WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 13 |

На правах рукописи

АББАСОВАСветлана Георгиевна

Растворимый Fas прионкологических заболеваниях

14.00.14. – онкология

03.00.04. – биохимия

Автореферат

диссертации насоискание ученой степени

доктора биологическихнаук

МОСКВА– 2008

Работавыполнена в Российском онкологическомнаучном центре им. Н.Н. Блохина РАМН

Научные консультанты:

Член-корреспондент РАМН,профессорН.Е.Кушлинский

Член-корреспондент РАН,профессорВ.М. Липкин

Официальные оппоненты:

Заведующий лабораториеймолекулярной эндокринологии НИИканцерогенеза ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН,доктор биологических наук, профессорКрасильников Михаил Александрович

ЗаместительГенерального директора ОАО «Всероссийскийнаучный центр диагностики и лечения»,заведующий отделом биотехнологии ВНЦДЛ,доктор биологических наук, профессорСвешников Петр Георгиевич

Заведующий лабораториейпрогноза эффективности консервативнойтерапии опухолей ФГУ «Московский НИИонкологии им. П.А. ГерценаРосмедбиотехнологий», докторбиологических наук, профессор СергееваНаталья Сергеевна

Ведущая организация:

ФГУ Российский научный центррентгенорадиологии МЗ и СР РФ

Защита диссертациисостоится «____»_______________2009 г. в «___» часов назаседании Диссертационного совета(Д.001.017.02) ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН поадресу: 115478, г.Москва, Каширское шоссе,24.

С диссертацией можноознакомиться в библиотеке ГУ РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН (115478, г.Москва, Каширскоешоссе, 24)

Автореферат разослан«____» ___________2009 г.

Ученый секретарьдиссертационного совета

доктор медицинскихнаук,профессорБарсуков Ю.А.

Список условных сокращений

ДОМЖ -доброкачественные опухоли молочнойжелезы

ДОЯ -доброкачественные опухоли яичников

ДТЗ -диффузный токсический зоб

ИФА -иммуноферментный анализ

KPP -колоректальный рак

МА -моноклональные антитела

НК -натуральные киллеры

РМЖ - ракмолочной железы

РТМ -рак тела матки

РЩЖ - ракщитовидной железы

РЯ -рак яичников

УКЗ -узловой коллоидный зоб

ЦТЛ -цитотоксические лимфоциты

ЩФ -щелочная фосфатаза

FADD -белок, содержащий домен смерти,ассоциированный с активированным Fas

FasL -Fas-лиганд

FLICE -FADD-подобная ICE-протеаза

FLIP -FLICE-ингибирующий белок

IFN -интерферон

IL- интерлейкин

sFas -растворимый Fas

uPA -активатор плазминогена урокиназноготипа

VEGF -фактор роста эндотелия сосудов

Общая характеристика работы.

Актуальностьпроблемы. Гомеостазмногоклеточного организма поддерживаетсяточно выверенным балансом междупроцессами пролиферации, дифференцировкии гибели клеток. Одним из основныхмеханизмов элиминации опасных дляорганизма клеток, к числу которыхотносятся вирус-инфицированные,опухолевые клетки, а также клетки,закончившие свой жизненный цикл, являетсяапоптоз, или программированная клеточнаягибель. Это очень сложный механизм, наразличных этапах которого задействованымногочисленные факторы и рецепторыклеточной гибели, а также ряд адапторныхбелков, приводящий, в конечном итоге, кактивации внутриклеточных протеаз исамоуничтожению опасной для организмаклетки. Любые сбои в этом сложном процессеприводят к развитию серьезных патологий, втом числе к возникновению и ростузлокачественных опухолей.Злокачественность новообразованийопределяется не только огромнымпролиферативным потенциалом составляющихих клеток, но и устойчивостью этих клеток кдействию факторов, регулирующих процессыдифференцировки и клеточной гибели.

Fas/APO-1/CD95 – является одним изключевых рецепторов, запускающихпрограмму самоуничтожения клетки (Itoh исоавт., 1991; Oehm и соавт., 1992). Экспрессия Fasпоказана почти во всех органах - в тимусе,почках, печени, сердце, легких, он такжеэкспонирован на поверхностиактивированных лимфоцитов, натуральныхкиллеров, вирус-инфицированных иопухолевых клеток (Nagata and Golstein, 1995).

ИндукцияFas-опосредованного апоптоза в клеткепроисходит после взаимодействия Fas с еголигандом - FasL. Механизм Fas-опосредованногоапоптоза хорошо изучен: идентифицированыосновные белки, участвующие в передачеапоптотического сигнала отактивированного Fas, установлены ихструктура и функции. Устойчивость клеток кFasзависимомуапоптозу определяется как нарушениями вэкспрессии, структуре, и функционированиибелков, опосредующих Fas-зависимый апоптоз,так и повышенной продукцией растворимогоFas (sFas) этими клетками. Растворимый Fasдистантно ингибирует действие FasL, позволяяклеткам-продуцентам растворимого Fas уйтиот противоопухолевой защиты организма. Спомощью молекулярно-биологических методовбыло показано, что sFas является продуктомальтернативного сплайсингаполноразмерной мРНК Fas (Cheng и соавт., 1994; Cascinoи соавт., 1995). Идентифицировано несколькорастворимых изоформ Fas, среди которыхпреобладает одна – FasdelTM, или FasExo6Del, остальные изоформыпродуцируются в незначительныхколичествах (Cascino и соавт., 1995; Cascino и соавт.,1996).

Актуальностьнастоящего исследования определяетсянеобходимостью определения значениярастворимого Fas в сыворотке крови прионкологических заболеваниях различногогистогенеза и локализации в прогнозезаболевания, а также в оценке устойчивостиопухоли к применяемой терапии в конкретнойкли­ническойситуации.

Цель исследования– Разработка ихарактеристика сэндвич-ИФА дляопределения концентрации растворимого Fas всыворотке крови, изучение связипоказателей sFas с основными клиническими,морфологическими и некоторымибиохимическими характеристикамиопухолевых процессов и его значения впрогнозе онкологическихзаболеваний.

Задачиисследования:

1. Охарактеризоватьразработанный нами сэндвич-ИФА дляколичественного определения sFas всыворотке крови человека – оценить пределдетекции тест-системы и воспроизводимостьрезультатов анализа. Датьиммунохимическую характеристикумоноклональных антител (МА), на основекоторых разработан сэндвич-ИФА.

2. С помощью пептидногофагового дисплея определить структуруэпитопов для МА к полноразмерному Fasчеловека, на основе которых разработансэндвич-ИФА, с целью выявления спектраизоформ sFas, которые должна детектироватьразработанная тест-система.

3. Определитьконцентрацию sFas в сыворотке кровионкологических больных с наиболее частовыявляемыми опухолями (новообразованиямолочной железы, яичников, эндометрия,костей, толстой кишки, надпочечников ищитовидной железы) и провести анализпоказателей sFas в зависимости от основныхклинических, морфологических и некоторыхбиохимических критериев опухолевыхпроцессов и определить его значение впрогнозе заболеваний.

4. Изучить корреляциюпоказателей sFas в сыворотке кровионкологических больных с показателяминаиболее важных патогенетическихфакторов: активатора процессанеоангиогенеза в опухоли – VEGF,провоспалительного цитокина, ингибитораFas-зависимого апоптоза – IL-6, уровнясодержания рецепторов эстрогенов вопухоли при раке молочной железы, общейактивности щелочной фосфатазы в сывороткекрови при новообразованиях костей, уровнясодержания активатора плазминогена (uPA) вткани опухолей щитовидной железы.

Научная новизна. Разработана и охарактеризованаоригинальная отечественная тест-системадля количественного определениярастворимого Fas в сыворотке крови человека,не уступающая аналогичным тест-системам,описанным в литературе.

С помощью разработанной тест-системывпервые на большом клиническом материалеопределена концентрация и проведен анализпоказателей растворимого Fas в сывороткекрови больных новообразованиямиразличного морфогенеза и локализации всравнении с соответствующими показателямипрактически здоровых людей. Впервыеопределены связь sFas с основнымиклиническими, морфологическими инекоторыми биохимическимихарактеристиками опухолевых процессов иего значение в прогнозе заболевания прираке яичников, раке тела матки, раке корынадпочечников и остеогенной саркоме, атакже предиктивное значение sFas в оценкеэффективности неоадъювантной лучевойтерапии при колоректальном раке.

Практическаязначимость исследования состоит в разработке оригинальнойотечественной иммуноферментнойтест-системы для количественногоопределения растворимого Fas в сывороткекрови человека, а также в установлениизначения этого белка как фактора прогнозапри раке яичников, раке тела матки, ракекоры надпочечников и остеогенной саркоме,а также его предиктивного значения воценке эффективности неоадъювантнойлучевой терапии при раке толстойкишки.

Основные положения,выносимые на защиту:

  1. Разработанная тест-система наоснове МА SA-7 и SA-8 может применяться дляколичественного определения sFas всыворотке и плазме крови человека и другихбиологических жидкостях. Присутствие sFasL идругих компонентов сыворотки крови невлияет на результаты количественногоопределения sFas. Разработанная намитест-система должна детектироватьосновную изоформу sFas - FasExo6Del и три минорных изоформы sFas-FasExo4Del, FasExo4,6Del и FasExo4,7Del.
  2. Концентрация и частота выявления sFasв сыворотке крови больныхновообразованиями различного морфогенезаи локализации достоверно превышаютсоответствующие показатели практическиздоровых людей.
  3. Показатели sFas в сыворотке кровисвязаны с основными клиническимихарактеристиками заболевания (стадияопухолевого процесса, размер опухолевогоузла, степень дифференцировки опухоли ихарактер ее роста) при раке яичников, ракетела матки, раке толстой кишки иадренокортикальном раке.
  4. Показатели sFas достоверно неразличаются при злокачественных идоброкачественных новообразованияхмолочной железы, костей, яичников инадпочечников, тогда как рак щитовиднойжелезы характеризуется более высокимипоказателями sFas в сыворотке крови, чемдоброкачественные и гиперпластическиепроцессы щитовидной железы. Одновременновысокие уровни sFas, VEGF и IL-6 в сыворотке кровихарактерны для злокачественныхновообразований.
  5. Высокий уровень sFas в сывороткекрови является неблагоприятным факторомпрогноза для больных остеогенной саркомой,раком яичников, раком тела матки иадренокортикальным раком.
  6. Высокая концентрация sFas в сывороткекрови является неблагоприятнымпредиктивным фактором эффективностиприменения неоадъювантной лучевой терапиипри колоректальном раке в пожиломвозрасте.

Апробация работы:

Материалы диссертациидоложены на научно-практическомсимпозиуме «Клиническая лаборатория напороге XXI века: синтез традиций и новаций»,(Москва, 12-14 октября 1999 года); на VIIРоссийском Национальном Конгрессе«Человек и лекарство» (Москва, 10-14 апреля 2000года); на 2-ом съезде онкологов стран СНГ(Киев, 23-26 мая 2000 года); на 7thBiennial Meeting of the International GynecologicalCancer Society (Rome, Italy, September 26-30, 1999); на XIРоссийском Национальном Конгрессе«Человек и лекарство» (Москва, 19-23 апреля 2004года); на Конгрессе «Национальные днилабораторной медицины России-2004» (Москва20-22 октября 2004г.); на Российскойнаучно-практической конференции«Современное состояние и перспективыразвития экспериментальной и клиническойонкологии» (Томск, 24-25 июня 2004 г.); на XIIРоссийском Национальном Конгрессе«Человек и лекарство» (Москва, 18-22 апреля 2005г.); на I Всероссийской научно-практическойконференции патологоанатомов «Актуальныевопросы патологической анатомии» (Орел, 31мая-2 июня 2005 г.); на X Российскомонкологическом конгрессе (Москва, 21-23ноября 2006 г.); на XIII Российском НациональномКонгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 3-7апреля 2006 г.). Диссертационная работаапробирована на совместной научной конференции лаборатории клиническойбиохимии, лабораторииклинической иммунологии, х/о опухолеймолочной железы, х/о проктологии, х/одиагностики опухолей НИИКО, лаборатории молекулярнойэндокринологии НИИ канцерогенеза ГУРОНЦ им. Н.Н.БлохинаРАМН; кафедры онкологиии кафедры клиническойбиохимии и лабораторной диагностикиФПДОМГМСУ; лабораториинейрохимии ФИБХ РАН 14 октября 2008 г.

Полученные результатыиспользуются в практике лабораторииклинической биохимии НИИ клиническойонкологии ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН и в учебномпроцессе на кафедре клинической биохимии илабораторной диагностики ФПДО ГОУ ВПО «Московскийгосударственный медико-стоматологическийуниверситет Росздрава».

Публикации. По материалам диссертацииопубликовано 41 работа вотечественных и зарубежныхжурналах.

Структура и объемдиссертации.Диссертация состоит извведения, обзора литературы,экспериментальной части, включающейописание материалов и методов и 8 главрезультатов собственных исследований;заключения, выводов, списка цитируемойлитературы. Общий объем диссертации 272страниц машинописного текста. Списоклитературы включает 84 отечественных и 448зарубежных авторов. Диссертацияиллюстрирована 67 таблицами и 26рисунками.

Материалы и методыисследования

Общая характеристикаобследованных больных

В настоящееисследование были включены 1061 первичныхбольных злокачест­венными и доброкачественныминовообразованиями различного гистогенезаи лока­лизации, из них 861 женщины и 200мужчин, в возрасте от 14 до 80 лет. В общейгруппе пациентов были больныеновообразованиями молочной железы (141),костей (99), яичников (347), тела матки (111),толстой кишки (113), щитовидной железы (141) икоры надпочечников (109).

Группу контролясоставили 457 практически здоровых людей, 332женщины и 125 мужчин, в возрасте от 17 до 76лет.

Диагнозы всем больнымбыли установлены впервые на основаниирезультатов клинических исследований иподтверждены данными гистологическогоисследования, определение концентрации sFasв сыворотке крови проводили до началаспецифи­ческого лечения.

Больныхклассифицировали по стадиям согласномеждународной классификации по системе TNM(Cancer TNM>

Группу больныхновообразованиями молочной железысоставили 119 женщин от 28 до 82 лет спервичным РМЖ и 22 пациентки сдоброкачествен­ными новообразованиями ифиброзно-кистозной болезнью в возрасте от33 до 58 лет, которые были обследованы иполучали лечение в НИИ клиническойонкологии Российского онкологическогонаучного центра им. Н.Н.Блохина РАМН впериод с декабря 1999г. по ноябрь 2003г.

Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 13 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»