WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

ЧУГУНОВА

Анастасия Александровна

клинико-иммунологическая характеристика беременных с невынашиванием и антифосфолипидным синдромом

14.01.01 – акушерство и гинекология

14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург – 2012

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Минздравсоцразвития РФ

Научные руководители:

доктор медицинских наук       Зайнулина Марина Сабировна

доктор медицинских наук,  профессор Сельков Сергей Алексеевич

Официальные оппоненты:

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» Минздравсоцразвития РФ, профессор кафедры репродуктивного здоровья

женщин

Репина Маргарита Александровна

член-корреспондент РАМН,

доктор медицинских наук, профессор, ФБУН «СПб НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера», заместитель директора по научной работе

       

  Тотолян Арег Артемович

 

Ведущая организация: ФГБВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны РФ.

Защита состоится  «____» ____________________ 2012 г. в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 001.021.01 при ФГБУ «НИИАГ им. Д.О. Отта» СЗО РАМН (199034, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «НИИАГ им. Д.О. Отта» СЗО РАМН.

Автореферат разослан «___»  _________________  2012 г.

Учёный секретарь 

диссертационного совета

доктор медицинских наук  Кузьминых Татьяна Ульяновна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования.  Важнейшей проблемой практического акушерства до настоящего времени является невынашивание беременности,  по мнению большинства исследователей часто обусловленное антифосфолипидным синдромом (АФС), в патогенезе которого основную роль играют иммунные нарушения  (Насонов Е.Л., 2004;  Chong P.J., 2005; Urbanus R.T., 2008; Макацария А.Д., 2009).

Акушерская патология встречается у 76-81% женщин с антифосфолипидным синдромом, при этом относительный риск плацентарной недостаточности составляет 50%, внутриутробной гибели плода 4,5%, синдрома задержки развития плода  46%, тромбозов – до 53,1%, угрожающего аборта – 46%, преждевременных родов – 42 %, гестоза – 46,2%, артериальной гипертензии – 15,6% (Carp H.J., 2007; Berkin Y., 2008).

У пациенток с невынашиванием  беременности АФС выявляется в 27-42% случаев (Hughes G.R.V., 1983; 1993; Harris E.N., 1983; 1999),  вероятность вынашивания беременности составляет 30% после 3 выкидышей, 25 %  после 4 выкидышей, 5%  после 5 выкидышей.  В то же время при адекватной патогенетической терапии вероятность благополучного исхода беременности составляет 70-85% (Chong P.J., 2005; Макацария А.Д., 2009). 

В последние годы внимание исследователей привлекает роль естественных Т-регуляторных клеток (Тreg) в индукции толерантности к аллоантигенам плода (Sakaguchi D.S., 1996; Ярилин А.А., Донецкова Ф.Д., 2005; Сельков А.В., Селютин А.В., 2008). Данные последних лет о способности Тreg ингибировать цитотоксическую активность CD8 Т-лимфоцитов (Chen M.L. et al., 2005) и NК-клеток (Trzonkowski P. et al., 2006) позволяют расценивать Тreg в качестве основных претендентов на роль клеток, контролирующих иммунный баланс в системе «мать-плод», а также предположить их участие в патогенезе АФС при беременности. Однако  сообщения об этом в доступной литературе практически отсутствуют.

Следует отметить, что  в настоящее время не существует единых  терапевтических рекомендаций в отношении иммунотерапии АФС. Особое внимание исследователи уделяют иммуносупрессии (глюкокортикоидами /цитостатиками) и иммуномодуляции, например, с помощью препаратов иммуноглобулинов (Sapir T., Shoenfeld Y., 2005; Carp H.J. et al., 2006; Trzonkowski P. et al., 2006). Возможности пассивной иммунотерапии путем введения внутривенных иммуноглобулинов (ВВИГ) в последние годы интенсивно обсуждаются, ряд исследователей сообщают об эффективности этого метода лечения при привычном невынашивании беременности  (Christiansen O.B. et al., 2002; 2010; Stephenson M. et al., 2010). Однако некоторые исследователи подвергают сомнению целесообразность  использования ВВИГ при невынашивании беременности (Hutton B. et al., 2007).

Таким образом, лечение АФС у беременных представляет собой сложную проблему, что обусловлено неоднородностью патогенетических механизмов, лежащих в основе данного синдрома, отсутствием достоверных клинических и лабораторных показателей, позволяющих прогнозировать риск развития тромботических и акушерских осложнений. Течение АФС является труднопрогнозируемым, а универсальные схемы лечения отсутствуют. При этом следует учитывать  полярные точки зрения на эффективность ВВИГ, что свидетельствует о необходимости проведения исследований по оценке клинической эффективности и безопасности  применения этой группы лекарственных средств у беременных с антифосфолипидным синдромом.

Цель исследования:  совершенствование диагностики и терапии  беременных с антифосфолипидным синдромом и невынашиванием.

Задачи исследования

  1. Охарактеризовать клинические особенности течения беременности у женщин с АФС.
  2. Изучить содержание антифосфолипидных антител (АФА), показатели иммунного статуса и состояние системы гемостаза в I триместре беременности у женщин с АФС и невынашиванием.
  3. Определить содержание антифосфолипидных антител, показатели системы гемостаза и иммунного статуса у беременных с АФС и невынашиванием с ретрохориальной гематомой (РХГ) в I триместре беременности.
  4. Оценить уровни антифосфолипидных антител и показатели свертывающей системы после иммуномодулирующей терапии в I  и II триместрах беременности у женщин с АФС и невынашиванием.
  5. Исследовать изменения иммунного статуса после иммуномодулирующей терапии у беременных с АФС и невынашиванием в I триместре.
  6. Изучить клиническую эффективность применения внутривенных иммуноглобулинов у беременных с АФС и невынашиванием.

Научная новизна и теоретическая значимость работы. В работе впервые показаны  изменения баланса регуляторных субпопуляций иммунокомпетентных клеток у беременных с АФС и невынашиванием. Полученные данные подтверждают гипотезу о патогенетической роли Т-регуляторных лимфоцитов в развитии нарушений течения гестационного периода  при АФС.

Впервые продемонстрировано  положительное влияние терапии лекарственным средством из группы внутривенных иммуноглобулинов на течение и исходы беременности у женщин с АФС, сочетающееся с нормализацией показателей системы свертывания крови и снижением концентраций антифосфолипидных антител.

Выявлено снижение частоты осложнений беременности при использовании препаратов внутривенных иммуноглобулинов в I триместре беременности, при этом установлено, что у беременных с АФС положительный эффект применения ВВИГ сопровождается изменением соотношения субпопуляций лимфоцитов.

Показано, что использование этих лекарственных средств способствует нормализации баланса иммунокомпетентных клеток, в частности, приводит  к повышению уровня  Т-регуляторных лимфоцитов.

Впервые показано, что развитие РХГ у беременных с АФС  сопровождается выраженным дисбалансом в содержании иммунокомпетентных клеток в периферической крови: снижением уровня регуляторных Т-лимфоцитов,  Т-лимфоцитов-хелперов и уменьшением  активности NK-клеток. Доказана клиническая эффективность применения препаратов ВВИГ у беременных с АФС при развитии РХГ, сопровождающаяся улучшением показателей гемостаза и иммунных параметров.

Практическая значимость работы. Полученные в работе данные свидетельствуют о необходимости проведения исследований показателей, связанных с участием иммунной системы в развитии и регуляции аутоиммунных процессов женщин с АФС и невынашиванием. Полученные в работе данные свидетельствуют о необходимости проведения лабораторных иммунологических исследований второго уровня (тестов II уровня)  женщин с АФС и невынашиванием. Показано, что при изучении иммунного статуса у данного контингента целесообразно оценивать содержание иммунокомпетентных клеток, в частности, Т-регуляторных лимфоцитов.

Полученные данные свидетельствуют о клинической эффективности и безопасности использования препаратов ВВИГ в I триместре беременности у женщин с АФС и невынашиванием. Использование ВВИГ рекомендовано пациенткам с наличием АФА и изменениями в системе гемостаза, свидетельствующими о риске развития тромбофилических осложнений.

Результаты работы свидетельствуют о том, что использование ВВИГ является эффективным  направлением патогенетической терапии у женщин с РХГ на фоне АФС.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

  1. У беременных с антифосфолипидным синдромом и невынашиванием повышен уровень антител к отрицательно заряженным фосфолипидам,  к 2-гликопротеину, к протромбину, имеются выраженные нарушения в системе гемостаза (повышение степени и скорости индуцированной агрегации тромбоцитов, уровня Д-димеров), изменения баланса субпопуляций лимфоцитов в периферической крови (снижение абсолютного и относительного содержания регуляторных Т-лимфоцитов, повышение относительного содержания В-лимфоцитов, цитотоксических Т-лимфоцитов). В наибольшей степени эти нарушения выражены у беременных с развившейся РХГ.
  2. Использование внутривенных иммуноглобулинов в комплексной терапии у беременных с антифосфолипидным синдромом и невынашиванием в I триместре  беременности приводит к статистически значимому снижению уровней антифосфолипидных антител, нормализует  показатели свертывающей системы крови и  баланс иммунокомпетентных клеток.
  3. Применение внутривенных иммуноглобулинов в комплексной терапии у беременных с АФС и невынашиванием оказывает выраженный клинический эффект, снижая частоту  осложнений беременности гестоза, угрозы преждевременных родов, плацентарной недостаточности, задержки внутриутробного развития плода.

Апробация работы и внедрение  в практику. Материалы диссертации доложены на XIV Всероссийском научном форуме с международным участием им. академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии», Санкт-Петербург, 2011; на конкурсе грантов правительства Санкт-Петербурга  для студентов, аспирантов ВУЗов и академических институтов, Санкт-Петербург, 2010; на XII Всероссийском научном форуме  «Мать и дитя 2011», Москва, 2011; на Национальном конгрессе «Дискуссионные вопросы современного акушерства», Москва, 2011; на конференции  «Иммунология репродукции. Теоретические и клинические аспекты», Иваново, 2012.

Основные положения диссертации внедрены в работу акушерского отделения патологии беременности ФГБУ «НИИАГ им. Д.О. Отта» СЗО РАМН, в учебный процесс кафедры акушерства и гинекологии СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова.

По теме диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 3 статьи в рецензируемых научных журналах и изданиях.

Структура и объем диссертации.  Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, описания и обсуждения результатов собственных исследований, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 61 отечественный и 178 зарубежных источник. Материалы диссертации изложены на 140 страницах машинописного текста, иллюстрированы 19 таблицами и 17 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и  методы исследования

Для решения поставленных задач в период с 2009 по 2011 г. проведено обследование 200  женщин репродуктивного возраста на базах  НИИАГ им Д.О. Отта, женских консультаций, в клиниках СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова; в родильном доме № 6 им. проф. В.Ф. Снегирева. Все пациентки подписали письменное информированное согласие на участие в исследовании. Из обследованных женщин в исследование были включены 186,  соответствовавших критериям включения и исключения.

Критерии  включения:

1.Женщины репродуктивного возраста с АФС.

2. Наличие в анамнезе невынашивания беременности.

3. I триместр беременности.

Критерии исключения:

1. Дефицит в крови Ig A.

2. Почечная, печеночная недостаточность.

3. Пороки развития и доброкачественные новообразования матки.

4. Наличие эндокринных, генетических или инфекционных факторов  невынашивания.

АФС диагностировали в соответствии с Международными лабораторными критериями (Sydney Consensus Workshop, Sydney, 2006).

Беременных включали в исследование на сроке 5-7 недель беременности.

В ходе лечения беременных с АФС и невынашиванием в параллельных группах  было проведено открытое сравнительное рандомизированное исследование по оценке эффективности и безопасности препарата ВВИГ Интратекта. Методом рандомизации с помощью открытой таблицы случайных чисел пациентки  с АФС и невынашиванием (n=113) были разделены на 2 группы:

1) основная группа (n=55) помимо традиционной противотромботической терапии (антиагреганты тромбо-асс, антикоагулянты – фраксипарин, препараты магния, препараты фолиевой кислоты в лечебных дозах) беременные  получали препарат из группы ВВИГ  Интратект («Биотест фарма», Германия);

2) группа сравнения (n=58) – беременные, получали только традиционную противотромботическую терапию.

В  контрольную группу вошли  49 женщин  с физиологическим течением беременности.

При оценке иммунологических показателей использовали результаты обследования здоровых небеременных женщин, в анамнезе у которых были  одни и более родов (n=24).

Пациентки основной группы получали препарат из группы ВВИГ в курсовой дозе 600 мл (30 г). Вводили по 100 мл (5 г) внутривенно капельно 1 раз в неделю, 3 недели подряд в I и II триместре. Лечение начинали на одинаковых сроках беременности (7 недель), затем лабораторные показатели беременных этих групп сравнивали в I и II триместре беременности спустя 1 неделю после окончания лечения.

У 9 пациенток группы сравнения и 12 женщин из основной группы была выявлена  РХГ. Показатели беременных из этих подгрупп сравнивали отдельно.

Возраст пациенток в группах составил от 22 до 39 лет (30,0+7,0 лет), достоверных возрастных межгрупповых  отличий не было.

Частота выявления клинических критериев АФС у обследуемых беременных с невынашиванием составила:

- сосудистый тромбоз – один и более клинических эпизодов артериального или венозного тромбозов или тромбоза мелких сосудов в любом органе или ткани  – 22,1% (n=25);

- одна и более необъяснимые смерти морфологически нормального плода при сроках 10 и более недель беременности – 12,3% (n=14);

- одни и более преждевременные роды до 37 недель беременности, протекавшей с тяжелым гестозом или тяжелой плацентарной недостаточностью, с рождением морфологически нормального плода – 23,0% (n=26);

- три и более необъяснимых последовательных прерывания беременности на сроке до 10 недель – 70,8% (n=80).

В ходе лабораторного  обследования беременных с  АФС и невынашиванием до начала лечения волчаночный антикоагулянт был выявлен в  16,8% (n=19) случаях; антифосфолипидные антитела  – у 22,1% (n=25) женщин; антитела к 2-гликопротеину  - у 72,6% (n=82) женщин, к протромбину  у 31,9 % (n=36), к аннексину V– у 16,8 % (n=19) беременных.

При этом сочетание двух лабораторных критериев было выявлено в 29,2% (n=33) случаях, сочетание трех лабораторных критериев – у 15,1% (n=17) беременных.

Ультразвуковая фетометрия и допплерометрия плодово-плацентарного и маточно-плацентарного кровотоков проводилась специалистами отделения  ультразвуковой диагностики лаборатории физиологии и патофизиологии плода НИИАГ им Д.О. Отта с помощью ультразвукового диагностического прибора «Medison SonoAce - 8000 live» (Корея), оснащенного допплеровским блоком.

При ультразвуковом исследовании выполняли фетометрию плода, оценивали расположение плаценты,  степень ее зрелости, количество околоплодных вод.

Лабораторные исследования проводились в лаборатории биохимии с клинико-диагностическим отделением и в лаборатории иммунологии НИИАГ им. Д.О. Отта.

Определение концентраций аутоантител включало оценку уровня антифосфолипидных антител (к кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу, фосфатидиловой кислоте), антител к 2-гликопротеину, волчаночного антикоагулянта, антител к аннексину V, к протромбину и уровень аннексина V. Исследование проводили методом твердофазного ELISA с использованием коммерческих тест-систем  фирмы Orgentec Diagnostika GmbH (Германия).

Изучение тромбоцитарного звена гемостаза проведено методом индуцированной агрегации тромбоцитов с аденозиндифосфатом (АДФ) (в концентрации 2мкМ и 0,2 мкМ). Уровень Д-димеров в плазме крови определяли методом иммуноферментного анализа с использованием реактивов Technoclone (США). Оценку активности фактора Виллебранда выполняли с помощью агрегометра «Биола».

Оценку количества субпопуляций лимфоцитов выполняли на проточном цитофлуориметре FacsCanto II («Beckton Dickinson», США). Фенотип клеток определяли с помощью моноклональных антител (мАТ), при этом оценивали абсолютное и относительное содержание лимфоцитов с фенотипом CD3+ (Т-лимфоцитов),  CD3+CD4+ (Т-хелперов), CD3+СD8+ (цитотоксических Т-лимфоцитов),  CD19+ (В-лимфоцитов),  CD16+/CD56+ (NK-клеток).

Для определения Т-регуляторных (Тreg) лимфоцитов, были использованы конъюгированные с флюорохромами мАТ к лимфоцитарным антигенам CD3-FITC, CD4-PE-Cy7, CD25-APC,  CD127-PE; кроме того, для иммуномагнитного выделения CD4+-лимфоцитов использовались антитела к CD4, конъюгированные с магнитными микрочастицами (Сельков С.А., Селютин А.В., 2008). Т-регуляторные лимфоциты характеризовали как клетки с фенотипом CD3+CD4+CD127low.

Для оценки содержания активированных NK-клеток окраска клеток цельной периферической крови антителами CD3, CD16, CD56, CD107a осуществлялась в соответствии с указаниями производителя (BD, США). Затем периферическую кровь инкубировали в присутствии стандартного лизирующего раствора для лизиса эритроцитов. Оценивали количество NK-клеток периферической крови, экспрессирующих CD107a – гликопротеин, ассоциированный с лизосомальными мембранами и отражающий степень активации NK-клеток.

Исследования показателей гемостаза и уровня антител проводили в  I и II  триместрах беременности, иммунологические исследования были проведены в I триместре беременности.

Статистическая обработка полученных данных выполнена на ПК при помощи пакета программ для статистической обработки данных STATISTICA for Windows 7,0. Использовали методы параметрической и непараметрической статистики. Методы описательной статистики включали в себя оценку среднего арифметического (М), средней ошибки среднего значения (m) – для признаков, имеющих непрерывное распределение, а также для частоты встречаемости признаков с дискретными значениями. Определение достоверности различий между качественными показателями сравниваемых групп проводили с помощью критерия 2 (хи-квадрат) с учетом поправки Йетса для сравнения частот бинарного признака в двух несвязанных группах парных сравнений. Для оценки различий значений количественных показателей в разных группах применяли t-критерий Стьюдента для независимых выборок (после проверки распределения признаков на соответствие закону нормального распределения по критерию Колмогорова-Смирнова) или непараметрический U-критерий Манна-Уитни.

Для определения наличия количественной характеристики  выраженности связи между лабораторными параметрами и частотой развития осложнений беременности проводили корреляционный анализ с использованием рангового коэффициента корреляции Спирмена (R). Для данного вида анализа использовали абсолютные значения клинико-лабораторных параметров (количественных показателей); оценку качественных показателей проводили по системе 1 – есть, 0 – нет.

Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы принимали равным 0,05.

Результаты исследований и их обсуждение

Лабораторные показатели беременных с АФС и невынашиванием до лечения. Установлено, что  большинство сравниваемых параметров гемостаза  – степень и скорость агрегации тромбоцитов, уровень Д-димеров и фактора Виллебранда у беременных с АФС и невынашиванием было достоверно выше, чем у пациенток с физиологической беременностью (p<0,05) (табл. 1).

Таблица 1

Показатели гемостаза у обследуемых беременных до лечения ВВИГ

       в I триместре беременности (M+m)

Показатели

Контроль (физиологическая беременность)  (n=49)

Беременные с АФС и невынашиванием (n=113)

Степень агрегации тромбоцитов, %

65,3+5,2

90,8+4,2*

Скорость агрегации тромбоцитов, %/мин

73,2+4,9

106,1+6,5*

Фактор Виллебранда,

МЕ/мл

1,69+0,17

2,54+0,31*

Д-димеры, нг/мл

267,2+37,2

379,4+44,5*

Примечание:  *  –  различия достоверны (p<0,05) при сравнении с контролем

У беременных с АФС и невынашиванием в сыворотке крови в высоких титрах обнаруживаются антифосфолипидные антитела, антитела к 2-гликопротеину, антитела к протромбину, повышенный уровень аннексина V.

Исследование позволило выявить у беременных с АФС и невынашиванием и изменения иммунного статуса,  при этом отмечен дисбаланс содержания основных субпопуляций лимфоцитов в периферической крови (табл. 2).

Таблица 2

Иммунологические показатели обследуемых беременных до лечения  ВВИГ (M+m)

Показатели

Здоровые женщины-доноры

(n=24)

Контроль (физиологическая беременность)  (n=49)

Беременные АФС и невынаши-ванием (n=113)

Treg, %

CD3+CD4+CD127low

6,79+1,15

6,86+0,87

3,80+0,46*#

Treg, абс.

(x103) /мкл CD3+CD4+CD127low

0,111+0,019

0,112+0,014

0,062+0,008*#

CD3+, %

74,2+8,5

75,1+6,1

74,2+7,3

CD3+, абс.

(x103) /мкл

1,21+0,22

1,32+0,19

1,34+0,16

CD19+, %

В-лимфоциты

12,0+0,6

10,9+0,9

16,7+1,2*#

CD19+, абс.

В-лимфоциты (x103) /мкл

0,20+0,05

0,18+0,03

0,24+0,06

CD4+, %

Т-хелперы

47,2+2,9

46,6+5,1

45,6+6,2

CD4+, абс.

Т-хелперы (x103) /мкл

0,78+0,06

0,78+0,09

0,90+0,11

CD8+, %, цитотокси-ческие-Т-лимфоциты

24,9+3,2

28,5+1,9

34,0+2,8*#

CD8+, абс. цитотоксические-Т-лимфоциты

(x103) /мкл

0,40+0,05

0,47+0,02

0,50+0,05

CD16+CD56+, %

NK-клетки

11,1+1,3

8,7+0,4*

8,3+0,7*

CD16+CD56+, абс.

NK-клетки (x103) /мкл

0,18+0,02

0,15+0,04

0,09+0,02*#

CD16+CD56+CD107a

активированные

NK-клетки, %

38,4+5,6

43,1+6,7

23,5+7,1*#

Примечание:

* -  различия достоверны (p<0,05) при сравнении с группой здоровых женщин-доноров

# - различия достоверны (p<0,05) при сравнении с контролем

Так, значения показателей относительного и абсолютного содержания Treg в периферической крови у беременных с АФС и невынашиванием были достоверно (p<0,05) ниже, чем у пациенток контрольной группы и у здоровых доноров. Значимо повышены были у женщин с АФС и невынашиванием и показатели относительного содержания CD19+ и CD8+лимфоцитов, в то же время – снижено относительное и абсолютное количество  CD16+CD56+ – клеток и уровень активированных NK-клеток. 

Еще более выраженные изменения изученных показателей были отмечены у беременных с АФС и невынашиванием с развитием РХГ (табл.3).

Таблица 3

Лабораторные показатели у беременных с РХГ и без РХГ до лечения ВВИГ (M+m)

Показатели

Беременные с АФС и невынашиванием

Беременные без РХГ

(n=92) 

Беременные с РХГ

(n=21)

Степень агрегации тромбоцитов, %

90,8+4,2

107,4+6,1*

Скорость агрегации тромбоцитов, %/мин

104,3+5,7

114,2+9,0

Фактор Виллебранда,

МЕ/мл

2,69+0,21

2,84+0,18

Д-димеры, нг/мл

352,1+39,7

403,4+28,3*

АФА, Ед/мл

17,0+2,8

22,2+2,0*

АТ к 2-гликопротеину, Ед/мл

38,4+6,2

55,2+7,0*

АТ к аннексину, Ед/мл

3,9+0,4

5,6+0,8*

АТ к протромбину, Ед/мл

8,7+1,7

12,8+2,3*

Treg, %

CD3+CD4+CD127low

3,90+0,40

2,52+0,36*

CD3+, %

72,5+5,8

70,3+6,9

CD19+, %.

В-лимфоциты

16,3+2,4

19,8+1,8

CD4+, %

Т-хелперы

46,5+4,9

39,4+3,8*

CD8+, %

цитотоксические-Т-лимфоциты

33,2+3,5

38,1+3,3

CD16+CD56+, %

NK-клетки

8,5+0,8

9,1+2,6

Примечание: *  -  различия достоверны (p<0,05) при сравнении с группой без РХГ

У беременных с РХГ было достоверно (p<0,05) увеличено значение показателя степени агрегации тромбоцитов, уровня Д-димеров, уровни всех оцениваемых антител (АТ) по сравнению с соответствующими показателями у женщин с АФС и невынашиванием без РХГ. Обращало на себя внимание, что уровень АТ к 2-гликопротеину у беременных с РХГ более чем в 1,5 раза превышал аналогичный показатель у пациенток без РХГ.

Оценка иммунологических параметров также свидетельствовала об отличиях в содержании основных субпопуляций иммунокомпетентных клеток в периферической крови в группах женщин с РХГ и без РХГ. При этом у беременных с РХГ был достоверно ниже показатель содержания Тreg и СD4+ лимфоцитов (p<0,05).

Динамика лабораторных показателей у беременных с АФС и невынашиванием  под влиянием лечения ВВИГ. На фоне лечения обследуемых женщин в I триместре у пациенток основной группы (получавших ВВИГ в составе комплексной терапии) значимо изменились показатели гемостаза относительно соответствующих значений до лечения и в группе сравнения (p<0,05) (табл. 4).

Наблюдалось также выраженное уменьшение концентраций антител: у беременных основной группы  были достоверно ниже, чем до лечения и в группе сравнения, уровни АФА, антител к 2-гликопротеину и аннексину (p<0,05). Волчаночный антикоагулянт также обнаруживался у пациенток группы сравнения, тогда как у женщин основной группы не определялся.

В целом результаты обследования женщин в I триместре беременности свидетельствовали, что проведенный курс терапии способствовал нормализации показателей гемостаза. Применение препаратов иммуноглобулинов приводило также к выраженному снижению уровней АФА у беременных. После второго курса терапии при сроке беременности 24 недели оценка лабораторных показателей беременных основной группы и группы сравнения также показала ряд отличий, хотя они и не были столь выраженными. Тем не менее, значения уровня Д-димеров, концентрации АФА и антител к 2-гликопротеину были достоверно ниже, чем у беременных группы сравнения (p<0,05) (табл. 4).

Проведенное лечение способствовало  и улучшению показателей у пациенток с РХГ, получавших лечение ВВИГ, что проявлялось нормализацией параметров гемостаза и снижением уровней АФА у этих женщин через неделю после окончания терапии.

При оценке иммунного статуса обследуемых беременных была выявлена существенная динамика показателей у пациенток с АФС и невынашиванием, получавших ВВИГ в составе комплексной терапии. Как представлено в табл. 5, у женщин, получавших ВВИГ после проведенного лечения наблюдалось увеличение уровня Тreg, практически до аналогичного  в контрольной группе (6,27+1,32%), в то время как у беременных группы сравнения количество этих клеток оставалось  прежним  – 3,42+0,28%. Были выявлены сдвиги данного параметра и в подгруппах женщин с РХГ: у пациенток, получавших только традиционное лечение, значение показателя было сниженным – 2,74+0,46%, тогда как у женщин, получавших ВВИГ, уровень Тreg  был достоверно (p<0,05)  выше и составил  5,06+1,14%.

Таблица 4

Лабораторные показатели у беременных с АФС и невынашиванием

в динамике  при лечении ВВИГ (M+m)

Показатели

I триместр

II триместр

Группа сравнения

(n=55)

Основная группа

(n=58)

Группа сравнения

(n=55)

Основная группа

(n=58)

Степень агрегации, %

92,3+4,9

80,9+3,4 *

80,1+4,8

73,7+5,2

Скорость агрегации,

%/мин

102,3+6,8

88,8+5,2*

89,1+3,6

84,5+4,5

Фактор Виллебранда,

МЕ/мл

2,81+0,28

2,30+0,40

3,61+1,13

2,34+0,22

Д-димер, нг/мл

385,2+19,5

210,4+20,2*

427,7+48,6

308,1+44,1*

АФА Ед/мл

14,4+2,8

6,6+1,3*

9,2+1,1

4,7+1,2*

АТ к 2-гликопротеину, Ед/мл

37,4+7,7

10,3+6,4*

30,1+2,2

22,8+1,8*

АТ к аннексину,

Ед/мл

3,8+0,2

2,7+0,4*

2,8+0,5

2,1+0,4

АТ к протромбину,

Ед/мл

8,2+1,8

6,2+1,4

6,9+0,8

5,6+0,7

Примечание: * - различия достоверны (p<0,05) относительно  группы сравнения

По содержанию в периферической крови CD3+ и  CD4+лимфоцитов, в группах обследованных беременных не было отмечено существенных различий в то же время лечение препаратами ВВИГ способствовало нормализации уровня В-лимфоцитов: значение этого показателя у женщин основной группы снизилось до 10,9+1,2% и было достоверно ниже такового в группе сравнения  (15,2+0,9%) (p<0,05). После проведенного лечения у беременных основной группы было отмечено выраженное снижение уровня CD8+ (цитотоксических Т-лимфоцитов) в периферической крови – до 24,8+3,4%. Последнее значение было достоверно ниже аналогичного показателя у больных группы сравнения  – 32,5+1,6% (p<0,05)  . 

В подгруппах пациенток с РХГ сдвиги иммунологических показателей были еще более выражены, при этом у беременных основной группы было значимо выше относительное содержание Treg и CD16+CD56+ (NK-клеток) в периферической крови, в то время как уровни CD8+  и CD 19+  были достоверно ниже соответствующих значений в группе сравнения (p<0,05) (табл. 5).

Таблица 5

Субпопуляции иммунокомпетентных клеток у беременных с АФС и невынашиванием после лечения  ВВИГ (M+m)

Показатели

Группа сравне-ния

(n=58)

Основная группа

(n=55)

Беременные с ретрохориальной гематомой

Группа

сравнения (n=9)

Основная группа

(n=12)

Treg, %

3,42+0,28

6,27+1,32*

2,74+0,46

5,06+1,14*

CD3+, %

75,2+4,4

77,2+5,6

72,0+3,8

76,4+4,1

CD19+, %.

В-лимфоциты

15,2+0,9

10,9+1,2*

19,1+1,4

14,5+1,1*

CD4+, %

Т-хелперы

43,1+4,4

43,0+5,4

41,2+3,6

42,7+4,8

CD8+, %

цитотоксические-Т-лимфоциты

32,5+1,6

24,8+3,4*

36,8+2,9

25,2+4,7*

CD16+CD56+, %

NK-клетки

8,5+1,0

11,1+1,2*

8,7+2,4

11,4+2,3*

Примечание: * - различия достоверны (p<0,05) относительно  группы сравнения

Особенности течения беременности и перинатальные исходы. Оценка частоты и характера осложнений течения беременности у обследованных женщин показала существенное снижение частоты осложнений у беременных основной группы по сравнению с группой сравнения. Одним из наиболее частых осложнений II триместра у беременных группы сравнения была угроза позднего самопроизвольного выкидыша, которая наблюдалась у 24,0% женщин, при этом, как правило, у них отмечено  осложненное течение беременности и в I триместре. В группе пациенток, получавших ВВИГ, угроза позднего выкидыша выявлена  достоверно реже – лишь у 8,3% пациенток (p<0,05). 

Наиболее частыми осложнениями в III триместре являлись угроза преждевременных родов, плацентарная недостаточность и гестоз. Отличия по частоте и структуре осложнений в группах обследуемых беременных были достоверными. Так, в 43,1% случаев у пациенток группы сравнения отмечена угроза преждевременных родов, значение этого показателя было достоверно выше, чем в основной группе, где угроза преждевременных родов была отмечена лишь у 20% женщин(p<0,05).

У пациенток, которым проводили только стандартную терапию достоверно чаще (в 25,6% случаев), чем в основной группе (6,3%), проявлялась плацентарная недостаточность (p<0,05). Частота гестоза в группе сравнения составила 63,8%, тогда как у беременных основной группы  гестоз наблюдался в 40,0% случаев.

Таким образом, проведенный анализ показал, что использование ВВИГ в комплексной терапии беременных с АФС и невынашиванием существенно улучшает клиническое течение беременности, уменьшая вероятность развития осложнений.

Благоприятное влияние ВВИГ на течение беременности отражается и на состоянии новорожденных. Так, оценка состояния новорожденных показала, что частота задержки внутриутробного развития в основной группе составила только 3,6%, что было достоверно реже, чем в группе сравнения, где значение этого показателя составило 20,7% (p<0,05).

Корреляционный анализ  показал наличие ряда достоверных коэффициентов корреляции Спирмена умеренной силы между иммунологическими параметрами и показателями свертывающей системы, с одной стороны, и частотой осложнений беременности, с другой (p<0,05) (табл. 6). В частности, показатели содержания Т-регуляторных клеток у женщин с АФС были отрицательно связаны с угрозой прерывания беременности и плацентарной недостаточностью.

Таблица 6

Коэффициенты корреляции  Спирмена (R) частоты осложнений беременности и уровней лабораторных показателей у беременных с АФС и невынашиванием

Показатели

Угроза выкидыша и преждевременных родов

Плацентарная недостаточность

Treg, %

CD3+CD4+CD127low

-0,43*

-0,40*

Treg, абс.

(x103) /мкл

-0,39*

-0,42*

CD19+, % В-лимфоциты

0,41*

-0,14

CD8+, %

цитотоксические-Т-лимфоциты

0,33*

0,40*

CD16+CD56+, %

NK-клетки

-0,25

-0,38*

CD16+CD56+, абс.

NK-клетки (x103) /мкл

-0,39*

-0,26*

Содержание активированных

NK-клеток, %

0,15

0,18*

Степень агрегации тромбоцитов, %

0,48*

0,36*

Скорость агрегации тромбоцитов, %/мин

0,34*

0,41*

Д-димеры, нг/мл

0,25*

0,15

АФА, Ед/мл

0,54*

0,48*

АТ к 2-гликопротеину, Ед/мл

0,51*

0,60*

Примечание: * - коэффициенты корреляции со степенью достоверности p<0,05

Отрицательные корреляции с частотой осложнений беременности у обследованных женщин были выявлены также для показателей уровня NK-клеток. Максимальными были значения R для концентраций антител к 2-гликопротеину и АФА и частоты осложнений беременности у пациенток с АФС и невынашиванием. Оценка взаимосвязи между иммунологическими параметрами и показателями гемостаза также показала, что относительное содержание регуляторных Т-лимфоцитов было отрицательно связано с параметрами степени и скорости агрегации тромбоцитов, а также с концентрациями АТ. Менее выраженными, но также отрицательными были значения коэффициентов корреляции Спирмена между абсолютным содержанием Treg и уровнями АФА, антител к аннексину и протромбину.

Полученные данные согласуются с мнением большинства  исследователей  о том, что важнейшую роль в патогенезе АФС играет связь процессов гиперкоагуляции и воспаления, нарушений гемостаза и иммунной системы, которые в значительной степени усиливают друг друга (Насонов Е.Л., 2004; Сердюк Г.В., 2005; Branch D.W. et al., 2010).

Результаты работы являются,  на наш взгляд, основанием  для назначения ВВИГ и подтверждают мнение исследователей о том, что использование препаратов этой группы представляет собой перспективный патогенетически обоснованный метод лечения АФС при беременности, являющийся фактически единственно возможным для иммунокоррекции аутоиммунных синдромов (в том числе и АФС) у беременных, когда использование других методов ограничено (гормонотерапия) или полностью исключено (цитостатики).

Отсутствие побочных эффектов в нашем исследовании при использовании ВВИГ позволяет рекомендовать эти препараты для более широкого использования в клинической практике при различных формах акушерской патологии, связанных с образованием аутоиммунных антител.

Таким образом, по нашему мнению, важнейшим компонентом лечебно-профилактических мероприятий в перспективе должно стать целенаправленное воздействие на  иммунорегуляторное звено, в частности, на уровень и активность Т-регуляторных лимфоцитов. Необходимой представляется в дальнейшем разработка и апробация  метода комплексной оценки состояния регуляторного звена иммунной системы, обеспечиваемого Treg, пригодного в качестве метода лабораторной диагностики.

ВЫВОДЫ

  1. Беременность у женщин с антифосфолипидным синдромом характеризуется большей частотой осложнений гестационного периода по сравнению с женщинами без антифосфолипидного синдрома: угроза выкидыша  в I и II триместрах чаще  в 4 раза, преждевременные роды  – в 5 раз, гестоз – в 7 раз, плацентарная недостаточность – в 6 раз, задержки внутриутробного развития плода  в 6 раз.
  2. У беременных с антифосфолипидным синдромом в сыворотке крови обнаружены в высоких титрах антифосфолипидные антитела, антитела к 2-гликопротеину и протромбину, а также выявлены достоверные изменения параметров гемостаза по сравнению с показателями у женщин с физиологической беременностью: повышена степень (на 39%) и скорость (на 45%)  агрегации тромбоцитов (с индуктором АДФ в концентрации 2 мкМ), а также уровня Д-димеров (на 42%).
  3. В I триместре беременности  у женщин с антифосфолипидным синдромом и невынашиванием выявлены существенные нарушения баланса иммунокомпетентных клеток по сравнению с физиологически протекающей беременностью: достоверное снижено на 45%  абсолютное и относительное содержание регуляторных Т-лимфоцитов, достоверно повышено на 53% относительное содержание В-лимфоцитов и на 16%   цитотоксических Т-лимфоцитов. Наличие патогенетической взаимосвязи между уровнями T-регуляторных лимфоцитов и концентрациями аутоантител подтверждается коэффициентами корреляции R= -0,43 для антифосфолипидных антител и R= -0,40 для 2-гликопротеина.
  4. В I триместре у беременных с ретрохориальной гематомой на фоне антифосфолипидного синдрома  по сравнению с беременными с антифосфолипидным синдромом без ретрохориальной гематомы достоверно выше уровень антифосфолипидных антител  на 32%, антител к 2-гликопротеину – на 44%, антител к аннексину – на 43%, антител к протромбину – на 49%. Выявлено повышение индуцированной агрегации тромбоцитов на 32%, уровня Д-димеров  –  на 19%, а  также обнаружено  значимое изменение содержания иммунокомпетентных клеток в периферической крови: снижение регуляторных Т-лимфоцитов на 35% и Т-лимфоцитов-хелперов на 15%, уменьшение количества активированных NK-клеток  на 20%.
  5. Проведенный в I триместре беременности курс терапии внутривенными иммуноглобулинами у женщин с АФС  и невынашиванием по сравнению с показателями у женщин с традиционной терапией приводил к статистически значимым изменениям лабораторных показателей: к снижению содержания антифосфолипидных  антител на 45%, антител к протромбину и аннексину на 22% и 20% соответственно, антител к 2-гликопротеину в 3,9 раза, к снижению степени и скорости индуцированной агрегации тромбоцитов на 11 и 16% соответственно. 
  6. Применение препаратов внутривенных иммуноглобулинов у беременных с антифосфолипидным синдромом в I  триместре беременности приводило, по сравнению с иммунологическими показателями у женщин с антифосфолипидным синдромом, получавших традиционную противотромботическую терапию, к статистически значимому повышению количества Т-регуляторных лимфоцитов на 61%, снижению Т-цитотоксических лимфоцитов – на 25%, В-лимфоцитов – на 33%. 
  7. Терапия препаратами внутривенных иммуноглобулинов  статистически значимо снижала частоту осложнений беременности: угрозу выкидыша  - в 3 раза, угрозу преждевременных родов – на 54%, развитие гестоза – на 37%, плацентарную недостаточность – в 4 раза; задержка внутриутробного развития плода  наблюдалась в 5,7 раз реже.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

  1. Беременным с АФС и невынашиванием в  I триместре показано: определение волчаночного антикоагулянта, антифосфолипидных антител, антител к 2-гликопротеину. Обследование рекомендовано проводить дважды с интервалом не менее 12 недель. Аналогичное обследование рекомендовано беременным, у которых диагностирована в I триместре ретрохориальная гематома.
  2. Беременным с АФС и невынашиванием рекомендуется 1 раз в месяц проводить оценку системы гемостаза – определение уровня Д-димеров и показателей индуцированной агрегации тромбоцитов.
  3. При подтверждении диагноза АФС показано проведение иммунологического обследования с определением содержания иммунокомпетентных клеток, в частности, Т-регуляторных лимфоцитов, в том числе  – для контроля эффективности применения внутривенных иммуноглобулинов.
  4. Беременным с АФС и невынашиванием целесообразно включать в комплексную терапию препараты внутривенных иммуноглобулинов  в курсовой дозе 600 мл  30 г: 100 мл (5 г)  внутривенно капельно, 1 раз в неделю, в течение  3 недель в I и II триместрах беременности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Влияние иммуномодулирующей терапии на клинико-лабораторные показатели беременных с невынашиванием и антифосфолипидным синдромом / А.А.Чугунова, М.С. Зайнулина,  А.В. Селютин, С.А. Сельков // Журнал акушерства и женских болезней. 2011. Вып. 3. - С. 152-160. 
  2. Содержание основных субпопуляций иммунокомпетентных клеток у беременных с невынашиванием  и антифосфолипидным синдромом при лечении препаратами иммуноглобулинов / А.А. Чугунова, М.С. Зайнулина, А.В. Селютин, Д.И. Соколов, В.А. Михайлова,  С.В. Чепанов, С.А. Сельков  // Акушерство и гинекология.    2012. № 2. С. 30-36.
  3. Чугунова, А.А. Иммуномодулирующая терапия у беременных с АФС / А.А. Чугунова, А.В. Селютин,  С.А. Сельков // Медицинская иммунология. – 2011. - Т. 13, № 4-5. – С. 443-444. – ( Материалы XIV Всероссийск. науч. форума с междунар. участием им. акад. В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге». – СПб., 2011)
  4. Клинико-иммунологическое обоснование использования иммуноглобулинов для внутривенного введения в лечении антифосфолипидного синдрома при беременности / С.А. Сельков, М.С. Зайнулина, А.А. Чугунова, А.В. Селютин, В.А. Михайлова, С.В. Чепанов, Д.И. Соколов // Журнал акушерства и женских болезней. 2012. Вып.2. С. 5-12.
  5. Чепанов, С.В. Спектр аутоиммунных антител у женщин с привычным невынашиванием / С.В. Чепанов, А.А. Чугунова // Материалы III ежегодн. науч. конф. молодых ученых и специалистов «Репродуктивная медицина: взгляд молодых – 2012». – СПб., 2012. – С. 54-55.
  6. Чугунова, А.А. Роль иммунологических нарушений в развитии осложнений течения беременности и родов у беременных с невынашиванием на фоне антифосфолипидного синдрома  / А.А. Чугунова, А.В. Селютин,  С.В. Чепанов // Российский иммунологический журнал. – 2012. – Т. 6 (14),  №  2 (1) . – С.190-191.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АДФ – аденозиндифосфат

АТ - антитела

АФА – антифосфолипидные антитела

АФС – антифосфолипидный синдром

ВВИГ – внутривенные иммуноглобулины

РХГ – ретрохориальная гематома

CD – клеточные детерминанты

NK – натуральные киллеры

Treg – Т-регуляторные клетки

R – коэффициент корреляции Спирмена

мАТ – моноклональные антитела







© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.