WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

Гатиятов Юрий Фаатович

Аутоантитела к активированным

факторам свёртывания крови

при ишемической болезни сердца

14.03.03 патологическая физиология

Автореферат диссертации

на соискание учёной степени

кандидата медицинских наук

       Чита – 2012

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Читинская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития РФ

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Цыбиков Намжил Нанзатович

Официальные оппоненты:

Степанов Александр Валентинович - доктор медицинских наук, ГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития РФ, заведующий кафедрой безопасности жизнедеятельности и медицины катастроф

Герасимов Александр Александрович - кандидат медицинских наук, ГУЗ «Городская клиническая больница №1» г. Читы, заведующий клинико-диагностической лабораторией

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Алтайский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, г. Барнаул

Защита состоится «  » декабря 2012 года в____часов на заседании диссертационного совета Д208.118.01 при ГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития РФ (адрес: 672090, г. Чита, ул. Горького, 39а).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития РФ (адрес: 672090, г. Чита, ул. Горького, 39а).

Автореферат разослан  «____»  ноября 2012 г.

Учёный секретарь

диссертационного совета

Д 208. 118. 01

д.м.н., профессор                                                И.Н. Гаймоленко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ1

Актуальность проблемы. Ишемическая болезнь сердца (ИБС) – актуальная социально-медицинская проблема и ведущая причина смертности населения многих стран, в том числе России. По данным исследований, проведённых в РФ среди мужчин 35-65 лет, смертность от ИБС в общей структуре смертности от сердечно-сосудистой патологии составляет 56,5%, а у женщин такого же возраста – 40,4%. ИБС является основной причиной (70-80%) внезапной смерти (Палкин М.Н., 2011; Панченко Е.П., 2009). Ишемическая болезнь сердца как патологический процесс представляет собой не только прогрессирующее атеросклеротическое поражение коронарного русла, но и выраженные изменения в системе гемостаза (Авалиани В.М. с соавт., 2005; Антелава Н.А. с соавт., 2005; Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В., 2002). Ключевым событием в патогенезе инфаркта миокарда является внутрикоронарный тромбоз с активацией сосудисто-тромбоцитарного гемостаза, плазменных прокоагулянтов на фоне снижения активности системы фибринолиза и физиологических антикоагулянтов (Баркаган З.С. с соавт., 2004; Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В., 2002). Исходя из концепции иммунной регуляции системы гемостаза (Кузник Б.И., Цыбиков Н.Н., 1981), актуальным представляется изучение содержания аутоантител (ААТ) к факторам свёртывания крови (ФСК) при заболеваниях сердечно-сосудистой системы, так как, с одной стороны, некроз миокарда и эндотелия при ИБС приводит к гиперпродукции тканевого фактора и появлению активированных факторов свертывания крови, с другой стороны, не исключено, что активность последних может изменяться соответствующими аутоантителами. Актуальность проблемы взаимодействия аутоантител с факторами свёртывания крови при ИБС определяется недостаточной изученностью этой проблемы, а также высокой частотой тромботических осложнений в первые месяцы после перенесённого инфаркта миокарда (Фрид М., Грайнс С., 1996). В настоящий момент не вызывает сомнения факт наличия антител к факторам свёртывания крови как в норме, так и в патологии (Petrelli C.T. et al., 2008). Известно об участии этих молекул в регуляции системы гемостаза, однако отсутствуют чёткие клинико-патофизиологические данные, характеризующие эти взаимодействия (Shoenfeld Y., Isenberg D.A. 1993; Petrelli C.T. et al., 2008). Имеются немногочисленные работы, посвящённые вопросам выяснения роли аутоантител к факторам свёртывания крови при патологических состояниях (Banninger H. et al., 1993; Franchini M. et al., 2007). Сведения о динамике аутоантител к факторам свёртывания крови при ИБС практически отсутствуют в литературе.

       С открытием аутоантител с ферментативной активностью (абзимов) вопрос о роли иммунной системы по отношению к организму приобретает новые аспекты изучения (Генералов И.И. с соавт., 2009), особенно по отношению к регуляции гомеостаза (Цыбиков Н.Н., Кузник Б.И. , 2005). Всё вышеуказанное позволило сформулировать цель и задачи настоящего исследования.

Цель исследования изучить содержание аутоантител и аутоантител-абзимов к факторам свёртывания крови у больных с инфарктом миокарда и постинфарктным кардиосклерозом.

3адачи исследования:

  1. Определить концентрацию отдельных факторов свертывания крови у больных с инфарктом миокарда и постинфарктным кардиосклерозом.
  2. Установить содержание аутоантител к активированным и неактивированным факторам свёртывания крови у больных в различные стадии инфаркта миокарда и постинфарктным кардиосклерозом.
  3. Определить пул аутоантител с протеолитическими свойствами и охарактеризовать его абзимную активность.

Научная новизна. Показано, что концентрация отдельных факторов свёртывания крови в виде проферментов и ферментов изменяется в соответствии с динамикой уровня аутоантител. Установлены концентрации аутоантител IgG и IgM классов к протромбину, тромбину, VIIa, IX, IXa, X, Xa факторам, к -, - и -тромбину у здоровых и больных в острую, подострую стадии ИМ, а также при постинфарктном кардиосклерозе.

Обнаружено, что острая стадия инфаркта миокарда характеризуется снижением уровней аутоантител против IX, X факторов, - и -тромбина; увеличением аутоантител к VIIa фактору и -тромбину.

Доказано, что часть аутоантител IgG класса, направленных к тромбину и его дериватам, содержит аутоантитела, обладающие абзимной активностью. В -фракциях крови от здоровых и больных в разные стадии инфаркта миокарда и с постинфарктным кардиосклерозом содержатся аутоантитела  IgG класса, обладающие протеолитическими свойствами. Впервые дана динамика абзимной активности аутоантител к вышеприведённым факторам свёртывания крови в острую, подострую стадии инфаркта миокарда и при постинфарктном кардиосклерозе.

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая значимость работы определятся тем, что выявленная динамика аутоантител во взаимосвязи с соответствующими факторами свёртывания крови обеспечивает более глубокое понимание патогенетических механизмов, действующих при разных стадиях инфаркта миокарда. Полученные данные позволяют  взглянуть на тромботические и тромбоэмболические осложнения, развивающиеся при данной патологии, с иммунологических позиций. Динамика антитромбиновых аутоантител с абзимной активностью открывает перспективы исследований патогенеза коагулопатий.

Практическая значимость работы заключается в расширении диагностических возможностей, так как полученные знания могут быть использованы для установления с иммунологических позиций глубины нарушения системы гемостаза при ишемической болезни сердца иммунологическими методами.

Внедрение результатов. Материалы и результаты исследования используются в учебном процессе на кафедрах патологической физиологии и госпитальной терапии ГБОУ ВПО Читинской государственной медицинской академии.

Апробация работы. Основные положения и результаты исследования представлены на Российском национальном конгрессе кардиологов, Москва, 2012; на XIX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», Москва, 2012; на Съезде терапевтов Сибири и Дальнего Востока, Новосибирск, 2012; на Всероссийской Байкальской научно-практической конференции молодых учёных и студентов с международным участием «Актуальные вопросы современной медицины», Иркутск, 2012.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 3 статьи в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ для публикации результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 103 страницах. Текстовая часть состоит из введения, обзора литературы, характеристики методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 172 источника, из них 92 работы отечественных и 80 – зарубежных исследователей; иллюстрирована 10 таблицами, 2 рисунками.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При инфаркте миокарда наиболее выраженные изменения концентрации факторов свертывания крови отмечаются в подострую стадию и в период постинфарктного кардиосклероза. У этих больных уровень тромбина повышается в 2-2,5 раза, а содержание активных и неактивных форм IX и Х факторов снижается.

2. В острую стадию инфаркта миокарда происходит снижение концентрации аутоантител к протромбину, тромбину, - и -тромбину, IX и X факторам. А к -тромбину резко повышается. При постинфарктном кардиосклерозе уровень перечисленных аутоантител восстанавливается до исходного. У всех больных, перенёсших инфаркт миокарда, определяется повышенное содержание аутоантител к VIIa фактору.

3. В препарированной -фракции белков крови здоровых и больных выявляется абзимная активность, которой обладают аутоантитела к тромбину. В острую и подострую стадии инфаркта миокарда, а также при постинфарктном кардиосклерозе абзимная активность пула аутоантител к тромбину снижается.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе представлены результаты обследования 57 больных, страдающих ишемической болезнью сердца, перенёсших инфаркт миокарда. Возраст обследуемых составлял 56,7±6,1 лет, из них 43 мужчины (75,4%), 14 женщин (24,6%).  Пациенты были разделены на три группы согласно МКБ-Х:  1-я – больные с инфарктом миокарда в острую стадию (1-7 сутки, 18 человек); 2-я – пациенты с ИМ в подострую стадию (8-28 сутки, 25 человек), 3-я – пациенты с постинфарктным кардиосклерозом (ПИКС) (14 человек). На момент взятия крови все пациенты принимали медикаментозную терапию. В 1-й и 2-й группах всем больным было проведено или проводилось лечение гепарином. Ацетилсалициловую кислоту принимали все пациенты, участвовавшие в исследовании. Клопидогрел был назначен 78% больных из 1-й группы, 68% из 2-й и 21% из 3-й групп. 96,5 % обследуемых принимали селективные -блокаторы (метопролола сукцинат, бисопролол, метопролола тартрат).

Группа контроля состояла из 23 практически здоровых добровольцев, сопоставимых по полу и возрасту с больными без клинических проявлений ИБС (61,1% мужчин и 38,9% женщин).

Работа проводилась с учетом Хельсинской декларации; Конвенции Совета Европы «О правах человека и биомедицине» (1996); Национального стандарта РФ «Надлежащая клиническая практика» (ГОСТ Р 52379-2005). Все пациенты дали информированное согласие на проведение исследований. Подбор больных, общеклинические исследования и получение крови проводились на базе НУЗ Дорожной клинической больницы на ст. Чита-2, ГУЗ Краевой клинической больницы №1 (Забайкальский края, г. Чита), ГУЗ Городской клинической больницы №1 г. Читы. Лабораторные исследования проведены в лаборатории экспериментальной и клинической биохимии и иммунологии НИИ медицинской экологии ГБОУ ВПО Читинской государственной медицинской академии с 2011 по 2012 годы.

Содержание протромбина, тромбина, IX/IXа, X/Xа факторов  изучалось в сыворотке и плазме крови с использованием наборов для иммуноферментного анализа (AssayMax Human Prothrombin ELISA Kit, Assaypro США; AssayMax Human Thrombin ELISA Kit, Assaypro США; AssayMax Human Factor IX (FIX) ELISA Kit, Assaypro США и AssayMax Human Factor X (FX) ELISA Kit, Assaypro США).

Определение общего содержания аутоантител IgG и IgM  классов к протромбину и тромбину проводили в плазме крови с помощью наборов для иммуноферментного анализа (Anti-Prothrombin IgG/IgM Orgentic Diagnostica GmbH, Германия и AESKULA Thrombin-GM, Германия).

Определение общего содержания аутоантител IgG и IgM  классов к -тромбину, -тромбину, -тромбину, VIIa, VIII/VIIIa, IX, IXa, X, Xa факторам в плазме крови осуществлялось по оригинальной методике Цыбикова Н.Н., 2008.

Изучение абзимной активности. Для исследования абзимной активности из плазмы крови была предварительно получена -фракция. Для этого плазму после размораживания перемешивали на шейкере и очищали от белков крови человека ультрацентрифугированием в целлюлозном мембранном фильтре 100 кДа (Amicon Ultra 0.5mL 100K, Millipore, Ирландия) (Цыбиков Н.Н., 2011). Далее определение абзимной активности -фракции проводили спектрофотометрически при длине волны 405 нм по оценке образования 4-нитроанилина из хромогенного субстрата – БАПНА (натрий-бензоил-DL-аргинин-4(р)-нитроанилида гидрохлорида) по методике Окулича В.К., Косинца А.Н. с соавт., 2002.

Определение абзимной активности аутоантител IgG класса к тромбину. Выделение аутоантител класса IgG к тромбину из плазмы крови осуществлялось в несколько этапов. Первый этап – выделение фракции гамма-глобулинов проводили с помощью ультрафильтров фирмы Millipore (Amicon Ultra 0,5 мл, 100K, Millipore, Ирландия). В ячейку-концентратор объемом 0,5 мл вносили биоматериал и центрифугировали при 14000 g в течение 30 мин. Затем проводили аффинную хроматографию полученного материала на сефарозе 4B («GE Healthcare», Швеция), конъюгированной с тромбином человека («Roche», Германия). Тромбин человека в количестве 10 мг иммобилизовали на CNBr-активированную сефарозу 4В («GE Healthcare», Швеция), согласно методическим рекомендациям фирмы «GE Healthcare». Хроматографическую колонку последовательно отмывали 0,01 М фосфатным буферным раствором, рН 7,4, содержащим 1% раствор твина 20, и 0,01 М фосфатным буферным раствором с рН 7,4 без детергента до полного исчезновения поглощения белка в элюенте при 280 нм. Элюирование связавшихся ААТ к тромбину проводили 0,1 М глицин-НСl буфером, рН 2,8, которое контролировали по выходу белка при 280 нм в элюенте. Полученные иммуноглобулины концентрировали с помощью ультрафильтров фирмы Millipore (Amicon Ultra 0,5 мл, 100K, Millipore, Ирландия). На следующем этапе проводили выделение и очистку ААТ класса IgG к тромбину. Полученный концентрат иммуноглобулинов наносили на колонку HiTrap Protein G HP (GE Healthcare, Швеция) (1 мл), уравновешенную буфером А (50 мМ Тris-HCl, pH 7,5, 150 мМ NaCl). Иммуноглобулины, не взаимодействующие с сорбентом, отмывали тем же буфером до полного исчезновения поглощения при 280 нм. Неспецифически адсорбированные белки и липиды элюировали буфером, содержавшим 1%-ный Triton X-100. Колонку промывали 50 мМ Тris-HCl-буфером, pH 7,5, содержавшим 0,3 М NaCl. ААТ, представляющие только IgG, элюировали 0,1 М глицин-HCl, pH 2,6, и сразу после выхода с колонки фракции ААТ нейтрализовали 1,5 М Тris-HCl, рН 8,0. Диализ ААТ осуществляли на колонке HiTrap Desalting («GE Healthcare», Швеция) (5 мл) против фосфатно-солевого буфера (140 мМ NaCl, 2.7 мМ KCl, 10 мМ Na2HPO4, 1.8 мМ KH2PO4, pH 7.4). Полученные ААТ сразу после диализа замораживали при -200С до момента определения абзимной активности и концентрации IgG. Определение концентрации полученных аутоантител класса IgG к тромбину проводили с помощью высокоэффективной гель-фильтрации на колонке BioSep-SEC-S 2000 300x7.8 мм («Phenomenex», США), уравновешенной 20 мМ Tris-HCl, pH 7,5, содержавшим 0,3 М KCl. Перед гель-фильтрацией для диссоциации комплексов 20 мкл раствора ААТ смешивали с 80 мкл 3 М MgCl2 и 150 мкл 3 М NaCl, выдерживали 30 мин, центрифугировали (10 мин, 10 000 g). Перед нанесением образца на колонку вводили 20 мкл буфера, содержавшего 0,5 М MgCl2 и 1 М NaCl, а затем – раствор ААТ в количестве 20 мкл. Скорость потока элюента – 1 мл/мин., длина волны детекции – 215 нм. Определение абзимной активности аутоантител IgG класса к тромбину осуществляли по методике Окулича В.К., Косинца А.Н. с соавт., 2002.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием пакета статистических программ «Statistica 6.1». Для описания характера распределения количественных признаков определялись средние величины (М), стандартные отклонения (SD). При использовании методов непараметрической статистики определялись медианы, межквартильные интервалы (от 25% до 75%). Для оценки различия между несколькими группами применялся критерий Крускалла-Уоллиса и медианный тест. Для оценки достоверности различий двух сравниваемых групп использовали U-критерий Манна-Уитни. Во всех описанных методах статистически значимыми признавались результаты, соответствующие уровню значимости p<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Содержание факторов свертывания крови в различные стадии инфаркта миокарда

Коагуляционный потенциал крови можно расценивать как динамическое равновесие между антигенами (ФСК) и аутоантителами к ним (Кузник Б.И., Цыбиков Н.Н., 2005). Следовательно, необходимо количественно охарактеризовать содержание отдельных факторов свёртывания крови на каждой стадии заболевания. Как видно из таблицы 1, при проведении анализа было установлено, что уровень протромбина у больных в различные стадии не изменяется статистически значимым образом (p>0,05).

Таблица 1

Сравнительная характеристика содержания факторов свертывания крови в различные стадии инфаркта миокарда (медиана, 25-й - 75-й процентили)

Показатель

Контрол. группа

1-я группа (ИМ острая стадия)

2-я группа (ИМ подострая стадия)

3-я группа (ПИКС)

р-уровень значимости

Протромбин, мкг/мл

0,414

[0,384 - 0,436]

0,407

[0,382 - 0,431]

0,424

[0,393 - 0,494]

0,471

[0,420 - 0,519]

_

Тромбин, нг/мл

2,189

[2,052 - 2,676]

2,268

[1,789 - 3,352]

5,464

[2,418 - 7,920]

4,198

[4,035 - 8,305]

рК-2=0,020

рК-3=0,001

IX/IXa фактор, нг/мл

18,740

[15,460 - 19,250]

15,930

[14,375 - 20,590]

12,210

[10,650 - 16,950]

12,105

[8,865 - 13,650]

рК-1=0,048

рК-2=0,018

рК-3=0,018

р1-3=0,028

X/Xa фактор, нг/мл

7,414

[7,132 - 8,709]

6,275

[5,726 - 7,442]

5,726

[5,202 - 6,250]

5,627

[4,543 - 6,741]

рК-1=0,023

рК-2<0,001

рК-3=0,024

Примечание: здесь и далее рК-1 – уровень значимости при сравнении контрольной и 1-й групп; рК-2 – уровень значимости при сравнении контрольной и 2-й групп; рК-3 уровень значимости при сравнении контрольной и 3-й групп; р1-3 – уровень значимости при сравнении 1-й и 3-й групп.

При подострой стадии по сравнению с контролем содержание тромбина увеличивалось в 2,5 раза и имело максимальный показатель из всех обследуемых групп больных (рК-2=0,020). В группе больных с ПИКС концентрация тромбина оставалась повышенной в 1,9 раза по сравнению с контрольной группой (рК-3=0,001). При сравнении суммарной концентрации IX и IXa факторов (IX/IXa) было получено, что во все изученные стадии инфаркта миокарда: острую, подострую, а также при ПИКС происходило значимое снижение уровня IX/IXa факторов по сравнению с показателями контрольной группы. Причём это снижение прогрессивно нарастало: так в 1-й группе по сравнению с контролем разность составляла 2,81 нг/мл (рК-1=0,048), во 2-ой группе по сравнению с контролем – 6,53 нг/мл (рК-2=0,018). В 3-ей группе по сравнению с контрольной группой разница составляла 6,635 нг/мл (рК-3=0,018). Не установлено статистически значимых отличий между 1-ой и 2-ой, 2-ой и 3-ей группами; определены различия между 1-ой и 3-й группами (р=0,028), свидетельствующие о том, что при ПИКС содержание IX/IXa факторов ниже, чем в острый период ИМ в 1,3 раза. По сравнению с контрольной группой происходит достоверное снижение концентрации X/Xa факторов: в 1-ой группе на 1,139 нг/мл (рК-1=0,023), во 2-ой группе на 1,688 нг/мл (рК-2<0,0001), в 3-ей группе на 1,787 (рК-3=0,024). Сравнения групп между собой не дало значимых различий.

Содержание аутоантител к факторам свертывания крови в различные стадии инфаркта миокарда

Результаты исследования содержания аутоантител к протромбину и тромбину представлены в таблице 2. Медиана содержания ААТ к протромбину в плазме крови у здоровых добровольцев составила 1,308 Ед/мл. Изменение концентрации антипротромбиновых ААТ выявлено в острую и подострую стадии ИМ по сравнению с контролем: происходит последовательное снижение ААТ с 1,03 Ед/мл (рК-1=0,042) в острую стадию до 0,94 Ед/мл (рК-2=0,013) в подострую стадию ИМ. В подострую стадию ИМ уровень ААТ к протромбину минимален по сравнению с другими сравниваемыми группами. При ПИКС наблюдается восстановление уровня антипротромбиновых ААТ, содержание их составило 1,056 Ед/мл (рК-3>0,05). Не выявлено отличий при сравнении группы в острую стадию с подострой стадией ИМ и с ПИКС, а также группы в подострую стадию с ПИКС.

Таблица 2

Содержания аутоантител к протромбину и тромбину в различные стадии инфаркта миокарда (медиана, 25-й - 75-й процентили)

показатель

Контрол. группа

1-я группа

(ИМ острая стадия)

2-я группа

(ИМ подострая стадия)

3-я группа

(ПИКС)

р-уровень значимости

ААТ (IgG и IgM) к протромбину, Ед/мл

1,308

[0,877 - 1,559]

1,034

[0,675 - 1,185]

0,941

[0,855 - 1,142]

1,056

[0,564 - 2,069]

рК-1=0,042

рК-2=0,013

ААТ (IgG и IgM) к тромбину, Ед/мл

3,131

[2,414 - 3,920]

1,196

[0,578 - 1,827]

1,420

[1,049 - 1,798]

1,816

[1,064 - 4,137]

рК-1=0,00004

рК-2=0,000002

р1-3=0,029

При анализе антитромбиновых ААТ наибольшая их концентрация была установлена в контрольной группе (медиана равна 3,13 Ед/мл). В острый период ИМ наблюдалась минимальная концентрация антитромбиновых ААТ (1,2 Ед/мл, при рК-1=0,00004). В подострую стадию имела место тенденция к росту ААТ по сравнению с острой стадией, но уровень их остается достоверно ниже контрольной группы в 2,2 раза (1,42 Ед/мл, рК-2=0,000002). У лиц с ПИКС отмечено дальнейшее увеличение содержания антитромбиновых ААТ, не достигающее значений контрольной группы. При сравнении показателей антитромбиновых ААТ при ПИКС с контрольной группой не выявлено статистических отличий (рК-3=0,1531). Статистически значимые различия установлены при сравнении показателей больных в острую стадию ИМ и при ПИКС (р1-3=0,0286).

Содержание аутоантител к VIIa, Х, Xa, IXa факторам свертывания крови в различные стадии инфаркта миокарда

Результаты исследований содержания ААТ, относящихся к иммуноглобулинам M и G, представлены в таблице 3. В контрольной группе выявлен наименьший уровень ААТ к VIIа фактору, он составил 0,0045 OD450нм. При ИМ в острую и подострую стадии, а также при ПИКС по сравнению с контрольной группой происходит статистически значимое увеличение концентрации данных ААТ. Так в 1-й группе содержание ААТ к VIIа фактору составило 0,0140 OD450нм (рК-1=0,013), во 2-й группе – 0,0175 OD450нм (рК-2=0,045), в 3-й – 0,0195 OD450нм (рК-3=0,007).

Таблица 3

Содержание аутоантител классов M и G к факторам свертывания крови

(медиана, 25-й - 75-й процентили)

Показатель

Контрол. группа

1-я группа (ИМ острая стадия)

2-я группа (ИМ подострая стадия)

3-я группа (ПИКС)

р-уровень значимости

IgG и IgM к VIIa, OD450нм

0,0045

[0,0025 - 0,0065]

0,0140

[0,0105 - 0,0185]

0,0175

[0,0155 - 0,0265]

0,0195

[0,0065 - 0,0225]

рК-1=0,013

рК-2=0,045

рК-3=0,007

IgG и IgM к  X, OD450нм

0,0045

[0,0015 -

0,0105]

0,0020

[0,0000 -

0,0055]

0,0075

[0,0075 -

0,0105]

0,0035

[0,0025 -

0,0075]

рК-1=0,048

р1-2=0,043

IgG и IgM к Xа, OD450нм

0,0075

[0,0045 -

0,0195]

0,0055

[0,0023 -

0,0120]

0,0055

[0,0025 -

0,0065]

0,0055

[0,0045 -

0,0065]

рК-3=0,049

IgG и IgM к IXa, OD450нм

0,0010

[0,0000 -

0,0070]

0,0100

[0,0025 -

0,0135]

0,0020

[0,0020 -

0,0060]

0,0050

[0,0040 -

0,0050]

р1-2=0,048

Сравнение групп больных между собой по показателю уровня ААТ к VIIа фактору не дало значимых различий.

Выявлено достоверное снижение ААТ к Х фактору в острую стадию ИМ по сравнению с контролем в 2,25 раза (рК-1=0,048). В подострую стадию по сравнению с острой стадией ИМ установлено значимое увеличение в ААТ к Х фактору 3,75 раза (р1-2=0,043). При других сравнениях групп (контрольной со 2-ой, контрольной с 3-ей, 1-ой с 3-ей и 2-ой с 3-ей) различий выявлено не было.

Наибольший уровень ААТ к Ха фактору наблюдается в контрольной группе. Статистически значимым оказалось снижение уровня ААТ к Ха фактору при ПИКС по сравнению с контрольной группой. В остальных сравнениях снижение носит недостоверный характер и может быть обосновано как изменение концентрации ААТ к Xa фактору в границах физиологической нормы.

При определении уровня ААТ к IXa фактору выявлено, что в контрольной группе он составляет 0,0010 OD450нм. В острую стадию ИМ наблюдается увеличение концентрации ААТ к IXа фактору, равное 0,0100 OD450нм. В подострую стадию и при ПИКС медиана концентрации ААТ к IXа фактору составляет 0,0020 OD450нм и 0,0050 OD450нм соответственно. Статистически значимым является пятикратное снижение уровня ААТ к IXа фактору в подострую стадию ИМ по сравнению с группой больных в острую стадию (p=0,048).

Проводилось отдельное определение классов иммуноглобулинов М и G к IX фактору (таблица 4). Для обоих классов иммуноглобулинов характерно статистически значимое снижение в острую стадию ИМ по сравнению с контрольной группой на 0,007 OD450нм для IgM и на 0,008 OD450нм для IgG (рК-1=0,035 и рК-1=0,023 соответственно). Изменения концентрации ААТ IgM класса в подострую стадию ИМ по сравнению с группой в острую стадию ИМ и с ПИКС не носило значимый характер. Однако в эту стадию по сравнению с 1-ой группой выявлено достоверное увеличение уровня ААТ IgG класса на 0,013 OD450нм (р1-2=0,046). При ПИКС изменение содержание ААТ IgM класса не является статистически значимым по отношению ко всем остальным группам.

       Таблица 4

Содержание фракций иммуноглобулинов M и G к IX фактору свертывания крови в различные стадии инфаркта миокарда

(медиана, 25-й - 75-й процентили)

показатель

Контрол. группа

1-я группа: (ИМ острая стадия)

2-я группа: (ИМ подострая стадия)

3-я группа: (ПИКС)

р-уровень значимости

IgM к IX, OD450нм

0,011

[0,006 - 0,016]

0,004

[0,002 - 0,008]

0,008

[0,004 - 0,011]

0,005

[0,003 - 0,015]

рК-1=0,035

IgG к IX, OD450нм

0,015

[0,012 - 0,023]

0,007

[0,003 - 0,011]

0,020

[0,013 - 0,022]

0,014

[0,012 - 0,018]

рК-1=0,023

р1-2=0,046

р1-3=0,049

Уровень ААТ IgG класса при ПИКС отличается (р1-3=0,049) от показателя в острую стадию ИМ на 0,001 OD450нм. Установлено, что у здоровых лиц содержание ААТ класса IgM к IX фактору составляет 0,011 OD450нм. В подострую стадию и при ПИКС уровень ААТ находится в пределах, характеризующих группу здоровых лиц. Физиологическое содержание ААТ IgG класса к IX фактору составляет 0,015 OD450нм. В острую стадию ИМ происходит резкое, более чем 2 раза, уменьшение уровня ААТ IgG класса к IX фактору.

Уровень аутоантител к -, - и -тромбину

В проведенном исследовании выявлено, что у здоровых лиц содержание ААТ к -тромбину составляет 0,0050 OD450нм, а в острую стадию ИМ происходит снижение этого уровня до 0. В подострую стадию ИМ выявлено увеличение концентрации ААТ к -тромбину до 0,0100 OD450нм.

Как видно их таблицы 5, значимыми оказались различия между контрольной группой и группой в острую стадию ИМ. Таким образом, контрольная группа, группа в подострую стадию ИМ и группа с ПИКС являются статистически однородными. Проводя анализ уровня ААТ к -тромбину в зависимости от стадии процесса, можно заключить, что при развитии ИМ, в острую его стадию происходит снижение уровня ААТ к -тромбину, в дальнейшем, в подострую стадию, происходит нормализация этого показателя. Группа больных с ПИКС характеризуется содержанием ААТ -тромбину выше исходного уровня. Однако в двух последних группах превышение уровня ААТ к тромбину по сравнению с контрольной группой не является значимым.

Таблица 5

Описание ААТ к изоформам тромбина , , и (медиана, 25-й - 75-й процентили)

показатель

Контрол. группа

1-я группа: (ИМ острая стадия)

2-я группа: (ИМ подострая стадия)

3-я группа: (ПИКС)

р-уровень значимости

IgG и IgM к -тромбину, OD450нм

0,0050

[0,0020 - 0,0120]

0,0000

[0,0000 - 0,0015]

0,0100

[0,0030 - 0,0210]

0,0080

[0,0000 - 0,0130]

рК-1=0,023

р1-2=0,016

р1-3=0,001

IgG и IgM к -тромбину, OD450нм

0,0075

[0,0015 - 0,0125]

0,0000

[0,0000 - 0,0010]

0,0055

[0,0055 - 0,0075]

0,0065

[0,0045 - 0,0115]

рК-1 =0,006

р1-2=0,006

р1-3=0,016

IgG и IgM к -тромбину, OD450нм

0,0085

[0,0065 - 0,0165]

0,0260

[0,0110 - 0,0360]

0,0095

[0,0075 - 0,0145]

0,0055

[0,0015 - 0,0075]

рК-1 =0,043

р1-2=0,043

В острую стадию ИМ происходит достоверное снижение содержания ААТ к -тромбину по сравнению с контрольной группой на 0,0075 OD450нм. Подострая стадия характеризуется увеличением уровня ААТ к -тромбину на 0,0055 OD450нм по отношению к острой стадии (р1-2=0,006). По сравнению с острой стадией ИМ при ПИКС наблюдается рост концентрации ААТ к -тромбину на 0,0065 OD450нм (р1-3=0,016), что на 0,001 OD450нм больше, чем в подострую стадию ИМ.

Исходный уровень ААТ к -тромбину, зафиксированный в контрольной группе, составил 0,0085 OD450нм. В острую стадию ИМ по сравнению с контрольной группой выявлено более чем трёхкратное увеличение содержание ААТ к -тромбину – 0,0260 OD450нм (рК-1 =0,043). В группе с подострой стадией ИМ содержание ААТ к -тромбину составило 0,0095 OD450нм, при сравнении с контрольной группой уровень значимости составил рК-2>0,05. При ПИКС уровень ААТ к -тромбину оказался равным 0,0055 OD450нм при рК-3>0,05. В подострую стадию по сравнению с острой стадией имеет место достоверное снижение ААТ к -тромбину в 2,74 раза.

Сравнительная характеристика абзимной активности -фракции в различные стадии ИМ

       Результаты исследования абзимной активности -фракции отражены в таблице 6. Абзимная активность в контрольной группе составила 4,015 пкат/мг. У больных в острую стадию ИМ выявлено снижение абзимной активности в 2,85 раза по сравнению с контрольной группой (1,41 пкат/мг). В подострую стадию ИМ наблюдалось восстановление абзимной активности -фракции: активность была снижена в 1,61 раза по сравнению с группой контроля и составляла 2,490 пкат/мг. В группе с ПИКС установлен рост абзимной активности, который, однако, не достигает цифр контрольной группы: этот показатель остаётся сниженным в 1,46 по сравнению с группой контроля и составляет 2,755 пкат/мг. Статистически значимых различий при сравнении 1-ой группы со 2-ой группой, 1-ой группы с 3-ей группой и 2-ой группы с 3-ей группой не получено.

Таблица 6

Сравнительная характеристика абзимной активности -фракции в различные стадии ИМ (медиана, 25-й - 75-й процентили)

показатель

Контрол. группа

1-я группа: (ИМ острая стадия)

2-я группа: (ИМ подострая стадия)

3-я группа: (ПИКС)

р-уровень значимости

Абзимная активность, пкат/мг белка

4,015

[3,270 - 4,560]

1,410

[1,280 - 2,550]

2,490

[1,765 - 3,285]

2,755

[2,065 - 3,015]

рК-1=0,0004

рК-2=0,002

рК-3=0,026

Абзимная активность IgG к тромбину

Данные об абзимной активности ААТ к тромбину, выделенных аффинно, представлены в таблице 7.

Таблица 7

Абзимная активность IgG к тромбину (медиана, 25-й - 75-й процентили)

Показатель

Контрол. группа

1-я группа (инфаркт миокарда острая стадия)

2-я группа (инфаркт миокарда подострая стадия)

3-я группа (ПИКС)

р-уровень значимости

Абзимная активность  пкат/мг белка

31,89

[28,59 - 35,19]

10,66

[9,89 - 11,44]

12,81

[11,17 - 14,44]

14,14

[12,28 - 16,01]

рК-1= 0,029

рК-2= 0,029

рК-3= 0,029

р1-3= 0,029

Абзимная активность в контрольной группе составила 31,89 пкат/мг. В острую стадию ИМ наблюдается статистически достоверное по сравнению с контрольной группой снижение абзимной активности в 2,99 раза до 10,66 пкат/мг. В подострую стадию ИМ абзимная активность составляет 12,81 пкат/мг. При ПИКС она составляет 14,14 пкат/мг. Несмотря на то, что в группе с подострой стадией ИМ абзимная активность на 2,15 пкат/мг выше, чем в 1-ой группе, это увеличение не является статистически достоверным (p>0,005).

По отношению к контрольной группе абзимная активность во 2-ой группе является достоверно сниженной в 2,49 раза, а в 3-ей группе в 2,26 раза. При сравнении 1-ой группы с 3-ей обращает на себя внимание увеличение абзимной активности на 3,48 пкат/мг (р1-3= 0,029). Это свидетельствует в пользу того, что при ПИКС имеет место более высокая абзимная активность по сравнению с острой стадией ИМ.

ВЫВОДЫ

  1. В подострую стадию инфаркта миокарда и при постинфарктном кардиосклерозе увеличивается содержание тромбина в крови. Концентрации IX, IXa , X и Xa факторов уменьшаются в острую, подострую стадии инфаркта миокарда, а также при постинфарктном кардиосклерозе.
  2. Содержание аутоантител к протромбину и тромбину в плазме крови снижается в острую и подострую стадии инфаркта миокарда, а при постинфарктном кардиосклерозе восстанавливается до исходных значений. Уровень аутоантител к IX и X факторам уменьшается в острую стадию инфаркта миокарда. Во всех группах больных по сравнению с контролем установлено увеличение уровня аутоантител к VIIa фактору.
  3. В острую стадию инфаркта миокарда содержание аутоантител к - и -тромбину уменьшается, а к -тромбину резко увеличивается. В подострую стадию инфаркта миокарда и период постинфарктного кардиосклероза происходит восстановление концентраций аутоантител к -, - и -тромбину до уровней контрольной группы.
  4. Выявлена абзимная активность в -фракции из плазмы крови доноров и больных. При инфаркте миокарда минимальная абзимная активность -фракции установлена в острую стадию заболевания.
  5. Доказаны абзимные свойства пула препарированных аутоантител к тромбину: иммуноглобулины здоровых обладают наибольшей каталитической активностью, которая снижается у больных в острую стадию инфаркта миокарда.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи, опубликованные в рецензируемых журналах, определенных ВАК Минобрнауки России:

1. Гатиятов Ю.Ф. Аутоантитела к факторам свёртывания крови / Ю.Ф. Гатиятов, Н.Н. Цыбиков // Сибирский медицинский журнал, Иркутск. 2011. №4. С. 34-38.

2. Гатиятов Ю.Ф. Аутоантитела к активированным факторам свёртывания крови у пациентов с ишемической болезнью сердца / Ю.Ф. Гатиятов, Н.Н. Цыбиков, П.П. Терешков // Казанский медицинский журнал. 2012. Т. 93, №2. С. 181-183.

3. Гатиятов Ю.Ф. Аутоантитела к протромбину и тромбину у больных инфарктом миокарда / Ю.Ф. Гатиятов, Н.Н. Цыбиков, П.П. Терешков // Сибирский медицинский журнал, Иркутск. 2012. №5. С. 50-52.

Работы, опубликованные в других изданиях:

4. Гатиятов Ю.Ф. Содержание аутоантител к факторам свёртывания крови у больных с ишемической болезнью сердца / Ю.Ф. Гатиятов, Е.В. Богатиков // Украинский научно-медицинский молодёжный журнал: материалы Международной научно-практической конференции, посвящённой Всемирному дню здоровья 2012. – г. Киев, Украина, 2012. – №1. – С. 244.

5. Гатиятов Ю.Ф. Антитела к факторам свертывания крови у больных инфарктом миокарда / Ю.Ф. Гатиятов // XIХ Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: сб. материалов конгр. – М., 2012. – С. 61.

6. Гатиятов Ю.Ф. Уровень аутоантител к IXа фактору свёртывания крови при инфаркте миокарда / Ю.Ф. Гатиятов // «Актуальные вопросы современной медицины»: материалы Всероссийской Байкальской научно-практической конференции молодых учёных и студентов с международным участием. – Иркутск, 2012. – С. 180.

7. Гатиятов Ю.Ф. Протабзимная активность плазмы крови в различные стадии инфаркта миокарда / Ю.Ф. Гатиятов, Н.Н. Цыбиков // Материалы III съезда терапевтов Сибири и Дальнего Востока. – Новосибирск, 2012. – С. 52-53.

8. Гатиятов Ю.Ф. Аутоантитела к тромбину у больных в разные периоды инфаркта миокарда / Ю.Ф. Гатиятов // Российский национальный конгресс кардиологов «Интеграция знаний в кардиологии»: материалы конгр. – М., 2012. – С. 116.

9. Гатиятов Ю.Ф. Факторы риска и приверженность к терапии у больных с острым коронарным синдромом / Ю.Ф. Гатиятов, Е.Ю. Алексенко, С.М. Цвингер // Российский национальный конгресс кардиологов « Интеграция знаний в кардиологии»: материалы конгр. – М., 2012. – С. 116-117.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ААТ – аутоантитела

ИБС – ишемическая болезнь сердца

ИМ – инфаркт миокарда

кДа - килодальтон

ПИКС – постинфарктный кардиосклероз

пкат/мг – пикокаталы на миллиграмм белка

ФСК – факторы свертывания крови

IgG, IgM – иммуноглобулины G и M классов


1 Работа выполнена на средства гранта Российского фонда фундаментальных исследований (проект №11-04-98052-р_сибирь_а) и Министерства образования, науки и молодёжной политики Забайкальского края.







© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.