WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

На правах рукописи

ФИЛИМОНОВА ТАТЬЯНА МИХАЙЛОВНА

ВЛИЯНИЕ ТОПИЧЕСКОГО ГЛЮКОКОРТИКОСТЕРОИДА НА ЭКСПРЕССИЮ ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ В КОЖЕ И ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ АТОПИЧЕСКИМ ДЕРМАТИТОМ

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва, 2011 г.

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Государственный научный центр «Институт иммунологии» Федерального медико-биологического агентства

Научные руководители: кандидат медицинских наук,

  Елисютина  О.Г.

доктор медицинских наук,

  Болдырева М.Н.

Официальные оппоненты доктор медицинских наук,

профессор Лусс Л.В.

доктор медицинских наук,

профессор Ревякина В.А.

Ведущая организация: Российский национальный  исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова Минздравсоцразвития России.

 

Защита диссертации состоится «28» декабря 2011 года в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 208.017.01 в ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России по адресу: 115478, Москва, Каширское шоссе, дом 24, корпус 2.

Факс: (499) 617-10-27.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России.

Автореферат разослан « »  2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук  Л.С. Сеславина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время атопический дерматит (АтД) является важной медико-социальной проблемой, значимость которой определяется его широким распространением: по данным разных авторов 15-24%, а в некоторых экологически неблагоприятных регионах около 50% населения, страдает этим заболеванием. В последние годы наблюдается тенденция к развитию более тяжёлых, непрерывно рецидивирующих форм заболевания, сопровождающихся изнурительным кожным зудом, торпидных к традиционной терапии. Лечение больных АтД представляет сложную проблему ввиду особенностей патогенеза заболевания, многообразия фенотипических проявлений и стадийного течения процесса и, по общему мнению исследователей, должно носить этиопатогенетический характер [Феденко Е.С., 2005; Кунгуров Н.В., 2004].

Наружная терапия является неотъемлемой частью комплексного лечения АтД, занимая в ней ведущее место. Рациональное использование наружных лекарственных средств с учетом возраста больного, периода и тяжести заболевания в значительной степени повышает эффективность лечения и способствует регрессу кожного воспаления. Исчезновение или уменьшение кожных высыпаний и субъективных ощущений, таких как, зуд, боль, жжение, благоприятно сказывается на общем состоянии больного, улучшается качество жизни.

В соответствии с международным согласительным документом по АтД, принятым в 2006 г., предложена ступенчатая схема наружной терапии в зависимости от стадии заболевания, которая предусматривает использование топических глюкокортикостероидов (ТГКС), ингибиторов кальциневрина, увлажняющих и смягчающих средств в комплексе с элиминационными мероприятиями на всех стадиях заболевания [Akdis C., 2006].

Наружную терапию следует проводить на фоне рационального ухода за кожей, который включает в себя использование препаратов, направленных на восстановление  функции эпидермального барьера. В настоящее время предпочтение отдается препаратам с высоким содержанием липидов, идентичным липидам здоровой кожи. Эффективность эмолиентов была продемонстрирована в нескольких мультицентровых исследованиях. В одном из исследований было показано, что увлажняющие препараты обладают способностью уменьшать симптомы АтД, особенно связанные с сухостью, нарушением барьерной функции кожи [Berardesca E., 2001; Mohammed D., 2011; Simpson E., 2010]. По данным других исследований оказалось, что применение эмолиентов приводит  к существенному уменьшению потребности в ТГКС у больных с АтД [Ghazvini et al., 2010; Kucharekova. et al., 2003].

Большинство существующих на сегодняшний день схем топической терапии основано на принципе использования ТГКС в период обострения АтД. В последнее время все чаще выявляются случаи тяжелого течения АтД, резистентного к традиционной наружной терапии, отмечается увеличение потребности в ТГКС, длительное применение которых в ряде случаев является необходимым, хотя нередко приводит к развитию как местных, так и системных побочных эффектов.

Препараты всех используемых групп показали свою клиническую эффективность, однако до сих пор не определены критерии ее оценки с учетом иммунных маркеров воспаления в коже.

В связи с этим, локальный иммунный ответ в очаге поражения на разных стадиях АтД, а также влияние на него различных видов топической терапии является предметом перспективного изучения.

Цель работы: Изучить экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови у больных атопическим дерматитом под влиянием наружной терапии.

Задачи исследования:

  1. Изучить экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови у здоровых доноров.
  2. Изучить экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови у больных АтД тяжелого и средне-тяжелого течения в сравнении со здоровыми донорами.
  3. Изучить влияние ТГКС и эмолиентов на экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови у больных АтД  тяжелого и средне-тяжелого течения.
  4. Оценить диагностическую значимость показателей экспрессии генов цитокинов в коже и периферической крови больных АтД в зависимости от проведенной наружной терапии.

Научная новизна:

Впервые проведена оценка экспрессии генов цитокинов: IL1B, IL2, IL2r, IL4, IL5, IL6, IL7, IL8, IL10, IL 12A, IL12B, IL15 (суммарный), IL15, IL17A, IL18, IL23, IL28, IL29, IFN, TNF, TGFB1, FOXP3 в коже и периферической крови здоровых доноров и больных АтД разной степени тяжести.

Впервые выявлены маркеры локального иммунного воспаления на основании исследования экспрессии генов цитокинов в коже больных АтД.

Впервые изучено влияние мометазона фуроата 0,1% крема и нейтрального увлажняющего липидсодержащего средства на экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови больных АтД.

Практическая значимость работы:

Изученные показатели уровня экспрессии ряда генов иммунной системы в коже и периферической крови у здоровых доноров могут служить в качестве контроля при проведении научных исследований в области дерматологии, аллергологии, иммунологии.

Показана целесообразность оценки экспрессии генов цитокинов в коже и периферической крови больных АтД для определения  прогноза течения заболевания и эффективности наружной терапии.

Показана целесообразность локального исследования экспрессии генов цитокинов в органе-мишене коже, что может быть использовано при разработке новых иммунотропных препаратов местного действия.

Апробация работы:

По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ в материалах отечественных и международных конгрессов и в центральной научной печати. Результаты исследований были представлены на межрегиональном форуме «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии – междисциплинарные проблемы» (2010 г., Санкт-Петербург, Россия), на ХI международном конгрессе «Современные проблемы иммунологии, аллергологии и иммунофармакологии» (2011 г., Москва, Россия). 

Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных данных и выводов. Библиографический указатель включает 146 источников, в том числе 49 отечественных и 97 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 12 таблицами, 7 рисунками, 8 фотографиями.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

За период с 2008 по 2011 гг. в клинике Института иммунологии на базе отделения «Аллергии и иммунопатологии кожи» обследовано 77 человек. В группу здоровых доноров (контрольная группа) вошло 20 человек, не страдающих аллергическими заболеваниями. Среди них было 14 женщин и 6 мужчин в возрасте от 19 до 32 лет. В общую группу больных АтД вошло 57 человек. Среди них было 40 женщин и 17 мужчин в возрасте от 18 до 45 лет. Диагноз АтД был установлен согласно критериям Hanifin J. и Rajka G. (1980), модифицированным отечественными авторами и отраженным в Российском национальном согласительном документе по АтД. Все пациенты, вошедшие в исследование были в стадии обострения АтД, из них 19 человек с тяжелым течением АтД и 38 человек со средне-тяжелым течением АтД.

Исследование было проведено в два этапа. Во время первого этапа всем пациентам было проведено комплексное клинико-лабораторное, аллергологическое и иммунологическое обследование.

Клинико-лабораторное обследование включало в себя сбор анамнеза, осмотр, лабораторные методы исследования, инструментальные методы, функциональные методы, которые проводили по общепринятым методикам.

Аллергологическое обследование больных включало сбор аллергологического, фармакологического, пищевого анамнеза, кожные тесты с небактериальными аллергенами, определение уровня общего IgЕ.

Иммунологические методы обследования включали определение уровня сывороточных иммуноглобулинов класса А, М, G по методу Манчини. По показаниям проводилось определение общего числа лейкоцитов и лимфоцитов,  определение процентного и абсолютного числа Т-лимфоцитов (CD3), определение субпопуляций Т-лимфоцитов: хелперов/индукторов (CD4) и киллеров/супрессоров (CD8); определение процентного и абсолютного числа В-лимфоцитов (CD19) в периферической крови, оценка фагоцитоза.

Всем больным и здоровым донорам было проведено исследование экспрессии генов цитокинов: IL1B, IL2, IL2r, IL4, IL5, IL6, IL7, IL8, IL10, IL 12A, IL12B, IL15 (суммарный), IL15, IL17A, IL18, IL23, IL28, IL29, IFN, TNF, TGF, FOXP3 в периферической крови и в биоптатах кожи, взятых методом пункционной биопсии. Забор материала у больных АтД проводили до лечения в период обострения и на 14-й день наружной терапии, а у здоровых доноров – однократно.

Биопсийный материал был взят у 57 больных АтД из очагов пораженной кожи задней поверхности шеи, сгибательной поверхности локтевых и коленных суставов.

Пяти здоровым донорам из 20 была произведена одновременная пункционная биопсия с 3 различных по локализации участков кожи (задняя поверхность шеи, сгибательные поверхности локтевых или коленных сгибов, наружная поверхность плеча) для выявления возможных различий в показателях экспрессии генов цитокинов. Поскольку статистически значимых различий между показателями в биоптатах с этих участков выявлено не было, в дальнейшем 15 здоровым донорам пункционную биопсию кожи проводили только с одного участка – наружной поверхности плеча.

Пункционную биопсию производили в асептических условиях с помощью одноразового стерильного пробойника (Stumpp Medizintechnik GmbH, Германия) диаметром 3 мм под местной анестезией 2 %-м раствором лидокаина гидрохлорида.

Забор периферической венозной крови проводили в асептических условиях утром натощак из кубитальной вены в объеме 4 мл. Образцы крови забирали в пробирки с добавленной в качестве антикоагулянта динатриевой солью этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в конечной концентрации 2 мг/мл.

Уровень экспрессии генов цитокинов в коже и периферической крови больных АтД и здоровых доноров по количеству мРНК соответствующих генов определяли методом ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией, от. англ. reverse transcription polymerase chain reaction) в режиме реального времени. Для выделения РНК из клеток из периферической крови и кожи использовали твердотельный термостат «Термит» производства компании «ДНК-Технологии» (Россия). Для постановки обратной транскрипции использовали твердотельный термостат «Гном» производства компании «ДНК-Технология» (Россия). Постановку  полимеразной цепной реакции в реальном времени проводили на детектирующем термоциклере «ДТ-96» «ДНК-Технология» (Россия). Учет результатов реакции осуществлялся автоматически с помощью программного обеспечения, поставляемого с детектирующим амплификатором. В биологических образцах, содержащих мРНК исследуемого цитокина, программа прибора фиксировала положительный результат и определяла значение индикаторного цикла (Ср) [Ребриков Д.В., 2009].

Количественный уровень исследуемых мРНК генов цитокинов выражали в относительных единицах, вычисленных по формуле:

[исследуемый IL]/[ HPRT1] = E(HPRT1)*Cр1/E(иIL)*Cp2 (формула 1), где Е – эффективность амплификации,

Сp1 - значение индикаторного цикла в образце для нормировочного гена HPRT1(фермент гипоксантин-гуанин фосфорибозилтрансфераза),

Сp2  - значение индикаторного цикла в образце исследуемого цитокина.

Обработку данных в виде полученных в результате вычислений относительных единиц осуществляли с помощью программы MS Excel (Microsoft Corp., США).

На 2 этапе исследования из общей группы пациентов с АтД были отобраны 40 больных со средним (n=28) и тяжелым течением заболевания (n=12). Больные АтД были разделены на 2 группы методом парного контроля в зависимости от наружной терапии, применяемой для дальнейшего лечения (рис.1).

Рисунок 1. Распределение больных АтД по группам в зависимости от применяемой наружной терапии.

Группы были сходные по полу, возрасту, по степени тяжести АтД, клиническим, аллергологическим, иммунологическим признакам.

Первую группу составили 20 пациентов, которые получали непрерывный курс лечения ТГКС (мометазона фуроат 0,1% крем), который относится к ТГКС сильной активности согласно европейской классификации [Miller J., Munro D., 1993]. Препарат наносили 1 раз в сутки в течение 14 дней на пораженные участки кожи. На протяжении всего периода исследования больные АтД не получали ни системных ГКС, ни ТГКС других групп.

Вторую группу составили 20 пациентов, которые получали непрерывный курс лечения увлажняющим липидсодержащим кремом Элобейз, в состав которого входит очищенная вода, парафин белый мягкий, масло минеральное, спирт цетостеариловый, цетес-20, натрия дигидрофосфат дигидрат, хлорокрезол, кислота фосфорная, натрия гидроксид. Препарат наносили на пораженные участки кожи 2 раза в день в течение 14 дней.

Наряду с наружной терапией всем больным АтД назначали антигистаминную терапию – непрерывный  курс лечения цетиризином в течение 10 дней в дозе 10 мг в сутки 1 раз в день. 

Клиническую эффективность терапии оценивали на основании изменения индекса SCORAD (severity scoring of atopic dermatitis), исследовательской глобальной оценки (IGA - Investigators’ Global Assessment) по 6 - балльной шкале, где 0 баллов – чистая кожа (без признаков воспаления), 1 балл – почти чистая кожа (едва определяемая эритема, единичные папулы), 2 балла – легкий  АтД (слабая эритема, папулы, инфильтрация), 3 балла – среднетяжелый АтД (умеренная эритема, умеренно выраженные папулы), 4 балла – тяжелый АтД (выраженная эритема, инфильтрация, папулы), 5 баллов – очень тяжелый АтД (выраженные эритема, инфильтрация, папулы с образованием корочек), субъективной оценки интенсивности зуда и сухости кожи по 4-балльной шкале по отношению к исследуемому участку кожи, где 0 баллов соответствует отсутствию данного признака, а 3 балла – это максимальные клинические проявления данного признака.

Результаты исследования обработаны и сравнены статистически с использованием адекватных методов параметрической и непараметрической статистики. Проводили вычисление медианы и интерквартильного размаха (Me [Q1; Q3]), среднего арифметического значения соответствующего параметра и его стандартного отклонения (М±Sd), использовали двухсторонний критерий Фишера. Группы сравнивали с использованием непараметрического критерия Уилкоксона (для парных сравнений показателей внутри групп), U-критерия Манна-Уитни (для сравнения показателей между двумя независимыми группами).

Различия считали достоверными при р<0,05. Для нивелирования проблемы множественных сравнений применялась поправка Бонферрони: нулевые гипотезы отклонялись при достигнутом уровне значимости p<0,0023.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В общую группу больных АтД вошло 57 человек. Среди них было 40 женщин и 17 мужчин в возрасте от 18 до 45 лет. В момент включения в исследование у всех 57 больных отмечалось обострение АтД: поражение кожи носило распространенный характер с локализацией на лице, волосистой части кожи головы, шее, спине, груди, конечностях с преимущественным вовлечением сгибательной поверхности лучезапястных, локтевых и коленных суставов, явлениями экссудации, инфильтрации, выраженной сухости, шелушения кожи, присутствовал интенсивный зуд, усиливающийся в ночное время суток.

На момент включения в исследование средне-тяжелое течение АтД было у 38 человек, медиана и квартили индекса SCORAD составили – 56,6 [Q1=51,1; Q3=62,2], индекс IGA составил – 3,7 [Q1=3,3; Q3=4,1]. Тяжелое течение  АтД было у 19 человек, медиана и квартили индекса SCORAD составили – 78,6 [Q1=59,7; Q3=85,2], индекс IGA составил – 4,7 [Q1=4,3; Q3=4,8].

При сборе аллергологического анамнеза установлено, что большинство пациентов страдало АтД с раннего детского возраста с длительностью заболевания от 18 до 45 лет. Дебют заболевания отмечен: у 35 пациентов (61,4%) - до 1 года,  у 19 пациентов (33,3 %) - от 2 до 5 лет.  Только у 3 пациентов (5,3%) симптомы  АтД впервые возникли  в возрасте от 7 до 10 лет. У обследованных нами больных отмечалось продолжительное рецидивирующее течение АтД. Частота обострений АтД варьировала от 5 до 12 раз в год. Средняя частота рецидивов АтД в год у пациентов со средне-тяжелой степенью тяжести заболевания – 5,2 ± 2,2, у пациентов  с тяжелым течением АтД – 8,2±2,6. Длительность обострений колебалась от 7 до 21 дня.

На основании данных проведенного аллергологического обследования проведена оценка спектра сенсибилизации к различным группам аллергенов у обследованных больных. Сенсибилизация к бытовым  аллергенам  выявлена у 54 человек (94,7%), к эпидермальным аллергенам – у 31 больного (54,4%). В 70,2% (40 человек) случаев выявлена клинически значимая сенсибилизация к пыльцевым аллергенам, проявлявшаяся в виде пыльцевой бронхиальной астмы, аллергического ринита, аллергического конъюнктивита, и у 17 (29,8%) пациентов зафиксирована латентная сенсибилизация к пыльцевым аллергенам. У 13 пациентов (22,8%)  был выявлен поливалентный спектр сенсибилизации. При оценке клинических проявлений сенсибилизации у большинства пациентов АтД (56 человек – 98,2%)  выявлены респираторные проявления аллергии. Аллергический ринит выявлен у 54 человек (94,7%), атопическая  бронхиальная астма – у 13 человек (22,8%).  У 12 пациентов (21%) отмечено сочетание атопической бронхиальной астмы и аллергического ринита. У всех пациентов отмечался высокий уровень сывороточного IgE: 2056 ME/мл  [1300; 5000] при норме до 130 ME/мл.

Группу контроля составили 20 практически здоровых лиц без признаков атопии, из них 14 женщин и 6 мужчин, в возрасте от 19 лет до 32 лет, средний возраст и стандартное отклонение (M±Sd) - 22,2 (4,3) лет. При аллергологическом обследовании ни у одного из доноров атопии выявлено не было.

При оценке уровня экспрессии генов цитокинов статистически значимых различий между показателями в биоптатах кожи шеи, сгибательных поверхностей конечностей, наружной поверхности плеча у 5 здоровых доноров  выявлено не было.

При сравнении показателей экспрессии генов цитокинов в коже больных АтД выявлено статистически значимо больший уровень экспрессии IL2R, IL5, IL6, IL8, IL10, IL12B, IL23, IL29, TGF по сравнению со здоровыми донорами (табл. 1). Также выявлена сильная статистическая тенденция в отношении различий по признаку IFN (p=0,0024), свидетельствующая о его больших значениях у больных АтД по сравнению со здоровыми донорами. Статистически значимых различий по признакам  IL1В, IL2, IL4, IL7, IL12А, IL15 (суммарный), IL15, IL17А, IL18, IL28, TNF, FOXP3 не выявлено.

При исследовании экспрессии генов цитокинов в периферической крови здоровых доноров и больных АтД статистически значимых различий не выявлено (табл. 2).

Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии статистически значимых изменений показателей уровня экспрессии генов цитокинов в периферической крови у больных АтД и у здоровых доноров, что позволяет сделать вывод о преобладании локального иммунного ответа в органе-мишени коже, характеризующего активность воспаления при тяжелом АтД.

Таблица 1.Уровни экспрессии генов цитокинов в коже больных АтД (n=57) и здоровых доноров (n=20) (медиана, верхний и нижний квартили).

Гены

Здоровые доноры

n=20

Больные АтД

  n=57

Mann-Whitney U-test, P

IL1В

0,196  [0,096; 0,337]

0,061 [0,030; 0,117]

0,0056

IL2

0,002  [0,001; 0,006]

0,005 [0,003; 0,009]

0,0135

IL2R

0,003 [0,001; 0,006]

0,011 [0,007; 0,026]

0,000064 *

IL4

0,00004  [0; 0,00025]

0,0003 [0,00005; 0,0009]

0,0270

IL5

0,0003 [0,00009; 0,0008]

0,001 [0,0005; 0,003]

0,0021 *

IL6

0,0004  [0; 0,000059]

0,0005 [0,0001; 0,002]

0,000098 *

IL7

0,218 [0,139; 0,303]

0,139 [0,085; 0,362]

0,3324

IL8

0,005 [0,003; 0,011]

0,066 [0,029; 0,141]

0 *

IL10

0,0008 [0,0004; 0,0019]

0,005 [0,003; 0,013]

0,000004 *

IL12А

0,004 [0,002; 0,006]

0,003 [0,001; 0,005]

0,1033

IL12В

0,001 [0,0002; 0,0032]

0,004 [0,003; 0,009]

0,00058 *

IL15

(суммарн.)

0,0043 [0,032; 0,064]

0,057 [0,037; 0,075]

0,1333

IL15

0,009 [0,007; 0,014]

0,009 [0,002; 0,016]

0,4924

IL17А

0 [0; 0,000412]

0 [0; 0,0008]

0,6303

IL18

2,107 [1,444; 2,462]

1,711 [1,319; 3,732]

0,9302

IL23

0,003 [0,002; 0,007]

0,007 [0,005; 0,012]

0,00205 *

IL28

0 [0; 0,0002]

0 [0; 0,004]

0,2514

IL29

0 [0; 0]

0,0005 [0; 0,001]

0,000252 *

IFN

0,0009 [0,0005; 0,004]

0,003 [0,002; 0,006]

0,0024

TNF

0,057 [0,036; 0,121]

0,088 [0,045; 0,165]

0,2610

TGF

1,018 [0,616; 1,444]

1,933 [1,366; 3,310]

0,00001 *

FOXP3

0,064 [0,051; 0,088]

0,072 [0,054; 0,105]

0,41

*Р < 0,0023

Таблица 2. Уровни экспрессии генов цитокинов в периферической крови здоровых доноров (n=20) и больных АтД (n=57) (медиана, верхний и нижний квартили).

Гены

Здоровые доноры

  n=20

Больные АтД

n=57

Mann-Whitney U-test, P

IL1В

5,282  [3,427; 9,212]

5,756 [3,797, 7,337]

0,924

IL2

0,0005  [0,003; 0,007]

0,004 [0,003; 0,007]

0,818

IL2R

0,0366 [0,023; 0,049]

0,037 [0,026; 0,059]

0,403

IL4

0,0053  [0,0006; 0,0105]

0,006 [0,004; 0,012]

0,086

IL5

0,00029 [0,00009;0,00029]

0,00031 [0,00018; 0,0006]

0,034

IL6

0,0016 [0,0012; 0,0025]

0,0013 [0,00098; 0,002]

0,168

IL7

0,038 [0,0296; 0,0,057]

0,045 [0,026; 0,058]

0,594

IL8

46,108 [38,054; 80,761]

48,091 [21,484; 60,767]

0,244

IL10

0,0043 [0,0027; 0,0052]

0,0049 [0,003; 0,008]

0,385

IL12А

0,015 [0,0122; 0,024]

0,0175 [0,012; 0,025]

0,686

IL12В

0,00063 [0,00045;0,00119]

0,0011 [0,0007; 0,0018]

0,022

IL15

(суммарн.)

0,225 [0,157; 0,308]

0,233 [0,189; 0,308]

0,590

IL15

0,067 [0,036; 0,095]

0,055 [0,0384; 0,075]

0,686

IL17А

0,00016 [0; 0,0002]

0,00013 [0; 0,00043]

0,362

IL18

0,107 [0,069;0,162]

0,133 [0,101;0,203]

0,092

IL23

0,074 [0,037;0,115]

0,053 [0,029;0,082]

0,174

IL28

0,00009 [0;0,00029]

0,00011 [0;0,00029]

0,731

IL29

0 [0; 0]

0 [0;0]

0,006

IFN

0,0055 [0,0226;0,0743]

0,057 [0,0384;0,0964]

0,247

TNF

0,341 [0,2107;0,5645]

0,420 [0,329;0,671]

0,087

TGF

13,516 [10,022;19,073]

15,727 [13,225;18,379]

0,118

FOXP3

0,160 [0,086;0,165]

0,131 [0,110;0,203]

0,118

*Р < 0,0023

На 2 этапе исследования из общей группы пациентов с АтД были отобраны 40 пациентов со средним (n=28) и тяжелым течением заболевания (n=12). Больные АтД были разделены на 2 группы методом парного контроля в зависимости от наружной терапии, применяемой для дальнейшего лечения. Исследуемые группы были однородными по клиническим, аллергологическим и иммунологическим признакам (табл.3).

Таблица 3. Клиническая, аллергологическая и иммунологическая характеристика больных АтД групп 1 и 2  перед началом лечения (n=40).

Показатель

Группа 1  (n=20)

Группа 2 (n=20)

Возраст, M (s)

27,2 (6,4)        

25,4 (7,1)        

Пол

Мужской

9 (45%)

6 (30%)

Женский

11(55%)

14(70%)

  Показатели оценки степени тяжести заболевания

Длительность  АтД (годы),

Mе [Q1; Q3 ]        

18 [Q1=15; Q3=45]

16 [Q1=13; Q3=40]

Индекс IGA,  Mе [Q1; Q3 ]

4,1 [Q1=3,7; Q3=4,8]

3,8 [Q1=3,1; Q3=4,5]

Индекс SCORAD, Mе [Q1; Q3 ]

76,4 [Q1=57,3; Q3=84,5]

68,4 [Q1=52,3; Q3=80,1]

Средняя частота рецидивов M ±m

5,9±2,1

6,1±1,9.

Возраст начала заболевания

до 1 года  (число пациентов)

13 (65%)

15 (75%)

с 2 до 5 лет  (число пациентов)

4 (20%)

3 (15%)

c 6 лет (число пациентов)

3 (15%)

2 (10%)

Результаты аллергологического обследования

IgE общ., МЕ/мл,  Mе [Q1; Q3 ]

2045 [Q1=1500; Q3=5300]

2470 МЕ/мл  [Q1=1400; Q3=6100]

Эозинофилы, %, Mе [Q1; Q3 ]

12,6 [Q1=7,8; Q3=15,7]

10,9 % [Q1=6,0; Q3=18,0]

Аллергический ринит  (число пациентов)

20 (100%)

17 (85%)

Бронхиальная астма

(число пациентов)

3 (15%)

5 (25%)

Сенсибилизация к бытовым аллергенам (число пациентов)

19 (95%)

17 (85%)

Сенсибилизация к эпидермальным аллергенам (число пациентов)

11 (55%)

6 (30%)

Сенсибилизация к пыльцевым аллергенам (число пациентов)

13 (65%)

12 (60%)

Латентная сенсибилизация к пыльцевым аллергенам  (число пациентов)

6 (30%)

10 (50%)

Сенсибилизация к пищевым аллергенам (число пациентов)

11 (55%)

8 (40%)

Поливалентная сенсибилизация

(число пациентов)

4 (20%)

3 (15%)

На фоне проводимой наружной терапии мометазона фуроатом 0,1% кремом в течение 14 дней у большинства больных АтД из группы 1 отмечалось значительное уменьшение основных симптомов заболевания, таких как зуд, сухость кожи, уменьшение площади поражения кожи, количества высыпаний, что отразилось в статистически достоверном уменьшении медианы и квартилей индекса SCORAD с 76,4 [Q1=57,3; Q3=84,5] до 28,3 баллов[Q1=23,5; Q3=42,5] , индекса  IGA с 4,1 [Q1=3,7; Q3=4,8] до 1,8 [Q1=1; Q3=1,8] баллов,  а также в уменьшении средних значений субъективных оценок зуда и сухости кожи с 2,8±1,3 до 1,6±1,2 и с 2,6±1,4 до 1,8±1,4 (p<0,05  по критерию Уилкоксона). В группе 2, использовавшей крем элобейз, также  отмечалось некоторое  уменьшение основных симптомов заболевания, таких как зуд, сухость кожи и количества высыпаний, что отразилось в тенденции к уменьшению  медианы и квартилей индекса SCORAD с 68,4 и [Q1=52,3; Q3=80,1] до 48,4 баллов[Q1=32,6; Q3=54,4] и  индекса  IGA с 3,8 [Q1=3,1; Q3=4,5] до 2,9 [Q1=2,4; Q3=3,8] баллов, а также индекса зуда кожи с 2,9±1,4 до 2,4±1,8, однако уменьшение значений данных показателей было статистически недостоверно. В группе 2 статистически достоверное уменьшение значений было выявлено только в отношении показателя индекса сухости кожи с 2,8±1,3 до 2,0±1,4 (p<0,05  по критерию Уилкоксона)  (рис. 2, 3). 

* - (p<0,05  по критерию Манна -Уитни).

Рисунок 2. Оценка клинической эффективности лечения в группах 1 и 2 (n=40). По оси абсцисс – индексы зуда, сухости кожи и исследовательская глобальная оценка IGA,  по оси ординат – шкала в баллах.

* - (p<0,05  по критерию Манна -Уитни).

Рисунок 3. Оценка индекса SCORAD у больных с АтД в группах 1 и 2 до и после лечения. По оси абсцисс – группы больных АтД,  по оси ординат - значение индекса SCORAD  в баллах.

Таким образом, применение мометазона фуроата 0,1% крема приводит к достоверному уменьшению основных симптомов АтД, а именно, к уменьшению инфильтрации, воспаления, интенсивности зуда, площади поражения кожи в отличие от крема элобейз, что свидетельствует о противовоспалительных свойствах мометазона фуроата и о его высокой эффективности при АтД. Применение крема элобейз у больных с АтД приводит к достоверному уменьшению сухости кожи, а также  к тенденции уменьшения зуда и воспаления.

При сравнении показателей экспрессии генов цитокинов в коже у больных АтД из группы 1 в период обострения  до начала лечения и на 14-й день лечения отмечено достоверное уменьшение уровня экспрессии генов ряда провоспалительных цитокинов: IL2, IL2r, IL8, IL12В, IL23, IFN, а также  противовоспалительного цитокина IL5. При сравнении этих же показателей в коже у больных АтД из группы 2 в период обострения до начала лечения и на 14-й день лечения отмечено достоверное уменьшение уровня экспрессии генов регуляторного цитокина IL7 (p=0,0043) и провоспалительного цитокина IL17A (p=0,0117). Статистически значимых различий по остальным признакам в отличие от группы 1 выявлено не было. В таблице 4 указаны значения экспрессии генов цитокинов у больных  АтД в группах 1 и 2 до и после лечения мометазона фуроатом 0,1% кремом и кремом элобейз.

Таблица 4. Уровни экспрессии генов цитокинов в коже больных АтД до и после лечения в группах 1 и 2 (n=40) (медиана, верхний и нижний квартили).

Ген

Группа 1 (n=20)

Группа 2 (n=20)

0 день

Me [Q1;Q3]

14 день

Me [Q1;Q3]

p (критерий Уилкоксона)q

0 день

Me [Q1;Q3]

14 день

Me [Q1;Q3]

p (критерий Уилкоксона)q

IL1В

0,0544

[0,0292; 0,0884]

0,0594

[0,0341, 0,107]

0,91082

0,0797

[0,0385; 0,1015]

0,1015

[0,0474,0,1436]

0,53369

IL2

0,0054

[0,0039; 0,0107]

0,0033

[0,002; 0,0042]

0,00999*

0,0096

[0,0031; 0,0221]

0,0078

[0,0042; 0,0136]

0,7221

IL2r

0,0123

[0,0056; 0,0249]

0,0052

[0,0026; 0,0093]

0,00803*

0,0146

[0,0093; 0,0625]

0,0103

[0,0068; 0,0359]

0,85886

IL4

0,0003

[0,0000; 0,0009]

0 [0; 0,0003]

0,42652

0,0002

[0,0001; 0,001]

0,0004 [0; 0,0009]

0,78967

IL5

0,0014

[0,0003; 0,0028]

0

[0,0000; 0,0007]

0,00568*

0,0017

[0,0005; 0,0032]

0,0005

[0; 0,0007]

0,05933

IL6

0,001

[0,0001; 0,0023]

0 [0; 0,0013]

0,13593

0,0004

[0,0002; 0,0053]

0 [0; 0,0003]

0,05933

IL7

0,1490

[0,0901; 0,4204]

0,2377

[0,1195; 0,3602]

0,7089

0,2872

[0,0947; 0,5339]

0,5743

[0,3299; 0,9330]

0,00443*

IL8

0,0573

[0,0292; 0,1287]

0,0148

[0,0052; 0,0278]

0,00511 *

0,067

[0,0312; 0,1294]

0,0254

[0,0127; 0,0825]

0,42359

IL10

0,0056

[0,0032; 0,0162]

0,0093

[0,0039; 0,0129]

0,658

0,0045

[0,0016; 0,0167]

0,0045

[0,0013; 0,0055]

0,59371

IL12А

0,0027

[0,0016; 0,0067]

0,0048

[0,0033; 0,0072]

0,09296

0,0028

[0,0011; 0,0073]

0,003

[0,0021; 0,0045]

0,65664

IL12В

0,0043 [0,0018;0,0121]

0,0011

[0;0,0023]

0,0089*

0,0031

[0,0026; 0,0048]

0,0008 [0,0001;0,0036]

0,286

IL15

(сумм.)

0,0604

[0,0440; 0,0693]

0,0625

[0,0375; 0,077]

0,52565

0,0693

[0,0604; 0,1539]

0,1436

[0,0884; 0,1895]

0,10951

IL15

0,0065

[0,0032; 0,0127]

0,0004

[0,0019; 0,0072]

0,26272

0,0245

[0,0114; 0,0385]

0,0359

[0,0272; 0,0474]

0,13066

IL17А

0 [0; 0,0014]

0 [0; 0]

0,0166

0,0003

[0; 0,0008]

0 [0; 0]

0,01171*

ИЛ18

1,6818 [1,2116;3,6072]

3,6245 [2,5941;4,6058]

0,13649

1,8661 [1,5157;4,4383]

3,249 [3,0314;5,278]

0,06188

IL23

0,0076 [0,0056;0,110]

0,0023 [0,0016;0,004]

0,00116 *

0,009

[0,0039;0,0179]

0,0042 [0,0021;0,0068]

0,07536

IL28

0[0;0,0004]

0,0000 [0;0]

0,04986

0[0;0,0006]

0 [0;0,0003]

0,34544

IL29

0,0007

[0; 0,0016]

0 [0;0]

0,01922

0,0007

[0; 0,0022]

0 [0;0]

0,12819

Ген

Группа 1 (n=20)

Группа 2 (n=20)

0 день

Me [Q1;Q3]

14 день

Me [Q1;Q3]

p (критерий Уилкоксона)

0 день

Me [Q1;Q3]

14 день

Me [Q1;Q3]

p (критерий Уилкоксона)

IFN

0,003 [0,002;0,0046]

0,0014 [0,0003;0,002]

0,00033*

0,0059 [0,0025;0,0096]

0,0034 [0,0017;0,0045]

0,11412

TNF

0,1034 [0,0605;0,232]

0,116 [0,0423;0,2224]

0,97022

0,1015 [0,0625;0,1768]

0,1768

[0,1166;0,2176]

0,286

TGF

2,3798 [1,4953;4,2191]

2,0755 [1,3918;2,8352]

0,47812

2,1435 [1,5692;4,4383]

2,1435 [1,4142;2,639]

0,7221

FOXP3

0,0839 [0,0596;0,1074]

0,0718 [0,0566;0,1051]

0,43304

0,0583 [0,0412;0,0743]

0,0442 [0,0359;0,067]

0,65664

*Р < 0,0023

Таким образом, при сравнении полученных результатов до и после лечения мометазона фуроатом 0,1% кремом отмечено уменьшение уровня экспрессии генов провоспалительных  цитокинов: IL2, IL2r, IL8, IL12В, IL23, IFN и гена противовоспалительного цитокина IL5, являющихся маркерами хронического воспаления и сдвига иммунного ответа в сторону Th-1, что может свидетельствовать об уменьшении хронического воспаления в коже. Полученные нами данные показали иммунотропную активность мометазона фуроата 0,1% крема, заключающуюся в положительном влиянии на локальный иммунный ответ в коже у больных АтД, что отражается в уменьшении экспрессии генов как провоспалительных, так и противовоспалительных цитокинов. Напротив, у больных из группы 2, использовавших крем элобейз, выявлено только достоверное уменьшение уровня экспрессии генов регуляторного цитокина IL7  и провоспалительного цитокина IL17A. Полученные нами данные показывают, что крем элобейз оказывает локальное влияние только на экспрессию генов регуляторных цитокинов.

При сравнении показателей экспрессии генов цитокинов в периферической крови у больных АтД из группы 1 до лечения в момент обострения заболевания и через 14 дней после лечения отмечено достоверное уменьшение уровня экспрессии генов регуляторных цитокинов TGF (p=0,015241), FOXP3 (p=0,013742). При сравнении показателей экспрессии генов цитокинов в периферической крови у больных АтД из группы 2 до начала лечения и на 14-й день лечения достоверных различий по всем исследуемым признакам не выявлено. В таблице 5 указаны значения экспрессии генов цитокинов в периферической крови у больных АтД до и после лечения мометазона фуроатом 0,1% кремом и кремом элобейз.

Таблица 5. Уровни экспрессии генов цитокинов в периферической крови больных АтД до лечения и после лечения мометазона фуроата 0,1 % кремом (n=20) (медиана, верхний и нижний квартили).

Ген

Группа 1 (n=20)

Группа 2 (n=20)

0 день

Me [Q1,Q3]

14 день

Me [Q1,Q3]

p (критерий Уилкоксона)

0 день

Me [Q1,Q3]

14 день

Me [Q1,Q3]

p (критерий Уилкоксона)

IL1В

4,9774 [2,5509;7,46426]

3,42701

[2,34071, 4,75969]

0,092964

6,06287

[4,43828;8]

4,59479

[3,249; 9,18959]

0,78967

IL2

0,00466 [0,00359;0,0072]

0,0033

[0,002; 0,00534]

0,313464

0,00449

[0,00317; 0,00755]

0,00635 [0,00258;0,00897]

0,328066

IL2r

0,03857 [0,03075;0,0604]

0,02586

[0,01735; 0,04344]

0,047858

0,05831

[0,01858; 0,13397]

0,125

[0,10153; 0,17678]

0,061885

IL4

0,00783

[0,00457;0,0127]

0,004

[0,00114; 0,00853]

0,033341

0,02916

[0,00897; 0,03847]

0,02916

[0,00897; 0,03847]

0,073346

IL5

0,00032

[0,00018;0,0008]

0,00019

[0,00007; 0,0003]

0,053407

0,00022

[0,00012; 0,00043]

0,00008

[0; 0,00019]

0,092602

IL6

0,00165

[0,00121;0,0024]

0,0012

[0,00058; 0,00165]

0,204331

0,00112

[0,00052; 0,00159]

0,0024

[0,00148; 0,00419]

0,005062

IL7

0,04419

[0,02653;0,0534]

0,03235

[0,02172; 0,03653]

0,147417

0,04419

[0,01858; 0,05831]

0,07179

[0,05831; 0,14359]

0,710861

IL8

40,13944 [26,92485;65,20]

29,70172 [18,70324;60,7670]

0,191335

59,71411

[39,39662;66,2569]

55

[25,99208;73,5166]

0,789675

IL10

0,00669 [0,00371;0,0103]

0,00468

[0,00254; 0,01297]

0,940481

0,00328

[0,00209; 0,00515]

0,00419

[0,003; 0,00718]

0,050461

IL12А

0,01416 [0,01248;0,0307]

0,01269[0,01144; 0,01513]

0,073139

0,02538

[0,01924; 0,03125]

0,02368

[0,01924; 0,01924]

0,59371

IL12В

0,00140

[0,00074;0,0020]

0,0087

[0,0072; 0,0118]

0,05734

0,00088

[0,00035; 0,00195]

0,0004

[0,00026; 0,00064]

0,06188

IL15

(сумм)

0,21393

[0,16785;0,2773]

0,19984

[0,11464; 0,28717]

0,204331

0,27739

[0,1894; 0,46652]

0,53589

[0,40613; 0,70711]

0,059337

IL15

0,05444

[0,03915;0,0730]

0,0508

[0,02844; 0,08392]

0,822761

0,07433

[0,03235; 0,13397]

0,15389

[0,11663; 0,25]

0,07992

IL17А

0,00005

[0; 0,00046]

0,00007

[0; 0,00021]

0,408045

0,00015

[0, 0,00024]

0,00023 [0,0001 0,00046]

0,284504

ИЛ18

0,11074 [0,09005;0,1784]

0,12072 [0,09652;0,16494]

0,575487

0,20306

[0,0915;0,26794]

0,11663 [0,04419;0,16494]

0,091162

IL23

0,05835 [0,03501;0,1034]

0,05089 [0,03142;0,09675]

0,910827

0,03349

[0,1795;0,07695]

0,08247

[0,03847;0,11663]

0,154861

IL28

0,00012

[0;0,0005]

0,0001

[0;0,00022]

0,652918

0,00021

[0;0,00033]

0,00079

[0;0,00159]

0,050613

Ген

Группа 1 (n=20)

Группа 2 (n=20)

0 день

Me [Q1,Q3]

14 день

Me [Q1,Q3]

p (критерий Уилкоксона)

0 день

Me [Q1,Q3]

14 день

Me [Q1,Q3]

p (критерий Уилкоксона)

IL29

0 [0; 0]

0 [0;0]

0,464532

0[0; 0]

0[0; 0]

0

IFN

0,04419 [0,03847;0,0604]

0,05845 [0,03421;0,08252]

0,125860

0,05256 [0,02368;0,1387]

0,05831 [0,02916;0,08247]

0,79886

TNF

0,37248 [0,31883;0,6713]

0,54534 [0,21547;0,71957]

0,851925

0,5

[0,25;0,87055]

0,53589

[0,35355;1]

0,284504

TGF

16

[13,69158;18,70]

13,48668 [10,5624;15,74638]

0,015241*

17,14838 [10,55606;25,9920]

21,11213

[17,1121;17,14838]

0,15486

FOXP3

0,15932

[0,12287;0,2524]

0,15399 [0,09312;0,17076]

0,013742*

0,125

[0,08538;0,21022]

0,14359

[0,13397; 0,18946]

0,79886

*Р < 0,0023

По данным последних зарубежных исследований количество FOXP3-регуляторных клеток прямо коррелирует с тяжестью воспалительного процесса при АтД: у больных с обострением заболевания было выявлено увеличение FOXP3-положительных CD4+CD25+-T-клеток [Ito Y., 2009]. Возможно, уменьшение экспрессии гена FOXP3 у больных АтД на фоне лечения мометазона фуроатом 0,1% кремом обусловлено изменением системного иммунного ответа на фоне выраженного уменьшения аллергического воспаления в коже.

Некоторые авторы отмечают, что в условиях хронизации аллергического воспаления выявляются Т-регуляторные клетки (ТРК), маркером которых является цитокин TGF. Известно, что он изменяет обычный эффект IL4 и приводит к формированию Th1-ответа при активации Т-наивных лейкоцитов. Таким образом, можно предположить, что именно активация Т-регуляторных клеток, продуцирующих данный цитокин, приводит к включению в патологический процесс Th1-лимфоцитов и, соответственно – к хронизации воспаления. Уменьшение экспрессии гена данного цитокина на фоне лечения мометазона фуроатом 0,1% кремом может косвенно свидетельствовать о его влиянии на ТРК.

При сравнении результатов по разности показателей (между оценкой к 14 дню исследования и начальной оценкой) выявлены статистически достоверные различия по признакам IL4 и IL8 в коже больных АтД из групп 1 и 2. Таким образом, на фоне терапии мометазона фуроатом 0,1% кремом отмечено достоверно большее уменьшение экспрессии генов провоспалительных цитокинов IL4 и IL8 по сравнению с группой больных, использовавших крем элобейз.  При оценке разности остальных исследуемых иммунологических параметров в коже достоверных различий между группами выявлено не было. При сравнении результатов по разности показателей в периферической крови (между оценкой к 14 дню исследования и начальной оценкой)  выявлены статистически достоверные различия по признаку FOXP3 у больных АтД между группами 1 и 2. Таким образом, на фоне терапии мометазона фуроатом 0,1% кремом  отмечено достоверно большее уменьшение экспрессии гена FOXP3 по сравнению с группой больных, получавших крем элобейз,  где была выявлена даже некоторая тенденция к увеличению данного показателя. При оценке разности остальных исследуемых иммунологических параметров в крови достоверных различий между группами выявлено не было (рис. 4). 

* - (p<0,05  по критерию Манна -Уитни).

Рисунок 4. Сравнение экспрессии генов цитокинов в коже и крови по разности показателей (между оценкой к 14 дню исследования и начальной оценкой)  у больных АтД из групп 1 и 2.  По оси абсцисс – разности показателей,  по оси ординат – показатели цитокинов.

Таким образом, полученные нами данные подтверждают преобладание Th1 ответа в коже больных АтД средне-тяжелого и тяжелого течения. В результате проведенного исследования также показана иммунотропная активность  мометазона фуроата крема 0,1% за счет его влияния на экспрессию ряда провоспалительных цитокинов в органе-мишени коже и механизмы системной иммунорегуляции  у больных АтД со средним и тяжелым течением заболевания. Полученные результаты могут быть использованы для разработки критериев эффективности наружной терапии и оптимизации лечения АтД.

ВЫВОДЫ

  1. При исследовании экспрессии генов цитокинов в коже у здоровых доноров достоверных различий между разными участками кожи (задняя поверхность шеи, сгибательная поверхность коленных и локтевых суставов) не выявлено.
  2. При исследовании иммунного ответа в коже у больных АтД выявлена экспрессия генов следующих провоспалительных цитокинов: IL2r (р=0,000064), IL8 (р=0), IL12B(р=0,00058), IL23 (р=0,00205), IL29 (р=0,000252), IFN (р=0,0024), TGF (р=0,00001) и противовоспалительных  цитокинов  IL5 (р=0,000098), IL10 (р=0,000004) по  сравнению со здоровыми донорами.
  3. Различий в показателях экспрессии генов цитокинов в периферической крови у больных АтД тяжелого и средне-тяжелого течения и у здоровых доноров не выявлено.
  4. Наружная терапия мометазона фуроатом 0,1% кремом уменьшает экспрессию генов цитокинов IL2 (р=0,0099), IL2r (р=0,008), IL8 (p=0,005), IL12В (p=0,0089), IL23 (p=0,00116), IFN (p=0,00033) в коже у больных АтД по сравнению с кремом элобейз.
  5. Достоверное снижение показателей экспрессии генов регуляторных цитокинов FOXP3 и TGF в периферической крови у больных АтД на фоне лечения мометазона фуроатом 0,1% кремом можно рассматривать в качестве критерия уменьшения аллергического воспаления. 
  6. Показатели экспрессии генов следующих цитокинов IL2r, IL6, IL8, IL12B, IL23, IL29, TGF, IFN в коже являются маркерами хронического воспаления и преобладания Th1 ответа у больных с тяжелым и средне-тяжелым течением АтД и могут изменяться в ответ на терапию.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

  1. Елисютина О. Г., Лапшин Н.Н., Филимонова Т.М., Цывкина Е.А. Возможности современных увлажняющих препаратов в восстановлении функции кожного барьера у больных атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал, 2009, №4, стр. 75-81.
  2. Филимонова Т.М., Елисютина О.Г., Феденко Е.С., Болдырева М.Н., Смирнов В.С. Влияние иммунотропной наружной терапии на экспрессию генов  цитокинов в коже и периферической крови больных атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал, 2010, №4, стр. 40-45.
  3. Филимонова Т.М., Елисютина О.Г., Феденко Е.С., Бурменская О.В.,  Болдырева М.Н., Смирнов В.С. Влияние топических глюкокортикостероидов на экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови больных атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал, 2011, №3, стр. 19-30.
  4. Филимонова Т.М., Елисютина О. Г., Феденко Е. С., Ниязов Д.Д., Болдырева М. Н.,  Бурменская О.В.,  Реброва О. Ю. Локальный и системный иммунный ответ у больных с тяжелым атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал, 2011, № 5, стр. 10-15.
  5. Филимонова Т.М., Елисютина О. Г., Феденко Е. С., Болдырева М. Н., Бурменская О.В., Реброва О. Ю., Ярилин А.А., Хаитов Р.М. Экспрессия генов цитокинов в коже и периферической крови больных атопическим дерматитом и здоровых доноров. Российский аллергологический журнал, 2011, №4, вып.1, стр. 398-400.
  6. Филимонова Т.М., Елисютина О.Г., Феденко Е.С., Болдырева М.Н. Изучение влияния топических глюкокортикостероидов на экспрессию генов цитокинов у больных у больных атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал, 2010, №1, вып.1, стр. 178.
  7. Филимонова Т.М., Елисютина О.Г., Феденко Е.С., Болдырева М.Н., Смирнов В.С. Влияние иммунотропного препарата крема тимоген 0,05% на экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови больных атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал, 2010, №5, вып.1, стр. 312-313.



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.