WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

На правах рукописи

МАТВЕЕВА

Марина Викторовна

РОЛЬ ЭНТЕРОЦИТОПРОТЕКТОРНОГО КОМПОНЕНТА

В ДЕТОКСИКАЦИОННОМ ЭФФЕКТЕ

АНТИГИПОКСАНТНОЙ ТЕРАПИИ

14.03.03 – патологическая физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва, 2012

Работа выполнена в ФГБОУВПО «Российский университет дружбы народов», ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук

Саушев Игорь Викторович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор

Трубицына Ирина Евгеньевна

доктор медицинских наук профессор

Пирожков Сергей Викторович

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский
медицинский университет имени Н. И. Пирогова»

Защита состоится 11 апреля 2012 года в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.06 ГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198 г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, 8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198 г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, 8.

Автореферат разослан  «___» ________________ 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук профессор Г.А. Дроздова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Проблема перитонита в настоящее время не теряет актуальности из-за широкой распространенности заболевания и большой продолжительности лечения, высокого уровня летальности, особенно при присоединении осложнений – абдоминального сепсиса, полиорганной недостаточности, инфекционно-токсического шока (Гельфанд Б.Р. и др., 2000; Григорьев Е.Г. и др., 2000; Завада Н.В. и др., 2002; Савельев В.С. и др., 2006; Brun-Buisson C. et al., 1995; Kologlu M. et al., 2001). Острый перитонит – заболевание, затрагивающее все органы и системы.  Патоморфологические изменения при остром перитоните, происходящие в кишечнике, обуславливают формирование энтеральной недостаточности, играющей особую роль в развитии системного воспалительного ответа, абдоминального сепсиса и комплекса висцеральных нарушений за счет выброса большого количества эндотоксинов в кровоток (Гаин Ю.М. и др., 2001; Изимбергенов В.И. и др., 2003; Илларионов М.Ю. и др., 2004; Косинец А.Н. и др., 2004; Зайцев В.М. и др., 2008). Трансинтестинальная транслокация бактерий обуславливает степень выраженности и характер синдрома эндогенной интоксикации перитонеального генеза (Скорляков В.В., 2003; Чернов В.Н., 2004; Deitch E.A. et al.,1990; O'Boyle C.J. et al., 1998). Наряду с энтеральной недостаточностью, большое значение в прогрессировании эндотоксикоза при остром перитоните придается активизация процессов перекисного окисления липидов в комплексе с повышением активности ФЛА2 и подавлением собственной системы антиоксидантной защиты, приводящей в дальнейшем к деструкции мембран клеток, которая в свою очередь усиливает нарушения гомеостаза и метаболический дисбаланс в различных органах и тканях, в том числе кишечника, что является значимым для определения тяжести течения и исхода заболевания (Ерюхин И.А., 1987; Белова Т.А. и др., 2000; Алиев С. А. и др., 2003; Трофимов В. А., 2005; Власов А.П. и др., 2007; Логинова О.В., 2008).

Многофакторность и поликомпонентность патогенеза острого перитонита  обуславливают значительные трудности в выборе оптимальной лечебной тактики при энтеральной недостаточности на фоне острого перитонита. Невзирая на большие успехи современной медицины в области диагностики и совершенствование терапевтических схем, лечение не всегда оказывается эффективным (Власов А.П. и др., 2007).

Весьма актуальна проблема поиска путей повышения результативности терапии с помощью влияния на основные патогенетические механизмы при остром перитоните, данные о которых на настоящий момент не являются исчерпывающими. В частности, недостаточно сведений об участии гипоксии и липопероксидации в клеточных структурах тонкой кишки в развитии энтеральной недостаточности. Отсутствуют данные об эффективности антигипоксантной терапии в коррекции функционально-метаболического статуса кишечника. Указанному кругу вопросов и посвящена настоящая работа. 

Цель исследования. Дать оценку значимости энтероцитопротекторного эффекта антигипоксантной терапии в коррекции эндогенной интоксикации при остром перитоните.

Задачи исследования.

1. На модели острого перитонита в динамике определить выраженность мембранодестабилизирующих явлений клеточных структур слизистой и серозно-мышечной оболочек тонкой кишки.

2. Выявить значимость гипоксии и процессов перекисного окисления липидов в патогенезе мембранодестабилизирующих явлений клеточных структур различных оболочек стенки тонкой кишки при остром перитоните.

3. Установить при остром экспериментальном перитоните сопряженность развития энтеральной недостаточности с функционально-метаболическим состоянием тонкой кишки.

4. Определить патогенетическую направленность антигипоксантной терапии (на примере ремаксола) в коррекции энтеральной недостаточности и эндогенной интоксикации при остром перитоните.

5. Установить влияние антигипоксантной терапии на липидный обмен в клеточных структурах различных оболочек стенки тонкой кишки.

Научная новизна. Дана экспериментальная оценка значимости мембранодестабилизирующих  явлений клеточных структур в различных оболочках тонкой кишки в развитии острой энтеральной недостаточности и эндогенной интоксикации при перитоните. Установлено, что в патогенезе острой энтеральной недостаточности при перитоните определяющую роль играют мембранодестабилизирующие явления в клеточных структурах слизистой оболочки, меньшую – в серозно-мышечной. Доказано, что в развитии мембранодестабилизирующих явлений в клеточных структурах кишечной стенки при остром перитоните важную роль играют гипоксия и процессы перекисного окисления липидов. Выявлено, что в начале заболевания в слизистой оболочке превалируют явления гипоксии, в серозно-мышечной оболочке – процесс перекисного окисления липидов. Установлено, что в динамике заболевания в исследованных тканевых объектах до 2 суток отмечается пропорциональное повышение активности указанных патогенных агентов, а  затем вплоть до конца периода наблюдения – их снижение с преобладанием темпа уменьшения гипоксии.

Экспериментально показано, что своевременное применение антигипоксанта ремаксола приводит к существенному снижению уровня токсических продуктов в портальной системе – важнейшему эффекту в коррекции энтеральной недостаточности. Установлено, что в основе указанного эффекта антигипоксанта лежит его мембранопротекторная активность за счет способности быстро корригировать явления гипоксии в начале заболевания в слизистой оболочке и процессы перекисного окисления липидов – в серозно-мышечной.

Практическая ценность работы. В хронических опытах установлено,  что развитие энтеральной недостаточности при остром перитоните сопряжено с мембранодестабилизирующими явлениями в тканевых структурах кишечной стенки, особенно в слизистой оболочке.

Показано, что включение в терапию острого перитонита антигипоксанта ремаксола приводит к существенному уменьшению проявлений энтеральной недостаточности и, как следствие, воспалительного процесса в брюшной полости. Выявлено, что наибольшая эффективность антигипоксантной терапии в купировании энтеральной недостаточности при остром перитоните отмечается в своевременном применении препарата, когда возможно предупредить резкое прогрессирование мембранодестаблизирующих явлений со стороны слизистой оболочки кишечника.

Положения, выносимые на защиту.

1. В патогенезе острой энтеральной недостаточности при перитоните определяющую роль играют мембранодестабилизирующие явления в клеточных структурах слизистой оболочки, меньшую – в серозно-мышечной. В развитии мембранодестабилизирующих явлений в клеточных структурах кишечной стенки при остром перитоните важную роль играют гипоксия и процессы перекисного окисления липидов.

2. Своевременное применение антигипоксанта ремаксола при остром перитоните приводит к уменьшению энтеральной недостаточности. В основе указанного эффекта препарата лежит его мембранопротекторная активность за счет способности корригировать явления гипоксии и процессы перекисного окисления липидов в тканевых структурах кишечной стенки.

Внедрение в практику. Разработанные диссертационные положения включены в программу обучения студентов на кафедре факультетской хирургии Медицинского института Мордовского государственного университета им. Н. П. Огарева.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и обсуждены на Огаревских чтениях – научно-практической конференции Мордовского университета (Саранск, 2007–2011),  Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в ХХI веке» (Москва, 2011), III межрегиональной научной конференции (Пенза, 2011), XVIII Российской гастроэнтерологической неделе (Москва,  2011), XV научной конференции молодых ученых Медицинского института Мордовского государственного университета (Саранск, 2011), IV Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека» (Ульяновск, 2011), Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, из них 3 – в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 170 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы (1-я глава), материалов и методов исследования (2-я глава), результатов собственных исследований (3–5-я главы), обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, который включает 205 отечественных и 88 иностранных источников. Работа содержит 28 таблиц и 34 рисунка.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. В основу работы положены экспериментальные исследования на 36 взрослых беспородных половозрелых собаках обоего пола массой от 8,37 до 14,44 кг. В процессе исследования животные были разделены на две группы.

Первая группа (I) – контрольная (n = 18). В этой группе при остром экспериментальном перитоните на фоне антибактериальной и инфузионной терапии исследовали выраженность энтерального синдрома по уровню токсических продуктов гидрофобной и гидрофильной природы в плазме крови общего кровотока и в портальной системе (брыжеечного кровотока), интенсивность процессов ПОЛ (по накоплению МДА, ДК и ТК), активность ФЛА2, состояние антиоксидантной системы (по активности СОД и каталазы) в тканях тонкой кишки. Состояние биомембран клеточных структур оценивали по качественным и количественным характеристикам липидного спектра тканей стенки тонкой кишки. 

Вторая группа (II) – опытная (n = 18). В данной группе оценивали динамику указанных биохимических показателей при включении в комплексную терапию острого экспериментального перитонита антигипоксанта ремаксола в дозе 15 мл на 1 кг массы тела животного (ежедневное внутривенное введение).

Моделирование перитонита проводилось по способу профессора Власова А. П. (1991). Животным под внутривенным тиопентал-натриевым наркозом (0,04 г на 1 кг массы тела) в брюшную полость шприцем вводили 20%  каловую взвесь из расчета 0,5 мл на 1 кг массы тела. Через сутки выполняли срединную лапаротомию, оценивали выраженность патологических изменений в брюшной полости, проводили ее санацию, шов раны. В контрольные сроки (1-е, 2-е, 3-и и 5-е сутки) послеоперационного наблюдения производили релапаротомию, забор венозной крови из брыжеечных и нижней полой вен, биопсию серозно-мышечного и слизистого слоя тонкой кишки. Экспериментальные исследования проводились исключительно под внутривенным наркозом (тиопентал-натрия из расчета 0,04 г на 1 кг массы тела животного). Каждому животному выполняли не более одной релапаротомии. Животных из эксперимента выводили введением летальной дозы тиопентал-натрия.

В послеоперационном периоде животным указанных групп проводили антибактериальную и инфузионную терапию: внутримышечные инъекции 2 раза в сутки раствора гентамицина из расчета 0,8 мг на 1 кг массы тела; внутривенно 1 раз в сутки 5% раствор глюкозы и 0,89% раствор хлорида натрия из расчета 50 мл на 1 кг массы тела.

Для получения исходных данных (условная норма) были изучены перечисленные показатели у 8 здоровых животных. Опыты выполнялись в соответствии с этическими требованиями к работе с экспериментальными животными («Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.1987 г.), Федеральный закон «О защите животных от жестокого обращения» от 01.01.1997 г., приказ МЗ РФ от 19.06.2003 г. № 267 «Об утверждении правил лабораторной практики»), одобрены локальным этическим комитетом.

В работе использованы следующие методы исследования:

Определение содержания пирувата производили при проведении реакции с 2,4-динитрофенилгидразином (Кушманова О.Д., Ивченко Г.М., 1983). Содержания лактата устанавливали по реакции с параоксидифенилом (Меньшиков В.В., 1987). Липиды из тканей кишечника экстрагировали хлороформ-метаноловой смесью (Хиггинс Дж.А., 1990). Липиды фракционировали методом тонкослойной хроматографии. Полярные фосфолипиды разделяли на пластинах фирмы «Merk» на стеклянной основе, нейтральные липиды – на силикагелевых пластинах для обращено-фазной тонкослойной хроматографии (Хиггинс Дж. А., 1990; Vaskovsky V.E. et al., 1975). Молекулярный анализ проводили на денситометре GS-670 (BIO-RAD, США) с соответствующим программным обеспечением (Phosphor Analyst/PS Sowtware). Показатели интенсивности ПОЛ: уровень диеновых и триеновых конъюгатов определяли спектрофотометрическим методом при длине волны 232-233 и 275 нм (Ганстон Ф.Д., 1986); малонового диальдегида – спектрофотометрическим методом в реакции с тиобарбитуровой кислотой (Sigma), активность каталазы – спектрофотометрическим метод с помощью молибдата аммония (Королюк М.А., 1988); активность супероксиддисмутазы оценивали в реакции с нитросиним тетразолием (Гуревич В.С. и др., 1990). Активность фосфолипазы А2 исследовали в среде, содержащей 10 ммоль трис-HCL-буфер (рH 8,0), 150 ммоль «Тритон Х-100», 10 ммоль CaCl2 и 1,2 ммоль субстрата, в качестве которого использовали фосфатидилхолины яичного желтка. Выраженность эндогенной интоксикации оценивали по следующим показателям: содержание молекул средней массы определяли спектрофотометрическим методом на спектрофотометре СФ-46 при длинах волн 254 и 280 нм (Пикуза О.И., Шакирова Л.З., 1994); общую и эффективную концентрацию альбумина в сыворотке крови – флуоресцентным методом на специализированном анализаторе АКЛ-01 «Зонд»" (Грызунов Ю.А., Добрецов Г.Е., 1994).

Полученные цифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента t и коэффициента корреляции r. Вычисления производили на CPU 1600 MHz «Intel Pentium-IV» с помощью пакета программ «Microsoft Office». Динамика показателей отражена на графиках, построенных с использованием программы электронных таблиц «Microsoft Excel 2003».

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В результате исследования установлено, что моделирование острого экспериментального перитонита по описанному ранее способу приводили к развитию воспалительного процесса в брюшной полости уже на следующие сутки.

Эндогенная интоксикация, неизбежно возникающая при остром перитоните, играет значимую роль в патогенезе заболевания, а также во многом определяет его тяжесть и прогноз (Ерюхин И.А. и др., 2001). Насыщение организма эндотоксинами, происходящее в результате развития синдрома энтеральной недостаточности и сопутствующая ему транслокация микроорганизмов из просвета кишечника в брюшную полость в настоящее время оцениваются как основные  индукторы формирования абдоминального сепсиса, синдрома системного воспалительного ответа, полиорганной и полисистемной недостаточности при остром перитоните (Савельев В.С. и др., 2004), что согласуется с результатами, полученными в ходе исследования. В контрольной группе выявлен существенный рост концентрации гидрофильных и гидрофобных токсинов в плазме крови на уровне общего кровотока, что говорит о формировании синдрома эндогенной интоксикации. Так, в общем кровотоке показатели среднемолекулярных пептидов ( = 254 нм и = 280 нм) возрастали соответственно на 70,97–132,26 и 48,57–111,43 %  (р < 0,05) по сравнению с нормой (рис. 1).

Рис. 1. Показатели эндогенной интоксикации в системном кровотоке при остром перитоните (значения нормы приняты за 100  % )

Также регистрировалось снижение эффективной концентрации и резерва связывания альбумина на 43,22–52,75 и 37,84–56,76 % (р < 0,05) относительно первоначальных показателей, одновременно с повышением индекса токсичности плазмы на 251,52–545,45 % (р < 0,05).

По сравнению с системным кровотоком в локальном кровотоке исследуемые показатели претерпевали более значительные изменения: уровень молекул средней массы ( = 254 нм и = 280 нм)  возрастал соответственно на 70,97–132,26 и 48,57–111,43 % (р < 0,05) по отношению к исходным данным (рис. 2).

Рис. 2. Показатели эндогенной интоксикации в локальном кровотоке при остром перитоните (значения нормы приняты за 100  % )

Эффективная концентрация и резерв связывания альбумина, по сравнению с нормой, были снижены на 47,49–60,20 и 42,25–59,15 %  (р < 0,05), также фиксировалось увеличение индекса токсичности плазмы на 220,45–456,81 % (р < 0,05). Приведенные данные демонстрируют развитие энтеральной недостаточности при остром перитоните.

Ряд исследований свидетельствует, что изменение липидного спектра при остром перитоните происходит за счет повышения активности процессов перекисного окисления липидов (Власов А.П. и др., 2004). Наиболее значимым патогенетическим аспектом энтеральной недостаточности является увеличение интенсивности и дисбаланс липопероксидации и системы собственной антиоксидантной защиты. Дефицит кислорода и энергетических субстратов способствует накоплению недоокисленных метаболитов, ацидозу и интенсификации свободнорадикального окисления, что в дальнейшем разрушает липидный бислой клеток различных органов и тканей, в том числе кишечника (Ермолов А.С., 2005).

Исследования, проведенные в контрольной группе, обнаружили существенное увеличение активности процессов перекисного окисления липидов при остром перитоните. Отмечался рост концентрации ДК, ТК и МДА относительно нормы в серозно-мышечном слое тонкой кишки на 85,71–133,33; 169,23–200 и 85,27–180,86 % (p < 0,05) соответственно (рис. 3).

       Рис. 3. Динамика показателей ПОЛ, активности ФЛА2, каталазы и СОД в серозно-мышечном (I) и слизистом (II) слоях  тонкой кишки при остром экспериментальном перитоните

В слизистом слое тонкой кишки также регистрировалось увеличение содержания ДК, ТК и МДА сравнительно с первоначальными показателями соответственно на 68,18–77,27; 78,57–85,71 и 37,88–70,99 % (p < 0,05).

Увеличение активности фосфолипазы А2 может служить другим источником повреждения клеточных мембран. Зафиксирована связь между активацией фосфолипазы А2 и процессами перекисного окисления липидов. Липиды, содержащие гидропероксидные группировки, активируют липолитический фермент – фосфолипазу А2, активная фосфолипаза также ускоряет липопероксидацию (Литвинко Н.М., Кисель М.А., 1991; Губергриц Н.Б. и др., 2000). Результаты нашего исследования позволяют заключить, что активность фосфолипазы А2 увеличивается при остром экспериментальном перитоните по сравнению с первоначальными показателями в серозно-мышечном и слизистом слоях тонкой кишки на 97,90–138,46 и 59,57–124,82 % (p < 0,05). Вместе с тем отмечалось ингибирование ферментативной способности супероксиддисмутазы и каталазы в серозно-мышечном слое на 54,47–67,32 и 52,07–76,35 % (p < 0,05), в слизистой оболочке тонкой кишки снижение составило 32,55–57,65 и 27,83–66,25 %  (p < 0,05) соответственно.

Доказанным является факт модификации липидного спектра клеточных структур кишечника при синдроме энтеральной недостаточности. Изменение метаболизма липидов в тканях кишечника являются патоморфологическими компонентами острого перитонита, что может содействовать прогрессированию нарушения функции органов, расстройству перистальтики кишечника и увеличивать насыщение организма кишечными эндотоксинами  (Власов А.П. и др., 2004).

В результате исследований, проведенных в контрольной группе животных, обнаружена модификация липидного спектра биомембран как в серозно-мышечном, так и в слизистом слое тонкой кишки, причем изменения липидного состава были различными. Так, в серозно-мышечном слое на начальных этапах эксперимента отмечалось уменьшение доли суммарных фосфолипидов на 27,97 %, эфиров холестерола – на 16,82, параллельно с увеличением холестерола на 26,12 %  (р<0,05), ацилглицеролов – на 29,89–75,36, свободных жирных кислот – на 28,89 % (р < 0,05).

Рис. 4. Динамика липидного спектра серозно-мышечного слоя (I) и слизистой оболочки (II) тонкой кишки при остром экспериментальном перитоните

В начале заболевания в серозно-мышечном слое кишечника установлено увеличение фракции лизофосфолипидов на 351,21 % (р < 0,05). В дальнейшем наблюдались более выраженные изменения и в других фракций. Регистрировалось увеличение доли фосфатидилэтаноламина на 440,05 %, фосфатидилинозита – на 69,56, фосфатидилсерина – на 50,16 % (р < 0,05), снижение фракции фосфатидилхолина на 68,28 %, сфингомиелина – на 80,04 % (р < 0,05) относительно нормы.

Рис. 5. Динамика фосфолипидного спектра серозно-мышечного слоя (I) и слизистой оболочки (II) тонкой кишки при остром экспериментальном перитоните

В слизистой оболочке на первых этапах динамического наблюдения отмечалось снижение фракции суммарных фосфолипидов на 34,55 %, эфиров холестерола – на 19,31 %, синхронно с ростом удельного веса холестерола на 31,28 %, ацилглицеролов – на 39,43, свободных жирных кислот – на 34,79 %  (р < 0,05).

Состав фосфолипидов слизистой оболочки также претерпевал изменения. На начальном этапе периода наблюдения установлено увеличение относительно нормы доли лизофосфолипидов на 370,68 %  (р < 0,05). В конце эксперимента регистрировалось увеличение доли фосфатидилэтаноламина на 359,97 %, фосфатидилинозита – на 75,14, фосфатидилсерина – на 59,45 % (р < 0,05), снижение фракции фосфатидилхолина на 72,36 %, сфингомиелина – на 89,73 %  (р < 0,05).

Формирующаяся при остром перитоните гипоксия тканей приводит к прогрессированию ацидоза, накоплению лактата и ингибированию АТФ (Смирнов А.В., 1997). Происходящая при заболевании централизация кровообращения делает зону спланхнического бассейна наиболее уязвимой, проявляясь клинически синдромом энтеральной недостаточности. В контрольной группе животных выявлено увеличение уровня лактата и пирувата в серозно-мышечном слое тонкой кишки на 64,50–250,45 и 52,94–211,76 % (p < 0,05) и рост в слизистой оболочке на 24,92–246,44 и 6,77–213,56 % (p < 0,05) соответственно (рис. 6).

Рис. 6. Показатели гипоксии в серозно-мышечном слое (I) и слизистой оболочке (II) тонкой кишки при остром перитоните

Регистрировалось повышение коэффициента гипоксии, на третьи сутки достигавшее максимума увеличения относительно нормы на 26,29 % (p < 0,05) в серозно-мышечном слое и 31,04 %  (p<0,05) – в слизистом слое стенки тонкой кишки. Следует отметить большую выраженность гипоксии в тканевых структурах слизистой оболочки по сравнению с таковыми серозно-мышечного слоя.

Таким образом, результаты экспериментальных исследований показали, что в патогенезе развития энтеральной недостаточности при перитоните определяющую роль играют мембранодестабилизирующие явления, которые в большей степени выражены в слизистой, в меньшей – в серозно-мышечной оболочке.

В контрольной серии исследований нами также установлено, что в развитии мембранодестабилизирующих явлений в клеточных структурах кишечной стенки при остром перитоните важную роль играют гипоксия и процессы перекисного окисления липидов. Причем в начале заболевания в слизистой оболочке превалируют явления гипоксии, в серозно-мышечной оболочке – процесс перекисного окисления липидов. В динамике заболевания в исследованных тканевых объектах до 2-х суток отмечается пропорциональное повышение активности указанных патогенных агентов, а  затем вплоть до конца периода наблюдения – их снижение с преобладанием темпа уменьшения гипоксии в слизистой оболочке.

Выявленные научные факты явились патофизиологическим основанием для применения антигипоксантной терапии с целью коррекции (предупреждения) энтеральной недостаточности, поскольку барьерная функция кишечника для разного рода токсических субстанций обусловлена функциональным состоянием слизистой оболочки, которое напрямую зависит от мембранодеструктивных явлений. Как указано выше, именно в ней в начале заболевания превалировали явления гипоксии, которые во многом и обусловливали  дестабилизацию биомембран клеток. Эти доводы стали основанием для применения в опытной группе ремаксола, который обладает антигипоксантным эффектом. В ходе динамического наблюдения выявлено положительное влияние препарата на содержание гидрофильных и гидрофобных токсичных продуктов в плазме крови при остром перитоните.

Экспериментально доказано, что уже на 3-и сутки исследования включение ремаксола в терапию в общем кровотоке отмечался рост эффективной концентрации альбумина на 25,10–29,57 % по отношению к показателям контрольной группы, на 5-е сутки наблюдения зафиксировано повышение резерва связывания альбумина на 21,74  % (р < 0,05) (рис. 7).

Р и с. 7. Показатели эндогенной интоксикации в системном кровотоке при перитоните на фоне внутривенного применения ремаксола в терапии острого перитонита (значения нормы приняты за 100 %; I – контрольная группа, II – опытная группа)

Начиная с 3-х суток терапии в системном кровотоке отмечалось уменьшение концентрации молекул средней массы (λ = 254 нм и (λ = 280 нм) относительно результатов контроля на 31,82 и 21,74 % (р < 0,05) соответственно. Индекс токсичности плазмы крови по сравнению с контролем снижался на 30,07 % (р < 0,05).

В локальном кровотоке препарат результативно корригировал исследуемые показатели, таким образом снижая выраженность синдрома энтеральной недостаточности. Начиная с третьих суток уровень среднемолекулярных пептидов (λ = 254 нм) и (λ = 280 нм) снижался на  30,67 и 38,98 %  и 20,51 и 31,67 % (р < 0,05) по отношению к данным контроля; эффективная концентрация и резерв связывания альбумина сравнительно с группой животных, получавших стандартную терапию, повышались на 27,77 и 31,14 % (р<0,05) соответственно, в дальнейшем отмечен их рост. На заключительном этапе опыта резерв связывания альбумина по сравнению с контролем повышался на 26,83 % (р<0,05), а индекс токсичности плазмы уменьшался на 25,53 % (р<0,05) (рис. 8).

Рис. 8. Показатели эндогенной интоксикации локального кровотока при перитоните на фоне внутривенного применения ремаксола (значения нормы приняты за 100 %; I – контрольная группа, II – опытная группа)

В ходе наблюдения зафиксировано положительное действие препарата на процессы перекисного окисления липидов. Так, на фоне применения ремаксола уровень диеновых конъюгатов в серозно-мышечном слое тонкой кишки был ниже по сравнению с контрольными данными на 20,0–28,21 %, триеновых конъюгатов – на 16,13–26,92 %, малонового диальдегида – на 15,36–18,05 %  (р < 0,05). На фоне комплексной терапии на 3-и сутки в серозно-мышечном слое тонкой кишки уменьшалась ферментная способность фосфолипазы А2 относительно показателей группы животных, не получавших ремаксол, на 20,82 %, на 5-е сутки – на 16,61 % (р < 0,05). Активность супероксиддисмутазы на третьи сутки эксперимента возрастала на 20,05 % (р < 0,05), в конце периода наблюдения – на 21,39 % (р < 0,05). Активность каталазы достоверно отличалась от контрольной группы лишь на заключительном этапе: рост относительно контрольных цифр составил 35,04 % (р < 0,05) (рис. 9). 

Зафиксировано благоприятное действие ремаксола на процессы липопероксидации в слизистой оболочке тонкой кишки. Оказалось, что на фоне включения ремаксола в терапию по сравнению с показателями контроля концентрация диеновых конъюгатов понижалась на 24,39–29,73 %, триеновых конъюгатов – на 20,69–28,00, малонового диальдегида – на 17,54–21,1 % (р < 0,05).

В тканях слизистой оболочки, по сравнению с контролем, снижалась энзимная активность фосфолипазы А2 на 3-и сутки комбинированного лечения с ремаксолом на 29,47 %, на 5-е сутки – на 31,34 % (р < 0,05). На 3-и сутки комплексного лечения отмечалось увеличение ферментативного потенциала супероксиддисмутазы на 9,04 %, на 5-е – на 10,84 % (р < 0,05) относительно цифр контроля. Ферментативная способность каталазы в слизистой оболочке тонкой кишки на заключительном этапе эксперимента возрастала на 12,96 % (р < 0,05).

Рис. 9. Динамика показателей ПОЛ, активности ФЛА2 и СОД в серозно-мышечном слое тонкой кишки при остром экспериментальном перитоните на фоне терапии ремаксолом (I - контрольная группа, II – опытная группа). Исходные данные приняты за 100 %. * – отмечены показатели, достоверно отличающиеся от значений группы контроля при p<0,05

Таким образом, ремаксол оказывал существенный положительный энтеропротекторный эффект, уменьшая выраженность липопероксидации и потенцируя активность собственной антиоксидантной системы тканевых структур тонкой кишки, корригируя метаболические нарушения в тканевых структурах. Необходимо обратить внимание на способность нивелирования повышенной и ферментной активности фосфолипазы А2. В целом достигается мембраностабилизирующий эффект, предохраняющий мембраны энтероцитов от повреждающих агентов.

Указанный эффект нашел подтверждение и при оценке липидного состава тканевых структур тонкой кишки Экспериментально доказано, что добавление внутривенных инфузий ремаксола к стандартной терапии острого перитонита эффективно улучшает липидный метаболизм в тканях кишечника и оказывает мембраностабилизирующее действие на фосфолипидный бислой клеточных структур тонкой кишки (рис. 10).

В серозно-мышечном слое тонкой кишки зафиксировано уменьшение содержания фракции свободных жирных кислот по сравнению с контрольными показателями на третьи и пятые сутки наблюдения на 16,64 и 21,40 % (p < 0,05) соответственно наряду со снижением доли триацилглицеролов на 12,2 и 22,43 % (p < 0,05). На фоне применения апробируемого препарата также происходили изменения липидного спектра слизистой оболочки тонкой кишки: удельный вес свободных жирных кислот на 3-и сутки эксперимента уменьшался на 15,90 %, на 5-е – на 22,12 % (p < 0,05).

Рис. 10. Динамика фосфолипидного спектра слизистого слоя тонкой кишки при остром экспериментальном перитоните на фоне терапии ремаксолом (K - контрольная группа, I – опытная группа). Исходные данные приняты за 100 % . * – отмечены показатели, достоверно отличающиеся от значений группы контроля при p<0,05

В результате проводимой терапии содержание фосфатидилхолина в серозно-мышечном слое тонкой кишки на 3-и сутки превышало контрольные показатели на 23,36 % и 31,20 % (p < 0,05) в слизистой оболочке уже на начальном этапе наблюдения. Также с третьих суток послеоперационного периода по сравнению с данными контроля отмечалось снижение доли фосфатидилэтаноламина и лизофосфолипидов на 17,00 и 16,47 % (p < 0,05) соответственно в серозно-мышечном слое и на 17,17 и 16,93 % (p < 0,05) – в слизистой оболочке.

Позитивное терапевтическое действие ремаксола на функционально-метаболическое состояние тканей тонкой кишки было обусловлено и его способностью корригировать явления гипоксии (рис. 11).

Рис. 11. Лабораторно-диагностические показатели гипоксии в слизистой оболочке тонкой кишки при остром перитоните (I - контрольная группа, II – опытная группа). Нормальные значения показателей приняты за 100 %. * – значения показателей, достоверно отличающиеся от нормы при p<0,05

Сравнение исследуемых показателей опытной и контрольной групп свидетельствовало о снижении уровня лактата в серозно-мышечном слое на 40,39 %, пирувата – на 32,91, коэффициента гипоксии – на 11,21 % (p < 0,05). В слизистом слое тонкой кишки регистрировалось уменьшение концентрации лактата на 26,26 %, пирувата – на 14,29, коэффициента гипоксии – на 14,05 % (p < 0,05).

Подводя итог проделанной работы, следует отметить высокую эффективность ремаксола в предотвращении прогрессирования синдрома энтеральной недостаточности при остром перитоните. В основе его положительного действия лежит способность быстро восстанавливать функционально-метаболический статус кишечника за счет снижения проявлений гипоксии, нивелирования процессов ПОЛ. Необходимо обратить внимание на то, что важнейшим подтверждением энтеропротекторного действия препарата является значимое уменьшение концентрации гидрофильных и гидрофобных токсинов в плазме крови не только общего, но и локального кровотока.

Экспериментально подтверждено, что своевременная коррекция нарушений липидного обмена и предупреждение их дальнейшего прогрессирования в тканевых структурах кишечной стенки являются важнейшим патогенетическим аспектом действия ремаксола. Отмеченные свойства уменьшать активность процессов липопероксидации и ферментативную способность мощного фактора мембранодеструкции – фосфолипазы А2 обуславливают его благоприятное действие на стабилизацию липидного спектра биомембран клеток кишечника, что демонстрируется восстановлением состава основных мембранообразующих липидов. Мембраностабилизирующая активность препарата, особенно по отношению к слизистой оболочке лежит в основе восстановления функциональных характеристик кишечника, в том числе барьерной функции. 

ВЫВОДЫ

1. В патогенезе острого развития энтеральной недостаточности при перитоните определяющую роль играют мембранодестабилизирующие явления в клеточных структурах слизистой оболочки, меньшую – в серозно-мышечной.

       2. В развитии мембранодестабилизирующих явлений в клеточных структурах кишечной стенки при остром перитоните важную роль играют гипоксия и процессы перекисного окисления липидов.

3. В начале заболевания в слизистой оболочке превалируют явления гипоксии, в серозно-мышечной оболочке – процесс перекисного окисления липидов. В динамике заболевания в исследованных тканевых объектах до 2-х суток отмечается пропорциональное повышение активности указанных патогенных агентов, а затем вплоть до конца периода наблюдения – их снижение, с преобладанием темпа уменьшения гипоксии в слизистой оболочке.

4. Своевременное применение антигипоксанта ремаксола приводит к существенному уменьшению проявлений острой энтеральной недостаточности, одним из важнейших патогенетических эффектов чего выступает уменьшение токсинемии в портальной системе.

5. В основе энтеропротекторного эффекта препарата лежит его мембраностабилизирующая активность за счет способности корригировать явления гипоксии (особенно в слизистой оболочке) и процессы перекисного окисления липидов в тканевых структурах кишечной стенки.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Для эффективного предотвращения прогрессирования синдрома энтеральной недостаточности рекомендуется включить препараты, обладающие антигипоксантной активностью (ремаксол), в комлексную терапию острого перитонита с целью более эффективной коррекции недостаточности кишечника за счет восстановления фунционально-метаболических нарушений и уменьшения мембранодеструктивных процессов тканевых структур кишечника, уменьшая выраженность эндотоксикоза перитонеального генеза.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Энтеропротекторный эффект антиоксидантной терапии при остром перитоните/ Актуальные вопросы фундаментальной и прикладной медицины. Сборник научных работ. – Саранск, 2007. – С. 30-35. Шибитов В.А., Власов П.А., Матвеева М.В.
  2. Патофизиологические механизмы поражения кишечника при остром воспалении// Актуальные вопросы фундаментальной и прикладной медицины. Сборник научных работ. – Саранск, 2007. – С. 87-89. Матвеева М.В., Саушев И.В. 
  3. Метаболическая терапия в предупреждении поражений токсического характера/ Актуальные проблемы медицинской науки и образования. Труды III межрегиональной научной конференции. – Пенза, 2011. – С. 197-199. Шибитов В.А., Васильев В.В., Матвеева М.В.,  Рыжкова О.А., Быханова О.Н. 
  4. Антиоксиданты и антигипоксанты в коррекции гемостатических расстройств/ Актуальные проблемы медицинской науки и образования. Труды III межрегиональной научной конференции. – Пенза, 2011. – С. 157-158. Васильев В.В., Матвеева М.В.,  Быханова О.Н., Кормишкин А.Е., Рыжкова О.А.
  5. Мембранопротекторная терапия в коррекции энтеральных панкреатогенных поражений// Фундаментальные исследования. 2011. 7.
    –С. 43-46 Власов А.П., Саксин А.А., Рузавина А.В., Гуляева Л.А., Николаев Е.А., Матвеева М.В
  6. Фармакологические эффекты ремаксола при эндотоксикозе перитонеального генеза// Экспериментальная и клиническая фармакология. 2011. –Т. 74. –№ 5. –С. 40-42. А.П. Власов, О.В. Логинова, В.В. Васильев, Т.И. Власова, В.А. Шибитов, Т.Н. Казаева, М.В. Матвеева
  7. Модуляция функционально-метаболического состояния клеток крови при эндогенной интоксикации // Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте: материалы XVнаучной конференции молодых ученых медицинского института Мордовского государственного университета. Вып. 14. – Саранск, 2011. – С. 79-81. А.Е. Кормишкин, В.В. Васильев, М.В. Матвеева, О.А. Рыжкова, М.В. Пьянов, О.Н. Быханова
  8. Повышение детоксикационной способности организма при эндогенной интоксикации // Медико-физиологические проблемы экологии человека: Материалы IV Всероссийской конференции с международным участием. –Ульяновск, 2011. – С. 131-132.  Кузнецова О.М., Власова В.П., Матвеева М.В., Быханова О.Н., Гашимова С.К., Рыжкова О.А.
  9. Оптимизация метаболических процессов при хирургическом эндотоксикозе. // Вестник хирургической гастроэнтерологии. 2011. 3. –С. 118-119. Кузнецова О.М., Матвеева М.В., Рыжкова О.А., Гашимова С.К., Кульченко Н.Г.
  10. Коррекция системных поражений при эндотоксикозе // Молодежь и наука: Модернизация и инновационное развитие страны. Материалы научно-практической конференции. – Пенза, 2011. Ч.2. – С. 214-216. Матвеева М.В., Шибитов В.А., Быханова О.Н., Рыжкова О.А., Гашимова С.К.

РЕЗЮМЕ

Матвеева М.В.

Роль энтероцитопротекторного компонента в детоксикационном эффекте
антигипоксантной терапии

В работе показано, что в патогенезе развития энтеральной недостаточности при перитоните определяющую роль играют мембранодестабилизирующие явления в клеточных структурах слизистой оболочки, меньшую – в серозно-мышечной. Установлено, что в начале заболевания в слизистой оболочке превалируют явления гипоксии, в серозно-мышечной – процесс перекисного окисления липидов. Своевременное применение антигипоксанта приводит к существенному уменьшению проявлений острой энтеральной недостаточности. В основе указанного эффекта препарата лежит его мембранопротекторная активность за счет способности корригировать явления гипоксии и процессы перекисного окисления липидов в тканевых структурах кишечной стенки.

SUMMARY

Matveeva M.V.

The role enterocytoprotective component in detoxication effect of
antihypoxantic therapies

In work it is shown that in a pathogenesis of development of enteral insufficiency at a peritonitis defining role play membrane destabilized phenomena in cellular structures of a mucosa, smaller – in is serous-muscular. It is established that in the disease beginning in a mucosa the hypoxia phenomena, in an is serous-muscular cover – process peroxidations of lipids prevail. Timely application antihypoxant leads to essential reduction of implications of acute enteral insufficiency. At the heart of the specified effect of a preparation lies it membrane protecttive activity at the expense of correction ability phenomena of a hypoxia and processes peroxidations of lipids in fabric structures of an intestinal wall.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ПОЛ – перекисное окисление липидов;

МДА – малоновый диальдегид;

ФЛА2  – фосфолипаза А2;

ДК  – диеновые коньюгаты;

ТК – триеновые конъюгаты;

СЖК – свободные жирные кислоты;

СФ – суммарные фосфолипиды;

МАГ – моноацилглицеролы;

ДАГ – диацилглицеролы;

ТАГ – триацилглицеролы;

ЭХС – эфиры холестерола;

ХС – холестерол;

ЛФЛ – лизофосфолипиды;

СФМ – сфингомиелин;

ФХ – фосфатидилхолин;

ФС – фосфатидилсерин;

ФИ –фосфатидилинозит;

ФЭ – фосфатилдилэтаноламин

 





© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.