WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

Белоконова Оксана Николаевна

ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОРРЕКЦИИ «ФОСФОГЛИВОМ» 

В РАЗЛИЧНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ

НАРУШЕНИЙ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ

ПРИ ОСТРОЙ ТОКСИЧЕСКОЙ ГЕПАТОПАТИИ

14.03.06 фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Курск 2012

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ Конопля Александр Иванович

Официальные оппоненты:

Филиппенко Николай Григорьевич – доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет»  Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, заведующий кафедрой клинической фармакологии

Филиппова Ольга Всеволодовна доктор медицинских наук, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Воронежский государственный университет», профессор кафедры фармации последипломного образования Учебного центра «Фармация»

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова»  Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита диссертации состоится «_29_» ___июня___ 2012 г. в «14:30» часов на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (305041, г. Курск,
ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России.

Автореферат разослан «_28_» __мая__ 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета                                Пашин Евгений Николаевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ



Актуальность проблемы. В настоящее время имеет место существенное учащение токсических, в том числе и лекарственных, поражений различных органов и тканей. Значение этих поражений возросло в связи с либерализацией доступа населения к медикаментам, появлением в свободной продаже большого количества безрецептурных лекарственных средств, широким распространением агрессивной рекламы при отсутствии объективной информации о возможном побочном действии (Конопля Н.А., 2001; Топорков А.С. , 2004; Колпаков М.А. и др., 2006).

Известно, что поражения печени, как инфекционной, так и токсической этиологии, характеризуются нарушением иммунной реактивности организма в отношении Т-зависимых антигенов (Конопля А.И., 2008; Долгарева С.А., 2011). Важное значение имеет нестабильность течения патологического процесса как при повышении иммунной реактивности организма на эндо- и экзогенные антигены (активация функции клеток-киллеров, усиление аутоиммунных компонентов заболевания), так и при снижении иммунного ответа (повышение чувствительности к возбудителям инфекционных заболеваний, нарушение иммунологической регуляции процессов физиологической и репаративной регенерации) (Курилович С.А., 2010).

Сегодня можно говорить о том, что эритроциты вовлекаются в пато-логический процесс не только при гематологических заболеваниях, но и претерпевают серьезные изменения структуры и функции при болезнях разного генеза: злокачественных новообразованиях, воспалении, нарушениях обмена веществ, заболеваниях сердечно-сосудистой системы, психических расстройствах, инфекционной патологии и др. (Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., 2002; Рязанцева Н.В. с соавт., 2002, 2003; Терещенко С.Ю., 2002; Долгарева С.А. и др., 2011).

В настоящее время остается малоизученной роль изменений физико-химических параметров эритроцитов в условиях острой токсической гепатопатии, отсутствуют данные об эффективных способах их фармакологической и нефармакологической коррекции.

Большой интерес авторов привлекают лекарственные препараты на основе глицирризиновой кислоты, поскольку это соединение с выраженной иммуномодулирующей, противовирусной активностью. При этом отсутствуют экспериментальные, а тем более и клинические исследования, посвященные изучению влияния данной группы препаратов на структурно-функциональные свойства эритроцитов (Коротаева Т.В., 2004).

Цель работы: разработка способов фармакологической коррекции с использованием «Фосфоглива» в различных лекарственных формах нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при экспериментальной острой токсической гепатопатии

Задачи исследования.

1. Оценить изменения белкового и липидного спектра мембран эритроцитов в условиях острого токсического поражения печени, вызванного индометацином и четыреххлористым углеродом.

2. Определить сорбционную способность эритроцитов на различных моделях острого токсического поражения печени.

3. Сопоставить влияние «Фосфоглива», «Фосфоглива Форте» и «Фосфоглива» для инъекций на содержание белков и липидов в мембране эритроцитов, сорбционную способность эритроцитов при остром индометациновом поражении печени.

4. Определить эффективность «Фосфоглива» в различных лекарственных формах в коррекции нарушений белкового и липидного спектра мембран эритроцитов, их сорбционных свойств в условиях гепатопатии, вызванной четыреххлористым углеродом.

5. Провести сравнительную оценку фармакологической коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов с использованием «Фосфоглива» в различных лекарственных формах при токсическом поражении печени, вызванном введением индометацина и четыреххлористого углерода.

Научная новизна. Впервые установлены выраженные нарушения белкового и липидного спектра мембран эритроцитов и их сорбционных свойств в условиях острого индометацинового и тетрахлорметанового поражения печени.

Впервые выявлено корригирующее влияние «Фосфоглива», «Фосфоглива Форте» и «Фосфоглива» для инъекций нарушений содержания белков и липидов в мембране эритроцитов, сорбционные свойства красных клеток крови при остром токсическом поражении печени, вызванном индометацином и четыреххлористым углеродом.

Впервые установлено, что в условиях острой индометациновой токсической гепатопатии более эффективна в коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов инъекционная форма «Фосфоглива», а при поражении печени тетрахлорметаном – «Фосфоглив» для инъекций  и «Фосфоглив Форте».

Определено, что критериями прогнозирования и оценки выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами являются: сорбционная способность эритроцитов, содержание в мембране -спектрина и триглицеридов.

Практическая значимость. Установлена зависимость выраженности нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов от химической природы  и механизма повреждающего действия гепатотропных токсикантов.

Экспериментально доказана эффективность «Фосфоглива» в различных лекарственных формах в коррекции нарушений белкового и липидного спектра мембраны красных клеток крови, их сорбционных свойств на различных моделях острой токсической гепатопатии.

Применение «Фосфоглива», в отличие от «Фосфоглива Форте» и инъекционной формы препарата, в условиях экспериментального острого токсического поражения печени оказалось менее эффективным вне зависимости от химической природы  и механизма повреждающего действия гепатотропного токсиканта.

Расширены рекомендации назначения в клинической практике «Фосфоглива» для инъекций с целью коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при остром токсическом поражении печени.

Показана перспектива дальнейшего совершенствования способов фармакологической коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при заболеваниях печени.

Материалы диссертации вошли в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Курского, Российского, Самарского государственных медицинских университетов и академий и медицинского факультета Белгородского государственного университета.

Положения, выносимые на защиту.

1. Структурно-функциональные свойства эритроцитов при остром токсическом поражении печени изменяются дифференцированно в зависимости от химической природы и механизма повреждающего действия гепатотропного токсиканта.

2. При острой токсической индометациновой гепатопатии наибольшей эффективностью в коррекции нарушений белкового и липидного спектров мембраны и сорбционных свойств эритроцитов обладает «Фосфоглив» для инъекций.

3. У животных с тетрахлорметановым острым токсическим  поражением печени эффективными в коррекции структурно-функциональных свойств красных клеток крови являются инъекционная форма «Фосфоглива» и «Фосфоглив Форте».

4. Для прогнозирования и оценки степени выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами, наиболее диагностически ценными являются определение сорбционной способности эритроцитов и содержание в мембране -спектрина и триглицеридов.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009), IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2010), XV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2010), Межрегиональном форуме «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии – междисциплинарные проблемы» (Санкт-Петербург, 2010), совместном заседании кафедр фармакологии, биологической химии, хирургических болезней № 2, акушерства и гинекологии Курского государственного медицинского университета (2012).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, 6 из которых в рекомендуемых изданиях ВАК РФ; в работах содержится полный объем информации, касающейся темы диссертации.

Личный вклад автора. Автором составлены план и дизайн исследования, проведен анализ отечественных и зарубежных источников литературы по теме диссертации, лично проводились экспериментальные исследования, анализировались показатели структурно-функциональных свойств эритроцитов. Диссертантом самостоятельно выполнялся анализ и обобщение результатов, составление таблиц и графиков, написание диссертации, сопоставление с литературными данными. Доля автора в совместных публикациях составила 75-95%.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста, иллюстрирована 9 таблицами и 9 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (3 главы), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 106 отечественных и 97 иностранных источников.

Собственные исследования

Материалы и методы исследования

Экспериментальные исследования. Эксперименты проводили на 296 здоровых половозрелых крысах линии Вистар, массой 150-200 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме. Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 10-12 животных. В контрольные и опытные группы входили животные одного возраста, полученные из питомника РАМН «Столбовая» одновременно. Разброс в группах по исходной массе не превышал ±10%. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 8 до 12 ч, с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986), и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.). Животных умерщвляли передозировкой средств для наркоза через 24 часа после последнего введения препарата и/или токсиканта.

Дизайн исследования. Способы введения и дозировки фармакологических препаратов. Расчет дозировок препаратов для введения экспериментальным животным проводили при помощи коэффициентов пересчета доз (мг/кг на мг/м2) для крысы и человека в зависимости от массы тела (FreIreich E.J., 1966) (табл. 1).

Токсическое поражение печени моделировали внутрижелудочным введением индометацина в дозе 5 мг/кг, внутрижелудочно, трехкратно, через 24 часа (Саратиков А.С., 1995) или внутримышечным введением 3 мл/кг четыреххлористого углерода в виде 50% раствора в оливковом масле, трехкратно, через 24 часа (Алексеева Н.Н., 1991). Токсикант вводили в последние 3 дня получения препаратов «Фосфоглива».

Таблица 1

Использованные препараты, дозировки, способы и кратность введения интактным крысам и животным с острым токсическим

поражением печени

Препарат

Доза, мг/кг, в пересчете на:

Введение

Лецитин

ГК

Способ

Количество

Кратность

«Фосфо-глив»

1500

800

внутрижелудочно в 1% крахмальной суспензии

14

Через 24 часа

«Фосфоглив Форте»

1500

240

внутрижелудочно в 1% крахмальной суспензии

14

Через 24 часа

«Фосфо-глив» для инъекций

1500

600

внутрибрюшинно

14

Через 24 часа





Информация о лекарственных формах «Фосфоглива», изученных в работе. «Фосфоглив» – препарат, состоящий из липоида С80 (0,065 г), глицирата (0,035 г), микрокристаллической целлюлозы HP 101 (0,08 г), кальция карбоната (0,2636 г), аэросила А300 (0,0032), кальция стеарата (0,0032 г), талька (0,01).

«Фосфоглив Форте» – состоит из липоида PPL-400 (0,300 г), глицирата (0,065 г), бутилгидрокситолуола (0,0001 г), масла подсолнечного (0,0229 г), спирта этилового ректификата (0,012 г).

«Фосфоглив» для инъекций – лиофилизированный порошок, состоящий из лецитина (0,5 г) и глицирризиновой кислоты (0,2 г).

Исследование структурно-функциональных свойств эритроцитов. Эритроциты получали из 5 мл гепаринизированной крови по методу E. Beutler (1985) с незначительной модификацией. Цельную кровь отстаивали дважды в 10 мМ Na-фосфатном буфере (рН=7,4), содержащем 0,9% хлорида натрия и 3% декстрана Т-500, в течение 30 минут при температуре 37С. После этого кровь центрифугировали, удаляли надосадочную жидкость аспирацией. Эритроцитарную массу подвергали дополнительной очистке на хроматографической колонке через НВS-целлюлозу.

Определялась общая сорбционная способность эритроцитов, обусловленная наружной архитектоникой клеточной мембраны (Тогайбаев А.А. и др., 1988), сорбционная емкость гликокаликса эритроцитов для альцианового синего (Семко Г.А., 1998) и уровень малонового диальдегида в эритроцитах (Банкова В.В. и др., 1987).

Мембраны эритроцитов получали методом G.T. Dodge (1963), разрушая эритроциты осмотическим и механическим гемолизом в 10 мМ Na-фосфатном буфере, после чего проводили отмывку теней от гемоглобина в 10 мМ и 5 мМ Na-фосфатном буфере. Электрофорез проводили в присутствии додецилсульфата натрия в вертикальных пластинах полиакриламидного геля по методу U.K. Laemmli (1970). Белки окрашивали кумаси голубым R-250 по модифицированной методике G. Fairbanks (1971). Количественное содержание белковых фракций рассчитывали через площадь и известную концентрацию яичного альбумина, выступающего в качестве маркерного белка. Полученные значения пересчитывали на 1 мг общего белка в исследуемом образце сухих мембран эритроцитов. Липиды выделяли методом тонкослойной хроматографии (Крылов В.И. и др., 1984).

Статистическая обработка полученных результатов. Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя параметрические и непараметрические методы, факторный анализ, кластерный анализ, критерий 2, а также коэффициент ранговой корреляции Спирмена (Гублер Е.Г., Генкин А.Р., 1973; Лакин Г.Ф., 1980). Статистически значимыми считали различия с p<0,05.

___________________________

Примечание. Определение белкового и липидного спектра мембран эритроцитов проведено в лаборатории иммуноферментного анализа НИИ экологической медицины Курского государственного медицинского университета, за что выражаем сотрудникам соответствующего подразделения глубокую признательность.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Структурно-функциональные свойства мембраны эритроцитов при четыреххлористом токсическом поражении печени и использовании «Фосфоглива». При ОТПП у экспериментальных животных снижается представительность в  мембране эритроцитов обеих подфракций спектрина, анкирина, анионтранспортного белка (АТБ), белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (Г-3-ФД), тропомиозина, глутатион-S-трансферазы и повышается уровень белка полосы 4.1 и паллидина (табл. 2). Кроме этого, в данной группе животных снижена ССЭ, СЕГ и повышена концентрация внутри красных клеток крови малонового диальдегида (МДА) (табл. 2).

В группе животных, получавших «Фосфоглив» внутрь, отмечалась частичная коррекция представительности -спектрина, анкирина, АТБ, белка полосы 4.5, Г-3-ФД. Изменения белкового спектра на фоне применения «Фосфоглива»  приводят к повышению СЕГ до уровня нормы (табл. 2).

При использовании «Фосфоглива Форте» у животных в условиях ОТПП выявлена нормализация уровня -спектрина, белка полосы 4.1, СЕГ, коррекция не до уровня нормы -спектрина, анкирина, белка полосы 4.5, Г-S-Т, ССЭ и концентрация внутри клеток МДА (табл. 2).

Инъекции препарата «Фосфоглив» нормализовали у животных, получавших четыреххлористый углерод, представительность -спектрина, белка полос 4.1 и 4.5, паллидина,  Г-3-ФД, Г-S-Т, СЕГ и корригировали другие измененные показатели структурно-функциональных свойств эритроцитов (табл. 2).

Таким образом, в условиях ОТПП четыреххлористым углеродом выявлены изменения целого ряда белковых фракций в мембране эритроцитов и ее сорбционных свойств, а использование «Фосфоглива» позволяет корригировать и нормализовать выявленные изменения, при этом максимальной эффективность обладает форма «Фосфоглива» для инъекций.

После отравления четыреххлористым углеродом у животных в эритроцитарной мембране повышен уровень холестерина, свободных жирных кислот, моно- и диглицеридов, лизофосфатидилхолина и снижена концентрация эфиров жирных кислот, триглицеридов, фосфатидилхолина и сфингомиелина (табл. 3).

Таблица 2

Структурно-функциональные свойства мембраны эритроцитов при ОТПП ЧХУ(M±m)  

 

Показатели

1

2

3

4

5

Острое токсическое поражение печени (ОТПП) ЧХУ

Контроль

ОТПП ЧХУ

ОТПП ЧХУ + «Фосфоглив»

ОТПП ЧХУ + «Фосфоглив форте»

ОТПП ЧХУ + «Фосфоглив» для инъекций

-Спектрин, мг%

110,3±5,21

74,3±3,8*1

81,5±3,22*1,2

85,6±4,2*1,2

90,3±3,71*1,2

-Спектрин, мг%

93,1±4,31

79,5±4,3*1

82,3±4,7*1

88,1±4,05*2

90,2±5,0*2

Анкирин, мг%

71,0±2,04

52,6±2,74*1

62,1±4,21*1,2

59,4±3,05*1,2

64,1±3,08*1,2

Анионтранспортный белок, мг%

169,6±6,22

142,7±5,47*1

156,3±4,8*1,2

150,6±5,91*1

158,2±4,97*1,2

4.1, мг%

81,4±4,1

96,1±5,3*1

85,7±4,9

83,1±3,14*2

84,2±4,81*2

Паллидин, мг%

62,13±4,09

74,7±4,8*1

67,8±5,1

69,3±4,92

60,31±3,9*2

4.5, мг%

69,79±3,13

52,6±3,82*1

60,1±3,72*1,2

61,1±2,93*1,2

64,5±5,17*2

Дематин, мг%

41,2±2,05

45,6±3,33

40,4±2,7

46,9±4,71

39,5±3,75

Актин, мг%

101,1±4,15

117,7±5,64

108,7±4,3

99,6±8,21

112,6±6,41

Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, мг%

54,3±2,0

40,7±3,14*1

46,4±2,07*1,2

45,9±3,12*1

50,1±3,84*2

Тропомиозин, мг%

65,3±3,09

56,2±3,81*1

60,7±3,15

62,7±4,1

63,2±3,7

Глутатион-S-трансфераза, мг%

59,2±2,45

44,3±2,91*1

46,4±3,31*1

51,7±3,0*1,2

55,6±4,71*2,3

СЕГ, 10-12 г/эр.

2,4±0,12

1,8±0,09*1

2,1±0,19*2

2,4±0,20*2

2,2±0,10*2

ССЭ, %

46,2±3,0

12,2±4,84*1

19,6±1,21*1

21,5±2,37*1,2

28,6±2,89*1-4

МДА, нмоль * 106 эр.

3,21±0,09

7,27±0,39*1

6,06±0,25*1,2

5,91±0,29*1,2

4,1±0,17*1-4

Примечание. Звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой – по отношению к показателям какой группы даны эти различия; ТЛ – традиционное лечение.

Таблица 3

Липидный спектр мембраны эритроцитов при ОТПП ЧХУ (мг%, M±m)

 

Показатели

1

2

3

4

5

Острое токсическое поражение печени (ОТПП) ЧХУ

Контроль

ОТПП ЧХУ

ОТПП ЧХУ + «Фосфоглив»

ОТПП ЧХУ + «Фосфоглив форте»

ОТПП ЧХУ + «Фосфоглив» для инъекций

Холестерин

43,0±2,14

54,4±2,39*1

48,4±2,41*1,2

47,3±2,08*1,2

45,6±1,97*2

Эфиры холестерина

38,03±2,21

32,6±1,74*1

34,6±1,92*1

33,7±2,03*1

35,6±2,52

Свободные жирные кислоты

4,3±0,17

5,09±0,12*1

4,81±0,15*1,2

4,52±0,18*2

4,42±0,16*2

Моно- и диглицериды

10,43±0,42

11,31±0,38*1

10,3±0,24*2

9,45±0,41*2

10,21±0,27*2

Триглицериды

15,63±1,17

11,21±1,31*1

16,2±1,12*2

17,4±2,31*2

16,31±1,38*2

Фосфатидилхолин

24,0±1,87

17,1±2,01*1

17,31±1,24*1

18,32±1,12*1

20,41±1,29*1-4

Фосфатидилэтаноламин

24,63±2,12

22,3±2,07

23,2±1,38

25,6±2,33

24,8±2,51

Лизофосфатидилхолин

22,3±0,13

24,7 ±0,23*1

21,9±0,31*2

22,8±0,18*2

22,71±0,35*2

Фосфатидилинозитол

5,1±0,06

4,94±0,12

5,2±0,14

5,07±0,17

4,88±0,22

Сфингомиелин

11,8±0,49

9,31±0,33*1

9,07±0,19*1

10,52±0,25*1-3

12,04±0,51*2-4

Примечание. Звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой – по отношению к показателям какой группы даны эти различия; ТЛ – традиционное лечение.

Использование «Фосфоглива» внутрь у животных, подвергнутых воздействию четыреххлористого углерода, позволило снизить, но не до уровня нормы, концентрацию в эритроцитарной мембране холестерина и свободных жирных кислот, нормализовать уровень моно- и диглицеридов, лизофосфатидилхолина и триглицеридов (табл. 3).

Применение у животных в условиях ОТПП «Фосфоглива Форте» нормализует уровень в мембране красных клеток крови свободных жирных кислот, моно- и диглицеридов, лизофосфатидилхолина и триглицеридов, возрастает, но не до уровня нормы содержание холестерина и сфингомиелина, (табл. 3).

Максимальной эффективностью у данной группы животных обладает «Фосфоглив» для инъекций – его использование нормализует липидный спектр в мембране эритроцитов, за исключением концентрации фосфатидилхолина, уровень которого возрастает, но не до уровня нормы (табл. 3).

Мембранопротективная эффективность «Фосфоглива» в различных лекарственных формах при индометациновом токсическом поражении печени. В условиях ОТПП, вызванного введением индометацина, у животных установлено снижение представительности -спектрина, анкирина, белка полосы 4.5, Г-3-ФД, триглицеридов, сфингомиелинов и повышение количества белка полосы 4.1, паллидина, холестерина, свободных жирных кислот, что приводит к снижению общей сорбционной способности эритроцитов и накоплению в них МДА (рис. 1).

Введение животным «Фосфоглива» per os на фоне токсического воздействия индометацина позволило нормализовать в мембране красных клеток крови концентрацию триглицеридов и частично корригировать представительность -спектрина, анкирина, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, свободных жирных кислот и МДА внутри клеток (табл. 4).

Применение «Фосфоглива Форте» у животных в условиях ОТПП дополнительно, в отличие от предыдущей группы животных, нормализует в эритроцитарной мембране уровень анкирина и корригирует представительность паллидина и повышает, но не до уровня нормы, ССЭ (табл. 4, 5).

Рис. 1. Представительность белков и липидов в мембране эритроцитов, ССЭ, СЕГ и концентрация МДА у животных в условиях ОТПП.

Примечания.

1. Радиус окружности – показатели у контрольной группы животных (1 группа).

2.                – показатели у животных с ОТПП (2 группа).

3.        – р < 0,05 между показателями по отношению к 1 группе.

4. АТБ – анионтранспортный белок, Г-3-ФД – глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, Г-S-Т – глутатион-S-трансфераза; ЭХ – эфиры холестерина, СЖК – свободные жирные кислоты, МДГ – моно- и диглицериды, ТГ – триглицериды, ФХ – фосфатидилхолин, ФЭ – фосфатидилэтаноламин, ЛФХ – лизофосфатидилхолин, ФИ – фосфатидилинозитол, СМ – сфингомиелин.

Инъекции «Фосфоглива» более эффективно корригируют и нормализуют нарушенные показатели белково-липидного спектра мембран красных клеток крови в условиях ОТПП: нормализуют количество паллидина, белка полосы 4.5, Г-3-ФД, холестерина и сфингомиелина, корригируя остальные изменённые показатели, за исключением представительности белка полосы 4.1 (табл. 4, 5).

Таблица 4

Структурно-функциональные свойства мембраны эритроцитов при ОТПП ИМ (M±m)  

 

Показатели

1

2

3

4

5

Острое токсическое поражение печени (ОТПП)

Контроль

ОТПП ИМ

ОТПП ИМ + «Фосфоглив»

ОТПП ИМ + «Фосфоглив Форте»

ОТПП ИМ + «Фосфоглив» инъекции

-Спектрин, мг%

110,3±5,21

63,8±3,2*1

81,6±3,11*1,2

85,4±4,1*1,2

87,1±3,2*1,2

-Спектрин, мг%

93,1±4,31

89,7±4,5

92,3±4,7

92,9±4,05

91,1±5,0

Анкирин, мг%

71,0±2,04

57,4±2,3*1

63,7±4,1*1,2

69,4±4,25*2

69,8±3,1*2

Анионтранспортный белок, мг%

169,6±6,22

172,7±5,5

166,3±5,9

170,6±8,9

168,2±4,6

4.1, мг%

81,4±4,1

106,5±8,7*1

103,6±5,9*1

99,7±4,2*1

81,2±4,25*1

Паллидин, мг%

62,13±4,09

85,7±5,1*1

86,3±4,2*1

75,3±2,42*1,2

61,45±3,7*2

4.5, мг%

69,79±3,13

50,1±3,8*1

61,4±3,4*1,2

60,5±2,8*1,2

68,5±4,2*2

Дематин, мг%

41,2±2,05

43,1±3,25

40,4±2,7

46,9±3,2

39,5±3,4

Актин, мг%

101,1±4,15

107,1±5,61

108,7±6,4

102,6±8,3

107,6±8,1

Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, мг%

54,3±2,0

41,3±3,11*1

45,9±1,86*1,2

46,3±3,3*1,2

52,7±3,2*2

Тропомиозин, мг%

65,3±3,09

66,2±4,6

62,7±3,15

62,7±4,1

63,2±3,4

Глутатион-S-трансфераза, мг%

59,2±2,45

54,3±3,5

59,4±3,31

58,7±4,0

56,6±4,3

СЕГ, 10-12 г/эр.

2,4±0,12

2,6±0,11

2,5±0,19

2,5±0,20*2

2,4±0,10

ССЭ, %

46,2±3,0

22,2±2,1*1

20,9±1,3*1

29,5±2,11*1,2

28,6±2,89*1-4

МДА, нмоль * 106 эр.

3,21±0,09

6,21±0,52*1

5,12±0,281,2

5,3±0,2*1,2

4,4±0,2*1-4

Примечание. Звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой – по отношению к показателям какой группы даны эти различия; ТЛ – традиционное лечение.

Таблица 5

Липидный спектр мембраны эритроцитов при ОТПП ИМ (мг%, M±m)

 

Показатели

1

2

3

4

5

Острое токсическое поражение печени (ОТПП)

Контроль

ОТПП ИМ

ОТПП ИМ + «Фосфоглив»

ОТПП ИМ + «Фосфоглив Форте»

ОТПП ИМ + «Фосфоглив» инъекции

Холестерин

43,0±2,14

59,1±3,25*1

58,1±2,5*1

57,2±2,3*1

44,7±1,6*2-4

Эфиры холестерина

38,03±2,21

37,8±1,7

38,1±1,5

36,7±2,2

37,1±2,3

Свободные жирные кислоты

4,3±0,17

5,27±0,17*1

4,89±0,19*1,2

4,91±0,12*1,2

4,89±0,12*1,2

Моно- и диглицериды

10,43±0,42

11,2±0,6

10,9±0,7

10,5±0,9

10,7±0,8

Триглицериды

15,63±1,17

10,12±1,25*1

15,8±1,15*2

16,4±2,1*2

16,6±1,5*2

Фосфатидилхолин

24,0±1,87

27,1±2,2

25,9±1,2

28,32±1,12

23,4±1,29

Фосфатидилэтаноламин

24,63±2,12

22,3±2,3

23,2±1,3

25,6±2,33

24,2±2,51

Лизофосфатидилхолин

22,3±0,13

21,7±1,2

21,9±0,3

22,8±0,18

22,2±0,35

Фосфатидилинозитол

5,1±0,06

5,2±0,12

5,0±0,3

5,07±0,17

4,9±0,22

Сфингомиелин

11,8±0,49

8,28±0,42*1

9,0±0,18*1

8,9±0,21*1

11,74±0,81*2-4

Примечание. Звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой – по отношению к показателям какой группы даны эти различия; ТЛ – традиционное лечение.

Сравнительная эффективность «Фосфоглива» в различных лекарственных формах при различных моделях экспериментальной токсической гепатопатии. Сравнивая мембранопротективную эффективность различных форм «Фосфоглива» в условиях токсического поражения печени, выявлено, что максимальной эффективностью в отношении нарушенных показателей структурно-функциональных свойств мембраны эритроцитов обладает «Фосфоглив» для инъекций как при ИМ, так и ЧХ токсическом поражении печени, так как позволяет снизить количество измененных показателей с 80% до 24% при четыреххлористом токсическом поражении печени и с 48% до 20% при индометациновом (табл. 6).

Представленные выше данные позволяют сделать заключение, что в условиях острой токсической гепатопатии имеет место нарушение метаболического гомеостаза, что проявляется изменением структурно-функциональных свойств эритроцитов, в первую очередь белково-липидного спектра. При этом использование различных форм препарата «Фосфоглив» позволяет корригировать и нормализовать представительность белков и липидов в мембране красных клеток крови. Максимальной эффективностью в условиях ОТПП обладает «Фосфоглив» для инъекций, минимальной – «Фосфоглив», тогда как «Фосфоглив Форте» занимает промежуточное положение (табл. 6).

Таблица 6

Сравнительная мембранопротективная эффективность различных форм «Фосфоглива» в условиях острого токсического поражения печени

Измененные показатели (%)

ЧХУ

ИМ

Отравление гепатотоксическим ядом

80,0

48,0

Отравление + «Фосфоглив»

64,0

44,0

Отравление + «Фосфоглив Форте»

52,0

40,0

Отравление + «Фосфоглив» инъекции

24,0

20,0

В целом эффекты препарата обусловлены антиоксидантной активностью лецитина, который замещает и стабилизирует мембраны гепатоцитов, а глицирризиновая кислота не только дополнительно стабилизирует лецитин, но и обладает прямым иммуномодулирующим эффектом на клетки иммунной системы, что совместно ускоряет репаративные процессы в гепатоцитах.

В данном случае благодаря своей высокой биодоступности оказался более эффективным «Фосфоглив» для инъекций, введение которого, вероятно, позволяет стабилизировать мембранные структуры гепатоцитов, уменьшить процессы перекисного окисления липидов и снизить выход в кровеносное русло иммуностимулирующих соединений, что сопровождается нормализацией большинства исследованных показателей иммунного статуса.

Полученные результаты диктуют необходимость апробирования данных форм препарата «Фосфоглив» в клинических исследованиях с целью разработки эффективных способов фармакокоррекции метаболических нарушений при острой токсической гепатопатии.

Другой сферой интересов, позволяющей косвенно оценить механизм влияния тех или иных препаратов на изучаемые показатели, служит факторный анализ. С его помощью него удалось редуцировать лабораторные показатели, на которые предложенные схемы оказывают минимальное влияние, и выделить те, которые максимально чувствительны к воздействию препаратов.

Построение графиков факторной нагрузки лабораторных данных установило, что наиболее чувствительными к воздействию «Фосфоглива» вне зависимости от токсического агента, является содержание -спектрина, триглицеридов и сорбционная способность эритроцитов, что позволяет использовать данные показатели для прогнозирования и оценки выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами.

ВЫВОДЫ

1. При экспериментальной острой токсической гепатопатии, вызванной введением четыреххлористого углерода, в эритроцитарной мембране повышен уровень холестерина, свободных жирных кислот, моно- и диглицеридов, лизофосфатидилхолина, белка полосы 4.1, паллидина, внутриклеточного малонового диальдегида, снижена мембранная концентрация эфиров жирных кислот, триглицеридов, фосфатидилхолина и сфингомиелина, обеих подфракций спектрина, анкирина, анионтранспортного белка, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, тропомиозина, глутатион-S-трансферазы, общая сорбционная способность эритроцитов и их гликокаликс.

2. В условиях острого индометацинового токсического поражения печени в мембране эритроцитов снижен уровнь триглицеридов, сфингомиелинов,
-спектрина, анкирина, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, повышено количество холестерина, свободных жирных кислот, белка полосы 4.1, паллидина, снижена общая сорбционная способность клеток.

3. Введение «Фосфоглива» при токсическом индометациновом поражении печени нормализует в мембране эритроцитов концентрацию триглицеридов, применение «Фосфоглива Форте» дополнительно  нормализует уровень анкирина, инъекции «Фосфоглива» - количество паллидина, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, холестерина и сфингомиелина.

4. Использование «Фосфоглива» в условиях тетрахлорметанового токсического поражения печени нормализует в мембране эритроцитов представительность паллидина и белка полосы 4.1, «Фосфоглив Форте» дополнительно нормализует уровень свободных жирных кислот, тропомиозина и сорбционную емкость гликокаликса, «Фосфоглив» для инъекций – содержание всех липидов, -спектрина, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы и глутатион-S-трансферазы.

6. В условиях острой токсической индометациновой  гепатопатии наиболее эффективно нормализует нарушения структурно-функциональных свойств эритроцитов инъекционная форма «Фосфоглива», а при токсическом тетрахлорметановом поражении печени – «Фосфоглив» для инъекций и «Фосфоглив Форте».

7. Для прогнозирования развития и оценки степени выраженности острого токсического поражения печени наиболее диагностически ценным является определение сорбционной способности эритроцитов и содержания в мембране -спектрина и триглицеридов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендовать применение  «Фосфоглива» для инъекций для коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при остром токсическом поражении печени.

2. Использовать для прогнозирования развития и оценки степени выраженности токсического поражения печени определение сорбционной способности эритроцитов и содержание в мембране -спектрина и триглицеридов.

3. Использовать в учебном процессе медицинских вузов знания о нарушениях структурно-функциональных свойств эритроцитов при экспериментальной острой токсической гепатопатии и способах их фармакологической коррекции с использованием «Фосфоглива» в различных лекарственных формах.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Белоконова, О.Н. Применение фосфоглива для коррекции иммунных нарушений при острой экспериментальной токсической гепатопатии / 
Н.А. Кедровская, О.Н. Белоконова // Тез. докл. XVI Росс. нац. конгр. «Человек и лекарство». – 2009. – С. 232.

2. Белоконова, О.Н. Влияние различных лекарственных форм «Фосфоглива» на сорбционные показатели эритроцитов в условиях токсического поражения печени / О.Н. Белоконова, Н.А. Кедровская // Материалы IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков. 25-26 февраля 2010 года. Том I / Под ред. В.А. Лазаренко – Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2010. – С. 82-85.

3. Белоконова, О.Н. Иммуномодулирующие и гепатопротекторные эффекты различных лекарственных форм «Фосфоглива» в условиях индометацинового токсического поражения печени / Н.А. Кедровская,
О.Н. Белоконова // Курский науч.-практ. вестн. «Человек и его здоровье». 2009. № 4. С. 5-8.

4. Иммуномодулирующие эффекты фосфоглива при экспериментальном токсическом поражении печени / Н.А. Быстрова, О.Н. Белоконова, А.Л. Локтионов, Н.А. Кедровская // Международный журнал по иммунореабилитации. 2010. Т. 12, № 2. С. 159.

5. Применение различных лекарственных форм фосфоглива в коррекции нарушений иммунитета при экспериментальном токсическом поражении печени / Е.В. Орлова, О.Н. Белоконова, В.А. Рагулина, Е.В. Авдеева // Российский аллергологический журнал. 2010. - № 5, Вып. 1.
С. 36-37.

6. Коррекция функциональной активности нейтрофилов периферической крови производными 3-гидроксипиридина при остром токсическом поражении печени / О.Н. Белоконова, В.А. Рагулина, Е.А. Орлова и др. // Российский аллергологический журнал. 2010. - № 5, Вып. 1. С. 236-237.

7. Эффективность различных лекарственных форм «Фосфоглива» в коррекции структурно-функциональных нарушений мембраны эритроцитов при остром токсическом поражении печени / В.П. Гаврилюк, О.Н. Белоконова, А.И. Конопля, Н.А. Быстрова // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. 2011. Т. 10, № 2. С. 269-273.

8. Нарушения белково-липидного спектра мембраны эритроцитов при экспериментальной гепатопатии, коррекция различными формами препарата «Фосфоглив» / О.Н. Белоконова, А.И. Конопля, В.П. Гаврилюк и др. // Фундаментальные исследования. - 2011, № 11 (3). - С. 481-484.

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

1                – -спектрин, мг%

1                – -спектрин, мг%

АТБ                – анионтранспортный белок или белок полосы 3

Г-3-ФД        – глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа

Г-S-Т        – глутатион-S-трансфераза

ИМ                – индометацин

ЛФХ                – лизофосфатидилхолин, мг%

МДА        – малоновый диальдегид, нмоль * 106 эр.

МДГ                – моно- и диглицериды, мг%

ОТПП        – острое токсическое поражение печени

ПОЛ                – перекисное окисление липидов

СЕГ                – сорбционная емкость гликокаликса, 10-12 г/эр.

СЖК                – свободные жирные кислоты, мг%

СМ                – сфингомиелин, мг%

ССЭ                 – сорбционная способность эритроцитов, %

ТГ                – триглицериды, мг%

ФИ                – фосфатидилинозитол, мг%

ФХ                – фосфатидилхолин, мг%

ФЭ                – фосфатидилэтаноламин, мг%

ЭХ                – эфиры холестерина, мг%

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г.

Сдано в набор 26.05.2012 г. Подписано в печать 26.05.2012 г.

Формат 30х421/8. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom.

Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0.

Тираж 100 экз. Заказ № 206"А"

Издательство Курского государственного медицинского университета

305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.