.3.3 Антигенная и иммуногенная активность вакцинных вирусов классической чумы свиней и болезни Ауески, при их ассоциированном применении

Целью исследований явилось изучение антигенной и иммуногенной активности вакцин против БА и КЧС при их ассоциированном применении.

Для иммунизации использовали вакцину против БА из штамма «УБ-95», полученную в ФКЭ и вакцину против КЧС из штамма «КТ». Вакцинные вирусы перед применением смешивали в равных соотношениях, разводили 1:100 физиологическим раствором и в объеме 2 см вводили внутримышечно двум подсвинкам в возрасте 4-5 месяцев, невакцинированных против БА и КЧС. Антигенную и иммуногенную активности вирусвакцины против БА определяли по вируснейтрализующим антителам в сыворотке крови привитых животных до и через 21 сутки после вакцинации. Антигенную и иммуногенную активность вакцины против КЧС - по результатам ИФА. Реактогенность ассоциированной вакцины оценивали по общему состоянию привитых животных, температуре тела и состоянию мест инъекций.

Результаты исследований проб сыворотки крови (таблица 3) показали, что у вакцинированных ассоциированным препаратом животных выработка антител против БА была в пределах 1:4-1:8, что в принципе соответствует титрам поствакцинальных антител, образующихся при моновакцинации.

Данные ИФА с вирусом КЧС показали, что в сыворотке крови опытных животных титры антител через 21 сутки составили по степени потенциальной инертности >50%.

Использование вакцинных вирусов против БА и КЧС в ассоциации не вызывали каких либо видимых клинических реакций со стороны привитых животных. Температура тела подсвинков оставалась в пределах физиологической нормы, патологии общего состояния и вместе инъекции не было выявлено.

Таблица 3 – Титры специфических антител на вирусы БА и КЧС в сыворотках крови вакцинированных животных

Животные

Сроки исследования

Подсвинки 4-5 мес. возраста

до вакцинации

на 21 сутки после иммунизации

на ВБА

на ВКЧС

на ВБА

на ВКЧС

РН

ИФА*

РН

ИФА*

н/о

н/о

1:8

овцы

н/о

н/о

1:16

>50

Примечание: н/о – вируснейтрализующие антитела не обнаружены; *ИФА – по степени потенциальной инертности.

Таким образом, ассоциированное применение вирусвакцин против БА и КЧС, обеспечивает выработку иммунитета не уступающего по титрам при их раздельном применении.

2.3.4 Влияние электростимуляции на выработку иммунитета

В настоящее время все большее применение в медицине и ветеринарии получают нетрадиционные методы, используемые для профилактики и лечения болезней (электростимуляция, ДиаДЭНС-терапия и т.п.).

В своих исследованиях мы изучили возможность использования электростимуляции для повышения иммунного ответа животных на введение вирусвакцины. Опыты проводили в два этапа: подготовительный (до электростимуляции) и учетный (после электростимуляции). В подготовительный период овец в возрасте 12-16 мес. в количестве 6 голов, массой 35-50 кг, исследовали клинически, с ежедневным двукратным измерением температуры тела, подсчетом частоты дыхания и оценкой иммунологических показателей организма по общему количеству лимфоцитов, количеству Т и В клеток, хелперных и супрессорных популяции Т-клеток и фагоцитарной активности мононуклеаров.

Электростимуляцию проводили импульсным током прямоугольной формы, частотой 500 Гц, продолжительностью импульсов 0,5 м/с, при силе тока 14 мА в течение 10 минут с помощью аппарата ГИ-1 конструкции Н.Я. Начатова и В.В. Комарова (1978), с использованием биаурикулярных электродов для овец конструкции Ю.В. Хромова (1985).

Животных фиксировали в лежачем положении на правом боку. Электроды перед наложением обворачивали марлей, смоченной 1%-ным раствором хлорида натрия. До электростимуляции было проведено контрольное исследование у 3-х овец, далее по плану проводили учет иммунологических показателей на 7, 21, 60 день. Кровь брали из яремной вены утром, перед кормлением.

Результаты определения наличия вируснейтрализующих антител, показали, что в сыворотках крови вакцинированных животных, а также подвергнутых электростимуляции в исследуемые промежутки времени, титры были в пределах 1:2-1:4 через 7 суток, 1:4-1:32 через 21 суток, 1:4-11:16 через 60 суток. Полученные результаты свидетельствуют о том, что данные титры сопоставимы с титрами антител, которые обнаруживались у животных при изучении иммунобиологических свойств препарата.

Электростимуляция обуславливала развитие у животных Т-лимфоцитопении. Количество В-клеток, имеющих рецепторы к FcIgG, после вакцинации снижалась, у животных 1-й группы на 33%, а у 2-й - на 28%. При этом количество В-лимфоцитов, имеющих рецепторы к СЗ, после вакцинации уменьшалось в 2 раза, а в случае электростимуляции - на 25%. Фагоцитарный индекс во 2-й группе овец через неделю после вакцинации уменьшился в 2,5 раза, а в 1-й группе - в 1,8 раз. На 21-й день эксперимента, когда синтез антител находится на «плато», различий между показателями, характеризующими Т- и В-звенья системы иммунитета, факторов неспецифической защиты в сравниваемых группах не наблюдалось. У овец 2-й группы на 60-й день отмечается лейкопения, при этом уровень клеток был снижен на 24%. Необходимо отметить, что содержание Т-лимфоцитов у овец было уменьшено в 2-х группах в 1,6-1,7 раза. Причем количество Т-клеток с хелперной активностью во 2-й группе снижалось на 46%, а в 1-й - на 31%, лимфоцитов с цитотоксической и супрессорной активностью соответственно – в 1,6 и 2,7 раз. Если электростимуляция не приводила к уменьшению уровня В лимфоцитов после вакцинации, то у овец 2-й группы количество клеток имеющих рецепторы к СЗ, на 60-й день эксперимента снижалось в 1,5 раза.

На основании вышеизложенного установлено, что электростимуляция не оказывает влияния на выработку гуморальных факторов иммунитета. Титры антител были сопоставимы с титрами антител, которые обнаруживались у животных при иммунизации без данного воздействия. Для стимуляции выработки эффекторов клеточного иммунитета предлагается проводить электростимуляцию на 3-й день после вакцинации (первичного введения антигена) - «эффект третьих суток», либо назначать дополнительно животным препараты, влияющие на Т-звено иммунной системы.

2.4 Изучение устойчивости вирусвакцин против классической чумы свиней и болезни Ауески при хранении

2.4.1 Устойчивость нативных вариантов вирусвакцин против классической чумы свиней и болезни Ауески при хранении

С целью изучения устойчивости нативных форм штамма УБ-95 вируса БА, выращенного в культуре клеток ВНК-21 несколько партий вируссодержащего материала хранили при температурах 37+0,5°С; 20-25°С; 0-4°С и минус 40°С. Через различные интервалы времени из каждой партии брали пробы и определяли остаточную активность вируса титрованием в культуре клеток. Активность нативного вируса при температуре 37+0,5С не изменялась в течение первых двух суток. Через трое суток хранения при указанной температуре активности вируса понизилась в среднем на 0,25-0,50 lg ТЦД50/см3, через 5 суток – 1,0-1,25 ТЦД50/см3, через 7 суток – 1,50-1,75 lgТЦД50/ см3, через 10 суток – 2,50-2,75 lg ТЦД50/см3, через 14 суток – 3,75-4,0 lg ТЦД50/см3.

В процессе хранения вирусного материала при температуре минус 40°С, в течение 18 месяцев не наблюдалось снижение его биологической активности. При температуре 0-4°С также не происходило снижение активности вируса в течение 2 мес. хранения, только через 6 мес. при данной температуре она снизилась на 1,50-1,75 lgТЦД50/см3, а через 12-18 мес. снижение активности составило 2,50-3,75 lgТЦД50/см3. При температуре хранения 20-24°С не отмечена потеря титра вируса в течение первых 5 суток. Снижение активности вируса через 1 мес. хранения составило 0,25-0,50 lg ТЦД50/см3, через 3 мес. – 1,25-1,50 lg ТЦД50/см3, через 6 мес. – 2,50-2,75 lg ТЦД50/см3 и через 12 мес. – 4,75-5,00 lg ТЦД50/см3.

Таким образом, в случае возникновения необходимости возможно сохранение нативного вируса штамма «УБ-95» при температурах минус 40С в течение 18 мес., 0-4°С – в течение 2 мес. без снижения его исходной активности.

С целью подбора защитной среды, обеспечивающей наибольшую стабильность в процессе лиофилизации и последующем хранении, были приготовлены микросерии вакцин из вирусных суспензий, полученных в культуре клеток ВНК-21, в смеси с различными стабилизирующими добавками (6 прописей). Предварительно были определены титры вируса до и после лиофилизации, а после этого сухие образцы закладывали на хранение при температуре 37+0,5°С.

Через определенные промежутки времени пробы для определения биологической активности титровали общепринятым методом. Результаты проведенных опытов показали, что в процессе лиофилизации лучшая сохраняемость вируса была в образцах вакцины №1 – пептон-лактоза (3,0%, 2,5%) и №3 – сухое обезжиренное молоко (2%). В течение 45 суток (конечный срок наблюдения) хранения установлено, что наилучшее сохранение вируса наблюдается в образцах вакцины № 1 и 3 (снижение титра было в пределах 1,5-1,75 lgТЦД50/см3). В других образцах вакцины снижение активности было наибольшим (2,5-3,25 lgТЦД50/см3), в контрольном образце инактивация вируса была в пределах 4,0 lgТЦД50/см3.

При температуре хранения 37+0,5°С снижения титра вируса КЧС штамм «КТ» в первые 5-7 суток не отмечено. А через 1 мес. хранения при данной температуре титр вируса снизился на 0,50 lg ТЦД50/ см3, через 3 мес на 1,0-1,25 lg ТЦД50/см3, через 6 мес на 2,0-2,5 lg ТЦД50/см3.

Результаты изучения устойчивости лиофилизированных вариантов вирусвакцин против классической чумы свиней и болезни Ауески при хранении показали, что активность вакцин, восстановленных из сухого состояния до рабочего разведения существенно не изменяется в течение суток при температуре 37+0,5С, через 3 суток снижение титра вируса при указанной температуре составило 0,75-1,0 lg ТЦД50/см3, через 7 суток - 2,0-2,25 lgТЦД50/см3 и через 14 суток - 2,50-2,75 lgТЦД50/см3. При температуре 20-25С снижение активности вируса в течение 3 суток было незначительным (до 0,25 lgТЦД50/см3), через 7 суток в пределах 0,75-1,0 lg ТЦД50/см3, через 14 суток - 1,25-1,50 lgТЦД50/см3. При температуре 0-4С снижение активности вируса не наблюдали в течение 3 суток хранения, через 7 суток снижение активности вируса было незначительным (0,25 lg ТЦД50/см3) и через 14 суток до 0,5-0,75 lg ТЦД50/см3, по сравнению с исходной.

Таким образом, вакцины из штамма «КТ» против КЧС и штамма «УБ-95» против БА, восстановленные физиологическим раствором из сухого состояния до рабочего разведения, можно хранить и использовать без существенного снижения активности при температуре 37+0,5С - в течение суток, при температуре 0-4С - 5-7 суток, а при температуре 20-25С – 1 сутки.

2.4.2 Способ производства живых вирусных вакцин (на примере вируса болезни Ауески)

Целью дальнейших экспериментов явилось изучение возможности произодства вирусвакцин в таблетированной форме. Для этого проводили подбор компонентов (наполнителей) для изготовления таблеток и расчетным путем определили, что для получения вакцины, при растворении которого в дистиллированной воде получался 0,85% физиологический раствор, содержащий прививную дозу необходимо следующее содержание компонентов: 25%-вирусного сырья лиофильного способа высушивания, 25%-крахмала, 50%-хлористого натрия. Крахмал и хлористый натрий предварительно подвергали стерилизации. Для изготовления таблеток тритурационным способом, смешанной массой заполняли ниши и сушили при 37°С, в течение 22-24 часов, при этом вес 1 таблетки составлял 250 мг. Через 20-30 мин после начала сушки на воздухе, таблетки высвобождали из гнезд и сушили на бумаге.

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 8 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»