WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

БАСТРЫГИН ДМИТРИЙ ВЛАДИМИРОВИЧ

    1. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ БИОТРАНСФОРМАЦИИ И ФАРМАКОКИНЕТИКИ ОСНОВНОГО МЕТАБОЛИТА АФОБАЗОЛА СОЕДИНЕНИЯ М-11

14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Москва – 2012

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении

“Научно-исследовательском институте фармакологии имени В.В. Закусова” Российской академии медицинских наук (ФГБУ “НИИ фармакологии имени В.В.Закусова” РАМН)

Научный руководитель:

Доктор биологических наук                                Колыванов Геннадий Борисович

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ                                Жердев Владимир Павлович

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор,

главный научный сотрудник

лаборатории психофармакологии

ФГБУ “НИИ фармакологии

имени В.В.Закусова” РАМН                                Золотов Николай Николаевич

Доктор биологических наук,

главный эксперт лаборатории

химико-фармацевтических препаратов

№ 2 испытательного центра

ФГБУ "Научный центр экспертизы средств

медицинского применения"

Минздравсоцразвития РФ                                        Соколов Андрей Владимирович

Ведущая организация: ГБОУ ВПО Российский национальный
исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова
Минздравсоцразвития России

Защита диссертации состоится «_____» _______________ 2012 г. в ______час на заседании диссертационного совета Д. 001.024.01 на базе ФГБУ “НИИ фармакологии имени В.В. Закусова” РАМН по адресу: 125315, Москва, ул. Балтийская, д.8.

С диссертацией можно ознакомиться в учёной части ФГБУ “НИИ фармакологии имени В.В. Закусова” РАМН по адресу: 125315, Москва, ул. Балтийская, д.8.

Автореферат разослан  «_____» _______________ 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук,

профессор                               Вальдман Елена Артуровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ



Актуальность проблемы

В современной психофармакологии важной является проблема создания селективных анксиолитиков, сходных по противотревожным свойствам с бензодиазепинами, и при этом не обладающих их гипноседативными, миорелаксантными, амнестическими эффектами, не вызывающих зависимости и синдрома отмены (Середенин С. Б. с соавт., 1998, Briley М., Nutt D.J., 2000). Итогом фундаментальных исследований генетических различий в действии типичных транквилизаторов и анализе механизмов диссоциации их анксиолитического и седативного влияния явился целенаправленный синтез соединения с селективными анксиолитическими свойствами 5-этокси-2-[2-(морфолино)-этилтио]-бензимидазола дигидрохлорида, получившего название афобазол (Середенин С. Б. с соавт., 1998, Seredenin S.B., 2003).

Изучена фармакокинетика нового селективного анксиолитика афобазола у крыс (Виглинская А.О., 2007). Установлено, что при различных путях введения афобазол интенсивно биотрансформируется и уже в первые минуты в плазме крови и органах крыс регистрируются значительные концентрации его метаболитов. Неизмененный препарат и его метаболиты определяются в плазме крови и органах животных в течение 3-х часов. При этом показано, что основным продуктом биотрансформации афобазола является метаболит 11 (окисленный по морфолиновому кольцу).

Выявлено, что после введения крысам афобазол и его основной метаболит 11 характеризуются близкими значениями абсолютных величин тканевой доступности в мозге (Виглинская А.О. с соавт., 2010).

Основываясь на полученных данных, можно предположить, что в случае наличия фармакологической активности у метаболита 11, данное соединение внесет соответствующий вклад в реализацию фармакологических эффектов афобазола, а также может служить основой для создания нового оригинального лекарственного препарата.

В ФГБУ “НИИ фармакологии имени В.В. Закусова” РАМН синтезировано соединение М-11 2-[2-(3-оксоморфолин-4-ил)этилтио]-5-этоксибензимидазола гидрохлорид, ранее идентифицированное в качестве основного, активного метаболита афобазола и предложенное для дальнейшего фармакологического и фармакокинетического изучения (Середенин С. Б. с соавт., 2009).

В разработке оригинального лекарственного средства (ЛС) обязательным и необходимым этапом является экспериментальное изучение его фармакокинетики и метаболизма (Жердев В.П., Литвин А.А, 2005, Хабриев Р.У., 2005).

Диссертация выполнена в соответствии с плановой темой НИР ФГБУ “НИИ фармакологии имени В.В. Закусова” РАМН “Изучение механизмов эндо- и экзогенной регуляции функций ЦНС, разработка новых оригинальных нейропсихотропных средств”. (№ государственной регистрации 01. 2006 06601).

Целью работы явилось экспериментальное изучение биотрансформации и фармакокинетики соединения М-11 (основного активного метаболита афобазола).

Задачи исследования

  1. Разработать высокочувствительный и селективный аналитический метод количественного определения соединения М-11 и его метаболитов в биологическом материале с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией.
  2. Изучить биотрансформацию соединения М-11 в плазме крови крыс после его перорального и внутривенного введения.
  3. Изучить фармакокинетику соединения М-11 в плазме крови и органах крыс после однократного внутрибрюшинного введения.
  4. Изучить фармакокинетику соединения М-11 в плазме крови крыс после однократного внутривенного и перорального введения.
  5. Определить абсолютную биологическую доступность соединения М-11.
  6. Изучить фармакокинетику афобазола и соединения М-11 в системе “мать-плацента-плод”, молочных железах крыс и органах крысят, вскормленных самками, получавших афобазол.
  7. Определить коэффициенты липофильности афобазола и соединения М-11 в системе гексан : вода.
  8. Изучить экскрецию соединения М-11 и его метаболитов с мочой и калом в эксперименте.
  9. По результатам проведенных исследований обосновать перспективу создания пероральной лекарственной формы на основе соединения М-11.

Научная новизна исследования

Впервые исследована биотрансформация и фармакокинетика соединения М-11 (основного активного метаболита афобазола) у крыс, рассчитаны основные фармакокинетические параметры. Обнаружено, что соединение М-11 подвергается слабо выраженной биотрансформации после его непосредственного введения экспериментальным животным по сравнению с афобазолом. По результатам масс-спектрального анализа и встречного химического синтеза были идентифицированы 3 метаболита соединения М-11. Метаболиты – гидроксилированный по алифатическому радикалу, гидроксилированный по бензимидазольному кольцу и сульфоксид соединения М-11 можно условно отнести к основным метаболитам, так как они регистрируются в наибольших количествах.

Соединение М-11 и его метаболиты определяются в плазме крови и органах животных в течение 3-х часов. В результате проведенного исследования установлено, что для соединения М-11 характерна более низкая степень проникновения в орган-мишень мозг и более высокая абсолютная биодоступность по сравнению с афобазолом. Установлено, что соединение М-11 по сравнению с афобазолом значительно интенсивнее проникает в органы и ткани крыс, о чем свидетельствуют величины площадей под фармакокинетической кривой и максимальных концентраций исследуемого соединения.

Практическая значимость исследования

На основании результатов, полученных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией, идентифицированы и синтезированы метаболиты соединения М-11. Полученное высокое значение абсолютной биодоступности подтверждает возможность создания лекарственных форм для перорального применения на основе соединения М-11. Фармакокинетические параметры, установленные в настоящей работе, могут быть использованы для дальнейшего фармакологического изучения соединения М-11.

В результате сравнительного анализа фармакокинетических параметров соединения М-11 и афобазола обоснована перспектива создания на основе изучаемого соединения таблетированной формы нового лекарственного препарата.

Личный вклад автора

Автором самостоятельно разработана методики количественного определения соединения М-11 в биоматериале, проведены исследования по изучению биотрансформации и фармакокинетики соединения М-11 у крыс после разных путей введения, обработаны результаты, сформулированы выводы. При непосредственном участии автора подготовлены публикации по результатам работы.

Положения, выносимые на защиту

  1. Разработаны высокочувствительные и селективные методы количественного определения соединения М-11 в биологическом материале с использованием ВЭЖХ-УФ и ВЭЖХ-МС/МС.
  2. Соединение М-11 обладает более высокой абсолютной и тканевой биодоступностью по сравнению с афобазолом, кроме мозга. Соединение М-11 проникает в молоко кормящих самок крыс, а также через плацентарный барьер.
  3. Соединение М-11 подвергается слабой биотрансформации по сравнению с афобазолом в организме крыс после различных путей введения.
  4. Неизмененный препарат не определяется в экскрементах крыс.
  5. Липофильность соединения М-11 ниже, чем у афобазола.

Апробация работы

Основные результаты работы доложены на: научно-практической конференции ”Достижения клинической фармакологии в России“ (Москва, 2009 г.), ежегодной конференции с международным участием “Фармация и общественное здоровье” (Екатеринбург, 2010 г.),V Международной конференции “Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам” (Москва, 2010 г.), XVI Всемирном съезде фармакологов (Копенгаген, 2010 г.), XI Региональном Конгрессе Европейской коллегии по нейропсихофармакологии (Санкт-Петербург, 2011 г.), конференции в лаборатории фармакокинетики ФГБУ “НИИ фармакологии имени В.В. Закусова” РАМН (Москва, 2011 г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликованы: 3 статьи - в ведущих рецензируемых научных журналах, определенных Высшей аттестационной комиссией, и 5 тезисов - в материалах российских и международных научных конференций. 1 статья принята в печать.

Объем и структура диссертации

Диссертация содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, 3 главы результатов собственных исследований и их обсуждение, заключение, выводы, практические рекомендации, список литературы, включающий … источников литературы, 21 таблицу, 28 рисунков. Диссертация изложена на … страницах машинописного текста.

Экспериментальная часть

Материалы и методы исследования

Соединение М-11 – 2-[2-(3-оксоморфолин-4-ил)этилтио]-5-этокси-бензимидазола гидрохлорид. Молекулярная масса 357,89 г/моль. По своим физико-химическим свойствам соединение М-11 представляет собой белый кристаллический порошок, хорошо растворимый в воде и умеренно в спирте.

В работе использовалась субстанция соединения М-11, синтезированного в отделе химии фармакологически активных веществ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН. Там же были синтезированы следующие метаболиты соединения М-111: 2-оксиэтилтио-5-этоксибензимидазол, 2-[2-(3-оксоморфолин-4-ил)этилсульфенил]-5-этоксибензимидазол, 2-[2-(3-оксоморфолин-4-ил)этилсульфонил]-5-этоксибензимидазол. В качестве внутреннего стандарта (ВС) использовалась субстанция афобазола, сер. 0804001Р производства Erregierre SpA., (Италия). Содержание основного компонента во всех используемых в работе стандартных веществах было не ниже 99,0%

Экспериментальные животные

Изучение фармакокинетики соединения М-11 проводили на бодрствующих белых крысах-самцах (масса тела 200±30 г), полученных из питомника “Столбовая” РАМН. Животных содержали в стандартных условиях вивария ФГБУ “НИИ фармакологии имени В.В. Закусова” РАМН при 12-ти часовом световом режиме. Животным однократно внутрибрюшинно и перорально вводили раствор соединения М-11 в дозе 25 мг/кг.

Условия масс-спектрометрического анализа соединения М-11 и его метаболитов в плазме крови крыс

Анализ проводили на ВЭЖХ-МС/МС системе «Agilent 1200 Series» («Agilent technologies», USA с масс-спектрометрическим детектором (ионная ловушка) модели VL с электроспрей-ионизацией при атмосферном давлении (API-ES) и управляемым IBM совместимым компьютером с системой обработки данных “ChemStation”. Детектирование проводили в режиме как положительной, так и отрицательной ионизации по полному ионному току, температура азота – 350 С, расход – 10 л/мин, давление на небулайзере – 240 кПа, напряжение на капилляре – 3500В. Подвижная фаза состояла из буферного раствора А (50,0 мл 0,1М раствора ацетата аммония и 5 мл концентрированной муравьиной кислоты) и ацетонитрила с добавлением 50,0 мл раствора ацетата аммония и 5 мл концентрированной муравьиной кислоты в качестве раствора В. Соотношение раствора А к раствору В составляет 4:1. Скорость подачи подвижной фазы составила 0,3 мл/мин.

Условия количественного определения М-11 и его метаболитов в плазме крови, органах и экскрементах животных с применением метода высокоэффективной жидкостной хроматографии

Хроматографический анализ проводили на компьютеризованной системе «Beckman Coulter» (США), оснащенной изократической помпой – «System Gold 127 Solvent Module» и УФ-детектором с переменной длиной волны – «System Gold 166 Detector».

Условия хроматографирования: аналитическая колонка – Synergi С-18 «Phenomenex» (250×4,6 мм, 4 мкм); подвижная фаза – глициновый буфер (рН 3,4) : ацетонитрил (100:33); скорость потока подвижной фазы – 1,5 мл/мин; детектирование – 300 нм. Хроматографический анализ проводили при комнатной температуре (22-24°С). Перед хроматографированием подвижную фазу дегазировали на ультразвуковой бане и фильтровали.

Относительная ошибка метода количественного определения соединения М-11 не превышала 6,91%. Полученные данные свидетельствуют о том, что разработанные методики характеризуются высокой воспроизводимостью.

Обработка биологических проб, экстракция М-11 и его метаболитов из биологических образцов

Подготовка плазмы крови крыс к хроматографическому анализу

Экстракцию соединения М-11 из плазмы крови, молока, мочи и кала, а так же из гомогенатов органов, плацент и эмбрионов, проводили диэтиловым эфиром. К опытным образцам  добавляли 15,0 мл диэтилового эфира и встряхивали в течение 15 мин. Эфирный слой переносили в выпарительные колбы и выпаривали досуха при 40С в токе азота. Сухой остаток растворяли в подвижной фазе (0,3-0,5 мл) и аликвоту (200 мкл) вводили в инжектор хроматографа. Процедуру экстракции повторяли дважды.





С целью определения величины процента извлечения соединения М-11 из плазмы крови были приготовлены стандартные растворы в дистиллированной воде с концентрациями 1,25; 2,50 и 5,00 мкг/мл. 0,1 мл стандартного раствора добавляли к 0,9 мл интактной плазмы крови и инкубировали на водяной термостатической бане в течение 1 часа при 37°С. Затем проводили двойную экстракцию М-11 диэтиловым эфиром.

Установлено, что процент извлечения соединения М-11 из плазмы крови составляет 91,9 ± 2,24 (среднее из 3 определений).

Построение калибровочных кривых

Количественное определение соединения М-11 проводили методами  абсолютной калибровки и внутреннего стандарта.

При использовании метода абсолютной калибровки линейность методики оценивалась по площадям хроматографических пиков 7 калибровочных стандартов (50, 100, 250, 500, 1000, 2500, 5000 нг/мл), растворенных в элюенте, используя алгоритм линейной регрессии наименьших квадратов, в системе координат «площадь хроматографического пика – концентрация соединения М-11». В изучаемом диапазоне отмечена линейная зависимость между концентрацией анализируемого соединения и площадью пика, которая описывалась следующим уравнением: S=0,1644·С, где S – площадь хроматографического пика соединения М-11, С - концентрация анализируемого соединения. Коэффициент корреляции градуировочных графиков в диапазоне концентраций 50 – 5000 нг/мл составлял 0,992.

При использовании метода внутреннего стандарта (афобазол 1000 нг/мл) линейность методики оценивалась в диапазоне 505000 нг/мл, используя алгоритм линейной регрессии наименьших квадратов в системе координат «отношение площадей хроматографического пика соединения М-11 к площади хроматографического пика ВС (афобазола) – концентрация соединения М-11». В изучаемом диапазоне отмечена линейная зависимость между концентрацией анализируемого соединения и соотношением площади пика соединения М-11 к площади пика ВС, которая описывалась следующим уравнением: , где – площадь хроматографического пика соединения М-11, – площадь хроматографического пика внутреннего стандарта, С - концентрация анализируемого соединения. Коэффициент корреляции градуировочных графиков в диапазоне концентраций 50 – 5000 нг/мл составлял 0,995. В этих условиях время удерживания для соединения М-11 составило 6,5 мин.

Фармакокинетические параметры, используемые для интерпретации экспериментальных данных

Основные фармакокинетические параметры рассчитаны модельно-независимым методом (программа “M-IND”) (Агафонов А.А., Пиотровский В.К., 1991):

  • AUC0- (мкг/мл×ч) – площадь под фармакокинетической кривой (площадь под кривой “концентрация лекарственного вещества – время”). AUC0- рассчитывается от момента введения до бесконечности;
  • C0 (мкг/мл) – концентрация препарата в плазме крови после внутривенного введения в нулевой момент времени;
  • Тmax (ч) – время достижения максимальной концентрации препарата в плазме крови после перорального введения;
  • Cmax (мкг/мл) – максимальная концентрация лекарственного вещества (ЛВ) в плазме крови после перорального введения;
  • Cmax/AUC0- (ч-1)– параметр, характеризующий скорость всасывания препарата в системный кровоток;
  • MRT (ч) – среднее время пребывания лекарственного вещества в организме;
  • Kel (ч-1) – константа элиминации, параметр, характеризующий скорость выведения препарата из организма;
  • t1/2el (ч) – период, за который выводится половина введенной и всосавшейся дозы лекарственного вещества.
  • fт – тканевая доступность;
  • Kd – кажущий коэффициент распределения;
  • fa – абсолютная биодоступность.

Статистическая обработка полученных результатов

Полученные экспериментальные данные были статистически обработаны с помощью программы “Excel v.11.0”. В таблицах представлены следующие статистические характеристики: – среднее арифметическое результатов измерений, SD – стандартное отклонение, S – стандартное отклонение от среднего арифметического, – абсолютная погрешность измерений, ε% – относительная погрешность измерений.

Достоверность различий для сравниваемых концентраций исследуемых соединений оценивали с помощью критерия Стьюдента (программа “Statistica 6.0”) (Сергиенко В.И., Бондарева И.Б., 2001).

Поскольку на каждую временную точку использовали по 8 животных, результирующая фармакокинетическая кривая была построена по усредненным концентрациям, поэтому при расчетах фармакокинетических параметров отсутствует статистическая обработка результатов. Рисунки были выполнены с использованием графического редактора “Origin v.7.0”.

Условия определения коэффициента распределения афобазола и соединения М-11 между органической и водной фазами

Для определения коэффициента распределения афобазола и соединения М-11 использовалась система гексан:фосфатный буфер (рH 7,4). Log P определяли по методу “Shake - flask” (Sangster J., 1997).

К буферному раствору (рH 7,4) с известной концентрацией исследуемого соединения добавляли эквивалентный объем н-гексана. Две фазы встряхивали (в шейкере) в течение 3-х часов, а затем на 2 часа помещали в водяную баню при температуре 37°С для установления квазистационарного состояния. Фазы были окончательно разделены путем центрифугирования при 1500 об/мин в течение 15 мин. Концентрация исследуемого вещества в водной фазе определялась с помощью ВЭЖХ-УФ. Коэффициент распределения (Р), исследуемого соединения был рассчитан по формуле: ,где - концентрация исследуемого вещества в липофильной фазе (н-гексан), - концентрация исследуемого вещества в гидрофильной фазе (фосфатный буфер).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Биотрансформация соединения М-11 у крыс

Исследование метаболизма соединения М-11 с применением масс-спектрометрического анализа позволило обнаружить наряду с неизмененным препаратом 8 продуктов его биотрансформации (рис. 1). Как видно из рис. 1, большинство метаболитов относятся к продуктам окисления соединения М-11.

Ранее было показано, что в организме крыс афобазол интенсивно метаболизируется. С применением масс-спектрометрического анализа в плазме крови животных наряду с неизмененным афобазолом было обнаружено 17 продуктов его биотрансформации (Колыванов Г.Б. с соавт., 2006).

Рисунок 1 Схема биотрансформации соединения М-11 на основании данных масс-спектрометрического анализа плазмы крови крыс.

Соединение М-11, в отличие от афобазола, характеризуется слабо выраженной степенью биотрансформации, поскольку после введения аналогичными способами животным соединения М-11 его метаболиты определяются в небольших, а некоторые лишь в следовых количествах. В результате отщепления морфолонового цикла с последующим гидролизом образуется продукт 1, содержащий гидроксигруппу в алкильной цепочке молекулы. Гидролиз этоксигруппы в 5-м положении М-11 и соединения 1 приводит соответственно к формированию продуктов 2 и 6, содержащих гидроксильную группу в 5-м положении бензимидазольного цикла. Дальнейшая деградация алифатической цепочки у метаболита 1 приводит к образованию соединения 5. Частичное окисление атома серы в соединении М-11 приводит к формированию метаболита 3. Определяется также сульфоксид продукт 7, появление которого возможно несколькими путями (рис. 1). В результате деметилирования соединения 3 образуется продукт 8. Результатом дальнейшего окисления атома серы в соединении 3 является продукт 4 - сульфон.

В результате сравнительного анализа хроматографических и масс-спектральных свойств соединений 1, 3, 4 (рис. 1) и синтезированных стандартов установлена их полная идентичность. Другие метаболиты, для которых в настоящее время нет соответствующих стандартов, были охарактеризованы по значениям молекулярных ионов. Метаболиты 1, 2 и 3 можно условно отнести к основным метаболитам, так как они регистрируются в больших количествах, чем остальные. Остальные метаболиты были обнаружены лишь в следовых количествах. В опытной плазме крови крыс обнаружен молекулярный ион с m/z 322 соответствующий основанию соединения М-11, который отсутствовал в контрольной плазме крови. Дальнейшая фрагментация молекулярного иона выявила один дочерний (характеристический) ион с m/z 128, подтверждающий химическое строение исходного соединения. Формирование гидроксильной группы, являющейся более полярной и способной к глюкуронированию, характерное направление биотрансформации большинства ксенобиотиков. Частными примерами данного процесса являются реакции гидролиза этоксигруппы у афобазола и соединения М-11. Продукты биотрансформации, образующиеся по данному направлению определяются в наибольших количествах (Виглинская А.О., 2007). Окисление морфолинового кольца в соответствующие морфолоны встречается в метаболизме различных замещенных морфолинов: доксапрам (Pitts J.E. et al, 1973), вилоксазин (Case D.E. et al, 1975), молсидомин (Rosenkranz B. еt al, 1996), эморфазон (Hayashi T. et al, 1982), ребоксетин (Dostert P. et al, 1997) и др. Фактически, этот путь метаболизма является основным в биотрансформации шестичленных гетероциклов. Поэтому, и для содержащих морфолиновый цикл веществ характерно данное направление метаболизма (Граник В.Г., 2006). Дальнейшие метаболические превращения приводят, как правило, к раскрытию кольца с образованием более полярных структур, содержащих гидроксильную и/или карбоксильную группу.

Таким образом, основные направления биотрансформации соединения М-11 у крыс заключаются в образовании гидроксилированных по ароматическому кольцу бензимидазольного цикла метаболитов. Образование гидроксильной группы в бензимидазольном фрагменте подтверждается литературными источниками по биотрансформации таких производных бензимидазола как ланзопразол, омепразол, пантопразол, альбендазол и др. (Cederberg C. et al, 1989, Andersson T. et al, 1992, Karol M.D. et al, 1995, Pearce R.E. et al, 1996).

Фармакокинетика соединения М-11 после внутрибрюшинного введения крысам в дозе 25 мг/кг

После внутрибрюшинного введения соединение М-11 подвергается биотрансформации, и уже в первые минуты в плазме крови и органах крыс регистрируются его метаболиты. Соединение М-11 определяется в плазме крови и органах животных в течение 3-х часов.

Рисунок 2 Фармакокинетическая кривая соединения М-11 в плазме крови крыс после однократного внутрибрюшинного введения в дозе 25 мг/кг.

Снижение концентраций соединения М-11 носит ярко выраженный двухфазный характер (рис. 2). Время достижения максимальной концентрации (Tmax) соединения М-11 в плазме крови составило 0,042 часа (2,5 мин), а ее величина – 25,87 мкг/мл (табл. 1). Максимальные концентрации соединения М-11  в исследуемых органах и тканях наблюдались через 1-5 мин, а в мозге через 5 мин.

Анализ параметров кинетики позволяет заключить, что соединение М-11 быстро выводится из организма, на что указывает значение константы скорости элиминации из плазмы крови, которая составила для исследуемого соединения 2,042 ч-1.

Таблица 1 Фармакокинетические параметры соединения M-11 в плазме крови крыс после однократного внутрибрюшинного введения в дозе 25 мг/кг

Фармакокинетические параметры

AUC0-,

мкг/млч

Cmax,

мкг/мл

,ч -1

Tmax,

ч

Cl,

л/час

Kel,

ч-1

t1/2el,

ч

MRT,

ч

Vd,

л

12,58

25,87

2,06

0,042

1,988

2,042

0,34

0,39

0,973

Быстрое выведение соединения М-11 из организма характеризуется также величинами следующих фармакокинетических параметров: среднее время удерживания в организме – 0,39 ч и период полувыведения вещества из организма – 0,34 ч.

Соединение М-11 выводится из плазмы крови, мозга, печени, селезёнки и почек примерно с одинаковой скоростью (1,695 – 2,267 ч-1). Значения констант элиминации статистически не отличаются. Соединение М-11 более быстро выводится из умеренно и слабо васкуляризированных тканей. Абсолютные величины Kel для брыжейки и мышечной ткани составили 2,425ч-1 и 2,188 ч-1, соответственно, что может быть связано с относительно слабыми липофильными свойствами. Среднее время удерживания соединения М-11 в плазме крови, мозге, печени, селезёнке и почках характеризуются приблизительно одинаковыми величинами.

Таким образом, полученные результаты по изучению фармакокинетики соединения М-11 после его введения внутрибрюшинно позволяют сделать вывод, что исследуемое соединение элиминирует из организма животных с высокой скоростью, на основании чего его можно отнести к группе “короткоживущих” лекарственных веществ.

Полученные результаты подтверждаются многочисленными литературными данными по морфолинсодержащим структурам. Так, например, период полувыведения молсидомина составляет 1 ч (Rozenkranz B. et al, 1996), в случае инделоксазина – 2,2 ч (Kamimura H. et al, 1987), препарат моклобемид элиминирует из плазмы крови с периодом полувыведения 2–4 ч в зависимости от вводимой дозы (Wiesel F.A. et al, 1985), период полувыведения афобазола равен 0,53 ч (Виглинская А.О. с соавт., 2007).

    1. Тканевая доступность соединения М-11 у крыс

Распределение соединения М-11 изучали  в органах и тканях, отличаюшихся друг от друга различной степенью кровоснабжения, а также в органах, обеспечивающих элиминацию и в органе – зоне потенциального действия: сильно васкуляризованные ткани – селезёнка; умеренно васкуляризованные ткани – мышцы; слабо васкуляризованные ткани – брыжейка; органы, обеспечивающие элиминацию – печень, почки; зона потенциального действия – мозг.

Соединение М-11 регистрируется во всех исследуемых органах и тканях, причем в распределении препарата прослеживается некоторая гетерогенность.

Величины тканевой доступности представлены на рис. 3.

Рисунок 3 Тканевая доступность (fT) соединения М-11 после однократного внутрибрюшинного введения в дозе 25 мг/кг.

Анализ абсолютных величин тканевой доступности соединения М-11 показал, что исследуемое соединение интенсивно распределяется в сильно васкуляризированных тканях органов – печени, селезёнке и почках. В то же время их содержание в умеренно и слабо васкуляризированных тканях (мышца, брыжейка) – значительно ниже.

Тканевая доступность соединения М-11 в системе «печень – плазма крови» характеризируется величинами 1,19; «селезёнка – плазма крови» - 0,90; «почки - плазма крови» - 0,71.

К информативным фармакокинетическим показателям, отражающим степень проницаемости соединений в ткани организма и способность последних к избирательному захвату фармакологических препаратов из кровяного русла, также относится кажущийся коэффициент распределения (Kd). Наклон фармакокинетической кривой соединения М-11 в плазме крови и мозге крыс характеризуются близкими значениями параметра «b», поэтому правомерно рассчитать Kd  в моно экспоненциальных фазах.

Таблица 2 Коэффициенты распределения соединения М-11 в органах и тканях крыс после однократного внутрибрюшинного введения препарата в дозе 25 мг/кг (n=8; ±SD)

Органы

Коэффициенты

распределения

Время, час

0,25

0,50

1,0

1,5

Мозг

0,04

0,04

0,03

0,05

Печень

0,92

0,93

1,14

1,88

Селезёнка

0,43

0,47

0,42

0,14

Почки

0,61

0,77

0,79

1,01

Мышцы

0,38

0,34

0,42

0,55

Брыжейка

0,21

0,17

0,16

0,11

Величины коэффициентов распределения соединения М-11 в органах и тканях крыс представлены в таблице 2. Коэффициенты распределения для органов, обеспечивающих элиминацию вещества, характеризуются средними величинами и составили для печени – 0,92 – 1,88, для почек – 0,61 – 1,01 (через 0,25 – 1,50 ч после введения препарата). В то же время, для средне- и слабоваскуляризированных органов коэффициенты распределения оказались более низкими. Kd в системе «мышцы – плазма крови» (через 0,25 – 1,50 ч после введения) не превышают 0,55; в системе «брыжейка – плазма крови» - 0,11. Интересно отметить, что самое заметное уменьшение коэффициента распределения наблюдалось в системе «селезёнка – плазма крови» (через 0,25 – 1,50 ч после введения). Коэффициент распределения в данном органе снизился в 4 раза, в то время как коэффициенты распределения в остальных тканях либо были на одном уровне (мозг, мышцы), либо изменения носили не столь значительный характер, как в селезенке (брыжейка, почки). Самое низкое значение коэффициента распределения наблюдалось в системе «мозг – плазма крови» (через 0,25-1,5 ч после введения) и составило 0,05 после 1,5 часов. Важно также отметить, что в системах «селезёнка – плазма крови» и «брыжейка – плазма крови» наблюдалось снижение величин, характеризующих коэффициент распределения, в то время как для систем «печень – плазма крови», «почки – плазма крови» и «мышцы – плазма крови» наблюдается увеличение данного коэффициента (табл. 2), что может служить доказательством наличия небольшой кумуляции соединения М-11 в печени, почках и мышцах.

Таким образом, из полученных нами данных следует, что интенсивность проникновения соединение М-11 в органы и ткани снижается в ряду: печень – селезёнка – почки – брыжейка – мышцы – мозг.

Фармакокинетика соединения М-11 после перорального введения крысам в дозе

25 мг/кг

Рисунок 4 Фармакокинетические кривые соединения М-11 в плазме крови крыс после однократного введения пе­рорально и внутривенно в дозе 25 мг/кг (n=8; ±SD).

Фармакокинетика М-11 после введения его перорально крысам (рис. 4, табл. 3) существенно отличается от кинетики введения внутрибрюшинно, прежде всего более низкими концентрациями неизмененного препарата.

Как видно из рисунка 4, содержание М-11 в плазме крови крыс быстро нарастает (Cmax/AUC0-= 0,97 ч-1), и достигает максимума в среднем через 0,5 ч. Затем наблюдается двухфазное снижение концентрации неизменённого вещества.

Соединение М-11 определяется в плазме крови животных в течение 3-х часов. Снижение концентраций препарата носит ярко выраженный двухфазный характер (рис. 4). Фармакокинетические параметры М-11 после введения перорально и внутривенно представлены в табл. 3.

Таблица 3 Фармакокинетические параметры в плазме крови крыс после однократного введения перорально и внутривенно соединения М-11 в дозе 25 мг/кг

Фармакокинетические параметры

AUC0-,

мкг/млч

Cmax,

мкг/мл

,ч-1

C0,

мкг/мл

Tmax,

ч

Cl,

л/час

Kel,

ч-1

t1/2 el l,

ч

MRT,

ч

Vd,

л

П/О

9,08

8,8

0,97

0,5

2,757

1,53

0,45

0,56

1,80

В/В

13,3

83,63

1,879

2,01

0,34

0,38

0,71

Время достижения максимальной концентрации (Tmax) соединения М-11 в плазме крови после его перорального введения составило 0,5 ч, а её величина – 8,8 мкг/мл.

Анализ параметров кинетики позволяет заключить, что соединение М-11 быстро выводится из организма, на что указывают значения Cl – 2,757 л/ч и Kel – 1,533 ч-1. Период полувыведения исследуемого соединения­ составил 0,45 ч, MRT в  организме крыс – 0,56 ч.

При сравнении величин констант скорости элиминации соединения М-11 после введения внутривенно и перорально видно, что анализируемое вещество приблизительно одинаково выводится из организма животных как после введения перорально, так и после введения внутривенно.

Абсолютная биодоступность соединения М-11 у крыс

Абсолютная биодоступность соединения М-11 после введения перорально составляет 68,3%. Высокую степень биодоступности М-11, по-видимому, можно рассматривать, как следствие его слабо выраженной биотрансформации, что приводит в свою очередь к высокой концентрации соединения М-11 в плазме крови. У афобазола интенсивность биотрансформации значительно выше, чем у М-11 и в то же время величина абсолютной биодоступности ниже и составляет 43,6% (Виглинская А.О. с соавт., 2007, Середенин С.Б. с соавт., 2007).

Рисунок 5 Площади под фармакокинетической кривой в плазме крови крыс соединения М-11 после однократного перорального и внутривенного введения в дозе 25 мг/кг.

Высокие значения абсолютной биодоступности характерны для многих лекарственных препаратов содержащих морфолиновый цикл: ребоксетин (94,5%), линезолид (>95% у крыс и собак и >70 % у мышей), гефитиниб (59%), инделоксазин (90%) (Kamimura H. et al, 1987, Fleishaker J.C. et al, 2000, Slatter J.G., et al, 2002, McKillop D. et al, 2004).

    1. Сравнительный анализ тканевой доступности афобазола и соединения М-11

Распределение афобазола и соединения М-11 изучали в органах и тканях крыс, отличающихся друг от друга различной степенью васкуляризации, а также в зоне потенциального действия - мозге (Виглинская А.О. с соавт., 2007, Виглинская А.О. с соавт., 2010). Афобазол и соединение М-11 регистрируются во всех исследуемых органах и тканях, при этом в распределении веществ прослеживается значительная гетерогенность. Основными фармакокинетическими параметрами, на основании которых проводился сравнительный анализ величин исследуемых соединений, были площадь под фармакокинетической кривой (AUC0-), максимальная концентрация (Сmax) и период полувыведения (t1/2el) (табл. 4). Анализ величин фармакокинетических параметров афобазола и соединения M-11 показал, что исследуемые соединения интенсивно распределяются в сильно васкуляризированных тканях печени, селезёнки и почек, при этом значения AUC0- и Сmax соединения М-11 значительно превосходят те же параметры для афобазола. Так, в плазме крови Сmax соединения М-11 составляет 25,87 мкг/мл, а афобазола – 5,35 мкг/мл, что приблизительно в 5 раз превышает величину максимальной концентрации афобазола при одинаковой введенной дозе. Величина AUC0- соединения М-11 в плазме крови была в 7,6 раза выше аналогичного параметра для афобазола. Также значительно более высокие величины AUC0- и Сmax наблюдаются во всех исследуемых органах (печени, селезёнке, почках, мышцах и брыжейке), за исключением мозга. Соединение М-11 в значительно меньшей степени, по сравнению с афобазолом, подвергается биотрансформации, поэтому в плазме крови и почти во всех органах (кроме мозга) величины AUC0- и Сmax соединения М-11 были значительно выше (табл. 4). В то же время, в мозге величина Сmax соединения М-11 была в 2,7 раза ниже аналогичной величины афобазола. AUC0- соединения М-11 в мозге в 1,8 раза ниже аналогичной величины для афобазола. Хотя при непосредственном введении соединения М-11 AUC0- в 1,7 раза больше, чем при образовании соединения М-11 в качестве метаболита при введении афобазола.

Как и афобазол соединение М-11 быстро выводится из организма животных, о чем свидетельствуют значения t1/2el (табл. 4). Через 3 ч после различных способов введения регистрировались следовые концентрации исследуемых веществ.

Таблица 4 Основные фармакокинетические параметры (AUC0- , Сmax, t1/2el) афобазола и метаболита М-11 в плазме крови и органах крыс после однократного внутрибрюшинного введения в дозе 25 мг/кг

Афобазол

Соединение М-11

Неизмененный препарат

Метаболит (М-11)

AUC0- (мкг/мл×ч)

Cmax (мкг/мл)

t1/2el (ч)

AUC0- (мкг/мл×ч)

Cmax (мкг/мл)

t1/2el (ч)

AUC0- (мкг/мл×ч)

Cmax (мкг/мл)

t1/2el (ч)

плазма

крови

1,66

5,35

0,33

0,42

0,65

0,40

12,58

25,87

0,34

мозг

0,97

3,24

0,39

0,33

0,50

0,54

0,55

1,19

0,41

печень

4,15

19,83

0,32

2,42

5,51

0,39

15,00

59,62

0,37

селезенка

2,41

19,21

0,39

1,43

2,42

0,46

11,33

47,49

0,31

почки

2,55

8,32

0,38

1,39

2,65

0,44

8,94

28,45

0,39

мышцы

1,12

2,99

0,49

0,56

1,02

0,52

4,44

7,67

0,32

брыжейка

0,35

0,38

0,79

0,24

0,24

0,67

4,53

29,52

0,29

Высокая способность соединения М-11 проникать в различные органы и ткани подтверждена результатами исследования, проведенного совместно с сотрудниками лаборатории лекарственной токсикологии2 (Шредер О.В. с соавт., 2010). Концентрации афобазола и соединения М-11 определяли в системе мать-плацента-плод, молочных железах крыс и в органах крысят, вскормленных самками, получавших афобазол.

Содержание афобазола в плаценте через 15 мин после его введения беременным самкам в 2 раза больше, по сравнению с 40 минутной экспозицией. Концентрация метаболита М-11 в плацентарной ткани, наоборот, через 40 мин увеличилась в 2,9 раз по сравнению с данными полученными при 15 минутной экспозиции.

В тканях эмбрионов, как и в плаценте, выявлено характерное распределение концентраций афобазола и соединения М-11. Через 15 минут после введения афобазола в эмбриональных тканях установлено более высокое содержание препарата по сравнению с 40 минутной экспозицией. В то же время отмечено увеличение уровня соединения М-11 в 3,3 раза по сравнению со значением, наблюдаемым при 15 минутной экспозиции.

Таким образом, установлено, что максимальный уровень концентрации афобазола в тканях плацент и эмбрионов достигается через 15 минут экспозиции. Значительное увеличение уровня метаболита М-11 отмечено через 40 минут экспозиции. Кроме того, сходство и характер распределения концентраций афобазола и соединения М-11, а также увеличение уровня соединения М-11 через 40 минут экспозиции на фоне снижения содержания афобазола может свидетельствовать о том, что в плацентарной и эмбриональной тканях крыс может происходить дальнейшая биотрансфомация афобазола с образованием соединения М-11. Эти данные согласуются с литературными сведениями о фармакокинетических особенностях лекарственных веществ и их метаболическом превращении в системе мать-плацента-плод (Шехтман М.М. с соавт., 1999, Лозинский Е.Ю. с соавт., 2005).

Установлено, что после введения афобазола кормящим крысам в дозе 200 мг/кг в плазме крови крысят через 10 и 30 минут вскармливания молоком определяются неизмененный препарат и соединение М-11. Через 30 минут вскармливания молоком в плазме крови крысят отмечено увеличение концентрации афобазола в 1,5 раза и его метаболита М-11 в 4,8 раз, по сравнению с 10-минутной экспозицией.

Сравнение концентраций препарата в мозге крысят через 10 и 30 минут вскармливания молоком показало, что при разных временных экспозициях обнаруживается одинаковое, незначительное количество афобазола. Кроме того, метаболит М-11 в эти временные интервалы в мозге крысят не обнаружен, по-видимому, из-за его чрезвычайно низких концентраций (ниже порога чувствительности). Ранее было показано, что метаболит М-11, как и афобазол проникает через гематоэнцефалический барьер (Виглинская А.О. с соавт., 2007).

Более высокая степень проникновеня афобазола в мозг по сравнению с соединением М-11 связана, вероятно, с различиями в их физико-химических свойствах. Одним из факторов, влияющих на проницаемость лекарственного средства через ГЭБ является липофильность. Было установлено, что при распределении в системе гексан:вода соединение М-11 обладает менее выраженными липофильными свойствами по сравнению с афобазолом, что связано с наличием в структуре соединения М-11 морфолонового цикла. Рассчитанная величина коэффициента распределения для соединения М-11 составила 0,88, а для афобазола – 1,04. Полученные данные подтверждаются литературными источниками (Aravagiri M. et al, 1998, Aravagiri M. et al, 2002)

Из полученных нами данных следует, что афобазол обладает средней, а соединение М-11 более низкой интенсивностью проникновения в орган-мишень мозг по сравнению с афобазолом.

Установлено, что М-11 по сравнению с афобазолом значительно интенсивнее проникает в органы и ткани крыс, о чем свидетельствуют величины AUC и Cmax. В то же время афобазол и М-11 характеризуются приблизительно сходными величинами периода полувыведения (t1/2el). На основании рассчитанных величин t1/2el соединение М-11, как и афобазол, можно отнести к группе “короткоживущих” веществ.

Экскреция афобазола и его метаболитов с мочой и калом крыс

В результате исследования, проведенного по молекулярным ионам и синтезирован­ным стандартам-свидетелям идентифицировано 4 продукта биотрансфор­мации соеди­нения М-11 (рис. 6): гидроксилированное производное М-11 (m/z 294), сульфон М-11 (m/z 354), сульфоксид М-11 (m/z 338) и гидроксилированное сульфоокисленное про­изводное М-11 (m/z 311).

Данные по выведению соединения М-11 с мочой и калом крыс после однократного внутрибрюшинного и перорального введения препарата в дозе 25 мг/кг представлены на рисунках 6-8.

Установлено, что в суточной моче исходное соединение не определяется. В кале соединение М-11 так же не обнаружено вне зависимости от пути введения. Поэтому можно сделать вывод, что препарат полностью всасывается из ЖКТ в системный кровоток.

Рисунок 6 Схема метаболизма в моче и кале крыс после внутрибрюшинного и перорального введения в дозе 25 мг/кг.

В качестве основного метаболита соединения М-11 в моче и кале животных можно рассматривать гидроксилированное производное. Его содержание в моче составляет 0,41% от введенной дозы. Так же в моче зарегистрирован сульфоксид М-11. Его содержание составило 0,19%. В то же время количества сульфона М-11 и гидроксилированного сульфоокисленного производного М-11 в суточной моче и кале были значительно меньше (рис. 7 и 8). Полученные результаты подтверждают литературные данные, что выведение производных бензимидазола в большей степени происходит за счет образования гидроксилированных метаболитов по ароматическому кольцу (Andersson T. et al, 1992).

Рисунок 7 Содержание метаболитов в суточной моче после перорального введения соединения М-11.

Рисунок 8 Содержание метаболитов в суточном кале после внутрибрюшинного (светлые столбики) и перорального (темные столбики) введения соединения М-11.

За сутки с мочой крыс выводится 0,68% идентифицированых метаболитов (от введенной дозы, рис. 7), в то время как с калом 0,37% (рис. 8). Полученные результаты согласуются с данными литературы по изучению экскреции производных бензимидазола (Hongo M. et al., 1992, Steinijans V.W. et al., 1994, Levy R. H. et al., 2000, Виглинская А. О. с соавт., 2008).

Анализ процессов экскреции соединения М-11 и его метаболитов позволяет заключить, что элиминация этого вещества из организма крыс происходит почти исключительно за счет биотрансформации препарата в печени. Суммарное выведение метаболитов за сутки с мочой крыс в среднем в 2 раза выше, чем с калом.

Заключение

В разработке оригинального лекарственного средства обязательным и необходи­мым этапом является экспериментальное изучение его фармакокинетики и метаболизма.

В результате исследования фармакокинетики и биотрансформации нового селек­тивного анксиолитика афобазола был обнаружен его основной метаболит (соединение М-11), кото­рый был рекомендован для дальнейшего фармакологического изучения (Виглинская А. О., 2007).

В результате радиолигандного анализа обнаружена группа рецепторов-мишеней соединения М-11. Основной метаболит афобазола М-11 проявил значимое сродство только к мелатониновым MT1 и MT3-рецепторам. Из литературных источников из­вестно, что мелатонин играет важную роль в формировании поведенческих реакций, а лиганды MT1-рецептора обладают антидепрессивными и анксиолитическими свойст­вами (Середениен С.Б., Воронин М.В., 2009). Не исключено, что соединение М-11 будет проявлять антидепрессивное и анксиолитическое действие.

Изучена биотрансформация и фармакокинетика соединения М-11 у крыс при разных способах введения. Показано, что соединение М-11 полностью всасывается из желудочно-кишечного тракта крыс. Абсолютная биодоступность М-11 после перорального введения  составляет 68,3%. Анализ величин фармакокинетических параметров афобазола и соединения M-11 показал, что исследуемые соединения интенсивно распределяются в сильно васкуляризированных тканях печени, селезенки, почек, мышцах и брыжейки, при этом значения AUC0- и Сmax соединения М-11 значительно превосходят те же параметры для афобазола, за исключением мозга. Соединение М-11 в значительно меньшей степени, по сравнению с афобазолом, подвергается биотрансформации, поэтому в плазме крови и почти во всех органах (кроме мозга) величины AUC0- и Сmax соединения М-11 были значительно выше. В то же время, в мозге величина Сmax соединения М-11 была в 2,7 раза ниже аналогичной величины афобазола. AUC0- афобазола в мозге в 1,8 раза превосходит аналогичную величину для М-11. В то же время количества соединения М-11, проникающего через ГЭБ, может быть вполне достаточно для реализации фармакологического эффекта (Виглинская А. О. с соавт., 2010).

Полученные фармакокинетические данные позволяют высказать предположение о целесообразности создания пероральной лекарственной формы на основе соединения М-11 в случае подтверждения его нейропротекторной, анксиолитической или какой-либо другой фармакологической активности.

Выводы

  1. Разработан высокочувствительный и селективный аналитический ме­тод количественного определения соединения М-11 и его метаболитов в био­логическом материале с использованием высокоэффективной жидкостной хро­матографии и тандемной масс-спектрометрии.
  2. В результате анализа масс-спектрометрических характеристик на­ряду с неизменённым соединением М-11 идентифицировано 8 продуктов его биотранс­формации. Встречным химическим синтезом подтверждены структуры следую­щих трёх метаболитов соединения М-11: гидроксилированный по алифатиче­скому радикалу, сульфоксид М-11 и сульфон М-11. Остальные продукты биотрансформации: гидроксилированный по бензимидазольному циклу, гидроксилированный по атому серы, гидроксилированный по бензимидазольному циклу и по алкильной цепочке, гидроксилированный по бензимидазольному циклу сульфоксид М-11 и деметилированный сульфоксид соединения М-11, были идентифицированы по масс-спектрометрическим характеристикам. Соединение М-11, в отличие от афобазола, подвергается слабо выра­женной биотрансформации.
  3. Определены показатели количественного со­держания и величины дозозависимых фармакокинетических параметров соеди­нения М-11 в зависимости от пути введения (перорально или внутривенно). Исследуемое соединение и его метабо­литы определяются в плазме крови животных в течение 3 ч.
  4. Для соединения М-11 характерна более высокая аб­солютная биодоступность по сравнению с афобазолом. Интенсивность проникновения соединение М-11 в органы и ткани снижается в ряду: печень – селезёнка – почки – брыжейка – мышцы – мозг. Соединение М-11 проникает через плацентарный барьер и с молоком кормящих самок крыс.
  5. Низкую степень проникновения соединения М-11 через ГЭБ в сравнении с афобазолом, наряду с другими факторами, можно связать с его липофильностью, так как рассчитанный коэффициент липофильности соединения М-11 оказался ниже, чем у афобазола.
  6. Определены основные пути и параметры выведения соединения М-11 и его метаболитов. Установлено, что за 24 часа после внутрибрюшинного и перорального введения соединения М-11 с мочой и калом крыс исследуемое со­единение не выводится в неизмененном виде, а выводится в виде следующих метаболитов: гидроксилированное производное М-11, сульфон М-11, сульфоксид М-11 и гидроксилированное сульфоокисленное про­изводное М-11.
  7. Высокая степень абсолютной биодоступности соединения М-11 в эксперименте (63,8%) подтверждает целесообразность создания на его основе лекарственных форм для орального при­менения.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

  1. Виглинская, А.О. Фармакокинетика соединения М-11 после внутрибрюшинного введения крысам [Текст] / А.О. Виглинская, Г.Б. Колыванов, А.А. Литвин, Е.А. Литвин, Д.В. Бастрыгин, Т.Я. Можаева, П.О. Бочков, А.К. Сариев, В.П. Жердев, С.Б. Середенин // Клиническая фармакология и терапия: Материалы научно-практической конференции с международным участием “Достижения клинической фармакологии в России”. – М., 2009. – №6. – С. 7-8.
  2. Виглинская, А.О. Биотрансформация афобазола и его основного метаболита М-11 [Текст] / А.О. Виглинская, Д.В. Бастрыгин, Г.Б.Колыванов, А.А. Литвин, Т.Я. Можаева, М.И. Емельянов, В.П. Жердев // Материалы 5-ой международ­ной конференции “Биологические основы индивидуальной чувстви­тельности к психотропным средствам” Москва, 1-4 июня 2010. - М. – 2010. – С. 32.
  3. Виглинская, А.О. Сравнительный анализ тканевой доступности афобазола и соеди­нения М-11 [Текст] / А.О. Виглинская, Д.В. Бастрыгин, Г.Б. Колыванов, А.А. Литвин, В.П. Жердев, Т.Я. Мо­жаева  // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2010. – № 149. – С. 294-295.
  4. Шредер, О.В. Распределение  афобазола у беременных и кормящих самок крыс и но­ворожденных  крысят [Текст] / О.В. Шредер, Г.Б. Колыванов, А.А. Литвин, Д.В. Бастрыгин, Е.Д. Шредер, А.С. Соло­мина, А.О. Виглинская, В.В. Забродина, В.П. Жердев, А.Д. Дурнев, С.Б. Середе­нин // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 2010. – Том 73, №8. – С. 17-20.
  5. Бастрыгин, Д.В. Биотрансформация соединения М-11 (основного метаболита афобазола) [Текст] / Д.В. Бастрыгин, А.О. Виглинская, Д.В. Бастрыгин, П.О. Бочков, Р.В. Шевченко, Я.Г. Колыванова, О.Г. Пронина, В.П. Жердев // Материалы ежегодной конференции “Фармация и общественное здоровье”. – Екатеринбург, 2010. – С. 9-11.
  6. Viglinskaya, A.O. Maximizing benefits and minimizing harms from drugs biotransformation of a new anxiolytic aphobazole in rats [Text] / А.О. Viglinskaya, S.B. Seredenin, V.P. Zherdev, G.B. Kolyvanov, A.A. Litvin, T. Ya. Mozhaeva, D.V. Bastrygin // Abstract book “16th World Congress of Basic and Clinical Pharmacology, 17-23 July 2010, Copenhagen, Denmark”. – Copenhagen,  2010. – Vol. 107, Issue Supplement s1. – P. 636-637.
  7. Бастрыгин, Д.В. Фармакокинетика соединения М-11 у крыс [Текст] / Д.В. Бастрыгин, А.О. Виглинская, Г.Б. Колыванов, А.А. Литвин, П.О. Бочков, Т.Я. Мо­жаева, В.П. Жердев // Эксперимен­тальная и клиническая фармакология. – 2011. – N 7. – С.22-26.
  8. Bastrygin, D.V. The bioavailability of afobazol and compound M-11 in rats [Teкст] / D.V. Bastrygin, A.O. Viglinskaya, P.O. Bochkov, M.I. Emeljanov, Ya. G. Novitskaya, O.G. Pronina, V.P. Zherdev // Russia abstract book “11th ECNP Regional Meeting. 14-16 April 2011, St. Petersburg, Russia”. – St. Petersburg, 2011. – S147.
  9. Бастрыгин, Д.В. Экскреция соединения М-11 и его метаболитов с мочой и калом крыс [Текст] / Д.В. Бастрыгин, А.О. Виглинская, Г.Б. Колыванов, А.А. Литвин, П.О. Бочков, Т.Я. Можаева, В.П. Жердев // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2012. – принята в печать.

1         Синтез осуществлен канд. хим. наук Т. Я. Можаевой

2 Исследование выполнено совместно с сотрудниками лаборатории лекарственной токсикологии

Шредер О. В., Шредер Е. Д.,  Соломиной А. С., Забродиной В. В. (заведующий лабораторией член-корреспондент РАМН, профессор Дурнев А. Д.)






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.