WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |

На правах рукописи

ЛИТВИНОВА МАРИЯ МИХАЙЛОВНА

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ГЕТЕРОГЕННОСТЬ И ФЕНОТИПИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ГЕМОХРОМАТОЗА У ЛИЦ МОЛОДОГО ВОЗРАСТА

03.00.15. Генетика

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва 2009

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Медико-генетического научного центра РАМН

Научный руководитель:

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Бочков Николай Павлович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Журков Вячеслав Серафимович

кандидат медицинских наук

Павлов Чавдар Савов

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Московский государственный медико-стоматологический университет

Защита состоится «____»_________2009г. в «___» часов на заседании Диссертационного совета Д 001.016.01 при МГНЦ РАМН

по адресу: 115478, Москва, ул. Москворечье, д.1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук Медико-генетического научного центра РАМН по адресу: 115478, Москва, ул. Москворечье, д.1.

Автореферат разослан "_____" ___________2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 001.016.01

по защите докторских и кандидатских диссертаций,

доктор медицинских наук, профессор Р.А. Зинченко

Актуальность проблемы

Наследственный гемохроматоз (НГХ) признан одним из наиболее частых аутосомно-рецессивных заболеваний в Европе. Частота данного заболевания среди европеоидов составляет 0,2-0,8%, при этом каждый 10-й человек является гетерозиготным носителем мутации (Worwood M., 1994; Adams P.C. et al., 2005; Володичева Е.М., 2003; Лавров А.В., 2004). Поскольку классическая форма гемохроматоза начинает проявляться в возрасте 40-45 лет, то и обследованный контингент всех предыдущих работ в среднем оказался именно такого возраста. Не было проведено исследований в отношении изменения уровней показателей обмена железа в зависимости от возраста пациентов, а это крайне важно для организации своевременной профилактики клинических проявлений заболевания.

В генетические лаборатории, занимающиеся диагностикой НГХ, наряду с пациентами среднего возраста, довольно часто обращаются молодые люди, и даже родители с детьми. Зачастую исследование на наиболее частые мутации гена HFE, ответственного за развитие классической формы гемохроматоза, таким пациентам не рекомендуют. Происходит это в силу общепринятого мнения о позднем начале проявления данного вида патологии. Действительно, в таких ситуациях часто требуется генетическая диагностика на наличие мутаций в генах других типов гемохроматоза, манифестирующих в более раннем возрасте (HJV, HAMP, FPN1 и др.). В настоящее время, кроме наиболее частой классической формы гемохроматоза (1-й тип), выделяют еще 4 типа: ювенильный (2-й тип), гемохроматоз 3-го, 4-го типов и неонатальный гемохроматоз (Roetto A. et al., 1999; Camaschella C. et al., 2000; Montosi G. et al., 2001). Молекулярно-генетические основы большинства из перечисленных патологий открыты менее 10 лет назад. И хотя на сегодняшний день нет четких статистических данных о заболеваемости гемохроматозом неклассических типов, такие случаи описаны во многих странах мира. К сожалению, среди российского населения прицельных исследований по всем формам гемохроматоза еще не проводилось. В России применяется генетическая диагностика лишь в отношении классической формы НГХ.

Именно поэтому необходимо проанализировать молекулярно-генетические причины и фенотипическое разнообразие форм гемохроматоза и разработать схему обследования молодых пациентов.

Цель и задачи исследования

Цель: изучение генетических причин и фенотипического разнообразия гемохроматоза у лиц молодого возраста.

Для достижения указанной цели предполагалось решить следующие задачи:

  1. Создать и проанализировать базы данных больных с риском НГХ (Канада и Россия) и сформировать группы исследования;
  2. Изучить взаимосвязь повышения показателей обмена железа с генотипом HFE и возрастом пациентов;
  3. Провести анализ мутационных изменений в генах HJV, HAMP и FPN1 у больных гемохроматозом пациентов молодого возраста;
  4. Описать фенотипическое разнообразие НГХ при различных генетических вариантах этого заболевания;
  5. Разработать протокол обследования пациентов молодого возраста на предмет генетических причин гемохроматоза.

Научная новизна и практическая значимость

В России проблема гемохроматоза молодого возраста еще не поднималась. Впервые проведен анализ зависимости биохимических признаков гемохроматоза у лиц в возрасте до 30 лет от различных генотипов по мутациям C282Y и H63D гена HFE, ответственного за развитие классической формы заболевания (1-й тип НГХ). Это позволило сориентироваться, с какого возраста можно ожидать изменения показателей обмена железа при мутациях гена HFE с целью проведения превентивного лечения.

Кроме того, продемонстрированы особенности течения заболевания у лиц с мутациями в генах других типов НГХ (2А, 2В, 3-го и 4-го типов). Полученные сведения позволили разработать оптимальный протокол молекулярно-генетического обследования молодых пациентов с признаками перегрузки организма железом. Эти сведения могут быть использованы при консультировании пациентов молодого возраста с подозрением на НГХ.

Описана неизвестная ранее мутация в гене ферропортина (FPN1). Таким образом, пополнена мировая база известных мутаций этого гена. Определение молекулярно-генетической причины заболевания в большой семье позволит проводить раннюю генетическую диагностику родственникам пробанда и, в случае положительного результата, своевременно осуществлять профилактику развития клинических симптомов заболевания.

Положения, выносимые на защиту

  1. Биохимические признаки наследственного гемохроматоза 1-го типа проявляются в возрасте до 30 лет. Повышение показателей ферритина и насыщения трансферрина в основном наблюдается у гомозигот по мутации C282Y гена HFE.
  2. Наличие признаков перегрузки организма железом у лиц подросткового возраста является показанием для проведения молекулярно-генетического анализа на предмет гемохроматоза 1-го типа. Это позволит своевременно начать эффективное лечение по выведению излишка железа из организма.
  3. Полученная частота аллеля 282Y гена HFE у пациентов моложе 30 лет из терапевтических отделений Москвы не отличается от общепопуляционной частоты этой мутации для Московского региона. Следовательно, такие пациенты не относятся к группе риска по гемохроматозу.
  4. Обнаружена новая N185D мутация гена FPN1, кодирующего трансмембранный белок ферропортин. Гетерозиготное носительство мутации ассоциировано с клиническими и биохимическими признаками гемохроматоза.
  5. Гемохроматоз 4-го типа (ген FPN1) может проявляться смешанным характером показателей метаболизма железа: нормальными уровнями насыщения трансферрина на фоне повышенного ферритина сыворотки крови среди пациентов в возрасте до 20 лет и высокими цифрами обоих показателей у людей более старшего возраста.
  6. Настоящая работа продемонстрировала разнообразие генетических причин и широкий фенотипический полиморфизм наследственного гемохроматоза у лиц молодого возраста.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на итоговой научной студенческой конференции «Татьянин день» Школы молодых исследователей «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (работа удостоена медали Н.И. Пирогова за лучшую научную студенческую работу ММА имени И.М. Сеченова 2005г); Итоговой научной конференции по защите дипломных работ выпускников факультета подготовки научно-педагогических кадров ММА имени И.М. Сеченова (Москва, 2006 г.); научных конференциях кафедры медицинской генетики ММА им. И.М. Сеченова; Европейской конференции по генетике человека 2009 (Вена, Австрия, 2009 г.). Работа апробирована и рекомендована к защите на заседании ученого совета МГНЦ РАМН 10 июня 2009 года.

Личное участие автора в получении результатов, изложенных в диссертации. Автором подобрана и проработана отечественная и зарубежная литература по теме диссертации, проанализированы базы данных больных с подозрением на НГХ, сформированы соответствующие группы обследования. Разработку протоколов секвенирования и непосредственный анализ генов HJV, HAMP, FPN1 осуществляла самостоятельно. Также у части больных проводила генотипирование HFE на предмет наличия мутаций C282Y и H63D. Автор провел статистический анализ всех полученных данных, сформулировал выводы и опубликовал результаты своей работы в различных научных журналах.

Публикации. Результаты диссертационной работы отражены в 9 печатных работах. Из них 5 статей (2 в отечественных и 3 в зарубежных журналах) и 4 тезисов. Две статьи опубликованы в рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК МОН РФ соискателям ученой степени кандидата медицинских наук.

Внедрение результатов работы в клиническую практику. Результаты работы внедрены в клиническую практику и используются при медико-генетическом консультировании пациентов в МГНЦ РАМН и ММА им. И.М. Сеченова.

Структура и объём работы. Диссертационная работа состоит из оглавления, списка сокращений, введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы (161 наименование). Работа изложена на 114 страницах машинописного текста, иллюстрирована 15 таблицами и 25 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Формирование выборок. Для формирования выборок пациентов были использованы база данных пациентов с риском гемохроматоза (Центр здоровья детей и женщин Британской Колумбии, Ванкувер, Канада) и база данных пациентов терапевтического профиля (лаборатория мутагенеза, МГНЦ РАМН, Москва, Россия). В первую базу вошли пациенты с клиническими и/или биохимическими признаками НГХ, а так же пациенты с семейной историей данного заболевания. Вторая база состояла из пациентов отделений гастроэнтерологии, гепатологии, кардиологии и эндокринологии (предполагаемые группы риска по наличию НГХ). В центре здоровья детей и женщин Британской Колумбии на каждого пациента, вошедшего в базу, заполнялась анкета, в которой отражалась история заболевания (возраст манифестации, наличие клинических признаков, биохимические маркёры заболевания, проводимая терапия и пр.).

В группу исследования были отобраны пациенты в возрасте до 30 лет. Канадская выборка молодых пациентов составила 201 человек, выборка пациентов русской популяции - 137 человек. Все пациенты были генотипированы на наличие мутаций C282Y и H63D гена HFE. Канадская база данных содержала информацию об уровнях ферритина и насыщения трансферрина (основные показатели обмена железа в организме) на всех пациентов. Из 137 русских больных лишь 24 человека были обследованы с точки зрения обмена железа. В связи со столь малым количеством обследованных русских пациентов, анализ корреляции генотип-фенотип осуществлялся на пациентах канадского происхождения.

Показатели железа. Уровни ферритина и трансферрина канадских больных определялись с использованием N Latex Ferritin и N Antisera to Human Transferrin методик (Dade Behring Inc., Newark, USA). Уровень железа измерялся с помощью VITROS Dry chemistry Fe slides и VITROS 250 и 950 химических систем (Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., Rochester, NY, USA).

Референсные значения показателей ферритина и насыщения трансферрина отличаются в зависимости от пола и возраста обследуемого. В качестве критерия превышения нормы использовалась таблица норм, разработанная на основании исследования местной популяции в биохимической лаборатории Центра здоровья детей и женщин Британской Колумбии (Ванкувер, Канада) (табл. 1) (Lockitch G. et al., 1988).

Таблица 1.

Уровень ферритина и насыщения трансферрина у здоровых людей в зависимости от пола и возраста

Возраст

Ферритин, мкг/л

Насыщение трансферрина, %

Мужчины

Женщины

Мужчины

Женщины

0-7 дней

6-400

7-44

8 дней – 5 лет

9-30

6-9 лет

13-66

17-42

10-13 лет

29-84

9-49

11-36

2-40

14-17 лет

6-33

18-19 лет

15-250

10-200

20-50 лет

6-45

Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»