WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Результаты лечения оценивали по биометрическим показателям (коэффициентам массы легких и селезенки), индексу поражения легких, высеваемости МБТ из гомогенатов селезенки, результатам гистологического исследования микропрепаратов легких.

Фагоцитоз исследовали в культуре перитонеальных макрофагов (пМф) мышей (1  106 клеток) на чашках Петри в отношении клеточной взвеси дрожжей вида Saccharomyces cerevisiae (1  107 клеток), опсонизированных сывороткой мышей. Учитывали фагоцитарную активность (ФА) — процент макрофагов, вовлеченных в фагоцитоз; фагоцитарное число (ФЧ) — среднее количество дрожжевых клеток, поглощенных одним макрофагом; показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ) — количество дрожжевых клеток, переваренных макрофагом за 1,5 ч культивирования; индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ) — отношение ФЧ за 1 ч культивирования к ФЧ за 2,5 ч культивирования.

На основании полученных данных рассчитывали индекс эффективности лечения (ИЭ, %) по формуле:

nк – nо

ИЭ (%) = –––––––––––  100,

где nк и nо — средние значения показателей тяжести течения туберкулезной инфекции соответственно в контрольной и опытной группах.

Клинический раздел. Этот раздел работы выполнен на базе Санкт-Петербургского государственного учреждения здравоохранения «Городская туберкулезная больница № 2».

В клиническое исследование включен 91 ВИЧ-отрицательный пациент (70 мужчин и 21 женщина) с впервые выявленным туберкулезом легких в фазе распада с бактериовыделением. Основную группу составили 45 больных, контрольную — 46. Все пациенты подписали информированное добровольное согласие на участие в исследовании.

Больным основной группы после отработки стандартной химиотерапии не менее чем 4 ПТП (в соответствии с Приказом Минздрава № 109 от 21.03.2001 г.) назначали воздействие ФХТ-470 накожно контактно светодиодной матрицей с легким надавливанием в области локтевой ямки, режим — непрерывный, мощность — 100%, общая длительность процедуры — 15 мин, на курс — 15 процедур. Доза излучения, получаемая больным за процедуру, составила 14,4 Дж, курсовая — 216 Дж. Никакие другие (кроме аэрозольтерапии) физиотерапевтические методы в период терапии от 0 до 2 месяцев пациентам обеих групп не назначались. Больные контрольной группы получали только стандартную химиотерапию.

Для обследования пациентов использовали общепринятые во фтизиатрической практике методы: сбор жалоб и анамнеза, физикальные, клинико-лабораторные, бактериологические и рентгенотомографические исследования. Обследование проводили при поступлении пациентов в стационар, через 1 и 2 месяца лечения, а также в конце стационарного этапа лечения.

Средний возраст больных составил 35,9  ±  1,8 года. Диагноз инфильтративного туберкулеза легких установлен у 61 пациента, диссеминированного туберкулеза легких — у 25, туберкулеза внутригрудных лимфатических узлов с отсевом в легочную ткань — у 5.

Из данных анамнеза обращал на себя внимание тот факт, что большинство больных не были обследованы флюорографически до выявления туберкулеза на протяжении 3–12 лет, а 3 пациентам флюорография не проводилась никогда. 64 пациента (70,3%) злоупотребляли алкоголем, 72 (79,1%) — курили. Официально трудоустроены на момент госпитализации были 39 больных (42,9%).

При поступлении больные предъявляли жалобы на кашель (сухой — 7 пациентов; с выделением мокроты, чаще всего гнойной или слизисто-гнойной, до 100–150 мл в сутки — 84), кровохарканье (15 больных), которое прекратилось к моменту включения в исследование у всех пациентов, одышку (17 больных), боль в грудной клетке на стороне поражения (27 пациентов), снижение массы тела (на 3–15 кг за предшествовавшие 3–12 месяцев), повышение температуры тела до 38,5 °C, слабость, потливость.

На момент включения в исследование состояние 79 пациентов было удовлетворительным, 12 — средней тяжести. Физикальные находки при обследовании по органам и системам были преимущественно представлены патологическим изменением основных дыхательных шумов (жесткое дыхание — у 78 больных) и наличием хрипов (мелко- и среднепузырчатых — у 47 больных, крупнопузырчатых — у 2) и шума трения плевры (у 14 пациентов) в проекции зоны туберкулезного процесса.

У пациентов обеих групп рассчитывали лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) по В. К. Островскому и соавт. (1983). В контрольной и опытной группах этот показатель находился в пределах нормы и составлял 1,81  ±  0,10 и 1,82  ±  0,11 соответственно.

Иммунологический статус оценивали по полуколичественной реакции иммунофлюоресцентного анализа (ИФА). У 47 больных (51,6%) результат исследования был отрицательным, а у 12 (13,2%), 30 (33,0%) и 2 (2,2%) больных — соответственно слабоположительным, положительным и резкоположительным.

При бактериоскопии мазков мокроты, окрашенных по Цилю-Нельсену, кислотоустойчивые микобактерии обнаружены у всех пациентов. При исследовании мокроты культуральным методом первичная лекарственная устойчивость МБТ выявлена у 35 пациентов (38,5%) (17 — в контрольной и 18 — в основной группе), причем у 24 (26,4%) зарегистрирована мультирезистентность (по 12 больных в обеих группах).

При рентгенотомографическом обследовании определялись инфильтративно-очаговые изменения в легочной ткани, сопровождавшиеся одной или несколькими (иногда множественными) деструкциями. У 76 пациентов описаны следы ранее перенесенного туберкулезного процесса (плевроапикальные наслоения, плевральные шварты, плевродиафрагмальные и плеврокостальные спайки, кальцинаты во внутригрудных лимфатических узлах и легочной ткани).

В группах наблюдения оценивалась рентгенологическая динамика. Динамику оценивали как выраженную в случае рассасывания инфильтративно-очаговых изменений, сопровождавшегося закрытием деструкций и регрессом реакции со стороны внутригрудных лимфатических узлов. Как умеренную динамику расценивали при наличии только одного из вышеперечисленных положительных сдвигов (или рассасывание инфильтрации и очагов, или закрытие деструкций, или регресс реакции внутригрудных лимфатических узлов).

Основная и контрольная группы были сопоставимы по численности, а сравнение возрастных, половых, клинических и лабораторных характеристик на этапе включения в клиническое исследование показало их однородность по анализируемым параметрам.

Главными критериями эффективности лечения больных основной и контрольной групп были регрессия интоксикационных симптомов, рентгенологических и лабораторных показателей, прекращение бактериовыделения (абациллирование) и закрытие полостей распада.

Для формирования базы данных использовали MS Office 2003 Excel. При оценке полученных результатов применяли параметрический тест Стьюдента-Фишера и непараметрический метод Уилкоксона-Манна-Уитни, а также статистический показатель 2 (пакет статистических программ Statistica 6.0).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Экспериментальные исследования. В опытах in vitro диодное излучение с длиной волны 470 нм при изолированном применении оказывало заметное ингибирующее действие на рост культуры МБТ. Наиболее выраженное подавление ростовых свойств культуры МБТ отмечено в разведении 10–4. При этом количество выросших КОЕ сократилось в 1,4 раза по сравнению с контролем (до 19,5 ± 1,50 против 26,75 ± 1,65  в контроле культуры, p < 0,01).

При комбинированном применении исследуемого фактора и рифампицина регистрировали отчетливое усиление ингибиции роста тест-штамма. Так, массивность роста МБТ в разведении 10–3 сократилась в 7,7 раза (p < 0,01) по сравнению с моновоздействием препарата. Полный ингибирующий эффект получен в разведении культуры 10–4.

Синергидное взаимодействие в отношении культуры МБТ выявлено и при сочетанном применении диодного излучения с длиной волны 470 нм и изониазида (H). Так, если рост тест-штамма в присутствии H снизился в 6,7 раза (p < 0,001) по сравнению с контролем культуры, то после дополнительного воздействия исследуемого фактора отмечено усиление ингибирующего эффекта H в 36,9 раза (p < 0,001).

В проведенных исследованиях in vivo установлено, что при курсовом применении ФХТ-470 не оказывала отрицательного действия на поведение и состояние внутренних органов здоровых мышей и активировала фагоцитарную функцию макрофагов, что свидетельствует о фотобиологической безвредности излучения синей части спектра.

При монотерапии ФХТ-470 не проявляла терапевтической активности у инфицированных мышей, все тестируемые показатели тяжести течения туберкулезного процесса были сопоставимы с группой контроля заражения.

При обследовании зараженных мышей сразу после курса ФХТ-470 на фоне ПТП регистрировали усиление лечебного эффекта химиотерапии преимущественно за счет достоверного сокращения степени пораженности легких: коэффициента их массы — на 26,3% (р < 0,05) и индекса поражения — на 32,4% (р < 0,05), а также незначительного уменьшения коэффициента массы селезенки (на 3,0%) и роста МБТ в посевах ее гомогенатов (на 8,6%). Существенное повышение эффективности проводимой терапии (в среднем на 32,9% по сравнению с группой контроля лечения) наблюдали спустя 2 недели после завершения курса ФХТ-470 нм. При этом на фоне достоверного уменьшения коэффициента массы селезенки (на 40,0%, р < 0,05) установлено повышение ее обсемененности МБТ (на 46,6%, р < 0,02), а также снижение индекса поражения легких (на 25,4%, р < 0,05). В отдаленные сроки (через 4 недели после курса фотохромотерапии) показатели пораженности органов в опытной группе были сопоставимы с показателями группы мышей, получавших только химиотерапию, что, вероятно, обусловлено отсутствием эффекта последействия у ФХТ-470.

Изучение фагоцитарной функции пМф (через 6 недель после заражения) показало выраженную депрессию поглотительной и переваривающей функции макрофагов у мышей группы контроля заражения по сравнению с интактными животными. В частности, ФА снизилась в 1,4 раза; ФЧ — в 2,1; ПЗФ — в 4,1; ИЗФ — в 1,7 раза (p < 0,05) (рис. 1).

Рис. 1. Фагоцитоз пМф мышей с экспериментальным туберкулезом после

3-недельного курса ФХТ-470. По оси абсцисс — номера групп
животных; по оси ординат: слева — средние значения ФА (%), справа — средние значен ия ПЗФ (число дрожжевых клеток).

* p < 0,05 по сравнению с группой контроля заражения; ** p < 0,05 по сравнению с группой мышей, леченных ПТП

В эти же сроки наблюдения в группе зараженных животных, получавших только ПТП, на фоне явного снижения тяжести течения туберкулезного процесса регистрировали также недостаточную эффективность фагоцитоза (ФА ниже интактного уровня в 1,3 раза; ФЧ — в 1,4; ПЗФ — в 2,1; ИЗФ — в 1,3 раза; p < 0,05). В дальнейшем (через 5 и 7 недель терапии ПТП) в группе контроля лечения параллельно снижению биометрических и бактериологических показателей пораженности органов мышей отмечено восстановление фагоцитарной функции пМф. Сходные данные о снижении функциональной активности макрофагов при туберкулезной инфекции получены в многочисленных работах других авторов (Виноградова Т. И., 1995, 2007; Заболотных Н. В., 2003; Витовская М. Л., 2006).

Следует отметить, что применение ФХТ-470 как в виде моновоздействия, так и в комплексе с ПТП оказывало активирующее влияние на фагоцитарную функцию макрофагов (см. рис. 1). Так, в условиях моновоздействия ФХТ-470 наблюдали увеличение ФЧ в 1,4 раза (p < 0,05), ПЗФ — в 1,7 раза (p < 0,05), ПЗФ — в 1,3 раза по сравнению с показателями группы контроля заражения. Эффективность фагоцитоза при сочетанном применении ФХТ-470 с ПТП возросла в 1,9 раза (p < 0,01) по сравнению с контролем лечения и была сопоставима с показателями интактных животных (см. рис. 1), причем активирующий эффект определяли только после завершения 3-недельного курса фотохромотерапии. Динамика фагоцитарной функции макрофагов через 2 и 4 недели после отмены ФХТ-470 была сходна с таковой в группе контроля лечения. Эти данные дают основание полагать, что наблюдаемая активация фагоцитоза обусловлена действием ФХТ-470.

Влияние ФХТ-470 на макрофагальное звено иммунитета выражалось не только в стимуляции функциональной активности пМф, но и в усилении пролиферации альвеолярных макрофагов, что установлено при морфологическом исследовании легочной ткани мышей, подвергавшихся облучению (рис. 2).

В микропрепаратах легких мышей, получавших ПТП в комплексе с облучением ФХТ-470 на протяжении 3 недель, обнаружено значимое увеличение количества одноядерных макрофагов в 4 раза (p < 0,001), количества двуядерных макрофагов — в 10 раз и появление многоядерных макрофагов по сравнению с группой контроля лечения.

Рис. 2. Влияние ФХТ-470 на пролиферацию альвеолярных макрофагов при экспериментальном туберкулезе (через 3 недели применения). По оси абсцисс — номера групп животных; по оси ординат — относительное количество макрофагов (%).

* p < 0,05 по сравнению с контролем заражения; ** p < 0,05 по сравнению с группой мышей, леченных ПТП

Морфологическое исследование легких мышей выявило более благоприятное течение инволюции туберкулезного процесса в условиях использования ФХТ-470 в виде значительного снижения по сравнению с контролем лечения альтеративного компонента специфического воспаления, а также выраженного увеличения площади функционирующей легочной ткани (с 54,5 до 58,5%, p < 0,001), сокращения инфильтрации межальвеолярных перегородок (с 35,3 до 22,5%, p < 0,001).

Полученные данные свидетельствуют о фотобиологической безвредности накожного воздействия ФХТ-470. Проведенное исследование показало, что ФХТ-470 способствует снижению тяжести течения экспериментального туберкулеза, оказывая активирующее действие на систему мононуклеарных фагоцитов. Иммунотропная активность ФХТ-470 проявляется только в условиях проведения селективной фотохромотерапии, что позволяет предполагать отсутствие эффекта последействия. Эти данные послужили основанием для проведения клинического исследования.

Клиническое исследование. При включении в состав комплексной терапии воздействия ФХТ-470 отмечено более раннее (в среднем на 1 неделю) и более полное уменьшение или исчезновение жалоб в основной группе по сравнению с контрольной. Значимое уменьшение или исчезновение кашля наблюдали у 100% пациентов основной группы через 2–3 недели после начала лечения, в то время как в контрольной группе этот показатель составлял 89,1% через 3–4 недели. Одышка в группах сравнения значительно уменьшилась или исчезла соответственно у 100 и 87,5% пациентов, боль в грудной клетке — у 85,7 и 76,9% больных в те же сроки.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»