WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Определяли специфические антитела к боррелиям в НРИФ с корпускулярным антигеном, приготовленным из штамма B. afzelii Ip-21 в лаборатории переносчиков инфекций НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН г.Москва, в динамике заболевания с интервалом 10-11 дней (186 исследований). Методом непрямого твердофазного ИФА выявляли специфические антитела классов IgM и IgG к боррелиям, возбудителям гранулоцитарного анаплазмоза человека и моноцитарного эрлихиоза человека в сыворотке крови. Использовались тест-системы «Боррелиоз-ИФА-IgM», «Боррелиоз-ИФА-IgG», «ГАЧ-ИФА-IgM», «ГАЧ-ИФА-IgG», «МЭЧ-ИФА-IgM», «МЭЧ-ИФА-IgG» производства ООО «Омникс», г. Санкт-Петербург (табл.2).

Таблица 2

Количество исследований для определения специфических антител классов IgM и IgG к возбудителям ИКБ, ГАЧ и МЭЧ

Тест-система

Количество исследованных сывороток

Боррелиоз-ИФА-IgМ

114

Боррелиоз-ИФА-IgG

94

ГАЧ-ИФА-IgМ

178

ГАЧ-ИФА-IgG

178

МЭЧ-ИФА-IgМ

64

МЭЧ-ИФА-IgG

64

Всего

692

Определение неоптерина в сыворотках крови проводили методом твердофазного ИФА, используя тест-систему Neopterin ELISA производства IBL, Гамбург, Германия (88 исследований). Определение СРБ в сыворотке крови проводили методом твердофазного ИФА с использованием тест-системы с высокой чувствительностью фирмы BIOMERICA, INC, U.S.A. (88 исследований).

Методом иммунного блотинга исследовали специфические антитела классов IgM и IgG к определенным антигенам боррелий с помощью тест-системы recomBlot Borrelia IgМ и recomBlot Borrelia IgG производства «MIKROGEN», Германия (24 исследования).

Всего методами НРИФ, ИФА и иммунного блотинга исследовали 1078 образцов крови.

Проведен анализ 386 сывороток крови, исследованных в иммуноблоте, от пациентов с разным течением ИКБ и с различными соматическими заболеваниями, требующими дифференциальной диагностики с ИКБ (по данным лаборатории особо опасных инфекций ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Ярославской области»). Специальные методы исследования (НРИФ, ИФА, иммунный блотинг) проводили на базе лаборатории особо опасных инфекций ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Ярославской области» (зав. лабораторией Зайцева Л.Л., врач-бактериолог – Шалепо Е.В.).

Статистическую обработку результатов проводили на персональном компьютере с использованием программы «Statistica – 6.0» с применением следующих показателей: М - средняя арифметическая, m-средняя ошибка средней арифметической, - среднее квадратичное отклонение, t - достоверность разницы средних величин, р - показатель достоверности. При малой выборке достоверность оценивали по таблице Стьюдента. Корреляционный анализ проводили с вычислением коэффициента линейной корреляции r. Достоверность различия средних величин определяли по критерию Стьюдента с оценкой вероятности, равной 95 % при риске ошибки 5 % (р<0,05).

Результаты исследования

Клинико-эпидемиологическая характеристика больных иксодовыми клещевыми боррелиозами на современном этапе

Результаты исследования показали, что на территории Ярославской области преобладает заболеваемость ИКБ у лиц старше 60 лет (52,6%), преимущественно среди женщин (62,2%, р<0,001). Средний возраст пациентов составил 58,22±15,66 лет, средний возраст наблюдаемых женщин был достоверно выше среднего возраста мужчин (61,59±14,56 и 54,27±16,03 соответственно, р<0,001). Чаще среди больных встречались лица пенсионного возраста – 53,9% к числу всех обследованных. Пациенты трудоспособного возраста составили 32,0%. Отмечена низкая заболеваемость ИКБ детей и лиц 18-30 лет (3,1% и 3,5% соответственно).

Нападения иксодовых клещей на пациентов наблюдались с марта по август. На территории Ярославской области случаи заболевания регистрировали с апреля по октябрь, а максимум приходился на май и июнь (73,2%). Выявлено, что пик заболеваемости ИКБ приходился на весенне-летние месяцы, вероятно, это связано с благоприятными климатическими условиями, сложившимися в области в последнее время: меньшее количество осадков весной и высокие температурные показатели в весенние и летние месяцы. Заражение происходило в основном на дачных участках Ярославского муниципального округа (34,5%) и муниципальных округах области (34,5%). Установлено, что 28,5% больных были инфицированы в результате нападения клещей в черте города Ярославля при посещении парков и скверов, а также городских кладбищ. Среди обследованных у 2,5% заражение ИКБ произошло за пределами Ярославской области.

Пациенты удаляли иксодовых клещей через 1-3 суток - в 52%, в течение первых суток – 29,5%, остальные больные (7,5%) - позднее 3 суток.

Результаты проведенных исследований свидетельствовали, что клинические проявления острых манифестных форм ИКБ в Ярославской области на современном этапе характеризовались преимущественно эритемными формами (98,1%) и легкой степенью тяжести (81,5%). Реже диагностировали среднетяжелое течение заболевания – у 18,5% пациентов. Патогномоничный симптом ИКБ – мигрирующая эритема в большинстве случаев располагалась в местах присасывания клещей и чаще на туловище (68,0%). Ее размеры определены в значениях от 3 до 58 см в диаметре (16,95±10,05 см). У обследованных преобладали гомогенные эритемы (70,8%), над кольцевидными (28,2%). Вторичные эритемы отмечены у 6,9% пациентов. Атипичные варианты эритем наблюдали у 0,9% больных в виде папул и везикул с серозным содержимым, а также геморрагий, абсцедирование места укуса имело место у 0,6% обследованных. Из субъективных ощущений в области МЭ больные отмечали зуд – 59,6%, болезненность – 31,3%, жжение – 24,8%, отек тканей в области эритемы наблюдали у 14,7% пациентов. Регионарный лимфаденит к месту присасывания клеща регистрировали у 11,6% больных. Синдром общей интоксикации с повышением температуры от 37С до 39С и выше наблюдали у 55,5% пациентов (рис.1).

Рис.1. Клинические симптомы при остром течении иксодового клещевого боррелиоза.

Субфебрильную лихорадку регистрировали у 67,6% больных. Длительность лихорадки у 75,7% пациентов наблюдали в течение 1-3 дней. Выявили, что изолированная МЭ не сопровождалась лихорадкой у 44,5% человек. Симптомы общей интоксикации с явлениями слабости и недомогания наблюдали у 62,7% обследованных. Головная боль зарегистрирована у 29,5% пациентов, у одного больного были определены менингеальные симптомы.

При остром течении заболевания у 58 (18,2%) больных диагностированы поражения периферической нервной системы в виде расстройств кожной чувствительности локального характера (48 пациентов), радикулопатий (4), парестезий (3), монопарезов (2), неврита лицевого нерва (1). Увеличение печени, умеренное повышение активности аминотрансфераз (АСТ, АЛТ) и общего билирубина выявили у 13,2%. Артралгии и миалгии встречались у 9,4% и 4,7% обследованных соответственно. Изменения сердечно-сосудистой системы зарегистрированы у 4,7% пациентов в возрасте до 50 лет, не имеющих сопутствующего отягощенного кардиологического анамнеза. Среди пациентов старше 50 лет, имеющих в анамнезе указания на заболевания сердечно-сосудистой системы, у 13,8% было зарегистрировано на фоне манифестации ИКБ ухудшение в виде усиления болей в сердце, тахикардии, подъемов артериального давления, не купирующихся подобранными дозами лекарственных препаратов. Таким образом, в Ярославской области при остром течении иксодового клещевого боррелиоза преобладали эритемные формы и легкая степень тяжести заболевания, а также регистрировались органные поражения. Отмечалась преимущественная заинтересованность нервной (18,2%), опорно-двигательной (14,1%) и сердечно-сосудистой систем (4,7%), а также печени (13,2%).

Безэритемные формы ИКБ диагностированы у 1,9% больных. У всех наблюдаемых отмечались слабость и недомогание, лихорадка в пределах от 37,0 до 40,0С. У половины пациентов зарегистрированы подъемы артериального давления до высоких цифр и изменения на ЭКГ. У двоих больных определили поражение нервной системы в виде монопарезов нижних конечностей. У обследованных с безэритемными формами ИКБ выявляли выраженный общеинфекционный синдром, который сопровождался поражением нервной и сердечно-сосудистой систем, а также вовлечением в патологический процесс печени.

Лабораторные методы исследования в диагностике иксодового клещевого боррелиоза

Для лабораторного подтверждения иксодового клещевого боррелиоза использовали серологические методы диагностики. В период разгара заболевания подтверждение диагноза методом НРИФ было достигнуто у 26,3% пациентов. По мере увеличения сроков от начала заболевания отмечали увеличение количества серопозитивных результатов до 36,8% в периоде ранней реконвалесценции и увеличение значений титров антител.

При тестировании сывороток крови больных методом ИФА определили, что IgM при остром течении заболевания диагностируются у 42,1% пациентов, IgG – у 23,4%. Выявлено, что в ранние сроки заболевания (в среднем на 1-4 день пребывания в стационаре) у больных помимо IgM регистрировались IgG. Анализ результатов обследования с использованием нескольких серологических методов исследования показал, что в период разгара методом ИФА диагноз подтверждался у 47,9% больных, с помощью НРИФ у 26,6% (рис. 2).

Рис.2. Лабораторная верификация иксодового клещевого боррелиоза методами НРИФ и ИФА.

С увеличением длительности инкубационного периода возрастало количество серопозитивных результатов, особенно при использовании метода ИФА в сравнении с НРИФ.

В нашем исследовании использование наряду с НРИФ метода ИФА повысило подтверждаемость лабораторной диагностики иксодового клещевого боррелиоза на 21,3%. В целом, серологическая верификация диагноза при остром течении заболевания с помощью методов НРИФ и ИФА имела место у 73,6% пациентов.

У части больных ИКБ с положительными или сомнительными результатами в НРИФ и/или ИФА, полученными на первом этапе исследования, на втором этапе применили метод иммунного блотинга с рекомбинантным набором антигенов. В нашей работе из 24 сывороток крови от пациентов с острым течением заболевания только у 12 больных сыворотки признаны положительными и в них определены от 2 до 6 полос реагирования. Среднее количество полос в одной сыворотке составило 3,0±1,8 (р<0,05). Мы выявили, что по мере удлинения сроков инкубационного периода увеличивается количество положительных результатов в иммунном блотинге. Методом иммунного блотинга у больных с острым течением ИКБ были диагностированы специфические антитела класса IgM к отдельным белкам боррелий. Наиболее часто антитела класса IgM в иммуноблоте обнаруживали к следующим антигенам из геновида B.afzelii: 22 kDa (OspC), 39 kDa (BmpA), 100 kDa (p100), 18,5 kDa (p41/i), 31 kDa (OspА). Из геновида B.garinii регистрировали IgM к таким антигенам, как 20 kDa (p41/i), 22 kDa (OspC). Специфические антитела класса IgM наиболее часто определяли к следующим белкам боррелий: 41 kDa (Fla), 66 kDa (VlsE), 39 kDa (BmpA), 22 kDa (OspC). При исследовании, на территории Ярославской области отмечена циркуляция B. afzelii и B. garinii, причем в большинстве случаев наблюдалось микст-инфицирование пациентов B.afzelii и B.garinii (75%), реже заражались только одним штаммом - B.afzelii (25%). При изучении клинических проявлений боррелиозной микст-инфекции выявили, что заболевание протекает с выраженным общеинфекционным синдромом, вторичными эритемами, поражением сердечно-сосудистой и нервной систем. Мы проанализировали результаты иммуноблота от пациентов с разным течением клещевого боррелиоза, а также с различными соматическими заболеваниями, требующими дифференциальной диагностики с ИКБ. Из 386 сывороток крови 154 исследовали на антитела класса IgM, 232 образца – на антитела класса IgG. Специфические антитела класса IgM выявили в 40 (25,9%) сыворотках и у большинства пациентов определили боррелиозную микст-инфекцию, вызванную B.afzelii и B.garinii – у 34 (85%), реже выявляли моно-инфицирование B.afzelii - у 5 (12,5%) больных, у 1 (2,5%) произошло заражение B.afzelii и B.burgdorferi sensu stricto. Специфические антитела класса IgG выявили в 62 (26,7%) сыворотках крови и также чаще регистрировали боррелиозную микст-инфекцию, вызванную B.afzelii и B.garinii – у 37 (59,7%) больных, заражение B.afzelii имело место у 18 (29%) пациентов, у 5 (8,1%) наблюдали боррелиозную микст-инфекцию, вызванную B.afzelii и B.burgdorferi sensu stricto, у 2 (3,2%) выявили моно-инфицирование B.garinii. Таким образом, на территории Ярославской области определили несколько серологических вариантов боррелий из комплекса B.burgdorferi sensu lato, представленных преимущественно B.afzelii и B.garinii. Специфические антитела к отдельным белкам боррелий методом иммуноблота чаще выявляли к трем серовариантам боррелий: первый - OspC (22 kDa), p41/i (18,5 kDa) - B.afzelii и B.garinii, второй - BmpA (39 kDa), p100 (100 kDa), OspА (31 kDa) - B.afzelii, третий - OspC (22 kDa), p41/i (20 kDa) - B.afzelii и B.garinii.

Так как с иксодовыми клещами связаны существование и передача человеку других патогенных микроорганизмов, нами проведены серологические исследования сывороток крови пациентов с острым течением ИКБ для определения антител к возбудителям гранулоцитарного анаплазмоза человека (ГАЧ) и моноцитарного эрлихиоза человека (МЭЧ). При тестировании образцов крови методом ИФА, антитела класса IgM к возбудителю ГАЧ определены у 35,9% пациентов, антитела класса IgG к возбудителю ГАЧ – у 33,1%. При исследовании сывороток крови в динамике определили, что антитела класса IgM к возбудителю ГАЧ в равной степени имели тенденцию к нарастанию (21,3%) и снижению (26,2%) в течение заболевания, антитела класса IgG к возбудителю ГАЧ в основном увеличивались – у 36,3% пациентов. При исследовании, антитела к возбудителям МЭЧ определены в низких титрах только в 3 сыворотках крови. Таким образом, использование метода ИФА позволило выявить у части наблюдаемых больных (64,3%) смешанную клещевую инфекцию: иксодовый клещевой боррелиоз и гранулоцитарный анаплазмоз человека.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»