WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 |

На правах рукописи

МИШКИНА ТАТЬЯНА ВЛАДИМИРОВНА

ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ МЕТОДА ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ ПРИ ГЕНОТИПИРОВАНИИ HELICOBACTER PYLORI У ДЕТЕЙ С ХРОНИЧЕСКОЙ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ

14.00.09 - Педиатрия

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург

2007

Работа выполнена на кафедре педиатрии №2 с курсом гастроэнтерологии ГОУ ДПО «Санкт-Петербургская Медицинская Академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, Александрова Валентина Александровна

профессор

Научный консультант:

доктор медицинских наук Суворов Александр Николаевич

профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Романюк Федор Петрович,

заведующий кафедрой педиатрии №3 с курсом неонатологии ГОУ ДПО «Санкт-Петербургская Медицинская Академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

доктор медицинских наук, профессор Эрман Лев Владимирович,

заведующий кафедрой поликлинической педиатрии ГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова»

Защита состоится « » ____________________2007 года в ___ часов на заседании диссертационного совета Д. 208.089.05. при ГОУ ДПО «Санкт-Петербургская Медицинская Академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 191015, Санкт-Петербург, Кирочная ул., д. 41.

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ГОУ ДПО «Санкт-Петербургская Медицинская Академия последипломного образо-вания Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 195196, Санкт-Петербург, Заневский пр., д.1/82.

Автореферат разослан « » _____________ 2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор В.В. Кирьянова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Хронические заболевания верхних отделов гастродуоденального тракта являются наиболее частой патологией, встре-чающейся как у взрослых, так и у детей (Мазурин А.В., Запруднов А.М.,1995). Ведущее место среди этиологических факторов развития патологии желудочно-кишечного тракта в настоящее время занимают болезни органов пищеварения, ассоциированные с Нelicobacter Рylori (HP). За прошедший период с 1983 года (Warren J.R., Marshall B.J., 1983) были изучены его свойства, описаны многие звенья патогенеза заболеваний, развивающихся при инвазии НР (Григорьев П.Я., Яковенко А.В., 2001, Исаков В.А., Домарадский И.В., 2003, Chuan Z., Nobutaka Y., 2005), определены методы диагностики и оптимальные схемы лечения. Особое место занимают исследования НР-ассоциированных заболе-ваний у детей (Корсунский А.А.). Остается дискутабельным ряд вопросов, касающихся степени патогенности этого микроорганизма, особенностей пато-генеза, эпидемиологии. Еще ждут своего решения проблемы профилактики инвазии, показаний к применению антибактериальных средств у НР(+) лиц без клинических проявлений, а также у пациентов, инфицированных одновременно несколькими штаммами хеликобактера (Корсунский А.А., Щербаков П.П., Исаков В.А., 2002). Гастродуоденальные заболевания, ассоциированные с Нeli-cobacter Рylori, отличаются большим разнообразием эндоскопических, морфологических и клинических проявлений. Вопрос о том, что предопреде-ляет развитие той или иной формы заболевания, сложен и до настоящего време-ни не решен. Большинство исследователей высказывают предположение о ве-дущем значении внутривидового разнообразия штаммов данного микроба (Корсунский А.А., Щербаков П.П., 2002; Marshall B.J., 1991), генетической предрасположенности (Аруин Л.И.,1997; Ивашкин В.Т., Лапина Т.Л., 1997), длительности заболевания (Аруин Л.И., Григорьев П.Л., 1993), степени обсемененности НР слизистой оболочки желудка (Говорун В.М., Гущин А.Е., 2000), характера иммунного ответа (Ивашкин В.Т., Лапина Т.Л., 1997). В пос-леднее время во многих научных работах изучается роль особенностей мак-роорганизма в патогенезе хеликобактериоза (Циммерман Я.С.,2000, Павленко Н.В., 1999, Аруин Л.И., 2007, El Omar, 2001). Многими исследователями ведет-ся настойчивый поиск штаммов НР, специфичных для развития определенных гастродуоденальных заболеваний. Сообщения о роли различных штаммов весь-ма противоречивы (Yamaoka Y.,1999, 2006, Mahaboob A., 2001, Van Doorn L., 1998). По мнению отдельных авторов в природе не существует «ульцеро-генных» штаммов НР. Однако зарубежные и отечественные публикации (Gormally S.M., 1996, Hardicar W., 1996 Kolho K.L., 1999, Корсунский А.А., 2002, Корниенко Е.А.,1999), посвященные генотипированию хеликобактера в детском возрасте, не позволяют согласиться с подобным мнением.

В настоящее время с использованием технологии ПЦР проводится огром-ное количество молекулярно-эпидемиологических исследований НР на пред-мет присутствия в геноме специфических генов вирулентности, в которых поми-мо генов «острова патогенности», определяют присутствие определенных алле-лей гена vacA, iceA (Takahico K., Graham D.L., 2004). Крайне актуальна диаг-ностика не только наличия инфекции НР, но и молекулярно-генетических ха-рактеристик микроорганизма, так как в настоящее время именно его гене-тическим особенностям отводится ведущая роль в развитии НР-ассо-циированных заболеваний (Yamaoka Y., 2001, 2002, 2005). Все вышесказанное указывает на необходимость проведения исследования генетических осо-бенностей НР в детском возрасте и, исходя из полученных данных, определения дальнейшей тактики ведения пациента.

Цель исследования: определение специфичности генотипов Helicobacter pylori с помощью метода полимеразной цепной реакции с целью оценки их значимости в развитии определенных хронических гастродуоденальных забо-леваний у детей.

Задачи исследования:

1. Сопоставление диагностической значимости метода полимеразной цепной реакции и стандартных методов исследования НР.

2. Оценка диагностической значимости метода полимеразной цепной реак-ции для определения НР в различных биологических субстратах (биоптат, зубной налет, копрофильтрат).

3. Исследование частоты встречаемости НР у детей с хроническими забо-леваниями верхних отделов желудочно-кишечного тракта.

4. Проведение генотипирования НР в биоптате слизистой оболочки желуд-ка с помощью метода полимеразной цепной реакции у детей с хроническими гастродуоденальными заболеваниями.

5. Выявление взаимосвязи между определенными клинико-эндоскопи-ческими проявлениями и генотипами НР.

6. Исследование состояния инфицированности хеликобактером родителей обследованных детей.

7. Определение уровня устойчивости штаммов НР к кларитромицину.

Научная новизна. Доказана специфичность генотипов НР (cagAcagH-vacAs1, cagAcagHvacAs2) для развития определенных хронических гастродуо-денальных заболеваний в детском возрасте. Выявлено преобладание диагнос-тической значимости метода полимеразной цепной реакции при генотипировании НР в биоптатах СОЖ по сравнению с их определением в других биологических субстратах (зубной налет, копрофильтрат). Установлена высокая степень инфицирования НР в семьях детей с хроническими гастродуоденальными заболеваниями. Выявлено повышение уровня резис-тентности НР к макролидам у детей Санкт-Петербурга с хроническими заболеваниями гастродуоденальной зоны с помощью метода полимеразной цепной реакции.

Практическая значимость. Обнаруженная взаимосвязь определенных за-болеваний гастродуоденального тракта у детей с генотипами НР, позволяет дифференцировано подходить к лечению и прогнозу хронических заболеваний верхних отделов пищеварительного тракта, ассоциированных с НР. Низкая диагностическая значимость метода ПЦР в копрофильтратах и зубных налетах исключает возможность использования этих субстратов для диагностики НР инфекции у детей с хроническими заболеваниями верхних отделов ЖКТ. Инфи-цированность хеликобактером родителей является фактором риска развития НР-ассоциированных заболеваний у детей и ее установление может быть ис-пользовано для профилактики хронических гастродуоденальных заболеваний. Выбор антибактериального препарата для эрадикационной терапии должен осуществляться с учетом уровня устойчивости штаммов НР, определяемой с помощью метода ПЦР или другими методами.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При генотипировании НР методом полимеразной цепной реакции у де-тей с хроническими гастродуоденальными заболеваниями определяются гено-типы НР, специфичные для развития определенных хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта.

2. Низкая диагностическая значимость метода полимеразной цепной ре-акции в таких биологических субстратах, как зубной налет и копрофильтрат не позволяет использовать эти субстраты для диагностики хеликобактера в СОЖ.

3. Высокий уровень инфицированности H. pylori родителей в семьях обследованных детей способствует появлению хронических НР-ассоциирован-ных заболеваний ЖКТ у детей.

4. Относительно высокая резистентность H.pylori (22%) к препаратам групппы макролидов на примере кларитромицина, выявленная с помощью метода полимеразной цепной реакции, не позволяет использовать кларитро-мицин в схемах антихеликобактерной терапии.

Личное участие автора в проведении исследования. Самостоятельно проведен ПЦР анализ части биоптатов слизистой оболочки желудка, копро-фильтратов. Выполнен аналитический обзор отечественной и зарубежной лите-ратуры по изучаемой проблеме, проведено обобщение полученных данных, статистический анализ результатов исследования с компьютерной обработкой.

Внедрение результатов. Результаты работы внедрены в практику работы консультативно-диагностического центра для детей №2 СПбГУЗ «Городская поликлиника №23» и используются в процессе преподавания на кафедре педи-атрии №2 с курсом гастроэнтерологии ГОУ ДПО СПбМАПО Росздрава.

Апробация работы. Основные теоретические и практические поло-жения диссертационной работы прошли апробацию на 8 Славяно-Балтийском форуме (г. Санкт-Петербург, 2006), на XIII, XIV конгрессе детских гастро-энтерологов России «Актуальные проблемы абдоминальной патологии у детей» (Москва, 2006, 2007), на научно-практической конференции молодых ученых и специалистов ГОУ ДПО СПбМАПО Росздрава «Актуальные вопросы экспе-риментальной и клинической медицины-2006» (г. Санкт-Петербург, 2006).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе 1 в журнале, рекомендуемом ВАК.

Объем и структура диссертации: диссертация изложена на 107 страницах, состоит из введения, 4 глав, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 29 таблицами и 12 рисунками. Список литературы содержит 195 источников (отечественной - 65, иностранной - 130).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Работа проведена на базе консультативно-диагностического центра для детей №2 СПбГУЗ «Городская поликлиника №23». Всего было обследовано 179 детей в возрасте 7-18 лет с хроническими заболеваниями гастродуоденальной зоны. У всех детей прове-дено общеклиническое обследование – фиброгастродуоденоскопия (ФГДС) с биопсией слизистой оболочки желудка (СОЖ) из антрального отдела и тела, ультразвуковое исследование органов брюшной полости, гастроимпе-дансометрия, осмотры врачей-специалистов. Выраженность проявлений основ-ных синдромов – болевого, диспептического и астеновегетативного, оценивали по 3-балльной шкале. При лабораторном обследовании определяли показатели клинического анализа крови, анализ мочи, копрограммы, исследование на глистно-паразитарную инвазию, по показаниям – биохимическое исследование крови с определением белковых фракций, общего билирубина, холестерина, щелочной фосфатазы.

Диагностику НР-инфекции проводили с использованием комплекса инва-зивных и неинвазивных методов. Уреазную активность НР in vitro исследовали у 179 детей с помощью быстрого уреазного теста (HELPIL-test) производства ООО «Синтана», Санкт-Петербург. Результат при постановке уреазного теста расценивали как положительный при изменении окраски на 1-й (+++), 2-й (++) и 3-й (+) минутах. Гистологическое исследование биоптатов слизистой оболочки антрального отдела (174) и тела (157) желудка проводили в патоморфологической лаборатории ДГБ №5. Для исследования брали 2 биоп-тата, фиксировали материал в 10% растворе формалина, заключали в парафин и делали срезы. Проведение метода полимеразной цепной реакции в биоптатах СОЖ антрального отдела (177) и тела желудка (154) осуществлялось в лабора-тории НИИ Экспериментальной Медицины РАМН. ДНК определяли наборами реагентов «ООО Интерлабсервис», «Литех». Амплификацию проводили в при-боре «Терцик». Затем продукты амплификации идентифицировали в 1,5% ага-розном геле в присутствии бромида этидия.

Полученные в ходе работы результаты регистрировались автором в спе-циально разработанных таблицах, включающих данные анамнеза жизни, осо-бенности клинического течения, данные эндоскопического, лабораторного и инструментального обследования, а также результаты обследования родителей пациентов. Полученные в процессе исследования медико-биологические данные обрабатывались c использованием модулей системы STATISTICA for Windows (версия 5.5). Различия считались достоверными при р 0,05.

Результаты собственных исследований. В настоящем исследовании под наблюдением находилось 179 детей в возрасте 7-18 лет с хроническими забо-леваниями желудка и двенадцатиперстной кишки. Средний возраст обследо-ванных детей составил 13,4±0,2 года, среди них - 96 мальчиков и 83 девочки. Длительность анамнеза заболевания составила в среднем 3,9 года. При обсле-довании у наших пациентов были выявлены следующие нозологические формы: хронический гастродуоденит (ХГД) – 148, эрозивный гастродуоденит (ЭГД) – 21, язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки (ЯБДК) – 10.

Следует отметить, что различные методы диагностики НР в нашем исследовании (быстрый уреазный тест, гистологический метод) демонстри-ровали различную частоту выявления НР-инфекции. Поэтому, окончательное заключение о НР-статусе проводили с учетом оценки результатов ПЦР в биоп-тате слизистой оболочки антрального отдела желудка, который был принят за эталон.

Pages:     || 2 | 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»