WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

ТЕРКАЧЕВА ОЛЬГА АНАТОЛЬЕВНА

ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО ОТВЕТА  У ВЗРОСЛЫХ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПАНДЕМИЧЕСКОЙ  ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ГРИППА А(H1N1) 

14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва

2012

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» Российской академии медицинских наук

Научный руководитель: 

доктор медицинских наук, профессор,  заслуженный деятель науки РФ

Костинов Михаил Петрович 

Официальные оппоненты: 

Лавров Вячеслав Федорович,  доктор медицинских наук, профессор,  ФГБУ «НИИВС им. И.И. Мечникова» РАМН, заведующий лабораторией диагностики вирусных инфекций.

Бурцева Елена Ивановна доктор медицинских наук, ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздравсоцразвития России, заведующая  лаборатории этиологии эпидемиологии гриппа.

Ведущая организация: ФГБУ «Научно-исследовательский институт гриппа» Минздравсоцразвития России.

Защита диссертации состоится «22» ноября 2012 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 001.035.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» РАМН по адресу г. Москва, Малый Казенный пер., д. 5а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» РАМН

Автореферат разослан «___» октября  2012 г.

Ученый секретарь  диссертационного совета

кандидат биологических наук  И.В. Яковлева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Грипп – наиболее распространенное инфекционное заболевание с частыми осложнениями и возможным летальным исходом. В России в течение последних 10 лет ежегодно гриппом и гриппоподобными болезнями заболевает 27–41 млн. человек,  из которых до 500 случаев заболевания заканчиваются летально [Киселев О.И.  и др. 2011]. Единственным средством эффективной профилактики гриппа в настоящее время является вакцинация, которая в 1,4–1,7 раза снижает уровень заболеваемости, уменьшает тяжесть течения болезни, предупреждает развитие осложнений и летальных исходов. В России с 2004 по 2009 год заболеваемость гриппом в результате проведения вакцинации снизилась в 2,9 раза [Киселев О.И., Цыбалова Л.М., Покровский В.И. 2006;  Таточенко В.К., Озерецковский Н.А., Федоров А.М. 2011].

В апреле 2009 года ВОЗ сообщила о начале пандемии гриппа, вызванной новым штаммом вируса - А (H1N1), а уже осенью того же года в Европе, США и России были созданы и официально зарегистрированы несколько новых вакцин, предназначенных для  профилактики пандемического гриппа. Одним из таких препаратов стала вакцина Пандефлю, разработанная ФГУП  «НПО  «Микроген» МЗ РФ, безопасность и эффективность которой  были показаны в и фазе клинических исследований [Зверев В.В., Миронов А.Н., Михайлова Н.А. и др. 2009, 2011].  Однако проведенные  клинические испытания не в полной мере отражают частоту редко встречающихся поствакцинальных реакций и осложнений, так как их выявление требует более длительного наблюдения за вакцинированными, так же необходимо всестороннее изучение механизмов их формирования. В комплекс  тестов, использованных при клинических испытаниях вакцины Пандефлю, не входили исследования параметров  аутоиммунных и аллергических процессов, что  особенно важно для характеристики ее безопасности, в том числе у лиц с соматической патологией, которые, согласно рекомендациям ВОЗ, составляют приоритетную группу людей, подлежащих вакцинации против гриппа.

Необходимость изучения возможного влияния вакцин против гриппа на аутоиммунные процессы обусловлена малочисленностью и противоречивым характером данных, опубликованных по этому вопросу. С 1976 г. в США  наблюдается рост числа тяжелых неблагоприятных эффектов введения вакцины против гриппа, среди которых синдром Гиена-Барре с 1990 г по 2005 гг. диагностировали в 0,7 случаях на 1 млн. вакцинированных [Deeks S.L., Lim G.H., Simpson M.A. 2011]. Некоторые авторы указывают на связь  противогриппозной вакцинации с возникновением паралича лицевого нерва, в патогенезе которого не исключается участие аутоантител [Muetsch M., Zhou W., Rhodes P. et al. 2004].  В  2008 году было показано, что вакцина, содержащая вирус гриппа А/(H1N1), может стимулировать образование аутоантител к миелину у мышей [Nachamkin I., Shadomy S.V., Moran A.P. et  al. 2008].  Однако,  исследование проведенное в 2003 году  не выявило взаимосвязи вакцинации против гриппа с развитием аутоиммунных демиелинизирующих заболеваний [DeStefano F., Verstraeten T., Jackson L.A. et al. 2003].

Весьма актуально изучение возможной  сенсибилизирующей роли вакцины Пандефлю, в связи с присутствием остаточного количества белков куриного яйца  (среды культивирования вирусного штамма) и включением в препарат алюминия гидроксида в качестве адъюванта. Вполне вероятно, что введение данной  вакцины может способствовать развитию аллергических реакций у предрасположенных лиц или явиться пусковым механизмом возникновения сенсибилизации у исходно интактных добровольцев [Медуницин Н.В. 1999]. 

Известно, что вакцинация против гриппа сопровождается изменением в крови концентрации провоспалительных цитокинов, таких как  - и -ИФН и ФНО, свидетельствующем об активации системы врожденного противовирусного иммунитета. При этом необходимо учитывать, что увеличение в крови содержанием цитокинов, в частности, ФНО, с учётом его выраженных пирогенных свойств, может представлять реальную опасность для здоровья  вакцинируемых, включая детей с заболеваниями ЦНС [Mosmann T., Sad S. 1996; Медуницин Н.В. 1999; Plotkin S. 2004; Костинов М.П.  2008; Иванов А. А., и др. 2008]. Однако на современном этапе остается не изученным вопрос  о влиянии  пандемической вакцины против гриппа (штамм А/California/7/2009/(H1N1)v) на  содержание провоспалительных цитокинов и взаимосвязи их уровней с  продукцией поствакцинальных антител. 

Цель исследования: Оценка влияния  пандемической  субъединичной  моновалентной противогриппозной вакцины, содержащей штамм А/California/7/2009/(H1N1)v, на параметры аутоиммунного ответа, продукцию IgЕ-антител,  уровни провоспалительных цитокинов (-ИФН, -ИФН и ФНО)  и их взаимосвязи с синтезом поствакцинальных антител у взрослых. 

Задачи исследования:

1. Определить уровень поствакцинальных IgG-антител к вирусу гриппа штамм А/California/7/2009/(H1N1)v у взрослых.

2. Изучить динамику органоспецифических к (основному белку миелина,  ткани легкого) и органонеспецифических (нативной и денатурированной ДНК)  IgG-антител в процессе вакцинации.

3. Определить  концентрации общего IgE и аллергенспецифических IgE-антител к компонентам куриного яйца в сыворотке крови вакцинированных пациентов.

4. Исследовать уровни -ИФН -ИФН и ФНО в сыворотке крови взрослых  при введении пандемической противогриппозной вакцины.

5. Изучить взаимосвязь между продукцией IgG-антител к вирусу гриппа А/California/7/2009/(H1N1)v и содержанием органоспецефических и органонеспецефических аутоантител, общего и аллергенспецефических IgE, а также -, -ИФН и ФНО в сыворотке крови пациентов, вакцинированных пандемической противогриппозной вакциной.

Научная новизна

Впервые  показано, что введение  пандемической вакцины против гриппа, содержащей штамм  А/California/7/2009/(H1N1)v,  не приводит  к увеличению уровня IgG-Ат к основному белку миелина, ткани легкого, нативной и денатурированной ДНК у взрослых, что косвенно подтверждает  иммунологическую безопасность препарата Пандефлю.

Показано, что вакцинация против пандемического гриппа лиц с исходно высоким уровнем общего IgE сопровождается снижением аллергической реактивности организма, о чем свидетельствует  снижение значения данного параметра после введения первой дозы препарата.

Продемонстрирована возможность сенсибилизирующего влияния пандемической противогриппозной вакцины при повторном ее введении,  что проявляется повышением содержания IgE-антител к белку куриного яйца без клинических проявлений у здоровых лиц с исходно нормальным уровнем общего  IgE.  Не выявлена взаимосвязь интенсивности  антителообразования с исходным  уровнем общего IgE и его изменениями в процессе вакцинации.

Впервые установлено, что при двукратном введении пандемической противогриппозной вакцины у взрослых не изменялось содержание ФНО и -ИФН, а исходно низкие концентрации -ИФН (до10 пг/мл) после введения второй дозы препарата возрастали. 

Выявлена обратная корреляционная связь между исходной концентрацией -, -ИФН  и уровнем поствакцинальных антител к вирусу пандемического гриппа.

Практическая значимость

Отмеченное снижение общего IgE в поствакцинальном периоде у лиц с его исходно высокой концентрацией свидетельствует о безопасности введения препарата Пандефлю, в том числе у людей с аллергически измененной реактивностью, что позволяет применять пандемическую противогриппозную вакцину без предварительного исследования данного параметра.

Отсутствие динамики IgG-Ат  к антигенам основного белка миелина, ткани легкого, нативной и денатурированной ДНК у взрослых в процессе вакцинации против пандемического гриппа подтверждает отсутствие активации аутоиммунитета и является дополнительным критерием безопасности препарата.

У лиц с высоким содержанием - и/или -ИФН возможен низкий антительный ответ на противогриппоную вакцинацию, что обусловливает необходимость серологического контроля для решения вопроса о введении им бустерной дозы вакцины. 

Положения, выносимые на защиту

  1. Введение пандемической вакцины против гриппа сопровождается снижением концентрации общего IgE при его высоких исходных значениях и может вызывать повышение уровня IgE к белку куриного яйца без клинических проявлений.  Содержание общего IgE не влияет на синтез антител к вакцинному штамму вируса гриппа.
  2. Двукратное введение пандемической вакцины не сопровождается значимыми изменениями концентрации ФНО и IgG-Ат к антигенам нативной и денатурированной ДНК, ткани легкого, основному белку миелина, что свидетельствует об иммунологической безопасности данного препарата.
  3. Определение  содержания -ИФН и -ИФН до вакцинации может служить прогностическим критерием ее эффективности, поскольку показана отрицательная взаимосвязь между содержанием данных цитокинов и уровнем поствакцинальных антител.

Апробация материалов диссертации и публикации

Основные положения и результаты работы доложены и обсуждены на XVII Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2010), II Конгрессе терапевтов (Москва, 2010),  II научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики респираторных инфекций» ФГУН ЦНИИЭ (Москва, 2011), научной конференции ФГБУ «НИИВС им. И.И. Мечникова» РАМН (Москва, 2011). По теме диссертации опубликованы 6 печатных работ в журналах, рекомендованных  ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной материалам и методам исследования, четырех глав собственных исследований, обсуждения, выводов, списка используемой литературы. Диссертация изложена на 119 страницах, иллюстрирована 28 таблицами, 3 рисунками. Список литературы содержит 245 источников (82 отечественных и 163 зарубежных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Клинические испытания на ограниченной группе людей проведены совместно с  ФГУП  «НПО  «Микроген» МЗ РФ и были одобрены Министерством Здравоохранения и Социального Развития Российской Федерации (разрешение от 12.08.09 г. №331) и этическим комитетом.  Исследование проведено с 8.09.09 по 3.11.09 г.  Методом случайной выборки 100 здоровых добровольцев были разделены на 2 группы. В I группу вошли 70 человек, которым в ходе исследования двукратно с интервалом в 28 дней вводили пандемическую противогриппозную вакцину Пандефлю;  II группу (контроля) составили 30 человек, которым в аналогичные сроки вводили физиологический раствор (0,9% NaCl). Средний возраст добровольцев, получивших вакцинный препарат, составил  37,35 ± 10,63  (медиана – 37 лет); из них женщин – 55,7%, а мужчин – 44,3%. В группе «плацебо» средний возраст составил – 35,55 ± 7,63 (медиана – 35,5 лет); из них 73,3% – женщины, 26,7% – мужчины.

Критерии включения в исследование: возраст от 18 до 60 лет, отсутствие острых и хронических заболеваний, для женщин отсутствие беременности и использование ими контрацепции.

Критерии исключения  из исследования: аллергические реакции на белок куриного яйца и/или предшествующую вакцинацию против гриппа;  бронхиальная астма; хронические заболевания легких; хронический ринит;  первичный иммунодефицит; иммуносупрессия; острые инфекционные и неинфекционные заболевания; хронические заболевания в стадии обострения;  наличие в анамнезе лейкоза, рака, положительной реакции на ВИЧ-инфекцию, гепатита В и С; получение препаратов иммуноглобулина или переливание крови в течение последних 3 месяцев; участие в каком-либо другом исследовании.

Вакцинный препарат. Использовали инактивированную суъединичную адсорбированную  моновалентную, сконструированную на основе штамма A/California/7/2009(Н1N1)v вакцину против гриппа (коммерческое название «Пандефлю»),  представляющую собой комплекс поверхностных гликопротеинов (гемагглютинина и нейраминидазы), выделенных из очищенных  вирионов вируса гриппа А/Н1N1swine, выращенного на куриных эмбрионах и адсорбированного на гидроксиде алюминия. Одна  доза (0,5 мл) вакцины содержит  15±2,2 мкг гемагглютинина и  нейраминидазы, 0,475±0,075 мг алюминия гидроксида («Brenntag Biosector», Дания), 50±7,5 мкг консерванта  (тиомерсала). 

В качестве плацебо вводили 0,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида.

Состояние добровольцев до и после вакцинации с регистрацией системных и местных реакций оценивали согласно стандартному протоколу, принятому при проведении клинических испытаний вакцинных препаратов.

Определение IgG-Ат к гемагглютинину вируса гриппа A/California/7/2009 (H1N1) проводили в реакции микронейтрализации (РМН). Работа была проведена в ФГБУ НИИ гриппа МЗиСР РФ (г. Санкт- Петербург). 

Уровень общего IgE определяли в ИФА в образцах сыворотки крови взрослых с использованием набора реагентов для количественного определения IgE  («IgE-Вектор-Бест», Россия).

Уровень IgG-Ат  к антигенам ткани легкого, основному белку миелина (ОБМ), к нативной ДНК (нДНК) и денатурированной ДНК (дДНК) определяли методом твердофазного ИФА (ФГБУ «НИИВС им. И.И. Мечникова» РАМН).

Концентрацию  IgE-Ат к цельному куриному яйцу, белку, желтку, овальбумину, овамукоиду в сыворотке крови человека определяли с помощью иммуноферментной тест системы (ИФТС) («Dr. Fooke», Германия) с биотинилированными аллергенами. 

Уровни -, -ИФН и ФНО в сыворотках взрослых определяли с помощью ИФТС («Вектор-Бест», Россия).

Методы статистической обработки. Обработку цифрового материала результатов проводили в соответствии с  общепринятыми методами статистики с использованием специализированного софта Excel, Statistica, SPSS.

Результаты собственных исследований и их обсуждение

На основании результатов ежедневного осмотра в течение 7 дней после каждого введения препарата, а также анализа дневников самонаблюдения, которые добровольцы вели в течение всего поствакцинального периода,  у 18% волонтеров были выявлены слабовыраженные  местные реакции в течение 1-3 дней. Частота слабовыраженных системных (общих) реакций составляла 7%. Таким образом, частота и длительность поствакцинальных реакций была не выше, чем при применении аналогичных зарубежных вакцин. В группе  плацебо после введения препарата местные и общие реакции отмечались  в 3,3% случаев. 

Исходные гематологические показатели и параметры общего анализа мочи в исследуемых группах находились в пределах нормальных значений. Двукратное введение пандемической противогриппозной вакцины у взрослых не сопровождалось изменениями  клинических и биохимических показателей крови и общего анализа мочи. Стабильность лабораторных показателей у привитых указывает на отсутствие функциональных изменений в органах и системах организма и  свидетельствует о безопасности вводимого вакцинного препарата.

Антигенную активность вакцины оценивали по средней геометрической титров антител (СГТ Ат) к гемагглютинину (ГА) вируса гриппа A/California/7/2009 (H1N1)v в сыворотках взрослых добровольцев обеих групп, взятых  до и через 28 дней после каждой вакцинации, путем парного сравнения. По результатам реакции микронейтрализации СГТ Ат до вакцинации составляла 1:6,1, при этом индивидуальные показатели находились в диапазоне от 1:5,0 до 1:40 с преобладанием сывороток с низкими титрами.

Через 28 дней после первой вакцинации СГТ Ат достигла значений 1:21,1. при этом у 24 (34%) человек титр Ат варьировал от 1:40 до 1:360.  Сероконверсию считали доказанной, если титры антител в сыворотках после вакцинации составляли 1:20 и выше (при условии, что исходно они были ниже 1:10), либо 1:40, если довакцинальный  титр Ат был 1:10. Анализ результатов РМН показал, что после первой вакцинации сероконверсия зарегистрирована у 47,1 % привитых с дальнейшим увеличением после второй вакцинации до 71,4 % (табл.1).

Уровень серопротекции оценен по количеству защищенных лиц к вирусу гриппа штамм A/California/7/2009(H1N1)v в поствакцинальном периоде. Защитный уровень Ат к вакцинному штамму  выявлен у 34,3% волонтеров после первой вакцинации и у 60% – после второй.

Уровень сероконверсии оценен по количеству лиц с четырехкратным приростом антител к пандемическому вирусу гриппа в поствакцинальном периоде.  В целом, кратность прироста Ат составила от 3,46 после первой вакцинации и до 4,92 – после второй вакцинации. В то же время введение двух доз вакцины у 20 (28,6%) человек не сопровождалось четырехкратным приростом титра противогриппозных антител.

Так как регламентируемые показатели  фактора сероконверсии,  уровней серопротекции и сероконверсии  не разработаны  для РМН,  для сопоставления данных параметров использовались показатели, установленные для реакции торможения гемагглютинации (РТГА) (табл. 1). В соответствии с  международными критериями оценки иммуногенности вакцин против гриппа, считается, что если исследуемый препарат соответствует хотя бы одному критерию, то он иммуногенен. Исследуемая вакцина соответствует двум критериям иммуногенности даже после введения одной дозы препарата.

Таблица 1

Иммуногенность пандемической вакцины против гриппа у взрослых

Критерии  ВОЗ

  Препарат

Уровень сероконверсии

Уровень серопротекции

СТ Ат

Фактор сероконверсии

более 40 %

более 70 %

более 2,5

Вакцина

V1

33 (47,1%)

24 (34,3%)

1:21,1

3,46

V2

50 (71,4% )

42(60% )

1:30

4,92

Плацебо

V1

0

0

1:6,5

1,07

V2

1(2,5%)

0

1:6,5

1,07

Примечание: V1 – первое введение препарата; V2 – второе введение препарата;

При оценке исходного уровня общего IgЕ установлено, что у 15 (30 %) из 50 добровольцев, получивших вакцину, и у 2 (10%) из группы плацебо он превышал нормальное значение (до 100 мЕ/мл) без каких-либо клинических симптомов аллергии (табл. 2).  После первой вакцинации отмечено снижение уровня общего IgЕ (p<0,05) в группе привитых с его исходно высоким  показателем. После второй вакцинации тенденция к снижению общего уровня IgE в группе привитых с его исходно повышенным значением сохранилась. В целом из 15 (100%) добровольцев с высоким уровнем IgE через 56 дней после начала наблюдения его повышенный уровень выявлен лишь у 5 (33,3%) лиц. У привитых с нормальным уровнем общего IgЕ существенных изменений данного показателя не произошло ни после первой, ни после второй вакцинации. У волонтеров группы плацебо с исходно  нормальным значением общего IgE этот показатель не претерпел существенных изменений в течение всего периода наблюдения. Таким образом, введение пандемической противогриппозной вакцины не сопровождается увеличением уровня общего IgE, а в 66,7% случаях приводит к его снижению.

Таблица 2

Динамика общего IgЕ у взрослых в процессе вакцинации против гриппа A/California/7/2009 (H1N1)v

Группы

Уровни общего IgE (мЕ/мл) (M±m)

До V1

Через 1 мес. после V1

Через 1 мес. после V2

Группа

Всего (n=50)

52,5

log 1,72±0,49

20,0

log 1,3±0,5

25,6

log 1,41±0,45

Лица с высоким уровнем общ.IgE (>100 мЕ/мл)

212,0

log 2,3±1,42

107,0 *

log 2,02 ± 1,58

116,2*

log 2,06 ± 1,52

Лица с нормальным уровнем общ.IgE ( 100 мЕ/мл)

39,5

log 1,59 ±0,62

14,4

log 1,16 ± 0,18

19,1

log 1,28±0,83

Группа

Всего (n=20)

30,2

log 1,48±0,44

8,1

log 0,91±0,66

14,2

log 1,15±0,46

Лица с высоким уровнем общ.IgE (>100 мЕ/мл)

203,5

log 2,31±1,84

171,5

log 2,23±2,17

231

log2,36±2,29

Лица с высоким уровнем общ.IgE (>100 мЕ/мл)

28,5

log1,45 ±0,79

11,4

log1,06 ± 0,45

14,4

log1,16±0,43

Примечание: V1 – первое введение препарата; V2 – второе введение препарата; * - p<0,05 различия по сравнению с исходным данными

 

Корреляционный анализ показал, что достижение сероконверсии не зависит от исходного уровня общего IgE, так же как нет взаимосвязи между  увеличением или уменьшением общего IgE в процессе наблюдения и сероконверсией (2 = 0,265; р> 0,05).

Таблица 3

Динамика IgE-Ат к компонентам куриного яйца у взрослых в процессе вакцинации

Группы

исследования

IgE – Ат

к компонентам куриного яйца:

Уровни IgE-Ат (мЕ/мл)

(М±m)

До V1

Через 1 мес. после V1

Через 1 мес. после  V2

Группа I

(n=24)

белку

0,34 ± 0,0

0,34 0,0

0,75 ± 1,8

желтку

0,6 ± 1,3

0,7 ± 1,3

0,7 ± 1,9

цельному яйцу

1,1 ± 2,4

0,8 ± 0,9

0,7 ± 0,8

овальбумину

0,4 ± 0,3

0,4 ± 0,2

1,5 ± 3,5

овомукоиду

1,8 ± 3,3

2,2 ± 5,1

1,7 ± 3,5

Группа II

(n =5)

белку

0,8 ± 0,3

0,6 ± 0,2

0,34 ± 1,9

желтку

1,4 ± 0,9

1,6 ±1,3

2,4 ± 1,9

цельному яйцу

0,7 ± 2,5

1,2 ± 0,9

1,6 ± 0,8

овальбумину

0,7 ± 0,3

0,5 ± 0,2

0,5 ± 2,5

овомукоиду

0,7 ± 3,2

0,7 ± 1,6

0,9 ± 2,1

Примечание: V1 – первое введение препарата; V2 – второе введение препарата; p>0,05 

Поскольку вакцинный штамм выращивался на куриных эмбрионах,  одной из задач явилось исследование в сыворотке добровольцев IgЕ-Ат к белкам куриного яйца. Из 29 волонтеров 24 (83%) были дважды привиты пандемической противогриппозной вакциной, штамм А/ California /7/2009 (Н1N1)v, а 5 (17%) – получили плацебо. Среди обследованных у 10 (41,6%) человек из  I группы и 3 (60%) - из II группы концентрация общего IgЕ была высокой (> 100 мЕ/мл), а у остальных – в пределах нормальных значений. Хотя в целом как в группе вакцинированных,  так и в группе плацебо значимых изменений в концентрации IgЕ-Ат к компонентам куриного яйца  выявлено не было,  следует отметить что, у 6 (42,9%) привитых взрослых с исходно  нормальным значением общего  IgE  после введения второй дозы вакцины уровни IgE-Ат к белку куриного яйца повысились (рис.1). Регистрируемое в поствакцинальном периоде увеличение  IgE-Ат к одному из компонентов куриного яйца указывает на возможность сенсибилизации организма привитого.

 

Рис.1 Динамика IgE-Ат к белку куриного яйца у взрослых с исходно нормальным содержанием общего IgE после введения пандемической вакцины против гриппа,  содержащей штамм А/ California /7/2009 (Н1N1)v

Примечание: V1 – первое введение препарата; V2 – второе введение препарата;

*- p<0,05 различия по сравнению с исходными значениями и через 28 дней после  V1

Уровни IgG-Ат  к органоспецифическим (ОБМ, ткани легкого) и органонеспецифическим (нДНК, дДНК) антигенам определяли у 70 добровольцев. Из них 50 человек были привиты пандемической противогриппозной вакциной Пандефлю, а 20 - в аналогичные сроки получили инъекции плацебо (табл.4). 

Таблица 4

Динамика уровней IgG-Ат к органоспецифическим и органо-неспецифическим  антигенам  у взрослых,  привитых пандемической противогриппозной вакциной  штамм А/California/7/2009/(H1N1)v

Группы исследования

Уровень IgG-Ат (уЕ)  у 95% здоровых доноров к

Уровни IgG-Ат (уЕ) (М±m)

До V

Через 1 мес. после  V1

Через 1мес. после  V2

Группа I

(n=50)

нДНК (85,1)

54,7 ± 15,2

52,6 ± 14,3

53,6  ±15,1

дДНК (88,7)

61,3  ±13,7

60,0 ± 14,5

60,0 ±14,2

ткани легкого (73,0)

51,8 ± 10,6

51,4 ± 11,0

49,9 ± 12,0

ОБМ (93,7)

67,4 ± 13,2

70,2 ± 15,8

68,6 ± 18,6

Группа II

(n=20)

нДНК(85,1)

54,9 ± 13,0

56,5 ± 13,2

56,5 ± 13,2

дДНК (88,7)

59,9 ± 9,4

63,5 ± 10,7

63,3 ± 11,5

ткани легкого (73,0)

47,5 ± 10,4

51,4  ± 11,9

54,3  ± 13,0

ОБМ (93,7)

63,6 ± 11,4

63,0 ± 11,0

65,5  ± 9,9

Примечание: V1- первое введение препарата; V2- второе введение препарата; р>0,05

Как видно из таблицы 4, в процессе вакцинации против пандемического  гриппа не удалось выявить каких-либо статистически значимых изменений уровней аутоантител как в I, так и II группах. За весь период наблюдения уровни аутоантител не превышали таковых у  95% здоровых доноров.

Таким образом, результаты исследований сывороток вакцинированных на наличие аутоантител к органоспецефическим и органеспецифическим Аг свидетельствует об отсутствии динамики их накопления в поствакцинальном периоде,  что косвенно  свидетельствует  об иммунологической безопасности препарата. 

Для выявления взаимосвязи между уровнями  аутоантител и вышеописанными иммунологическими параметрами у добровольцев в процессе вакцинации мы разделили их на 4 подгруппы: 1а - волонтеры с высоким значением общего IgE; 1б - добровольцы с нормальным уровнем общего IgE; 2а – серопозитивные и 2б - серонегативные.  В динамике вакцинации не претерпевали существенных изменений уровни аутоантител как у серопозитивных, так и серонегативных волонтеров, то есть достижение сероконверсии не влияло на содержание IgG-Ат к органоспецефическим и органонеспецефическим антигенам. Корреляционный анализ показал, что уровни IgG-Ат к аутоантигенам не зависят от исходного  значения общего IgE (р> 0,05).

Поскольку интерфероны и являются ведущими цитокинами  противовирусного иммунитета, а ФНО - основным провоспалительным цитокином, мы исследовали их содержание у 58 взрослых при введении  пандемической гриппозной вакцины. Из них  41 (71%)  человек  дважды  получил препарат Пандефлю, а 17 (29%)  - плацебо.

Исходно содержание -ИФН в II группе (плацебо) оказалось несколько выше, чем в I (вакцинированных) - 12,2±6,3 пг/мл  и 6,6±1,8 пг/мл,  соответственно (р>0,05). Через 28 дней во II группе отмечено значительное снижение содержания -ИФН (р<0,05),  а еще через 28 дней  содержание данного цитокина вернулось  к исходным значениям. В тоже время у волонтеров  I группы содержание  -ИФН не менялось в течение всего периода наблюдения  (6,6±1,8 пг/мл, 6,7 ±1,8 пг/мл, 9,95 ±2,9 пг/мл, р>0,05).

Анализ динамики уровней -ИФН в зависимости от продукции противогриппозных Ат показал, что у привитых, не ответивших сероконверсией на введение вакцины,  исходный уровень -ИФН оказался значительно выше, чем в группе серопозитивных волонтеров - 17,6±9,3 пг/мл и 5,1±1,5 пг/мл, соответственно,  p<0,05, (табл. 5).  Так же и через 28 дней после первой вакцинации содержание -ИФН в группе серонегативных волонтеров оставалось выше,  чем в группе серопозитивных - 17,6±7,3 пг/мл и 5,2±1,6 пг/мл, соответственно,  p<0,05. К 56 дню наблюдения уровни данного цитокина как в  группе не ответивших сероконверсией, так и  у серопозитивных добровольцев оказались сопоставимы - 14,5±4,3 пг/мл и 9,3±3,3 пг/мл, соответственно, р>0,05.

Таблица 5

Динамика  -ИФН у взрослых, привитых пандемической вакциной против гриппа

Группы исследования

Уровни -ИФН (пг/мл) (М±m)

До V1

Через 1 мес. после V1

Через 1 мес. после V2

Группа I

Всего (n=41)

6,6 ± 1,8

6,7 ± 1,8

9,95 ± 2,9

Серопозитив. (n=36)

5,1 ± 1,5

5,2 ± 1,6

9,3 ± 3,3

Серонегатив. (n=5)

17,6 ± 9,3*

17,6 ± 7,3*

14,5 ± 4,3

Группа II

Всего (n=17)

12,2 ± 6,3

4,9 ± 2,4

11,7  ± 4,7

Примечание:V1- первое введение препарата; V2- второе введение препарата; * -  p<0,05 различия по cравнению с серопозитивными 

Анализ корреляций показал,  что имеется  отрицательная взаимосвязь между уровнем -ИФН  и сероконверсией (r > |0,3|, p <0,05).

В целом в наблюдаемых группах в динамике не отмечено значительных изменений уровня  -ИФН (табл. 6). В то же время при анализе в зависимости от исходных значений -ИФН отмечено, что среди привитых 20 (49%) человек имели высокие значения  данного показателя (более 10 пг/мл), а  у 21 (51%) волонтера его уровень был в пределах нормальных значений (0 - 10  пг/мл). В динамике у взрослых с исходно высоким уровнем -ИФН не отмечено существенных изменений.  Однако, в группе привитых с исходно низкими значениями -ИФН  к 56-му дню наблюдения они достоверно увеличились (р<0,05). Во II группе (плацебо) значительных изменений уровня  -ИФН  не отмечено. 

Анализ взаимосвязи между исходным уровнем -ИФН и продукцией поствакцинальных Ат к вирусу гриппа показал значительно более высокое содержание -ИФН  у серонегативных по сравнению с серопозитивными волонтерами. Анализ корреляций выявил, что существует отрицательная связь между уровнем  -ИФН и сероконвесией (r >|0,3|,  p <0,05).

Таблица 6

Динамика  -ИФН  у взрослых, привитых пандемической противогриппозной вакциной

Группы исследования

Уровни -ИФН (пг/мл) (М±m)

До V1

Через 1 мес. после V1

Через 1 мес. после V1

Группа I

Всего (n=41)

12,4 ± 3,8

21,2 ± 7,9

14,0 ± 4,7

С высоким уровнем (>10) (n=20)

17,5  ± 1, 2

21,5 ± 2,5

16,4  ± 1,2

С нормальным уровнем (0-10)

(n=21)

2,7 ± 0,8

3,4 ± 2,2

5,8 ± 0,2*

Серопозитивные 

(n=36)

8,7 ± 1,3

17,2 ± 6,9

8,7 ± 1,1

Серонегативные

(n=5)

43,4  ± 29,7

52,9 ± 42,5

52,2 ± 43,7

Группа II

Всего (n=17)

47,6 ± 18,9

47,4 ± 23,5

34,3 ± 15,9

С высоким уровнем (>10) (n=12)

30,5 ± 4,4

27,1  ± 2,1

22,5 ± 2,2

С нормальным уровнем (0-10) (n=5)

8,0 ± 0,8

7,1 ± 0,8

9,2 ± 0,2

Примечание: V1- первое введение препарата; V2- второе введение препарата;

* - p<0,05 различия  по cравнению с  исходными значениями;

  - p<0,05 различия  по cравнению серопозитивными.

 

Исследование цитокинового профиля показало, что исходный уровень ФНО в обеих группах исследования был близок к принятой норме (0-6 пг/мл) и не претерпевал значительных изменений за весь период наблюдения (табл. 7). В то же время, после двукратного введения вакцины средний уровень ФНО у вакцинированных оказался  достоверно ниже, чем в  группе плацебо (p<0,05). Хотя, концентрации ФНО в группе плацебо в течение наблюдения не превышали нормы установленной для здоровых взрослых (0-6 пг/мл).

Таким образом, исследование сывороток взрослых выявило, что двукратное введение противогриппозной вакцины не сопровождается изменением концентрации ФНО.  

Таблица 7

Динамика содержания  ФНО у вакцинированных

пандемической противогриппозной вакциной

Группы исследования

Уровни ФНО (пг/мл) (М±m)

До V1

Через 1 мес. после V1

Через 1 мес. после V2

Группа I

всего (n=41)

0,9  ± 1,8

1,1 ± 2,1

0,9 ± 1,8

Группа II

всего (n=17)

1,3 ± 1,6

1,7 ± 1,9

2,6 ± 2,2*

Примечание: V1 - первое введение препарата; V2 - второе введение препарата;

* - p<0,05  различия между группами

Содержание -ИФН у волонтеров с его исходно нормальным уровнем (0- 10 пг/мл) возросло после второй вакцинации с 2,66±2,5 пг/мл до 5,21±2,6 пг/мл (р<0,05). Анализ корреляций показал,  что имеется   обратная связь между уровнями -  и/или  -ИФН и интенсивностью антителообразования к вакцинному штамму вируса гриппа.

***

Проведенное исследование показало, отсутствие влияния пандемической вакцины против гриппа на параметры аутоиммунитета и содержание цитокинов ФНО и -ИФН. Снижение концентрации  общего IgE у лиц с его исходно высоким значением в поствакцинальном периоде свидетельствует о иммунокоррегирующем действии препарата, хотя существует вероятность сенсибилизации организма привитого к одному из компонентов среды культивирования вакцинного штамма.  Наличие высокого уровня -  и/или - интерферонов в сыворотке крови пациентов до вакцинации может служить предиктором недостаточной эффективности иммунизации.

Выводы.

  1. Установлено, что уровень общего IgE не влияет на выработку поствакцинальных антител к вирусу пандемического гриппа. Вакцинация не сопровождается изменением среднего содержания общего IgE, но способствует снижению данного показателя у лиц с его исходно высоким значением.
  2. Выявлено, что у 42,9% волонтеров с исходно нормальным содержанием общего IgE повторное введение вакцины против пандемического гриппа приводит к увеличению концентрации IgE-антител к белку куриного яйца без развития аллергических реакций.
  3. В поствакцинальном периоде  у взрослых не отмечено повышения  концентраций IgG-Ат к нДНК, дДНК, антигенам ткани легкого и к основному белку миелина.
  4. Двукратное введение пандемической вакцины против гриппа не приводит к изменению содержания ФНО и -ИФН вне зависимости от  исходного уровня данных цитокинов в сыворотке крови пациентов, однако вызывает нарастание уровня -ИФН у лиц с его исходно низким (0-10 пг/мл) содержанием.
  5. Установлена обратная корреляционная связь между содержанием - и  -ИФН и выработкой специфических антител к вирусу гриппа (r =0,3 ; р<0,05).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Зверев В.В. Вакцина Пандефлю: Результаты клинических исследований безопасности, реактогенности и иммуногенности / Зверев В.В., Миронов А.Н., Костинов М.П., Теркачева О.А. и др. // Вестник Уральской медицинской академической науки.- Екатеринбург.-2009.- № 4. - С. 105-106.
  2.   Зверев В.В. Результаты клинических исследований безопасности и реактогенности вакцины гриппозной инактивированной субъединичной адсорбированной моновалентной, штамм  А/CALIFORNIA/7/2009 (Н1N1)v – Пандефлю / Зверев В.В., Миронов А.Н., Костинов М.П., Михайлова Н.А., Теркачева О.А. и др. //  Эпидемиология и вакцинопрофилактика.- Москва.- 2010. –  № 4. - С. 86-90.
  3.   Зверев В.В. Иммуногенность вакцины гриппозной инактивированной субъединичной адсорбированной моновалентной, штамм A/California/7/2009 (H1N1) / Зверев В.В., Костинов М.П., Михайлова Н.А., Теркачева О.А. и др. // Вопросы вирусологии. - 2011. - № 3. - С. 20-23.
  4.   Костинов М.П. Оценка иммунологических сдвигов у взрослых после введения вакцины противогриппозной инактивированной субъединичной адсорбированной моновалентной, штамм А/California/7/2009/(H1N1)v / Костинов М.П., Теркачева О.А., Жирова С.Н., Ястребова Н.Е. // Медицинская иммунология. - Санкт-Петербург.- 2011. -Т. 13. - № 1. - С. 35-40.
  5.   Теркачева О.А. Динамика цитокинов у взрослых после введения пандемической  гриппозной вакцины /  Теркачева О.А., Костинов М.П., Жирова С.Н., Черданцев А.П. //  Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -  2012.- №1.-С.30-35.
  6.   Костинов М.П. Ig-E ответ после введения пандемической вакцины штамм А/ California /7/2009 (Н1N1)v /  Костинов М.П., Теркачева О.А., Жирова С.Н. и др. // Вестник Российской академии медицинских наук – Москва. – 2012. – принято в печать.






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.