WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

СУХОПАРОВА

Елена Петровна

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ОПТИМИЗАЦИИ ТЕХНОЛОГИИ ВЫПОЛНЕНИЯ ЛИПОФИЛЛИНГА

(экспериментальное исследование)

14.01.17 хирургия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург

2012

Работа выполнена на кафедре пластической и эстетической хирургии  Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Северо-западный государственный медицинский университет им И.И. Мечникова» Минздравсоцразвития РФ.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Малахов Сергей Федорович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор кафедры общей хирургии ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им.акад. И.П. Павлова» Минздравсоцразвития РФ.

Специальность 14.01.17 - хирургия

Протасов Андрей Анатольевич

доктор медицинских наук, профессор, зав кафедрой госпитальной хирургии ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» Минздравсоцразвития РФ.

Специальность 14.01.17 - хирургия

Топузов Эльдар Эскендерович

Ведущая организация: ФГБУ «Российский Научный центр хирургии им.акад. Б.В.Петровского» Российской Академии медицинских наук

Защита диссертации состоится « »_  _2012г. в _13_часов на заседании диссертационного совета Д.208.090.05 в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им.акад. И.П.Павлова» (197022, Санкт-Петербург, ул. Льва Толстого д. 6/8).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им.акад. И.П.Павлова» Минздравсоцразвития РФ (197022, Санкт-Петербург, ул. Льва Толстого д. 6/8).

Автореферат разослан  « »  2012 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, доцент

М.О. Мясникова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. В последние годы все большее количество пациентов обращаются к пластическим хирургам с целью коррекции контуров лица и тела [Asaadi et al., 2005; Coleman S. et al., 2007; Little B. et al., 2008; Epley B. et al., 2009]. Это объясняется тем, что ухудшение внешнего вида может стать причиной потери уверенности в себе, привести к ограничению общения, психологическим проблемам и снижению качества жизни [Erdinc B. et al., 1998; Fagrel D. et al., 2001; Horl H. et al., 2005].

В разное время хирурги тяготели то к более радикальным и расширенным вмешательствам [Ramirez O. et al., 1993; Hamra S. et al., 1996], то к малоинвазивным операциям [Chajchir A. et al., 2004; Benzaquen I. et al., 2006; Friedman P. et al., 2007; Little B. et al., 2010]. Естественно, что чем обширнее оперативное воздействие, тем больше осложнений может возникнуть как во время его выполнения, так и в послеоперационном периоде [Parastouk N. et al., 2004; Silverton K. et al., 2009]. Кроме того, удовлетворенность пациента результатами малоинвазивных операций не меньше, а в ряде случаев даже больше, чем результатами радикальных вмешательств [Colson Y. et al., 2006; Cohen S. et al., 2007; Zadach K. et al., 2010].

Одной из малоинвазивных операций является пересадка аутологичной жировой ткани (липофиллинг). Привлекательность метода обусловлена свойствами аутологичной жировой ткани, как идеального трансплантата, коротким реабилитационным периодом и отсутствием видимых кожных рубцов после операции [Asken S. et al., 2003; Celikoz М. et al., 2006; Jacobson D. et al., 2007]. Однако способность аутожирового трансплантата лизироваться и замещаться фиброзной тканью, вызывает некоторые затруднения в применении липофиллинга [Павлюк-Павлюченко Л. Л. и соавт., 2007; Silvers W. et al. 2000; Ersek R. еt al., 2006; Rigotti G. Et al., 2008], что делает эстетический результат менее стойким и затрудняет прогноз операции.

В последние годы, в связи с возросшим интересом к липофиллингу, были предприняты исследования, направленные на изучение технологии пересадки жировых клеток [Малаховская В.И. и соавт. 2009; Coleman S. et al., 2001; Cohen S. et al., 2001; Nguyen A. et al., 2006; Bouvier T. et al., 2008] и выживаемости адипоцитов [Agris J. et al., 2005; Enerstrom S. et al., 2006; Erdinc B. et al., 2006; Berggren  A. et al., 2008; Fagrell D. et al., 2009; Tas T. et al., 2010]. Но, на основе данных отечественной и зарубежной литературы, очевидно, что исследования липофиллинга ограничиваются анализом методик забора аутожирового трансплантата [Ellenbogen L. et al., 2000; Bouvier T. et al., 2008; Fagrell D. et al., 2009; Tas T. et al., 2010] и оптимизацией инструментария для выполнения липофиллинга [Coleman S. et al. 2001]. В то же время, в доступной нам литературе мы обнаружили крайне мало фундаментальных исследований, направленных на изучение патофизиологических процессов и морфологических изменений в реципиентной зоне и клетках аутожирового трансплантата. Кроме того, к настоящему времени достаточно хорошо известно влияние развития перекисного окисления липидов (ПОЛ) и истощения антиоксидантных систем клеток  на выживаемость аутотрансплантатов другой природы, в частности аутодермотрансплантатов и сосудистых аутотрансплантатов [Казимирко В.К. и соавт., 2004; Серов В.В. и соавт., 2005; Парамонов Б.А. и соавт., 2007]. Однако в литературе нам не встретилось исследований, посвященных развитию перекисного окисления липидов и реакции антиоксидантных систем клетки на выживаемость адипоцитов и прогноз липофиллинга.

Все вышеперечисленное и обусловило проведение данного диссертационного исследования.

Цель работы: повысить эффективность липофиллинга за счет улучшения выживаемости адипоцитов в аутожировом трансплантате.

Задачи исследования

  1. Исследовать перекисное окисление липидов в клетках аутожировых трансплантатов при проведении липофиллинга экспериментальным животным.
  2. Исследовать  изменения в системе глутатиона в клетках аутожирового трансплантата при проведении липофиллинга у экспериментальных животных.
  3. В экспериментах на животных  определить влияние препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1 на динамику  перекисного окисления  липидов и колебаний системы глутатиона в  клетках аутожирового  трансплантата.
  4. Изучить эффективность проведения трансплантации аутожировой ткани при применении препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1 в сравнении со стандартной методикой.
  5. Оценить полноту подавления процессов перекисного окисления липидов в клетках аутожирового трансплантата на фоне проводимой противовоспалительной терапии.

Научная новизна

Впервые в экспериментальных исследованиях получены данные, позволяющие рассматривать снижение чувствительности адипоцитов к интерлейкину-1 как метод, способствующей выживаемости адипоцитов. Доказано, что введение рецепторного антагониста интерлейкина-1 лабораторным животным в реципиентную зону перед выполнением липофиллинга снижает процессы перекисного окисления липидов и сохраняет антиоксидантный потенциал клеток трансплантата. Установлено, что применение рецепторного антагониста интерлейкина-1 при выполнении липофиллинга способствует выживаемости адипоцитов и предотвращает фиброз аутожирового трансплантата.

Практическая значимость

Продемонстрирована возможность использования показателей процессов перекисного окисления липидов для оценки прогноза результатов липофиллинга.

Обоснована возможность проведения клинических исследований трансплантации аутологичной жировой ткани с применением рецепторного антагониста интерлейкина-1.

Основные положения, выносимые на защиту

  1. При взятии аутологичной жировой ткани для трансплантации происходит запуск процессов перекисного окисления липидов и срыв антиоксидантной системы клеток, что ведет к снижению жизнеспособности и гибели клеток  аутожирового трансплантата.
  2. Местное введение препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1 в реципиентную зону при проведении трансплантации аутожировой ткани снижает выраженность перекисного окисления липидов и сохраняет антиоксидантный потенциал клеток трансплантата.
  3. Местное введение препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1 в реципиентную область при проведении трансплантации аутожировой ткани увеличивает выживаемость адипоцитов и уменьшает фиброз аутожирового трансплантата в отдаленные сроки наблюдения.

Личное участие автора в проведенном исследовании. Участие автора выразилось в определении основной идеи исследования. Автор лично выполнила этап экспериментальной операции, все этапы забора биоптатов, подготовила образцы для проведения морфологического и биохимического исследований, выполнила статистическую обработку материала.

Реализация результатов работы и ее апробация

Результаты исследования внедрены в научную работу кафедры  пластической и реконструктивной хирургии ГБОУ ВПО СЗГМУ им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург, Пискаревский пр., д. 47) и используются в учебном процессе при проведении занятий со слушателями и клиническими ординаторами кафедры пластической и реконструктивной хирургии ГБОУ ВПО СЗГМУ им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург, Пискаревский пр., д. 47).

Материалы диссертации доложены на научно-практической конференции «Актуальные вопросы косметологии» (Санкт-Петербург, 2009 г); Санкт-Петербургском конгрессе по косметологии и эстетической медицине (Санкт-Петербург, 2010 г); Третьем  съезде ассоциации пластических и эстетических хирургов Германии (г. Линдау, 2010 г).

По теме диссертации опубликовано 16 научных работ, из них 4 - в журналах, рекомендуемых ВАК РФ. 

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 133 страницах машинописного текста, состоит из введения, 4 глав, анализа результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 222 источника, из них 211 - иностранных авторов. Работа иллюстрирована 7 таблицами, 26 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Объектом исследования являлись лабораторные животные - 52 кролика самца породы Шиншилла, массой от 3 до 3,5 кг каждый, в возрасте 75 дней, содержавшихся в виварии в одинаковых условиях. Содержание и использование животных в эксперименте проводилось согласно положениям, изложенным в работе И. П. Западнюка (1962).

В ходе выполнения экспериментальной операции животные были разделены на 3 группы. Контрольная группа составила 12 животных, у которых была взята интактная жировая ткань для выявления исходного уровня малонового диальдегида, восстановленного глутатиона, глутатионредуктазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, сульфгидрильных групп белков, а также исходной морфологической картины. В 1-й группе животных  (20 животных) выполнялся липофиллинг по стандартной методике, во 2-й группе (20 животных) перед этапом пересадки аутожирового трансплантата в реципиентную область вводили препарат рецепторного антагониста интерлейкина-1  в дозе 0,1 мл препарата на 1 мл аутожирового трансплантата.

Гистологическое и биохимическое исследование аутожировых трансплантатов в каждой из групп проводилось на 3-е, 5-е, 7-е, 30-е, 90-е, 180-е сутки после операции. Биоптат делили на две части. Одну часть направляли на гистологическое исследование, а другую — на биохимическое.

Для гистологического исследования материал маркировали и фиксировали в 10 % нейтральном формалине в течение 24 ч, затем делили образец на две части. Одну часть окрашивали гематоксилином и эозином, другую — направляли на гистохимическое исследование с окраской на жир суданом III.

При гистологическом исследовании оценивали наличие, характер, динамику воспалительных и компенсаторно-приспособительных изменений, изменения жировой клетчатки имплантата с оценкой количества выживших адипоцитов в поле зрения при увеличении 400. Степень фиброза аутожирового трансплантата оценивали в рангах, где 0 – отсутствие фиброза, 1 –слабовыраженный фиброз, 2 – умеренный фиброз, 3 – тяжелый фиброз, 4 – тотальный фиброз.

При биохимическом исследовании образцы ткани лабораторных животных взвешивали, измельчали и гомогенизировали, полученный гомогенат использовали для определения концентрации восстановленного глутатиона, содержания сульфгидрильных групп белков, малонового диальдегида. Для определения активности глутатионредуктазы и глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы использовали очищенную цитоплазматическую фракцию, которую получали дифференциальным центрифугированием.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Полученные в результате проведенного эксперимента данные позволили провести оценочную характеристику сформированных групп.

В 1-й группе на 3-и сутки после операции в поле зрения определялось небольшое (0,5 ± 1,17; n = 20) количество живых (содержащих ядра) клеток жировой клетчатки, почти в 3 раза меньше, чем во 2-й группе (1,33 ± 1,00; n = 20) в этот же срок исследования. К 5-м —7-м суткам внутри трансплантата был выражен некроз, а так же лейкоцитарная реакция с примесью единичных плазматических клеток и лимфоцитов. По периферии с распространением на периферическую зону трансплантата определяли выраженный вал воспалительной инфильтрации с формированием грануляционной ткани и слабого фиброгенеза по периферии. Уже в эти сроки внутри пересаженной жировой клетчатки определяли очаги воспалительной инфильтрации и организации. Выживаемость адипоцитов оценивалась как слабая. К 30-м и особенно к 90-м суткам по периферии сохранялось умеренное и выраженное воспаление, нарастала выраженность воспалительной инфильтрации внутри трансплантата. Выраженность фиброза к 90-м суткам нарастала и становилась выраженной по периферии с распространением внутрь пересаженной жировой клетчатки. К 6 мес воспаление несколько уменьшалось, сохранялась его пролиферативная направленность. Количество сохранившихся адипоцитов в поле зрения было минимальным (0,1 ± 0,1; n = 20).

Во второй группе через 3 сут морфологическая картина была лучше, чем в первой группе в ранние сроки наблюдения. Определяли большее количество живых адипоцитов (1,33 ± 1,00; n = 20), слабую лейкоцитарную реакцию по периферии трансплантата с примесью плазматических клеток и лимфоцитов, слабо выраженный вал демаркации и фиброгенеза по периферии, а также слабые воспаление и организация внутри очага. Организация в динамике характеризовалась преобладанием процесса инкапсуляции с вовлечением узкой периферической зоны трансплантата.

На рис. 1 показано различие исследуемых групп по степени воспаления и фиброза в динамике.

Рис. 1 Динамика фиброза в группах.

* р < 0,05.

Из графика видно, что 1-я группа уже к 30-м суткам отличается выраженным фиброзом области трансплантации, который сохранялся на протяжении последующих месяцев. Во второй группе применение рецепторного антагониста интерлейкина-1 позволило уменьшить уровень фиброза с его стабилизацией в более поздние сроки исследования.

При проведении корреляционного анализа обращает на себя внимание наличие достоверной прямой корреляционной связи средней силы между применением рецепторного антагониста интерлейкина-1 и наличием сохраненных адипоцитов в поле зрения (r=0,59; p<0,05), что наглядно свидетельствует об эффективности использования данного препарата для повышения выживаемости жировых клеток.

Кроме того, были выявлены многочисленные достоверные патогенетически значимые корреляционные связи. Например, выживаемость адипоцитов зависела от наличия некрозов внутри трансплантата (r=-0,73; p<0,01), степени формирования грануляционной ткани (r=-0,63, p<0,01) и фиброгенеза (r=-0,64; p<0,01), от выраженности воспаления как по периферии трансплантата (r=-0,5; p<0,05), так и внутри него (r=-0,62; p<0,01).

Следует отметить также выраженную тенденцию уменьшения выживаемости адипоцитов с увеличением срока наблюдения и увеличением объема соединительной ткани (r=-0,32; p=0,19), что объяснимо с учетом нарастания некроза трансплантата (преимущественно в группе без применения препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1). Анализ выживаемости адипоцитов показал, что она была выше во 2-й группе по сравнению с 1-й группой (рис. 2). Достоверным это различие стало на поздних сроках наблюдения.

Рис. 2. Различия в количестве адипоцитов, содержащих ядра, в поле зрения в динамике после проведения  липофиллинга.

При проведении корреляционного анализа во второй группе была выявлена достоверная зависимость выживания адипоцитов от уровня воспаления (r=-0,82; p<0,05), влияние других патогенетических факторов было слабым и не достигало уровня статистической значимости. Этот факт позволяет сделать предположение, что важным для повышения выживаемости клеток аутожирового трансплантата может стать проведение противовоспалительной терапии.

Для биохимического исследования были выбраны показатели, характеризующие, с одной стороны, интенсивность окислительных процессов (малоновый диальдегид), с другой - показатели антиоксидантной системы (интенсивность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, изменения уровня сульфгидрильных групп, уровня глутатионредуктазы и уровня восстановленного глутатиона). Все перечисленные показатели исследовали в тканях с предварительным введением в реципиентную область препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1 и без него на 3-е, 5-е и 7-е сутки после проведения липофиллинга, а также спустя 30, 90 и 180 сут.

При исследовании в тканях аутожирового трансплантата содержания малонового диальдегида (конечного продукта перекисных процессов) было выявлено его увеличение более чем в 2 раза практически на всем протяжении эксперимента.

На рис. 3 в динамике представлены результаты, свидетельствующие, что действительно имеет место увеличение накопления в тканях аутожирового трансплантата малонового диальдегида, на что указывают статистически значимые различия между 1-й и 2-й группами (р < 0,05). Через 6 мес наблюдения нормализация уровня малонового диальдегида не наблюдается.

Рис 3. Динамика показателей малонового диальдегида

(мкмоль/г ткани) в аутожировых трансплантатах.

* р < 0,05.

При предварительной обработке реципиентной зоны препаратом рецепторного антагониста интерлейкина-1 отмечалось достоверно меньшее содержание малонового диальдегида (р < 0,05) во все сроки с нормализацией к 180-м суткам эксперимента.

Изменения уровня восстановленного глутатиона в клетках аутожирового трансплантата представлены на рис. 4.

Рис 4. Динамика показателей восстановленного глутатиона

(мкмоль/г ткани) в аутожировых трансплантатах.

* р < 0,05.

Из представленных данных видно, что содержание восстановленного глутатиона в клетках аутожировых трансплантатов 2-й группы достоверно (р < 0,05) выше, чем в тканях 1-й группы. Таким образом, в клетках аутожировых трансплантатов 1-й группы в большей степени повреждается антиоксидантная защита, что отражается большим расходом глутатиона, вследствие большей активности перекисных процессов. Однако при сравнении рис. 3 и рис. 4 становится понятным, что даже повышенный расход глутатиона не предотвращает образования продуктов перекисного окисления липидов.

Изменения уровня сульфгидрильных групп белков клеток в ткани аутожирового трансплантата представлены на рис. 5. Анализ полученных данных свидетельствует о достоверном снижении (р < 0,05) относительно нормальных значений сульфгидрильных групп белков как в1-й, так и во 2-й исследуемых группах. Достоверных различий между группами в первые 7 сут наблюдения не выявляется, относительно монотонная картина без нормализации показателей наблюдается в 1-й группе, а во 2-й только к  180 сут эксперимента уровень сульфгидрильных групп приближается к норме. Отсутствие нормализации уровня сульфгидрильных групп белков является дополнительным свидетельством истощения антиоксидантной защиты в аутотрансплантатах.

Рис. 5. Динамика показателей сульфгидрильных групп белков

(мкмоль/г ткани) в аутожировых трансплантатах.

* р < 0,05.

Глутатионредуктаза поддерживает достаточный уровень активного глутатиона путем восстановления его дисульфидной формы. Поэтому целесообразно было исследовать уровень глутатионредуктазы в аутожировом трансплантате обеих групп. Эти данные представлены на рис. 6. Как видно на этом рисунке изменение уровней глутатионредуктазы достигало достоверных различий (р < 0,05) в отдаленные сроки наблюдения.

Одним из факторов, способствующих поддержанию антиоксидантной защиты и энергетического обеспечения клеток аутожирового трансплантата как в 1-й, так и во 2-й группе животных, является активация ключевого фермента пентозофосфатного пути обмена глюкозы. Активация глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы способствует поддержанию уровня клеточного НАДФН, необходимого для функционирования цикла обмена восстановленного глутатиона, основного клеточного антиоксиданта.

Рис. 6. Динамика показателей глутатионредуктазы

(мкмоль/г ткани) в аутожировых трансплантатах.

* р < 0,05.

Достоверно более высокая активность глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы была отмечена у животных 2-й экспериментальной группы, что особенно выражено в отдаленные сроки наблюдения (р < 0,05) и свидетельствует о формировании в ткани аутожировых трансплантатов этой группы адаптационных механизмов, направленных на сохранение антиоксидантного и энергетического потенциала клеток (рис.7). Следует отметить, что в 1-й группе экспериментальных животных даже на 180-е сутки активность ферментов глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы и глутатионредуктазы была снижена по сравнению с контрольной группой исходным уровнем, что может служить признаком отрицательного прогноза для выживания адипоцитов при выполнении липофиллинга без защиты клеток аутожирового трансплантата препаратом рецепторного антагониста интерлейкина-1. Вероятно, речь идет об истощении возможностей антиоксидантной системы.

Таким образом, динамика биохимических процессов, наблюдаемая в ткани аутожирового трансплантата как в 1-й, так и 2-й группы идентична. Однако обращает на себя внимание различие в степени выраженности данных процессов. Очевидно, что во 2-й группе экспериментальных животных интенсивность перекисного окисления липидов выражена меньше. Об этом свидетельствует изменение количества малонового диальдегида, которое к 180-м суткам эксперимента нормализуется. Эти данные могут косвенным образом свидетельствовать, что во 2-й группе животных, где выполнялся липофиллинг с предварительной обработкой реципиентной области препаратом рецепторного антагониста интерлейкина-1, воспалительная реакция в реципиентной области менее выражена.

Рис. 7.  Динамика показателей глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы

(мкмоль/г ткани) в аутожировых трансплантатах.

* р < 0,05.

Вероятно, использование препарата антагониста рецепторов интерлейкина-1 первоначально ограничивает развитие воспалительной реакции и способствует меньшей активации процессов свободнорадикального окисления, которые лежат в основе гибели клеток. В свою очередь, умеренная активация процессов перекисного окисления липидов позволяет клеткам сохранить свой антиоксидантный потенциал, защитить их от действия свободных радикалов и дальнейшего запуска реакций воспаления. Так как продукты перекисного окисления липидов принимают заметное участие в механизмах формирования фиброза тканей, можно считать, что сохранение внутриклеточной антиоксидантной защиты у животных 2-й экспериментальной группы позволяет добиться существенного уменьшения развития фиброза, на что также указывают данные морфологического исследования.

В ходе проведенных опытов на двух экспериментальных моделях было установлено, что уже в раннем послеоперационном периоде после проведения липофиллинга происходит увеличение продуктов перекисного окисления липидов в клетках аутожировых трансплантатов. В свою очередь, липопероксидация клеточных мембран приводит к активации антиоксидантной системы организма. В ходе проведенных экспериментов было установлено, что при этом происходит переход восстановленного глутатиона в окисленную форму и повышается активность глутатионзависимых ферментов.

Во всех исследованных экспериментальных моделях наблюдалось повышение продуктов перекисного окисления липидов уже в раннем послеоперационном периоде. В 1-й группе  животных повышение уровня малонового диальдегида было достоверно (р < 0,05) выше, чем во 2-й группе уже на 3-и сутки эксперимента и  наблюдалось на протяжении всего эксперимента с увеличением к 30-м суткам, что, по-видимому, связано с переходом процесса воспаления в реципиентной области в хроническую форму. При проведении липофиллинга реципиентная область и клетки аутожирового трансплантата становятся мощным источником свободных радикалов, что уже в первые дни после операции приводит к резкой интенсификации процессов перекисного окисления липидов в трансплантате. Цитолиз и активация перекисного окисления липидов в областях, прилегающих к зоне некроза в аутожировом трансплантате, обуславливают активное выделение продуктов этих реакций и, следовательно, привлечение в очаг клеток макрофагально-моноцитарной системы, выработку ими различных биологически активных веществ, в том числе интерлейкина-1, что  ведет к образованию порочного круга и, конечном итоге, к лизису трансплантата и замещению его фиброзной тканью. Рецепторный антагонист интерлейкина-1 играет уникальную роль, являясь эндогенным антагонистом данного вещества. Он осуществляет баланс активностей интерлейкина-1 в крови и тканях. Функциональный ответ клеток на интерлейкин-1 осуществляется через его взаимодействие со специфическими рецепторами (ИЛ-1RI и ИЛ-1RII). Рецепторный антагонист интерлейкина-1 конкурирует с интерлейкином-1 за взаимодействие с рецепторами и, таким образом, блокирует передачу сигнала в клетку от рецептора ИЛ-1RI, тем самым, снижая выраженность воспалительной реакции.

Процесс развития воспалительной реакции в реципиентной зоне и накопления продуктов перекисного окисления липидов приводит к срыву антиоксидантной защиты организма, резкому снижению уровня эндогенных антиоксидантов и нарушению клеточной структуры аутожирового трансплантата. В процессе развития асептического воспаления в раннем послеоперационном периоде после липофиллинга идет необратимое расходование восстановленного глутатиона, а снижению его концентрации и отводится ведущее место в инициации процессов перекисного окисления липидов. В связи с тем, что для большинства клеток организма основным путем восстановления пула восстановленного глутатиона является глутатион-редуктазный (т.е. за счет окисленной формы глутатиона), а не путь синтеза глутатиона из аминокислот, то сами по себе необратимые потери восстановленного глутатиона могут привести к начальной активации прооксидантных процессов.

Следует обратить внимание на то, что в группе, где не проводилась защита клеток аутожировых трансплантатов, уровень восстановленного глутатиона не нормализовался к 180-м суткам эксперимента, в то время как в группе с применением местной противовоспалительной терапии уровень восстановленного глутатиона к 180-м суткам эксперимента вернулся к исходным показателям.

Глутатионредуктаза поддерживает достаточный уровень активного глутатиона путем восстановления его дисульфидной формы. Динамика изменения активности глутатионредуктазы в клетках аутожировых трансплантатов у животных 2-й группы нарастала к 30-м суткам эксперимента, и к концу эксперимента приходила к норме, в отличие от 1-й группы, где уровень глутатионредуктазы неуклонно снижался и к концу наблюдений был ниже контроля.

Выраженный расход сульфгидрильных групп белков в дополнение к расходу глутатиона может свидетельствовать, учитывая также рост уровня малонового диальдегида, о неспособности системы антиоксидантной защиты справляться со своей функцией, в особенности в 1-й группе, где оба показателя не нормализовались и спустя 6 мес после операции. Надо заметить, что если расход глутатиона является естественной реакцией на наличие оксидантов, то выраженный расход сульфгидрильных групп белков уже можно рассматривать как повреждение, поскольку эти группы зачастую играют важную роль в поддержании конформационной стабильности белков и функционировании ряда ферментов. Все вышеуказанные изменения свидетельствуют о развитии компенсаторно-приспособительных реакций в клетках аутожировых трансплантатов у лабораторных животных 2-й группы и снижении жизнеспособности адипоцитов в 1-й группе.

Обращает на себя внимание, что при использовании препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1 в клетках аутожировых трансплантатов у животных 2-й группы нормализуется уровень малонового диальдегида, уровень восстановленного глутатиона не нормализуется, другие показатели возвращаются к исходному уровню медленно. Это показывает необходимость добавления к проводимой противовоспалительной терапии антиоксидантов.

Биохимические процессы, протекающие в клетках аутожировых трансплантатов, нашли свое отражение в морфологической картине. Принципиальным было отличие в исследуемых группах по степени воспаления и фиброза в динамике. Биоптаты 1-й группы уже к тридцатым суткам отличаются выраженным фиброзом с дальнейшим его прогрессированием, что можно объяснить продолжающимся воспалением с тенденцией к хронизации. Во 2-й группе применение препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1 позволило в 2 раза уменьшить уровень фиброза с его стабилизацией в более поздние сроки исследования.

Кроме того, удалось установить, что выживаемость адипоцитов зависела от наличия некрозов внутри трансплантата, степени формирования грануляционной ткани и фиброгенеза, выраженности воспаления как по периферии трансплантата, так и внутри него. Выживаемость жировых клеток была меньше при большей выраженности повреждения трансплантата (некрозы) и реакции на это повреждение (воспаление) с активным развитием организации (разрастанием соединительной ткани), что полностью укладывается в общепатологические реакции здорового организма. Следует отметить также выраженную тенденцию уменьшения выживаемости адипоцитов с увеличением срока наблюдения, что объяснимо с учетом нарастания некроза трансплантата (преимущественно в группе 1) и увеличения объема соединительной ткани. Во 2-й группе выживаемость клеток жировой клетчатки во все сроки исследования была выше, чем в 1-й группе. Достоверным это различие стало через 1, 3 и 6 мес.

В ходе исследования было установлено, что проводимая противовоспалительная терапия способствует нормализации компенсаторно-приспособительных реакций в клетках аутожировых трансплантатов, снижению цитолиза клеток, фиброза аутожирового трансплантата и повышению выживаемости адипоцитов у всех лабораторных животных.

Высокий расход глутатиона и сульфгидрильных групп белков на фоне роста продуктов перекисного окисления липидов, даже при назначении противовоспалительной терапии, показывает, что необходимо усилить антиоксидантную защиту аутотрансплантата. Это можно сделать за счет насыщения организма жирорастворимыми и водорастворимыми антиоксидантами перед проведением операции и назначением антиоксидантов после проведения липофиллинга.

Полученные данные доказывают эффективность и необходимость применения местного противовоспалительного лечения в сочетании с тщательным соблюдением методики выполнения липофиллинга и указывают на необходимость дополнительной антиоксидантной терапии при выполнении данной операции.

ВЫВОДЫ

  1. При проведении липофиллинга экспериментальным животным в клетках аутожировых трансплантатов происходит запуск и интенсификация процессов перекисного окисления липидов.
  2. При проведении липофиллинга экспериментальным животным в клетках аутожировых трансплантатов происходит истощение системы антиоксидантной защиты.
  3. Введение в реципиентную область при выполнении липофиллинга препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1 снижает выраженность процессов перекисного окисления липидов и способствует восстановлению антиоксидантного потенциала клеток аутожирового трансплантата.
  4. Снижение показателей антиоксидантной защиты в сочетании с транзиторным ростом продуктов перекисного окисления липидов на фоне проводимой противовоспалительной терапии свидетельствует о необходимости введения антиоксидантов в схему терапии при выполнении липофиллинга.
  5. Проведение обработки реципиентной области липофиллинга препаратом рецепторного антагониста интерлейкина-1 повышает выживаемость адипоцитов и предотвращает фиброз аутожирового трансплантата.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

  1. Полученные экспериментальные данные могут служить основой для проведения дальнейших клинических исследований эффективности липофиллинга при обработке реципиентной области препаратом рецепторного антагониста интерлейкина-1.
  2. Полученные экспериментальные данные могут служить основой для дальнейшего исследования эффективности введения антиоксидантов в схему терапии при проведении липофиллинга.
  3. В качестве экспериментальных животных для изучения липофиллинга целесообразно использовать кроликов.
  4. Забор жирового аспирата рекомендовано проводить из межлопаточной области животного.
  5. Препарат рецепторного антагониста ИЛ-1 рекомендовано вводить в реципиентную область непосредственно перед выполнением липофиллинга по ходу движения канюли.
  6. Препарат рецепторного антагониста ИЛ-1 необходимо вводить из расчета 0,1 мл препарата на 1 мл аутожирового трансплантата.

СПИСОК РАБОТ,

ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Сухопарова Е.П., Шаповалов С.Г. Возможности медикаментозной оптимизации технологии выполнения липофиллинга в реабилитации пострадавших в чрезвычайных ситуациях // Мед.-биол. и соц.-психол. пробл. безопасности в чрезв. ситуациях. 2011. №1. - С. 8891. (из списка ВАК РФ)
  2. Сухопарова Е.П., Хрусталева И.Э. Экспериментальное обоснование медикаментозной оптимизации технологии выполнения липофиллинга // Вестн. Ивановск. мед. акад. 2011. №1(16). С. 7677. (Из списка ВАК РФ)
  3. Сухопарова Е.П., Хрусталева И.Э. Оценка процессов перекисного окисления липидов и изменений в системе глютатиона в клетках аутожировых трансплантатов при выполнении липофиллинга в условиях применения препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1 // Научные ведомости Белгородск. гос. ун-а. 2011. №10 (105). С. 202206. (Из списка ВАК РФ)
  4. Сухопарова Е.П., Хрусталева И.Э. Биохимическая оценка применения препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1 при выполнении липофиллинга // Вестн. Уральск. мед. академической науки. 2011. №2. С. 6971. (Из списка ВАК РФ)
  5. Сухопарова Е.П., Шаповалов С.Г. Случай хирургического лечения глубокого пролежня в седалищной области // Новое в пластической хирургии и комбустиологии. — СПб., 2007. — С. 101—102.
  6. Сухопарова Е.П., Шаповалов С.Г. Послеожоговая кожно-рубцовая деформация области шеи // Сборник научных трудов II Съезда комбустиологов России. — М., 2008. — С. 206—207.
  7. Сухопарова Е.П., Шаповалов С.Г. Первый опыт применения упрощенных методик хирургического омоложения лица и шеи // Материалы первой конференции ОПРЭХ РО «Современные аспекты пластической, реконструктивной и эстетической хирургии». — М., 2008. — С. 223.
  8. Сухопарова Е.П., Шаповалов С.Г. Восстановление груди, как наиболее конструктивный механизм психологической реабилитации женщин после мастэктомии // Материалы IX Междунар. конгресса «Реконструктивная, пластическая и эстетическая хирургия молочной железы». — Казань, 2009. — С. 162—163.
  9. Сухопарова Е.П., Кичемасов С.Х., Скворцов Ю.Р., Шаповалов С.Г. Хирургическая реабилитация женщин после мастэктомии // Материалы IX Междунар. конгресса «Реконструктивная, пластическая и эстетическая хирургия молочной железы». — Казань, 2009. — С. 170—173.
  10. Сухопарова Е.П., Шаповалов С.Г. Морфологическая оценка эффективности экспериментального применения рецепторного антагониста интерлейкина-1 при выполнении липофиллинга // Тезисы Второго съезда Российского общества пластических, реконструктивных и эстетических хирургов. — М., 2010. — С. 130—131.
  11. Сухопарова Е.П., Шаповалов С.Г. Возможности медикаментозной оптимизации технологии выполнения липофиллинга в реабилитации пострадавших в чрезвычайных ситуациях // Материалы междунар. науч. конф., посвящ. 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова «Наследие Пирогова: прошлое, настоящее, будущее». — СПб., 2010. — С. 400.
  12. Сухопарова Е.П., Хрусталева И.Э., Шаповалов С.Г. Гистологическая оценка эффективности экспериментального применения рецепторного антагониста интерлейкина-1 при выполнении аутожировой трансплантации // Материалы междунар. науч.-практич. конф. «Многопрофильная клиника XXI века: передовые медицинские технологии». — СПб., 2011. — С. 88—91.
  13. Сухопарова Е.П., Малахов С.Ф., Парамонов Б.А., Румакин В.П. Применение препарата «Ралейкин» для повышения выживаемости адипоцитов при липофиллинге // Сборник статей НПО врачей-косметологов Санкт-Петербурга. — СПб., 2009. — С. 110—114.
  14. Сухопарова Е.П. К вопросу о хирургическом омоложении периоральной области // Искусство профессионалов красоты. — 2010. —№1. — С. 21—25.
  15. Сухопарова Е.П., Малахов С.Ф., Парамонов Б.А., Шаповалов С.Г. Применение антагониста рецепторов ИЛ-1 для повышения выживаемости адипоцитов при выполнении липофиллинга // Искусство профессионалов красоты. — 2010. — №2. — С. 61—63.
  16. Сухопарова Е.П., Малахов С.Ф., Шаповалов С.Г. Профилактика развития перекисного окисления липидов при выполнении липофиллинга // Сборник статей НПО врачей-косметологов Санкт-Петербурга. — СПб., 2010. — С. 115—119.






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.