WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

Ромашкина Анастасия Сергеевна

ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ СКЛЕРОАТРОФИЧЕСКИХ ПОРАЖЕНИЙ КОЖИ, АССОЦИИРОВАННЫХ С БОРРЕЛИОЗНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ

14.01.10 – кожные и венерические болезни

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва  - 2012

Работа выполнена в ГБОУ ВПО  Первом Московском государственном медицинском университете имени И.М. Сеченова Минздравсоцразвития России

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор  Снарская Елена Сергеевна 

Официальные оппоненты:

Молочков Антон Владимирович, доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры дерматовенерологии и дерматоонкологии ГБУЗ МО Московского областного научно – исследовательского клинического института им. М.Ф.Владимирского

Галлямова Юлия Альбертовна, доктор медицинских наук, профессор кафедры дерматовенерологии, микологии и косметологии ГБОУ ДПО Российская медицинская академия постдипломного образования Минздравсоцразвития России.

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО Российский университет дружбы народов

Защита состоится «___» ______________2012 года в ______час. на заседании диссертационного совета Д208.040.10 при Первом Московском государственном медицинском университете имени И.М. Сеченова по адресу: 119992, г. Москва, ул. Трубецкая, д.8, стр. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в ГЦНМБ ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, д.49.

Автореферат разослан «____»___________2012 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор  Эрдес Светлана Ильинична

ОБЩАЯ ХАРАТЕРИСТИКА РАБОТЫ



Актуальность проблемы

Склероатрофические поражения кожи представляют собой  широкий спектр различных нозологических форм, в основе которых лежит уплотнение и последующее истончение всех слоев кожи с дистрофией ее придатков различного генеза.  Среди них встречаются разнообразные клинические формы ограниченной склеродермии (бляшечная  и линейная формы склеродермии, склероатрофический лихен, атрофодермия Пазини – Пьерини), хронический атрофический акродерматит.  Однако патогенез данной группы заболеваний недостаточно изучен. Так  в развитии ограниченной склеродермии играют роль наследственная предрасположенность, аутоиммунные и нейроэндокринные нарушения, стресс, химическо-медикаментозные факторы, травмы, возможен паранеопластический генез заболевания (Ю.С. Бутов с соавт., 2002;  А.С. Дворников,  2005;  А.Д.  Юцковский с соавт., 2002;  Т. Arkachaisri et al.,  2008, I. Badea ey al., 2009; S. Dubner et al., 2006; S. Jablonska, 2001; A.V.  Marzano, 2003; A. Peroni, 2008).  В настоящее время в ряде работ в качестве возможного патогенетического  механизма развития склероатрофических поражений кожи рассматривают воздействие Borrelia burgborferi sensu lato – возбудителя иксодового клещевого боррелиоза, который по данным разных авторов выявляется в 15  - 60% (М.И.  Курдина с соавт., 2009; F. Breier et al., 2000; M. Carlesimo et al., 2010; K. Eisendle et al., 2008; J.R. Goodlad et al., 2002; Y. Lee et  al., 2011; J.C. Prinz et al., 2009; T. Zollinger et al., 2010), а при некоторых формах в 100% случаев  (А.В. Бабкин, 1998; С.С. Козлов, 1999), что особенно актуально  на фоне роста боррелиозной инфекции в РФ. Патогенетическая связь этих поражений подтвержается в ряде случаев обнаружением боррелий в очагах поражения, а также  наличием специфических антител в крови больных и положительным эффектом от антиборрелиозной терапии  (А.В. Бабкин, 1998; С.С. Козлов, 1999; М.И. Курдина с соавт., 2009; Ю.В. Лобзин с соавт.,  2000; E. Aberer et al., 1999; F.  Breier et al., 2000; M. Carlesimo et al., 2010; J.R. Goodlad et al., 2002; Y. Lee et al., 2011; J.C. Prinz et al., 2009; B. Weide et al.,  2000; T. Zollinger et al., 2010).

Однако, работы,  посвещенные изучению связи склероатрофических поражений кожи и иксодового клещевого боррелиоза в РФ, единичны (A.В. Бабкин, 1998; М.И. Курдина с соавт.,  2009; Н.С. Потекаев с соавт., 2006; В.А. Самсонов с соавт., 1996),  основаны на небольшом количестве наблюдений и  диагностике инфекции с помощью ИФА или НРИФ, в  то время как по современным данным (О.А. Конева, 2003; М.И. Курдина с соавт., 2009; В.В. Малеев, 2005; M.E.Aguero-Rosenfeld et al., 2005; R.L. Bratton et al., 2008; K. Eisendle et al., 2007; J.C. Prinz et al., 2009; M.T. Smetanick et al., 2010; T. Zollinger et al., 2010) для выявления боррелиоза необходим двуступенчатый метод с использованием на втором этапе иимунного блоттинга, позволяющего определить геновид возбудителя и исключить возможные ложноположительные и сомнительные результаты  выше указанных отборочных реакций (Л.П. Ананьева, 2002; Е.П. Деконенко, 2005; М.И. Курдина, 2006; Ю.В. Лобзин с соавт., 2000; В.В. Малеев, 2005; M.E.Aguero-Rosenfeld et al., 2005; R.L. Bratton et al., 2008; J.J. Burrascano, 2005; A.C. Steere, 2001). На сегодняшний день не достаточно изучены  клинические и иммунологические особенности склероатрофических поражений кожи, развивающихся  при боррелиозе, не разработана их терапия.

Цель исследования

Выявление частоты склероатрофических поражений кожи, ассоциированных с боррелиозной инфекцией с помощью двуступенчатого метода: ИФА и инновационной тест – системы для иммуного блоттинга, изучение их клинико – иммунологических особенностей, разработка комплексного метода терапии.

Задачи исследования

  1. Определить частоту  склероатрофических поражений кожи, ассоцированных с боррелиозной инфекцией, на основании мониторинга больных склероатрофическими поражениями кожи Московской области с использованием современного двуступенчатого метода диагностики: ИФА и иммунного блоттинга в формате иммуночипа.
  2. Изучить особенности клинической картины и показателей наследственного и адаптивного звеньев иммунитета у больных склероатрофическими поражениями кожи, ассоциированными с боррелиозной инфекцией.
  3. Разработать комплексную патогенетически обоснованную терапию склероатрофических поражений кожи при  боррелиозной инфекции.

Положения, выносимые на защиту

  1. Частота ассоциации склероатрофических поражений кожи с боррелиозной инфекцией по данным обследования 238 больных Московской области  с помощью двуступенчатого метода (ИФА и иммуноблот в формате иммуночипа) составляет 15,1% (36 больных).
  2. Склероатрофические поражения кожи в поздней стадии боррелиоза отмечены в виде бляшечной склеродермии (55,5%), хронического атрофического акродерматита (19,4%), атрофодермии Пазини – Пьерини (11,2%), склероатрофического лихена (8,3%), линейной склеродермии (5,6%) и имели ряд отличительных особенностей от их идиопатических форм.
  3. У анализируемых больных выявлен дефицит моноцитарно – макрофагального звена иммунитета, проявляющийся в виде: уменьшения доли субпопуляций, экспрессирующих маркеры макрофагов CD11b; подавления адгезионной, поглотительной и переваривающей способностей фагоцитов (снижение  фагоцитарного индекса, НСТ – теста, латекс - теста) и активации  субпопуляций, несущих маркеры Т-киллеров (повышение СD3-CD16+CD56+, CD 57+).
  4. Анализ результатов исследования специфических антител к 8 группам (14 антигенам) различных белков боррелий у больных склероатрофическими поражениями при боррелиозе показал характерную продукцию 5 белков:  OspC (80,6%),  р17 (75%), р41 (61,1%), р58 (55,6%),  р 100 (50%), что можно рассматривать как маркер поражения кожи.
  5. Разработан метод комплексной терапии склероатрофических поражений кожи при ассоциации с боррелиозной инфекцией, включающий цефтриаксон в сочетании с лонгидазой, гептралом и  вобэнзимом, наружно использован крем эгаллохит. Достигнута стойкая ремиссия процесса в 55,5% случаев после одного курса терапии, в 36,2% случаев - после двух курсов терапии, в 8,3% случаев - после трех курсов терапии

Научная новизна исследования

  1. Впервые на основании анализа 238 случаев склероатрофических поражений кожи среди населения Московской области  выявлена частота ассоциации с боррелиозной инфекцией и дана клинико-морфологическая и иммунологическая  характеристика данной группы больных.
  2. Впервые для выявления боррелиозной инфекции у этой группы больных применен двуступенчатый метод с использованием  новой тест – системы для иммунного блоттинга в формате иммуночипа и обнаружена характерная для склероатрофических процессов при боррелиозе продукция белков боррелий OspC,  р17, р41, р58,  р 100.
  3. Разработан и внедрен в клиническую практику комплексный метод терапии склероатрофических поражений кожи при боррелиозной инфекции с применением антибиотика, тропного к боррелиям, гепатопротектора, дефиброзирующего и энзимного препаратов, наружно использован  эгаллохит.

Научно-практическая значимость

  1. Получены данные о значительной частоте (15,1%) ассоциации склероатрофических поражений кожи с боррелозной инфекцией среди населения Московской области на основе использования современного метода диагностики боррелиоза, включающего ИФА и иммунный блоттинг в формате иимуночипа.
  2. Разработаны представления об особенностях клинической картины склероатрофических поражений, позволяющие заподозрить боррелиозную инфекцию.
  3. Выявлены изменения наследственного и адаптивного звеньев иммунитета у больных склероатрофическими поражениями кожи при боррелиозе, позволяющие использовать их для диагностики и оценки степени активности процесса и эффективности комплексной патогенетической терапии.
  4. Разработан патогенетически  обоснованный метод комплексной терапии этой группы больных с использованием  антибиотика (цефтриаксон), гепатопротектора (гептрал), дефиброзирующего (лонгидаза) и энзимного (вобэнзим) препаратов и  наружной терапии (крем эгаллохит).

Внедрение работы

Результаты работы внедрены в практику отделения дерматовенерологии и дерматоонкологии МОНИКИ, Московского областного кожно – венерологического диспансера, кожно-венерологических диспансеров г. Раменское, г. Королев, г. Мытищи. Включены в лекционный материал курса  дерматовенерологии кафедры кожных и венерических болезней ФППОВ Первого МГМУ им. И.М. Сеченова,  ФУВ МОНИКИ,

Апробация работы

Диссертация апробирована на межкафедральной научной конференции кафедры кожных и венерических болезней ФППОВ Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, кафедры дерматовенерологии ФУВ МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, отделения дерматовенерологии и дерматоонкологии МОНИКИ им. М.Ф.Владимирского.

Материалы диссертации доложены на III Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2011г), Научно-практической конференции дерматовенерологов ЦФО (Москва, 2011, 2012гг), на заседаниях Московского областного общества дерматовенерологов (2009, 2010, 2011гг).

Личный вклад автора

Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе, обобщении и научном обосновании полученных результатов. Автором лично проведено моделирование процессов, мониторинг основных параметров, аналитическая и статистическая обработка, научное обоснование и обобщение полученных результатов. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задач и их клинической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях, докладах и их внедрения в практику.





Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.01.10 – «кожные и венерические болезни». Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно 2 и 3 пунктам паспорта специальности.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 13 печатных работ, из них 7 – в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки, изданы 2 методические рекомендации для врачей «Поражения кожи при болезни Лайма», «Комплексная терапия склероатрофических поражений кожи, ассоциированных с боррелиозной инфекцией».

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из  введения, обзора литературы, описания методов исследования, собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы. Работа изложена на 165 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 27 таблицами, 15  графиками, 20 рисунками. Указатель литературы содержат 151 источник, в том числе 103 на иностранном языке.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследований

Исследования проводились на кафедре кожных и венерических болезней ФППОВ  Первого Московского Государственного Медицинского Университета им. И.М. Сеченова. Проанализированы клинические особенности 238 больных Московской области с различными формами склероатрофических поражений кожи, в том числе 177 больных бляшечной  и 6 линейной склеродермией,  33 склероатрофическим лихеном, 15 атрофодермией Пазини – Пьерини, 7 хроническим атрофическим акродерматитом, наблюдавшихся за период с 2009 по 2011 гг. Из данной группы с помощью двуступенчатого метода диагностики (ИФА и иммунный блоттинг в формате иммуночипа) выявлены 36 больных, у которых склероатрофический процесс был ассоциирован с боррелиозной инфекцией. 

Помимо общеклинического исследования с использованием физикальных, инструментальных, лабораторных, гистологических методов, всем больным со склероатрофическими поражениями кожи при боррелиозной инфекции (36 больных), а также группе контроля (36 больных склероатрофическими поражениями кожи, серонегативными по антителам к боррелиям) проводилось иммунологическое исследование, выполненное  в лаборатории иммунологии МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского и включающее параметры наследственного иммунитета (фагоцитарная активность, естественная и цитокинозависимая цитотоксичность), параметры адаптивного иммунитета (Т-  и В-звенья иммунитета, апоптоз лимфоцитов). Таким образом, у каждого больного проанализировано 25 иммунологических показателей, при этом у больных склероатрофическими поражениями кожи, ассоциированными с боррелиозной инфекцией, данные параметры проанализированы в динамике после проведения комплексной терапии.

Исследование субпопуляционного состава клеток периферической крови проводили путем иммунофенотипирования клеток CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3+HLA-DR+, CD3-HLA-DR+, CD3-CD16+CD56+, CD3+CD16+CD56+, СD5+, СD7+ , CD11b,  CD19+ ,  CD25+, CD38+ , CD50+,  CD 57+, СD95+ на приборе FACS – Calibur (Beeton Dickinson, США) с применением соответствующих моноклональных антител (BD Biosciences Farmigen, Caltag, Invitrogen). Исследование концентрации IgG, IgA и  IgM в сыворотках крови подсчитывали методом радиальной иммунодиффузии по Манчини с применением реагентов ЗАО Вектор-Бест, Новосибирск. Количественное определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови проводили методом ПЭГ – преципитации с использованием 2-х концентраций (3,5% и 4%) ПЭГ-6000 с помощью наборов ЗАО Векор-Бест, Новосибирск.

С целью выявления боррелиозной инфекции  в лаборатории эпидемиологии природно-очаговых инфекций и лаборатории генно-инженерных методов ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора РФ  238 больным было проведено 238 исследований методом ИФА (с применением системы Боррелиоз ИФА – IgM, Боррелиоз ИФА – IgG производства ООО «Омникс», Санкт – Петербург)  и  306 исследований методом иммунного блоттинга в формате иммуночипа (до и после лечения) с использованием рекомбинантных антигенов, производства ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора РФ и флуоресцентного сканера для анализа биочипов (MarS, Германия).

Для выявления статистически достоверных различий в данной работе использовался статистический пакет «Statistica», версия 5.5 (StatSoft Inc., США).

Результаты исследований

За период с 2009 по 2011гг. мы наблюдали 238 больных различными формами склероатрофических поражений кожи (бляшечная склеродермия, линейная склеродермия,  склероатрофический лихен, атрофодермия Пазини – Пьерини, хронический атрофический акродерматит), из них  женщины  составили 213 человек (89,5%), мужчины 25 человек (10,5%).

В группу больных склероатрофическими поражениями кожи, ассоциированными с боррелиозной инфекцией, выявленной с помощью двуступенчатого метода диагностики (ИФА и иммунный блоттинг в формате иимуночипа) вошли 36 больных, из них 20 больных бляшечной и 2  линейной формами склеродермии, 4 -  атрофодермией Пазини-Пьерини, 3 -  склероатрофическим лихеном, 7 – хроническим атрофическим акродерматитом. 

Склероатрофические поражения кожи при боррелиозной инфекции наблюдались чаще у женщин – 33 больных (91,7%) в возрасте от 51 до 70 лет. При этом в возрастной группе от 20 до 30 лет склероатрофические поражения кожи, ассоциированные с борре­лиозной инфекцией, выявлены у 4 больных (11,2%), от 31 до 40 лет – у 2 боль­ных (5,6%), от 41 до 50 лет – у 3 больных (8,3%), от  51 до 60 лет – у 12 боль­ных (33,3%), от 60 до 70 лет – у 12 больных (33,3%), старше 71 года – у 3 боль­ных (8,3%).

Давность анамнеза склероатрофических пора­жений кожи при боррелиозной инфекции на момент обраще­ния составила до 1 года – у 8 больных (22,2%), от 1 до 3 лет – у 18 больных (50%), от 3 до 5 лет – у 4 больных (11,2%), от  5 до 10 лет – у 3 больных (8,3%), более 10 лет – у 3 больных (8,3%). Укус клеща в анамнезе  был отмечен у 10 больных (27,8%), мигрирующая эритема -  у 3 больных (8,3%), у этих же больных на месте мигрирующей эритемы впоследствии развились склероатрофические поражения кожи. Прием антибиотиков в анамнезе отмечен у 28 больных (77,8%).

При сравнении клинической картины склеродермически пораженной кожи при боррелиозе и идиопатическом процессе (36 больных ограниченными формами склеродермии без ассоциации с боррелозом) отмечены следующие особенности: множественный (более 4) характер очагов в 75% случаев  при 53% -  в группе сравнения; поражение акральных зон конечностей отдельно или в сочетании с очагами на туловище составили в совокупности 72,2%, в то время, как в группе сравнения поражение акральных зон отмечено лишь в 31% в сочетании с поражением туловища. Субъективные ощущения в виде зуда, парестезий, болезненности в очагах поражения отмечены в 50,0% больных, что значительно превышало (3,8%) данные в группе сравнения. Кожный счет по Родману был значительно выше у больных бляшечной склеродермией, ассоциированной с боррелиозом (8,1 ± 1,8 баллов), по сравнению с группой сравнения (3,25 ± 1,4 балла), что свидетельствует о большей степени тяжести процесса у изучаемой группы  (рис. 1).

Рис. 1. Сравнительная характеристика  клинической картины больных со склероатрофическими поражениями кожи, ассоциированными с боррелиозной инфекцией, и больных очаговой склеродермией, серонегативной по антителам к боррелиям.

Специфическая симптоматика проявлялась у больных склероатрофическими поражениями кожи при боррелиозной инфекции  в виде поражения опорно – двигательного аппарата (мигрирующие артралгии) - у 16 (44,5%) больных, неврологической симптоматики  (астено – невротическое состояние, неврит лицевых нервов, эпизоды кратковременной амнезии и нарушения равновесия) – у 14 (38,9%), поражения сердца (нарушение ритма и проводимости сердечной мышцы) – у 10 (37,9%).

Комплексное иммунологическое исследование, включающее 25 параметров, отражающих состояние наследственного и адаптивного звеньев иммунитета, было проведено 36 больным склероатрофическими поражениями кожи, ассоциированными с боррелиозной инфекцией,  и 36 больным группы сравнения.  Данные представлены в таблице 1.

Таблица 1

Показатели наследственного и адаптивного звеньев иммунитета у больных склероатрофическими поражениями кожи.

Показатели иммунного ответа

Здоровые доноры

(n=36)

M ± m

Склероатрофические поражения кожи, ассоциированные с боррелиозной инфекцией

(n=36)

M ± m

Склероатрофические поражения кожи, негативные по антителам к боррелиям

(n=36)

M ± m

Т-звено иммунитета

CD3+, %

(Т – лимф)

65, 1± 9,9

72,37 ± 5,73

69.3 ± 7,94**

CD3+CD4+,%

(Т – хелп)

40,3 ± 8,5

43,0 ± 4,0

41,5 ± 8,71**

CD3+CD8+ , %

(Т – супр)

28,6 ± 8,4

29,5 ± 6,18

30,31 ± 9,45**

CD4+/CD8+

1,9 ± 0,6

1,25 ± 0,31

1,69 ± 0,6**

CD3+HLA-DR+, %

8,4 ± 3,2

9 ± 2,53

7,0 ± 5,16**

CD3-HLA-DR+, %

13,5 ± 5,8

12,29 ± 3,1

15,18 ± 5,18**

CD38+ , %

(активир лимф)

32,4 ± 6,5

18,3 ± 7,26

34,2 ± 6,4**

CD25+ , %

(-цепь рецептора ИЛ-2)

2,6 ± 2,2

9,07 ± 6,99

4,11 ± 1,52**

CD7+ , %

(Т-лимф, NK-кл)

71,4 ± 6,3

84,0 ± 5,35

76,67 ± 2,49**

В-звено иммунитета

CD19+ , %

(В – лимф)

10,5 ± 5,4

16,75 ± 7,7

12,83 ± 4,67**

СD5+ , %

70,3 ± 8,9

84,83 ± 8,5

67,33 ± 7,72**

Сывор. IgG, мг/л

1456 ± 247,4

  1278 ± 377,8

1543 ± 597**

Сывор. IgA, мг/л

202,2 ±100,5

358,07 ± 109,11

321,07 ± 177,4**

Сывор. IgM, мг/л

120,6 ± 60,5

187,19 ± 88,17

157,17 ± 67,22**

3% ЦИК, Ед/мл

0,04 ± 0,02

0,08 ± 0,05

0,05 ± 0,03*

4% ЦИК, Ед/мл

0,071 ± 0,05

0,12 ± 0,07

0,07 ± 0,05*

Апоптоз лимфоцитов в периферическом кровотоке

СD95+, %

(FAS/APO-1 антиген)

42,4 ± 15,3

54,3 ± 6,94

52,5 ± 4,23**

Фагоцитарная функция

CD11b, %

(C3di рецептор С3 компонента комплемента)

20,5 ± 9,4

9,13± 3,08

17,0± 6,16**

CD50+ , %

(молекулы адгезии)

91,4 ± 5,4

90,96± 6,31

86,67 ± 3,3**

Фагоцитарный индекс, %

67,3 ± 6,4

57 ± 8,05

66 ± 2,83**

НСТ-тест, %

15,7 ± 2,6

11,25 ± 3,96

14 ± 4,47**

Латекс – тест, %

67,5 ± 6,4

52,25 ± 5,63

64,75± 2,59**

Естественная и цитокинзависимая цитотоксичность

CD3-CD16+CD56+, %

(NK – кл)

12,5 ± 5,8

16,03 ± 5,41

13,82 ± 5,98**

CD3+CD16+CD56+, %

(T – кил)

5,7 ± 3,5

5,5 ± 4,5

8,82 ± 4,09**

CD 57+, %

25,6 ± 5,8

44,0  ± 17,93

25,67 ± 8,57**

Примечание: *р < 0,001, **р < 0,05, М – среднее значение, m – средняя ошибка.

Особенностями иммунного статуса больных склероатрофическими поражениями кожи, ассоциированными с боррелиозной инфекцией, является тенденция к угнетению  доли субпопуляций Т-хелперов и Т-супрессоров, что проявляется в виде  понижения иммунорегуляторного индекса (1,25 ± 0,31) и повышении экспрессии вспомогательных молекул для межклеточной кооперации CD7+ (84,0 ± 5,35),  -цепи рецептора ИЛ-2 CD25+ (9,07 ± 6,99), в то время как, у больных  группы сравнения отмечалась тенденция к возрастанию доли субпопуляций  Т- супрессоров (CD8+, % - 30,31 ± 9,45).

У больных склероатрофическими поражениями кожи, ассоциированными с боррелиозной инфекцией, также как у больных группы сравнения отмечается активация гуморального звена иммунитета в виде повышения удельного веса В – клеток (16,75 ± 7,7 и 12,83 ± 4,67 соответственно), сывороточной концентрации IgM (187,19 ± 88,17 и 157,17 ± 67,22 соответственно), IgA (358,07 ± 109,11 и 321,07 ± 177,4 соответственно), 3% ЦИК (0,08 ± 0,05 и 0,05 ± 0,03 соответственно), 4% ЦИК (0,012 ± 0,07 и 0,07 ± 0,05 соответственно).

Апоптоз Т-лимфоцитов как у больных как  склероатрофическими поражениями кожи при боррелиозе, так и больных склероатрофическими поражениями кожи, негативными по антителам к боррелиям, находился в пределах нормы (CD95+, % - 54,3±6,96 и  52,5±56,73 соответственно).

У больных склероатрофическими поражениями кожи, ассоциированными с боррелиозной инфекцией,  отмечается уменьшение содержания  субпопуляций, экспрессирующих маркеры макрофагов (CD11b, % -  9,13± 3,08), подавление адгезионной (CD50+, % -  90,96 ± 6,31), поглотительной и переваривающей способности фагоцитов (фагоцитарный индекс, %  - 57 ± 8,05, НСТ – тест, % - 11,25 ± 3,96, латекс – тест, % - 52,25 ± 5,63). У больных склероатрофическими поражениями кожи, серонегативными по антителам к боррелиям, все виды функциональной активности фагоцитов в пределах нормы (CD11b, %  - 17,0± 6,16, CD50+ , % - 86,67 ± 3,3, фагоцитарный индекс, % - 66 ± 2,83, НСТ-тест, % - 14 ± 4,47, латекс – тест, % - 64,75± 2,59).

Кроме того, у больных склероатрофическими поражениями кожи при  боррелиозной инфекции отмечалась тенденция к повышению доли субпопуляций, несущих маркеры NK – клеток (CD3-CD16+CD56+, % -  16,03 ± 5,4; CD57+, % - 44 ± 17,93),  в то время, как у больных группы контроля отмечались нормальные значения субпопуляций NK – клеток (CD3-CD16+CD56+, % -  13,82 ± 5,98; CD57+, % - 23,67 ± 8,57).

Особенности антиборрелиозного иммунитета у больных склероатрофическими поражениями кожи, ассоциированными с боррелиозной инфекцией

С помощью новой инновационной тест – системы для иммунного блотинга в формате иммуночипа мы смогли выявить и оценить особенности гуморального антиборрелиозного иммунитета у больных склероатрофическими поражениями кожи при боррелиозной инфекции. При обследовании 238 больных склероатрофическими поражениями кожи методом иммунного блоттинга в формате иммуночипа, у 36 (15,1%) больных была выявлена ассоциация с боррелиозной инфекцией. Метод иммунного блоттинга показал более высокую чувствительность по сравнению с ИФА, позволив выявить случаи ложноположительных и сомнительных (13 больных) результатов ИФА.

С помощью метода иммунного блоттинга в формате иммуночипа  антитела класса IgM были выявлены у 15 (41,7%) больных склероатрофическими поражениями кожи при боррелиозной инфекции. Спектр антигенов по IgМ антителам представлен в большинстве случаев 1 или 2 группами антигенов (13,8% и 11,1% соответственно), при этом наиболее часто встречались антигены OspC (33,3%),  р17 (27,8%), р100 (22,2%). Значения антигенов класса IgM были невысокие и не превышали 4,61(рисунок 2).

Рис.2. Группы антигенов класса IgM и  IgG, выявляемые с помощью метода иммунного блоттинга в формате иммуночипа.

Антитела класса IgG с помощью метода иммунного блоттинга в формате иммуночипа были выявлены у всех 36 (100%) больных склероатрофическими поражениями кожи при боррелиозной инфекции. Спектр антигенов по IgG антителам у большинства больных был представлен  3 или 6 группами антигенов (27,8% и 25% соответственно), при этом максимальное количество (8 групп)  и высокие значения по всем группам антигенов  отмечались у больных хроническим атрофическим акродерматитом и коррелировали с тяжестью кожного процесса.  Наиболее часто встречались антигены OspC (80,6%),  р17 (75%), р41 (61,1%), р58 (55,6%),  р100 (50%). У больных бляшечной склеродермией, ассоциированной с боррелиозной инфекцией, в ряде случаев (антигены p41,  ВВК32, OspС, p17) отмечены  высокие титры антигенов, количественно соизмеримые с таковыми у больных хроническим атрофическим акродерматитом.

Таким образом. для больных склероатрофическими поражениями кожи, ассоциированными с боррелиозной инфекцией, выявлены характерные  антегены OspC (80,6%),  р17 (75%), р41 (61,1%), р58 (55,6%),  р100 (50%), наличие которых у больных с боррелиозной инфекцией может указывать на склонность к вовлечению в процесс кожных покровов. 

Комплексная терапия склероатрофических поражений кожи, ассоциированных с боррелиозной инфекцией

Мы разработали комплексный метод терапии склероатрофических поражений кожи, ассоциированных с боррелиозной инфекцией, заключающийся в  использовании антибиотика цефалоспоринового ряда (цефтриаксон) в сопровождении гепатопротектора (гептрал), ферментного препарата (лонгидаза), энзимного препарата (вобэнзим), наружной терапии (крем эгаллохит).

Антибиотик цефтриаксон назначался в дозе  1 г 2 раза в день в виде внутримышечных инъекций в течение 30 дней, до курсовой дозы 60г. Параллельно с этим назначался препарат гептрал в дозе 400 мг по 1 таблетке 2 раза в сутки  в течение 1 месяца,  лонгидаза  в виде ректальных суппозиторий в дозировке 3 тыс Ед 1 раз в 2 дня до курсовой дозы 30 тысЕд, вобэнзим в дозировке 5 драже 3 раза в день в течение 2 недель, затем по 2 драже 3 раза в день в течение 2 недель, затем по 1 драже 3 раза в день в течение 2 недель, затем по 1 драже 1 раз в день в течение 3 месяцев. Наружно наносили крем эгаллохит ежедневно 1 раз в день под окклюзию на 2 часа толщиной 1 – 2 мм.

После проведенной комбинированной терапии в течение 3 месяцев больной вызывался для осмотра каждые 2 недели. В течение этого времени динамику со стороны кожного процесса оценивали по следующим параметрам: состояние венчика периферического роста, размягчение и уменьшение размеров очагов, отсутствие новых очагов, уменьшение субъективных ощущений, положительная динамика индексов оценки кожного процесса. Кроме того, мы оценивали положительную динамику со стороны сопутствующей специфической симптоматики, иммунологических параметров и титра антиборрелиозных антител. Одного курса терапии было достаточно, при клиническом излечении больного, которое проявлялось  в  виде  сохранения атрофии или пигментации в местах ранее существующих очагов, нормализации иммунологических показателей, уменьшении титра антиборрелиозных антител. В случае недостаточной положительной динамики лечение проводилось повторно до 2-3 курсов. Необходимость назначения третьего курса комплексной терапии отмечалась у больных при отсутствии положительной динамики со стороны кожного процесса или со стороны иммунологических показателей, или со стороны титра антител.  Все пациенты находились под наблюдением от 2 до 4 лет. 

Всего лечение проведено 36 больным склероатрофическими поражениями кожи при боррелиозной инфекции (20 больных бляшечной и  2 линейной склеродермией, 7 – хроническим атрофическим акродерматитом,  4 - атрофодермией Пазини – Пьерини, 3 - склероатрофическим лихеном) (таблица 7).

При этом, 1 курс терапии получили 20  (55,5%) больных,  2 курса -  13 (36,2%)  больных, 3 курса -  3 (8,3%) больных, при этом количество курсов терапии коррелировало со степенью выраженности кожного процесса, давностью анамнеза заболевания. Данные представлены  в  таблице 2. 

Таблица 2

Распределение больных по количеству проведенных курсов терапии.

Вид склероатрофического поражения кожи

1 курс

2 курса

3 курса

Всего

Количество

Процент

Бляшечная склеродермия

13

7

-

20

55,5

Линейная склеродермия

1

1

-

2

5,6

Атрофодермия Пазини – Пьерини

1

3

-

4

11,2

Склероатрофический лихен

3

-

-

3

8,3

Хронический атрофический акродерматит

2

2

3

7

19,4

Всего

Количество

20

13

3

36

100

Процент

55,5

36,2

8,3

100

После проведенной комплексной терапии со стороны кожного процесса у больных наблюдалась клиническое излечение, что проявлялось в виде сохранения атрофии или пигментации в местах ранее существующих очагов, уменьшении размера очагов, степени тяжести (кожный счет по Родману) и активности кожного процесса, выраженности субъективных ощущений в местах склеродермоподобных изменений кожи. Данные динамики со стороны кожного счета по Родману представлены в таблице 3.

Таблица 3

Динамика показателей кожного счета по Родману у больных склероатрофическими поражениями кожи, ассоциированными с боррелиозной инфекцией, до и после лечения.

Вид склероатрофического поражения кожи

Кожный счет по Родману (баллы)

До лечения

После лечения

Бляшечная склеродермия

8,1 ± 5,8

4,35 ± 3,34

Линейная склеродермия

3,5 ± 2,5

1

Атрофодермия Пазини – Пьерини

2,7 ± 1,7

1,25 ± 0,54

Склероатрофический лихен

2,25 ± 1,3

1,3 ± 0,47

Хронический атрофический акродерматит

10,7 ± 8,1

5,57 ± 4,35

Положительная динамика после  проведенного лечения также отмечалась со стороны специфической симптоматики в виде уменьшения или отсутствия проявлений со стороны опорно-двигательно аппарата в 31,2% случаев, неврологической симптоматики – в 69,2%, поражения сердца – в 40% случаев.

Критерием эффективности проведенной терапии также считалась  динамика титров антител, определяемых с помощью метода иммунного блоттинга в формате иммуночипа. После проведенной комплексной терапии отмечалось уменьшение титров всего спекта  белков (8 групп, 14 антигенов)  класса Ig M и  IgG, что является свидетельством элиминации боррелиозной инфекции из организма.

Кроме того, динамика состояния больного после проведенной комплексной терапии оценивалась по состоянию наследственного и адаптивного звеньев иммунитета, исследование которых проводилось до и после лечения (таблица 4).

  Таблица 4

Особенности иммунного ответа у больных склероатрофичесими поражениями кожи, ассоциированными с боррелиозной инфекцией, до и после лечения

Показатели иммунного ответа

Здоровые доноры

(n=36)

M ± m

Склероатрофические поражения кожи, ассоциированные с боррелиозной инфекцией

До лечения (n=36)

M ± m

После лечения (n=36)

M ± m

Т-звено иммунитета

CD3+, %

(Т – лимф)

65, 1± 9,9

72,37 ± 5,73

71,71 ± 4,56**

CD3+CD4+,%

(Т – хелп)

40,3 ± 8,5

43,0 ± 4,0

42,23 ± 3,9**

CD3+CD8+ , %

(Т – супр)

28,6 ± 8,4

29,5 ± 6,18

28,25 ± 5,18**

CD4+/CD8+

1,9 ± 0,6

1,25 ± 0,31

1,71 ± 0,61**

CD3+HLA-DR+, %

8,4 ± 3,2

9 ± 2,53

7,6 ± 2,06**

CD3-HLA-DR+, %

13,5 ± 5,8

12,29 ± 3,1

8,86 ± 3,44**

CD38+ , %

(активир лимф)

32,4 ± 6,5

18,3 ± 7,26

33,0 ± 6,32**

CD25+ , %

(-цепь рецептора ИЛ-2)

2,6 ± 2,2

9,06 ± 6,99

7,67 ± 3,09**

CD7+ , %

(Т-лимф, NK-кл)

71,4 ± 6,3

84,0 ± 5,35

78,0 ± 5,35**

В-звено иммунитета

CD19+ , %

(В – лимф)

10,5 ± 5,4

16,75 ± 7,7

14,06 ± 6,44**

СD5+ , %

70,3 ± 8,9

84,83 ± 8,5

71,0 ± 8,04**

Сывор. IgG, мг/л

1456 ± 247,4

  1278 ± 377,8

1367,59 ± 351,76**

Сывор. IgA, мг/л

202,2 ±100,5

358,07 ± 109,11

260,41 ± 108,24**

Сывор. IgM, мг/л

120,6 ± 60,5

187,19 ± 88,17

166,62 ± 79,77**

3% ЦИК, Ед/мл

0,04 ± 0,002

0,08 ± 0,05

0,06 ± 0,02*

4% ЦИК, Ед/мл

0,071 ± 0,005

0,12 ± 0,07

0,09 ± 0,03*

Апоптоз лимфоцитов в периферическом кровотоке

СD95+, %

(FAS/APO-1 антиген)

42,4 ± 15,3

54,3 ± 6,94

51,33 ± 12,19**

Фагоцитарная функция

CD11b, %

(C3di рецептор С3 компонента комплемента)

20,5 ± 9,4

9,13± 3,08

24,33 ± 8,99**

CD50+ , %

(молекулы адгезии)

91,4 ± 5,4

90,96± 6,31

88,0 ± 0,82**

Фагоцитарный индекс, %

67,3 ± 6,4

57 ± 8,05

65,0 ± 4,56**

НСТ-тест, %

15,7 ± 2,6

11,25 ± 3,96

13,25 ± 3,96**

Латекс – тест, %

67,5 ± 6,4

52,25 ± 5,63

63,25 ± 5,63**

Естественная и цитокинзависимая цитотоксичность

CD3-CD16+CD56+, %

(NK – кл)

12,5 ± 5,8

16,03 ± 5,41

13,64 ± 3,33**

CD3+CD16+CD56+, %

(T – кил)

5,7 ± 3,5

5,5 ± 4,5

4,5 ± 2,29**

CD 57+, %

25,6 ± 5,8

44 ± 17,93

32,0 ± 12,03**

Примечание: *р < 0,001, **р < 0,05, М – среднее значение, m – средняя ошибка.

При анализе иммунологических показателей после проведенного лечения обращает на себя внимание тенденция к нормализации  иммунорегуляторного индекса, достоверное уменьшение экспрессии вспомогательных молекул для межклеточной кооперации CD7+, -цепи рецептора ИЛ-2 CD25+.  Кроме того,  отмечается восстановление фагоцитарной функции, проявляющейся в виде повышения содержания  субпопуляций, экспрессирующих маркеры макрофагов (CD11b, %  до 24,33 ± 8,99), повышении адгезионной (CD50+, % до  88,0 ± 0,82), поглотительной и переваривающей способности фагоцитов (фагоцитарный индекс, %  до  65,0 ± 4,56, НСТ – тест, %  до 13,25 ± 3,96, латекс – тест, % до 63,25 ± 5,63).  После полученой комплексной терапии наблюдается тенденция к понижению доли субпопуляций, несущих маркеры NK – клеток: СD3-CD16+CD56+ до 13,64 ± 3,33, CD 57+ до 32,0 ± 12,03 по сравнению с показателями данных больных до лечения (СD3-CD16+CD56+, % -  16,03 ± 5,41, CD 57+, % -  до 44,0 ± 17,93).

Период наблюдения после лечения составлял от 2 до 4 лет. Курсы были проведены с положительным эффектом  - достигнута клиническая ремиссия кожного процесса в виде отсутствия периферического венчика гиперемии у всех больных, отсутствия субъективных ощущений в местах очагов, уменьшении кожного сета по Родману, нормализации титра антиборрелиозных антител и иммунологических показателей.

ВЫВОДЫ

  1. При мониторинге 238 больных склероатрофическими поражениями кожи выявлено 36 (15,1%) случаев развития процесса на фоне боррелиозной инфекции, что обуславливает целесообразность обследования всех больных данной группы на боррелиоз.
  2. Склероатрофические поражения кожи при боррелиозной инфекции характеризовались следующими формами: бляшечной склеродермией (55,5%), хроническим атрофическим акродерматитом (19,4%), атрофодермией  Пазини – Пьерини (11,2%), склероатрофическим  лихеном (8,3%), линейной склеродермией  (5,6%) и отличались множественным характером очагов с повышенной болевой чувствительностью, зудом или парестезиями в их зонах, высокими показателями кожного счета по Родману (до 10,7±1,8) и общими симптомами в виде мигрирующих артралгий  в 44,5% случаев, неврологической симптоматики (астено – невротическое состояние,  неврит лицевых невров, эпизоды кратковременной амнезии и нарушения равновесия) в 38,9% случаев, нарушения ритма и проводимости сердечной мышцы в 37,9% случаев. 
  3. В отличие от идиопатической при склеродермии, ассоциированной с боррелиозной инфекцией, наблюдается дефицит моноцитарно – макрофагального звена в виде уменьшения доли  субпопуляций, экспрессирующих маркеры макрофагов (CD11b, % -  9,13± 3,08), подавления адгезионной (CD50+, % -  90,96 ± 6,31), поглотительной и переваривающей способности фагоцитов (фагоцитарный индекс, %  - 57 ± 8,05, НСТ – тест, % - 11,25 ± 3,96, латекс – тест, % - 52,25 ± 5,63) и увеличения  доли субпопуляций с  маркерами Т-киллеров (СD3-CD16+CD56+ до 16,03 ± 5,41, CD 57+ до 44,0 ± 17,93).
  4. Метод иммунного блоттинга в формате иммуночипа  (306 исследований до и после лечения) показал высокую чувствительность, превосходящую ИФА, НРИФ, за счет  широкого спектра антигенов (14 белков) к геновидам Borrelia afzelii и Borrelia garinii. Выявлены характерные  антигены  OspC (80,6%),  p17 (75,0%),  p41 (61,1%), p58 (55,6%), p100 (50%), которые можно рассматривать как маркерные белки склероатрофических поражений кожи при боррелиозной инфекции. 
  5. Разработанный нами метод комплексной терапии, включающий антибиотик (цефтриаксон) в сочетании с  гепатопротектором  (гептрал) и  энзимным (вобэнзим) и дефиброзирующими (лонгидаза и эгаллохит топически) препаратами, позволяет обеспечить клиническую ремиссию склероатрофического процесса на фоне стабилизации показателей активности боррелиоза  после одного - у 20 (55,5%), двух  – у 13  (36,2%) и  трех курсов терапии –  у 3 (8,3%) больных. Клиническая ремиссия наблюдалась у 33 (91,7%)  больных при сроках наблюдения от 2 до 4 лет и коррелировала с нормализацией иммунных показателей.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

  1. Разработанные представления о диагностике боррелиозной инфекции при  склероатрофических поражениях кожи показывают необходимость использования метода иммунного блоттинга в формате иммуночипа, позволяющего исключить  сомнительные и ложноположительные результаты скриниговых тестов.
  2. Разработанный нами метод комплексной терапии склероатрофических поражений кожи, ассоциированных с боррелиозной инфекцией, является высокоэффективным, патогенетически обоснованным, доступным и может быть рекомендован для применения в клинической и амбулаторной практике врачей – дерматологов.
  3. Изданы методические рекомендации для врачей «Поражения кожи при болезни Лайма», «Комплексная терапия склероатрофических поражений кожи, ассоциированных с боррелиозной инфекцией», материал введен курс лекций для врачей на курсе постдипломного образования кафедры кожных и венерических болезней (ФППОВ Первого МГМУ им. И.М. Сеченова и ФУВ МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского).

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Кряжева С.С., Третьякова Е.И., Прокофьев А.А., Ромашкина А.С. Поражения кожи в поздней стадии болезни Лайма. // Российский журнал кожных и венерических болезней. – 2008г. - №6. – С. 32 – 38.
  2. Кряжева С.С., Снарская Е.С., Ромашкина А.С. Роль боррелиозной инфекции в патогенезе склероатрофических поражений кожи. Материалы научно – практической конференции «Герпес и инфекции, передаваемые половым путем» / МЗ РФ, МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, 27 – 28 мая 2009г. – М., 2009г. – С. 72 – 73.
  3. Кряжева С.С., Снарская Е.С., Ромашкина А.С. Ранняя диссеминированная стадия Лайм – боррелиоза // Российский журнал кожных и венерических болезней.  – 2009г. - №6. – С. 18 – 21.
  4. Кряжева С.С., Снарская Е.С., Ромашкина А.С. Множественные очаги рецидивирующей доброкачественной лимфоплазии при болезни Лайма // Российский журнал кожных и венерических болезней. – 2010г. - №2. – С. 17 – 20.
  5. Кряжева С.С., Снарская Е.С., Ромашкина А.С., Куртис Д.Ш. Лабораторные аспекты диагностики боррелиоза кожи. Материалы научно – практической конференции «Актуальные вопросы дерматовенерологии и дерматоонкологии» / МЗ РФ, МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, 27 – 28 мая 2010г. – М., 2010г. – С. 75 – 78.
  6. Ромашкина А.С. Хронический атрофический акродерматит. // Российский журнал кожных и венерических болезней. – 2010г. - №6. – С. 28 – 32.
  7. Кряжева С.С., Снарская Е.С., Ромашкина А.С. Поражения кожи при болезни Лайма: Методические рекомендации / МЗ РФ. – М., 2010г., 23с.
  8. Молочков В.А., Снарская Е.С., Маркелов М.Л., Чеканова Т.А., Карань Л.С., Ромашкина А.С. Склероатрофические поражения кожи, ассоциированные с боррелиозной инфекцией. // Российский журнал кожных и венерических болезней.  – 2011г. - №1.  –С. 45 – 49.
  9. Молочков В.А., Кряжева С.С., Снарская Е.С., Ромашкина А.С. Анализ структуры заболеваемости очаговой склеродермией в Московской области. Материалы научно – практической конференции «Актуальные вопросы дерматовенерологии и дерматоонкологии» / МЗ РФ, МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, 26 – 27 мая 2011г. – М., 2011г. – С. 3 – 4.
  10. Молочков В.А., Снарская Е.С., Ромашкина А.С. Очаговая склеродермия, ассоциированная с другими аутоиммунными заболеваниями и спектром различных аутоантител. // Российский журнал кожных и венерических болезней.  – 2011г. - №4. – С. 33 – 36.
  11. Снарская Е.С., Ромашкина А.С. Иммунный блоттинг в диагностике склероатрофических поражений кожи боррелиозной этиологии. / VI Всемирный конгресс по иммунопатологии и респираторной аллергии. Москва, 15 – 18  сентября 2011г. // Аллергология и иммунология. – 2011г. – Т.12, №3. – С. 272 – 273.
  12. Снарская Е.С., Ромашкина А.С. Комплексная терапия склероатрофических поражений кожи, ассоциированных с боррелиозной инфекцией // Российский журнал кожных и венерических болезней. – 2012г. - №1. – С. 43 – 47.
  13. Кряжева С.С., Снарская Е.С., Ромашкина А.С. Комплексная терапия склероатрофических поражений кожи, ассоциированных с боррелиозной инфекцией: Методические рекомендации / МЗ РФ. – М., 2012г., 25с.





© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.