WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

Буханцев Олег Васильевич

Технология получения биологически активных веществ из отходов переработки креветки и применение их в животноводстве

03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Щелково - 2012

Работа выполнена в ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» (ВНИТИБП) Российской академии сельскохозяйственных наук (РАСХН)

Научный руководитель:

Албулов Алексей Иванович - доктор биологических наук, профессор, Заслуженный ветеринарный врач РФ, ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности», заведующий отделом получения биологически активных веществ

Официальные оппоненты:

Скотникова Татьяна Анатольевна - доктор биологических наук, ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности», заведующая лабораторией обеспечения качества вакцин

Балышев Владимир Михайлович - доктор ветеринарных наук, профессор,

ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологи и микробиологии», заведующий лабораторией музейных штаммов

Ведущая организация:

ГНУ «Всероссийский научно - исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко»

Защита диссертации состоится  26 октября 2012 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.069.01 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» РАСХН по адресу: 141142, Московская область, Щелковский район, пос. Биокомбината д.17, ВНИТИБП; тел./факс: 8 (496) 56-732-63; e-mail: vnitibp@mail.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» Россельхозакадемии

Автореферат разослан 25 сентября 2012 г.

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. Разработка комплексных малоотходных технологий переработки водных биологических ресурсов, в частности промысловых ракообразных, является перспективным направлением современного развития рыбохозяйственного комплекса Российской Федерации. В состав панцирьсодержащих отходов (ПСО) ракообразных входят такие ценные вещества, как хитин и белок, которые могут быть направлены на получение хитозана, глюкозамина и белковых гидролизатов. К сожалению, в настоящее время ПСО чаще всего не используются, при этом теряются их ценные компоненты. В нашей стране до сих пор остается актуальным вопрос дефицита кормового протеина. Белковые гидролизаты, полученные из гидробионтов, обладают высокой питательной ценностью и содержат в своем составе все незаменимые аминокислоты (В.П. Сафронова, 1998; М.В. Новикова, 2004).

Основным сырьем для получения хитина и хитозана является хитинсодержащее сырье (ХСС), в основном панцирь ракообразных (крабы, креветки, криль). Для выделения хитина и хитозана наиболее широко используется метод кислотно-щелочного удаления сопутствующих белков, липидов и минералов. Существенным недостатком данной технологии является необходимость утилизации сточных вод, а также ограниченное применение белков, выделяемых из панциря. Имеются данные о получении хитина и хитозана с применением ферментных препаратов (С.В. Рогожин, 1988; В. П. Быков, 1992; С.В. Леваньков, 1998). Применение ферментов для выделения белковой составляющей панциря позволяет получать гидролизаты с высокой биологической ценностью, однако недостатком данного способа обработки ХСС является высокая стоимость коммерческих ферментных препаратов. В связи с этим использование гомогената поджелудочной железы, содержащей в своем составе комплекс протеолитических ферментов, для переработки ХСС представляется перспективным направлением.

Уникальная структура хитозана обуславливает его широкое применение в биотехнологии, медицине, ветеринарии, сельском хозяйстве и пищевой промышленности (В.П. Быков, 1992; А.И. Гамзазаде, 1999; Л.А. Hудьга, 2002; Г.А. Вихорева, 2002; В.П. Варламов, 2004; А.И. Албулов, 2005; С.В. Немцев, 2006; R.A.A. Muzzarelli, 1997; M.G. Peter, 1997). Хитозан обладает широким спектром антимикробной активности, в том числе по отношению к патогенной микрофлоре (В.М. Бондаренко, 2006; С.Н. Куликов, 2010). Имеются данные о способности хитозана стимулировать рост бифидобактерий и лактобактерий (В.М. Червинец, 2001; L. Huean-Woo, 2002; W.H. Lee, 2002), что позволяет применять его в комплексе с пробиотическими препаратами. Пребиотические свойства хитозана изучены недостаточно, поэтому оценка симбиотического действия хитозана с различными пробиотическими штаммами микроорганизмов представляет научный и практический интерес.

В связи с вышеизложенным, исследования в области разработки технологии комплексной переработки отходов креветки являются актуальными, имеют научную и практическую значимость.

Цель и задачи исследований. Основной целью исследований является разработка технологии получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата из отходов переработки креветки и применение их в животноводстве.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- разработать технологию комплексной переработки отходов креветки с применением в качестве ферментсодержащего препарата гомогената поджелудочной железы свиньи;

- оптимизировать технологические параметры процесса получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата, изучить их физико-химические свойства;

- провести доклинические исследования полученных препаратов белкового гидролизата и глюкозамина гидрохлорида;

- изучить влияние сукцината хитозана в комплексе с пробиотическим препаратом «Проваген» на прирост живой массы, биохимические и клинические показатели крови, а также на микробиоценоз кишечника молодняка крупного рогатого скота;

- изучить влияние полученного по разработанной технологии белкового гидролизата в составе пробиотического препарата «Муцинол» на прирост живой массы, биохимические и клинические показатели крови молодняка свиней в период отъема.

Научная новизна исследований. Научно обоснована и разработана технология комплексной переработки отходов креветки с использованием ферментсодержащего гомогената поджелудочной железы свиньи. По разработанной технологии получены биологически активные вещества: хитин, хитозан, а также глюкозамина гидрохлорид и белковый гидролизат, не обладающие токсичностью, раздражающим и аллергизирующим действием.

Показано, что включение в основной рацион молодняка крупного рогатого скота сукцината хитозана в составе пробиотического препарата «Проваген» способствует оптимизации гомеостаза, повышению среднесуточного прироста живой массы, оказывает положительное влияние на микробиоценоз кишечника.

Применение белкового гидролизата в составе пробиотического препарата «Муцинол» способствует повышению живой массы молодняка свиней в период отъема и оптимизации гомеостаза организма.

Практическая значимость работы. Разработана промышленная технология комплексной переработки отходов креветки с применением в качестве ферментсодержащего препарата гомогената поджелудочной железы свиньи, позволяющая получать хитин, хитозан, глюкозамина гидрохлорид и белковый гидролизат.

Результаты исследований апробированы в установленном порядке в производственных условиях ЗАО «Биопрогресс» Щелковского района МО, пос. Биокомбината.

Показана эффективность включения в состав рациона молодняка крупного рогатого скота сукцината хитозана в комплексе с пробиотическим препаратом «Проваген» и белкового гидролизата в комплексе с пробиотическим препаратом «Муцинол» в состав рациона молодняка свиней.

Основные положения работы, выносимые на защиту.

1. Промышленная технология комплексной переработки отходов креветки.

2. Оптимизация технологических параметров процесса получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата.

3. Доклинические исследования белкового гидролизата и глюкозамина гидрохлорида из отходов креветки.

4. Влияние сукцината хитозана в составе пробиотического препарата «Проваген» на прирост живой массы, биохимические и клинические показатели крови и микробиоценоз кишечника молодняка крупного рогатого скота.

5. Влияние белкового гидролизата из отходов креветки в составе пробиотического препарата «Муцинол» на прирост живой массы, биохимические и клинические показатели крови молодняка свиней.

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы работы проводились совместно с доктором биологических наук, профессором Е.В. Крапивиной (Брянская ГСХА); доктором ветеринарных наук, профессором В.Е. Абрамовым (ВИГИС); кандидатом биологических наук М.А. Фроловой (ВНИТИБП); кандидатом химических наук С.А. Лопатиным (Центр «Биоинженерия» РАН); кандидатом биологических наук А.В. Балышевым (МНИЦ «ОЗОС»); кандидатом биологических наук Е.А. Нестеровым (ООО «ШансБио»).

Апробация результатов работы. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ ВНИТИБП (2010-2012), на Международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» (Нижний Новгород, 2010), Международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве» (Боровск, 2010), Конференции «Инновационные технологии управления здоровьем и долголетием человека» (Санкт Петербург, 2010), Международной конференции молодых ученых «Пищевые технологии и биотехнологии» (Казань, 2010), Международной научной конференции «молодежная наука – пищевой промышленности» (Ставрополь, 2011), Научно-практической конференции «Пищевая и морская биотехнология – для здорового питания и решения медико-социальных проблем» (Светлогорск, 2011), Международной научно-практической конференции «Морские прибрежные экосистемы. Водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки» (Южно-Сахалинск,2011), Международной научно-практической конференции «Актуальные аспекты разработки, приготовления, контроля качества и использования ветеринарных иммунобиологических препаратов на основе современных биотехнологий» (Алушта, АР Крым, 2011), the 10th International Conference of the European Chitin Society (St.-Petetersburg, 2011), Конференции молодых ученых «Актуальные проблемы инфекционной патологии в ветеринарной медицине» - (Покров, 2012), Международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» (Мурманск, 2012), заседании секции «Ветеринарная биотехнология» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (Щелково, 2012), на совещаниях сотрудников отдела биологически активных веществ ГНУ ВНИТИБП (2010-2012).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликованы 23 научные работы, в том числе 5 в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ для публикации материалов диссертационных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, материалы и методы, результаты и обсуждение, выводы, практические предложения. Диссертация иллюстрирована 31 таблицей и 8 рисунками. Список литературы включает 243 источника, из которых 120 отечественных и 123 иностранных. В приложениях представлены копии документов, подтверждающих достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.

2 Собственные исследования

Работа выполнена в 2010-2012 гг. в отделе получения биологически активных веществ ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» Россельхозакадемии в рамках Российской научно-технической программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК РФ, задание 08.06.02 «Научно обосновать, разработать и освоить производство новых видов лекарственных средств на основе сырья природного происхождения и микробиологического синтеза, повышающих иммунитет, продуктивность животных, качество и экологическую безопасность продукции животноводства».

Материалы и методы

Исходным сырьем для получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата были выбраны отходы креветки (ТУ 15-04-545-87). В качестве ферментсодержащего препарата использовали гомогенизированную на коллоидной мельнице поджелудочную железу свиньи (ГОСТ 11285-93). Протеолитическую активность гомогената поджелудочной железы свиньи определяли методом Ансона (А.П. Рухлядева, Г.В. Полыгалина, 1981).

Разработку и оптимизацию основных режимов технологии получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата осуществляли в экспериментально-производственных условиях. Гидролиз исходного сырья проводили в реакторе емкостью 250 л, высушивание гидролизата осуществляли на распылительной сушке NIRO - ATOMIZER.

При разработке технологии получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата изучали оптимальные условия проведения ферментативного гидролиза (концентрация ферментного препарата, время, температура, соотношение субстрат:вода), процесса депротеинирования ХСС (концентрация щелочи, соотношение субстрат:вода, время, температура), деминерализации ХСС (концентрация кислоты, время, температура, соотношение субстрат:вода), кислотного гидролиза хитина (температура, время, соотношение хитин:кислота).

Степень деацетилирования (СД) хитозана определяли методом кондуктометрического титрования (L. Raymond, et al., 1993). Средневесовую молекулярную массу, среднечисловую массу и значение полидисперсности образцов хитозана определяли методом гель-проникающей высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на приборе «Sykam» (Германия). Глубину гидролиза оценивали по накоплению свободных аминогрупп (аминный азот) в жидком гидролизате. Количество белка в препаратах хитина определяли по биуретовой реакции (A.G. Gornall, et al., 1949), содержание золы и воды в хитозане, концентрацию аминогрупп в белковом гидролизате - по ГОСТ 7636-85.

Доклинические исследования белкового гидролизата и глюкозамина гидрохлорида проводили в соответствии с Методическими рекомендациями Фармакологического Государственного комитета «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Москва, 2005) на базе аккредитованной испытательной лаборатории и вивария МНИЦ «ОЗОС» при ГНУ ВИГИС им. К.И. Скрябина.

Эффективность применения пробиотического препарата «Проваген» производства ООО «Пробиотик центр» (ТУ 9291-001-81668197-200) и его комплекса с сукцинатом хитозана (ТУ 9284-027-11734126-08) оценивали на телятах швицкой породы 2-3 - недельного возраста в СПК "Ильинск" Смоленской области. Препарат «Проваген» применяли согласно рекомендациям предприятия-изготовителя.

С учетом живой массы и интенсивности роста методом парных аналогов были сформированы 3 группы телят по 10 голов в каждой: I-ая группа-контрольная, II-ая и III-я - опытные. Животные всех групп получали основной рацион, принятый в хозяйстве. Телятам II-ой группы ежедневно в течение 7 суток давали пробиотик «Проваген» (14 г/голову) содержащий в своем составе пробиотические штаммы Bacillus licheniformis ВКМ В-2414 и Bacillus subtilis ВКМ В-2287 , животным III-ей группы - комплекс этого пробиотика (14 г/голову) с сукцинатом хитозана (1,6 г/голову). Дневную дозу препаратов выпаивали вместе с молоком во время утреннего и вечернего кормления. За животными вели наблюдение в течение 10 недель с начала опыта. Через 5 суток после окончания опыта у животных брали содержимое кишечника для микробиологического анализа. Пробы крови для биохимического и клинического анализа получали утром до кормления из яремной вены перед началом опыта и через 10 суток после его окончания.

Влияние белкового гидролизата в составе пробиотического препарата «Муцинол» производства ООО «КРОС Фарм» (ТУ 9291-001-90166827-2011) на прирост живой массы, клинические и биохимические показатели крови молодняка свиней изучали в условиях свинокомплекса ОАО «Аграрная группа РОСТ» Московской области.

С учетом живой массы и интенсивности роста методом парных аналогов были сформированы 3 опытные группы поросят крупной белой породы 4-недельного возраста по 10 голов в каждой. Животные I-ой контрольной группы получали общий рацион, принятый в хозяйстве. Поросята II-ой группы в дополнение к основному рациону в течение 10 дней получали препарат «Муцинол», содержащий в своем составе споры Bacillus subtilis ВКМ В-2716D и Bacillus licheniformis ВКМ В-2717D в концентрации не менее 1109 КОЕ/г и хитозан с молекулярной массой 500 кДа в дозе 5 г/голову. Животным III-ей группы в течение 10 дней скармливали препарат «Муцинол» (5 г/ голову) и гидролизат из отходов креветки в дозе 1г/кг живой массы. За животными вели наблюдение в течение 6 недель с начала опыта. Пробиотический препарат «Муцинол» применяли согласно рекомендациям предприятия-изготовителя.

Биохимический спектр сыворотки крови определяли с помощью автоматического биохимического анализатора Olympus AU 400. Гематологические показатели определяли с помощью автоматического гематологического анализатора PCE 90-vet. Исследования фекалий и типизацию микроорганизмов проводили согласно Методическим рекомендациям «Диагностика и лечение дисбактериоза кишечника» (1990).

При анализе и статистической обработке результатов использовали программу «Microsoft Excel», входящую в пакет программ «Microsoft Office, 2007». Для выявления статистически значимых различий использовали критерий Стьюдента-Фишера (Н.А. Плохинский, 1961).

Результаты собственных исследований

Разработка технологии комплексной переработки отходов креветки. В настоящее время предложены различные методы ферментативной обработки ХСС, которые предполагают использование кислых и щелочных протеиназ, панкреатина, трипсина, коллагеназы, собственных ферментных комплексов членистоногих. Полученные таким способом хитин и белок отличаются более высоким качеством, так как при этом используются «щадящие» условия, что позволяет максимально сохранить нативные свойства полимеров. Однако использование в промышленных условиях очищенных ферментов повышает себестоимость полученных продуктов. В связи с этим, весьма перспективной и экономически обоснованной является разработка технологии комплексной переработки отходов креветки с применением в качестве ферментсодержащего препарата гомогената поджелудочной железы свиньи, что позволяет снизить стоимость целевых продуктов.

Получение белкового гидролизата. С целью повышения доступности для ферментов предварительно размороженные отходы креветки гомогенизировали на коллоидной мельнице до получения однородной массы. Химический состав полученного гомогената представлен в таблице 1.

Таблица 1

Химический состав отходов креветки

Массовая доля, %

влага

белки

липиды

хитин

минеральные вещества

65,0-75,0

12,2-14,5

3,1-6,4

4,5-5,1

5,2-6,0

В качестве источника фермента использовали предварительно гомогенизированную на коллоидной мельнице поджелудочную железу свиньи с протеолитической активностью 0,09-0,1 ПЕ/мг. При отработке процесса гидролиза было изучено влияние следующих экспериментальных факторов: соотношение субстрат-вода, концентрация фермента и продолжительность процесса.

В результате проведенных исследований установлены оптимальные параметры ферментативного гидролиза: ферментолиз суспендированных в воде отходов креветки в соотношении 2:1 гомогенатом поджелудочной железы в количестве 10% от объема сырья при температуре 470С, рН 7,9-8,1 в течение 6 часов; инактивация фермента нагреванием реакционной смеси до 90-100 0С с последующим охлаждением до 40 0С; отстаивание в течение 20 часов; фильтрация гидролизата через бельтинг ткань на нутч фильтре.

Полученный жидкий гидролизат содержал не менее 1095 мг% свободных аминогрупп. Выход сухого продукта составил 9,4-10,8% от массы исходного сырья. Органолептические и физико-химические свойства полученного белкового гидролизата представлены в таблице 2.

Таблица 2

Органолептические и физико-химические свойства гидролизата из отходов креветки

Наименование показателей

Характеристика и значение показателей

Внешний вид, цвет

Порошок розовый с серым оттенком

Запах, вкус

Специфический

рН 1% раствора

7,8-8,0

Общий азот, %, не менее

9,8

Аминный азот, %, не менее

6,4

Степень гидролиза (Nам/Nоб),%, не менее

62,2

Влажность (распылительная сушка), %, не более

5,8

Результаты изучения аминокислотного состава сухого препарата показали, что полученный белковый гидролизат содержит все незаменимые аминокислоты, в том числе триптофан (таблица 3).

Таблица 3

Количественная характеристика аминокислот в белковом гидролизате

Заменимые аминокислоты

Содержание аминокислот, г/100 г

Незаменимые аминокислоты

Содержание аминокислот, г/100 г

Аргинин

6,82

Валин

4,92

Аспарагиновая кислота

6,35

Метионин

2,84

Тирозин

3,67

Лейцин

6,22

Серин

2,76

Изолейцин

4,58

Глутаминовая кислота

7,81

Треонин

3,28

Пролин

3,37

Фенилаланин

3,91

Глицин

3,64

Лизин

5,83

Аланин

5,27

Гистидин

2,65

Цистин

1,15

Триптофан

0,21

Сумма: 75,28 г/100 г

Количество незаменимых аминокислот в гидролизате составило 34,44 г/100г белка. Как видно из таблицы 3, в гидролизате из отходов креветки превалирует содержание аргинина, аспаргиновой и глутаминовой кислоты, валина, лейцина и лизина.

Таким образом, в результате отработки технологических параметров гидролиза отходов креветки с использованием в качестве ферментсодержащего препарата гомогената поджелудочной железы свиньи получен препарат белкового гидролизата, содержащий в своем составе не менее 6,4% аминного азота и все незаменимые аминокислоты.

Получение хитина. Для получения качественного препарата хитина необходимо снизить в нем содержание белка до 1-2%. После проведения ферментативного гидролиза уровень содержания белка в хитине составил 6-10%. Удаление остаточного белка достигалось мягким гидролизом щелочами в низких концентрациях при невысокой температуре, что позволяет максимально сохранить молекулярную массу хитина.

Исходным материалом для изготовления хитина служил креветочный жом, полученный после ферментативного гидролиза отходов креветки. С целью определения оптимальных условий депротеинирования были изучены концентрационные, температурные и временные параметры процесса, что позволило максимально снизить остаточное содержание белка в препарате хитина. Отработку процесса депротеинирования хитинсодержащего материала проводили при концентрации NaOH 0,25-3%, продолжительности процесса  0,5-4ч, температуре 600C и соотношении сырье:раствор щелочи 1:5. В результате проведенных исследований установлено, что обработка хитинсодержащего материала 1%-ным раствором NaOH в соотношении 1:5 при 600C в течение 3 часов позволило снизить содержание белка в хитине до 0,9-1,2%. Следует отметить, что депротеинирование необходимо проводить сразу после ферментолиза, когда хитин находится в набухшем состоянии и молекулы щелочи более эффективно проникают в его структуру.

При оптимизации условий деминерализации хитина установлено, что наиболее эффективной является обработка 2%-ным раствором соляной кислоты при соотношении твердой и жидкой фазы 1:4, температуре 60 0С в течение 2 часов. При данных условиях был получен хитин с содержанием минеральных веществ менее 1% (таблица 4). Использование более высоких концентраций соляной кислоты нежелательно, так как это приводит к снижению молекулярной массы полимера.

Таблица 4

Качественные показатели хитина из отходов креветки

Наименование показателя

Требования

ТУ 64-14-170-89 (хитин)

Хитин из отходов креветки

Внешний вид

порошок или хлопья

хлопья

Цвет

от белого до серовато-розового

светло-кремовый

Массовая доля влаги, %

10,0

9,1-9,2

Минеральные вещества, %

1,0

0,85-0,95

Белковые вещества, %

1,5

0,9-1,2

Таким образом, в результате проведенных исследований был получен препарат хитина, соответствующий требованиям ТУ 64-14-170-89.

Получение хитозана. В качестве исходного материала для изготовления хитозана использовали хитин, полученный нами ранее. Деацетилированием хитина 50% раствором NaOH в соотношении 1:6 при 1200С в течение 2 ч получен препарат хитозана. После промывки водой до рН 7,5-8,0 и конвекционной сушки были изучены органолептические и физико-химические свойства препарата (таблица 5).

Таблица 5

Органолептические и физико-химические показатели хитозана

Наименование показателей

Характеристика и значение показателей

Внешний вид

Чешуйки 1-3 мм

Цвет

Белый с желтым оттенком

Запах, вкус

Специфический

рН 1% раствора хитозана в 1% растворе уксусной кислоты

4,7 – 4,9

Влажность, %

9,1 - 9,2

Молекулярная масса, кДа

250-290

Степень деацетилирования, %

79-85

Содержание белка, %

0,7-0,9

Зольность, %

0,85-0,97

Получение глюкозамина гидрохлорида. Глюкозамина гидрохлорид был получен гидролизом хитина концентрированной соляной кислотой в соотношении 1:3 при 950С в течение 3 часов. С целью увеличения выхода конечного продукта на 5-7% нами введена дополнительная стадия, которая включает в себя добавление к гидролизату 10% (от объема гидролизата) этилового спирта, охлаждение до 50С, выдерживание реакционной смеси при этой температуре в течение 16 ч для кристаллизации соли.

Важным этапом в получении глюкозамина является его очистка от побочных продуктов гидролиза хитина. Установлено, что трехкратная обработка препарата этиловым спиртом в соотношении 2:1 при 800С в течение 10-15 минут с последующим освобождением от спирта фильтрованием позволило получить глюкозамина гидрохлорид со степенью чистоты 89%. Нами введена дополнительная стадия очистки активированным углем при соотношении глюкозамин:уголь 10:1, перемешивании и температуре 70-800С в течение 10 минут. После этого полученный бесцветный или бледно-желтый раствор подвергалсяя высушиванию на распылительной либо на лиофильной сушилке.

Степень чистоты полученного препарата была определена с использованием высокоэффективной обращенно-фазовой хроматографии. Как показали результаты хроматографических исследований (рисунок 1), введение этапа дополнительной очистки позволило получить препарат глюкозамина гидрохлорида со степенью чистоты 99,07 %.

COLUMN:  Shodex Asahipac NH2P-50 4E 

Size:  4.6x 250 mm

Number:  709032

Part.size: 5.0 µm

ELUENT: CH3CN : H2O =  70 :30

Flow: 0.80 мл/мин

Temperature: 25.0 C

Pressure:  86.0  бар

No  Retention  Area  Area Name

  мин  mV*сек %

1 2.8  67.49  0.93

2 7.233  7201,51 99.07

_____________________________

2 13.35 7269.11  100.00

Рисунок 1 Хроматограмма глюкозамина гидрохлорида

Схема комплексной переработки ХСО креветки. В результате проведенных исследований предложена схема технологии комплексной переработки отходов креветки для получения хитина, хитозана глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата (рисунок 2). Разработанная технология апробирована и используется в промышленных условиях на предприятии ЗАО «Биопрогресс».

Отходы креветки

Гомогенизация

Вода, фермент (46±1С)

Ферментолиз (6ч)

(нагрев до 95±5С)

Инактивация фермента

Отстаивание

Фильтрование

Раствор гидролизата

Креветочный жом

Сушка

1% р-р NaOH (60±1С)

Депротеинирование (3 часа)

Порошок гидролизата

Вода

Промывка водой до рН 7,5

Упаковка

2% р-р HCl (60±1С)

Деминерализация (2 часа)

Промывка водой до рН 7,5

Хитин

Сушка

50% р-р NaOH (120±1С)

Деацетилирование (2 часа)

Конц. НCl (95±1С)

Гидролиз (3 часа)

Промывка водой до рН 7,5

Охлаждение до (5±1С)

  Хитозан

Кристаллизация (16-18 ч.)

Сушка

Отделение осадка

  Расфасовка

Этиловый спирт

  Промывка

НCl

Вода дистиллированная

  Растворение осадка

Фильтрат

Активированный уголь

  Очистка раствора

  Фильтрация

Сушка

Глюкозамина гидрохлорид

Упаковка

Рисунок 2 Технологическая схема комплексной переработки

отходов креветки

Доклинические исследования белкового гидролизата и глюкозамина гидрохлорида.

Исследование белкового гидролизата. Острая токсичность белкового гидролизата была определена внутрижелудочным введением белым мышам в дозах от 1000 до 6000 мг/кг. Установлено, что введение гидролизата во всех тестируемых дозах ни в одном случае не привело к гибели животных. У всех мышей отсутствовали признаки интоксикации. В связи с тем, что верхняя доза была максимально возможной для внутрижелудочного введения, значение LD50 исследуемого препарата превышало 6000 мг/кг. Согласно общепринятой классификации и общим требованиям безопасности ГОСТ 12.1.007, белковый гидролизат был отнесен к малоопасным веществам (IV-ый класс опасности по ГОСТ 12.1.007).

При изучении субхронической токсичности на белых крысах было выявлено, что при внутрижелудочном введении в дозах 1000, 2000 и 4000 мг/кг в течение 14 дней гидролизат не оказывал отрицательного влияния на функцию жизненно важных органов и систем лабораторных животных.

Нанесение белкового гидролизата на слизистую конъюнктивы глаз кроликов показало, что препарат оказывал слабое раздражающее действие (не более 1 балла).

При изучении аллергизирующего (сенсибилизирующего) действия гидролизата из отходов креветки методом реакции непрямой дегрануляции тучных клеток установлено, что при однократном подкожном введении морским свинкам в дозе 0,2 мл/кг препарат сенсибилизацию организма не вызывал. При накожном ежедневном нанесении гидролизата в течение 7 суток раздражающего действия также не установлено.

Исследование глюкозамина гидрохлорида. Путем внутрижелудочного введения препарата белым крысам в нарастающих дозах от 2000 до 12000 мг/кг изучена острая токсичность глюкозамина гидрохлорида. Установлено, что LD50 глюкозамина гидрохлорида превышало 12000 мг/кг при отсутствии у животных признаков интоксикации. Таким образом, глюкозамина гидрохлорид был отнесен к малоопасным веществам (IV-ый класс опасности по ГОСТ 12.1.007). Дальнейшие исследования препарата свидетельствовали об отсутствии отрицательного влияния на функцию жизненно важных органов и систем белых крыс при многократном внутрижелудочном введении, слабом раздражающем действии на слизистую конъюнктивы глаза кроликов и отсутствии сенсибилизирующего действия на организм морских свинок.

Эффективность применения сукцината хитозана в комплексе с пробиотическим препаратом «Проваген». Задача заключалась в оценке влияния сукцината хитозана в сочетании с пробиотическим препаратом «Проваген» на интенсивность роста и развития телят, динамику морфологических и биохимических показателей крови подопытных животных, на микрофлору содержимого желудочно-кишечного тракта.

В ходе эксперимента установлено, что введение в рацион испытуемого пробиотика и его комплекса с сукцинатом хитозана способствовало увеличению живой массы опытных животных, по сравнению с контролем, на 4,2% и 6,3%, соответственно (таблица 6).

Таблица 6

Показатели живой массы телят в течение десяти недель опыта

Показатель

I-ая группа,

n=10

II-ая группа, n=10

III-я группа,

n=10

Живая масса в начале опыта, кг

50,7+2,45

50,4+2,10

50,4±2,23

Живая масса через 10 недель опыта, кг

91,6+4,20

95,5+3,90

97,4+3,75

Валовой прирост живой массы за 10 недель опыта, кг

40,9±1,96

45,1±1,89

47±2,11*

Среднесуточный прирост в течение 10 недель опыта, г

584+23,02

646+29,99*

671+35,94*

Примечание: * P0,05 к контрольной группе

Также установлено, что за весь период опыта среднесуточный прирост телят II-ой и III-ей опытных групп был выше в сравнении с аналогами из контроля на 10,0 % и 14,9 %, соответственно. При этом животные III-ей группы опережали аналогов II-ой группы по данному показателю на 3,8%. Молодняк опытных групп по абсолютному приросту живой массы превосходил телят контрольной группы. Более высокие приросты наблюдались у животных, получавших пробиотический препарат «Проваген» и сукцинат хитозана, которые за весь период опыта превосходили аналогов I-ой и II-ой групп на 14,9% и 4,2%, соответственно.

При изучении клинических и биохимических показателей крови установлены достоверные межгрупповые различия (таблица 7). У животных II-ой и III-ей групп количество эритроцитов и гемоглобина в крови было выше, по сравнению с телятами контрольной группы, на 4,9 и 6,2% и на 8,5% и 6,0%, соответственно. Содержание общего белка в крови животных II и III групп было выше по сравнению с контрольной группой на 10,5 и 14,5%, глобулинов - на 30,2 и 21,7%, соответственно. Отмечено снижение содержания холестерина и триглицеридов в сыворотке крови телят III-ей группы по сравнению с I-ой и II-ой группой на 59,0 и 40,7%, соответственно.

Таблица 7

Клинические и биохимические показатели крови телят

Показатели

Норма

I-ая группа,

n=5

II-ая группа,

n=5

III-я группа,

n=5

Гематокрит, %

24-46

42,4±1,21

41,7±0,97

41,7±0,92

Гемоглобин, г/л

80-150

119,9±5,4

122,1±5,1

121,1±5,2

Эритроциты, 1012/л

5,0-10,0

7,22±0,39

7,15±0,28

7,14±0,37

Общий белок, г/л

61-82

63,5±2,2

76,4±2,3*

77,7±2,6*

Глобулины, г/л

30-50

27,1±1,9

35,3±2,2

33,0±1,7

Холестерин, ммоль/л

1,3-5,0

3,71±0,30

3,48±0,28

1,52±0,24*

Триглицериды, ммоль/л

0,20-0,60

0,54±0,12

0,58±0,10

0,32±0,06*

P, ммоль/л

1,45-1,9

1,62±0,17

1,76±0,10

1,78±0,04

Ca, ммоль/л

2,5-3,3

2,68±0,17

2,57±0,19

2,37±0,08*

АСТ, Ед/л

46-130

56,5±9,8

85,4±11,8*

97,1±9,7*

АЛТ, Ед/л

5-40

15,2±3,2

25,1±3,0*

28,5±2,6*

Щелочная фосфатаза, Ед/л

20-155

218,3±22,5

261,2±24,8*

248,0±18,4

Примечание:  * P0,05 к контрольной группе

Изучено влияние пробиотического препарата «Проваген» и комплекса «Проваген» с сукцинатом хитозана на состав микрофлоры содержимого желудочно-кишечного тракта телят (таблица 8).

Таблица 8

Результаты исследований микрофлоры кишечника телят

Группа животных

КМАФАнМ1

Группы микроорганизмов

Молочно-кислые1

БГКП1

Энтерококки1

Стафилококки2

Дрожжи и плесени3

I

6023,7±176,2

367,2±31,4

321,5±20,9

1,57±0,21

19,6±1,76

458,5±27,7

II

7587,3±211,5

529,1±27,9

197,3±18,8

1,08±0,09

11,53±0,84

234,4±13,2

III

8267,7±238,9

553,8±23,6

181,6±27,7

0,79±0,13

13,3±1,28

198,6±17,9

Примечание: 1 - млн.КОЕ/г; 2 - тыс.КОЕ/г; 3 - КОЕ/г

Данные, представленные в таблице 8, свидетельствуют об увеличении количества мезофильно-аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), а также молочнокислых бактерий в содержимом желудочно-кишечного тракта животных II-ой и III-ей групп, в сравнении с контрольной группой животных, на 20,6 и 30,5% и на 37,2 и 33,7 %, соответственно, что является «сдерживающим» фактором размножения условно-патогенной микрофлоры. Так, в пробах кала телят II и III групп количество бактерий группы кишечной палочки (БГКП), энтерококков, стафилококков, грибов и плесеней было меньше по сравнению с контролем, на 61,4 и 56,5%; 68,8 и 50,3%; 58,7 и 67,9% и 51,2 и 43,3%, соответственно. При этом наименьшее содержание условно-патогенной микрофлоры установлено в пробах кала телят, получавших препарат «Проваген» в комплексе с сукцинатом хитозана. Соотношение БГКП к молочнокислым бактериям в содержимом желудочно-кишечного тракта животных данной группы составило 1:3,05 против 1:1,14 у телят контрольной группы, что является показателем сбалансированного микробиоценоза.

Таким образом, включение в рацион телят сукцината хитозана в комплексе с пробиотическим препаратом «Проваген» способствует повышению среднесуточного привеса молодняка, оптимизации гомеостаза и оказывает позитивное влияние на микробиоценоз желудочно-кишечного тракта животных.

Эффективность применения белкового гидролизата из отходов креветки в составе пробиотического препарата «Муцинол». При изучении эффективности применения белкового гидролизата из отходов креветки в комплексе с пробиотическим препаратом «Муцинол» оценивали его влияние на прирост живой массы, биохимические и клинические показатели крови молодняка свиней.

Показатели живой массы поросят контрольной и опытных групп представлены в таблице 9.

Таблица 9

Изменение показателей живой массы поросят за десять недель опыта

Показатели

I-ая группа, n=10

II-ая группа, n=10

III-я группа, n=10

Живая масса в начале опыта, кг

7,45±0,32

7,62±0,27

7,34±0,46

Живая масса через 6 недель опыта, кг

22,43±0,57

24,01±0,44

24,69±0,66

Валовой прирост живой массы за 6 недель опыта, кг

14,98±0,88

16,39±0,79

17,35±0,90*

Среднесуточный прирост живой массы в течение 6 недель опыта, г

356±19,7

390±18,2

413±22,9

Примечание: * P0,05 к контрольной группе

В результате проведенных исследований установлено, что введение в рацион молодняка свиней пробиотического препарата «Муцинол» и его комплекса с гидролизатом из отходов креветки способствовало увеличению живой массы опытных животных, по сравнению с контролем, на 7,0 % и 10,1 %, соответственно. Животные II-ой и III-ей групп за период опыта превосходили аналогов из контроля по среднесуточному приросту живой массы на 9,5% и 16,0 %, по абсолютному приросту – на 9,4% и 15,8%, соответственно.

При изучении клинических и биохимических показателей крови установлены достоверные межгрупповые различия (таблица 10). У животных II-ой и III-ей групп отмечена тенденция к увеличению содержания эритроцитов, содержание гемоглобина было выше, по сравнению с контролем, на 10,2 и 17%, соответственно.

Таблица 10

Клинические и биохимические показатели крови поросят

Показатели

Норма

Группы

I-ая группа,

n=5

II-ая группа,

n=5

III-я группа,

n=5

до опыта

после опыта

до опыта

после опыта

до опыта

после опыта

Гематокрит, %

39-43

39,8±0,4

39,7±1,0

39,5±1,3

41,2±0,3*

41,0±1,4

40,3±0,7

Гемоглобин, г/л

90-110

91,7±3,1

93,2±1,6

90,7±6,0

102,7±0,3*

89,8±3,6

109,1±0,3*

Эритроциты, 1012/л

6-7,5

6,37±0,33

6,82±0,17

6,27±0,36

6,91±0,14

6,48±0,25

6,94±0,11

Общий белок, г/л

60-85

60,5±2,1

65,5±1,7

60,2±1,5

78,5±1,2*

60,7±1,5

83,8±1,3*

Кальций, ммоль/л

2,5-3,5

2,46±0,18

2,57±0,2

2,52±0,39

2,69±0,17

2,55±0,20

2,77±0,09

Фосфор, ммоль/л

1,3-1,9

1,48±0,17

1,67±0,18

1,68±0,15

1,8±0,17

1,65±0,10

1,86±0,11

Общий холестерин, ммоль/л

0,2-3,9

1,89±0,17

2,02±0,12

1,87±0,46

1,02±0,28*

1,92±0,39

1,43±0,11*

Щелочная фосфатаза, Ед/л

140-200

280,7±24,6

199,7±28,3

273,0±27,1

235±16,5

278,7±15,2

211,3±17,2

Примечание: * P0,05 к контрольной группе

Как видно из данных, представленных в таблице 10, биохимические показатели крови поросят II-ой и III-ей групп в конце опыта превосходили  показатели  контрольной группы по содержанию белка на 19,8 и 27,9%, по активности щелочной фосфатазы – на 17,6 и 5,6%, соответственно. Содержание общего холестерина в крови поросят II-ой и III-ей групп было ниже на 49,5% и 29,2%.

Таким образом, применение пробиотического препарата «Муцинол» и его комплекса с гидролизатом из отходов креветки при кормлении молодняка свиней в период отъема позволяет повысить среднесуточный прирост живой массы животных и оказывает положительное влияние на биохимические и клинические показатели крови.

3. Выводы

  1. Разработана и предложена для промышленного применения технология комплексной переработки отходов креветки для получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата.
  2. Оптимизированы технологические параметры получения белкового гидролизата из отходов креветки, включающие обработку сырья 10% гомогенатом поджелудочной железы с протеолитической активностью 0,09-0,1 ПЕ/мг при температуре 470С, рН 7,9-8,1 в течение 6 часов, при которых выход сухого гидролизата составляет 9,4-10,8% от массы исходного сырья.
  3. Определены технологические параметры получения глюкозамина гидрохлорида со степенью чистоты не менее 99% из креветочного хитина, включающие гидролиз соляной кислотой при 95С в течение 3 часов, кристаллизацию 10% этиловым спиртом при 5С с последующей очисткой препарата этиловым спиртом и активированным углем.
  4. Доклинические исследования полученных по разработанной технологии препаратов белкового гидролизата и глюкозамина гидрохлорида показали, что испытуемые препараты относятся к IV-му классу опасности, не влияют на функцию жизненно важных органов и систем лабораторных животных при многократном внутрижелудочном введении и оказывают слабое раздражающее действие на слизистую конъюнктивы глаза кроликов.
  5. Включение в рацион молодняка крупного рогатого скота комплекса сукцината хитозана в дозе 1,6г/голову с пробиотическим препаратом «Проваген» в дозе 14г/голову способствует повышению среднесуточного привеса телят на 14,9 %, положительно влияет на клинические и биохимические показатели крови, а также приводит к снижению уровня патогенной и условно-патогенной микрофлоры и повышению содержания нормальной микрофлоры в желудочно-кишечном тракте животных.
  6. Показано, что применение белкового гидролизата из отходов креветки в дозе 1г/кг живой массы в комплексе с пробиотическим препаратом «Муцинол» в дозе 5г/голову при откорме молодняка свиней в послеотъемный период способствует повышению среднесуточных привесов на 16,0 % и оказывает положительное влияние на клинические и биохимические показатели крови.

4. Практические предложения

На основании проведенных исследований предлагаются для практики:

- Промышленная технология комплексной переработки отходов креветки для получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата;

- «Лабораторный технологический регламент изготовления глюкозамина», утвержден директором ВНИТИБП 26 сентября 2011г.

- «Методические положения по применению белкового гидролизата из отходов промысла креветки в свиноводстве», утверждены академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины, академиком РАСХН А.М. Смирновым 15 августа 2012 г.

5. Список работ, опубликованных по теме диссертации

  1. Биологические свойства различных форм и модификаций хитозана при использовании их в ветеринарии, животноводстве и агробиологии / А.И. Албулов, М.А. Фролова, А.Я. Самуйленко, С.М. Шинкарев, О.В. Буханцев, В.П. Варламов, Е.В. Крапивина, Ю.Д. Фролов // Актуальные проблемы биологии в животноводстве: материалы пятой международной конференции. - Боровск, 2010. – С. 124-125.
  2. Влияние способа высушивания на качество продукта при производстве хитозана и хитозансодержащей продукции / А.И. Албулов, М.А. Фролова, Б. А. Комаров, С.М. Шинкарев, О.В. Буханцев, В.И. Еремец // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: материалы десятой Международной конференции. - Нижний Новгород, 2010. – С. 74-77.
  3. Отечественные хитозансодержащие биологически активные добавки / А.И. Албулов, В.П. Варламов, М.А. Фролова, Б.А. Комаров, О.В. Буханцев // Инновационные технологии управления здоровьем и долголетием человека: материалы конференции. - Санкт Петербург, 2010. – С. 10-14.
  4. Разработка промышленных технологий изготовления ферментных препаратов протеолитического действия для использования в различных областях народного хозяйства / М.А. Фролова, А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, В.П. Варламов, Р.В. Рогов, О.В. Буханцев // Перспективные биокатализаторы для перерабатывающих отраслей АПК: сборник научных трудов. – Москва, 2010. – С. 123-128.
  5. Разработка технологии получения глюкозамина гидрохлорида из хитина камчатского краба / М.А. Фролова, О.В. Буханцев, А.И Албулов, А.В. Бакулин, А.И. Левов, С.А. Лопатин, В.П. Варламов // Пищевые технологии и биотехнологии: матер. XI Международной конференции молодых ученых. - Казань, 2010. – С. 34-36.
  6. Современное состояние и перспективы производства хитозан-содержащей продукции в России / А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, М.А. Фролова, А.В. Гринь, О.В. Буханцев, В.П. Варламов // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: материалы десятой Международной конференции. - Нижний Новгород, 2010. – С. 7-9.
  7. Хитозансодержащие биологически активные добавки к пище в рационализации питания населения / А.И. Албулов, М.А. Фролова, О.В. Буханцев, В.М.Быкова, С.В. Немцев, Б.А. Комаров // Рыбпром. – 2010. - №2. – С. 25-28.
  8. Эффективность применения препаратов хитозана при заболеваниях кожи и химических и термических ожогах / М.А. Фролова, Е.И. Лебедько,С.М. Шинкарев, А.И. Албулов, О.В. Буханцев, Ю.Д. Фролов // Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства: материалы Международной научно-практической конференции. – Самара, 2010. – С. 334-337.
  9. Буханцев, О.В. Применение хитозана в производстве продуктов питания / О.В. Буханцев // Молодежная наука – пищевой промышленности: материалы II международной научной конференции. - Ставрополь, 2011. - С. 67-69.
  10. Буханцев, О.В. Опыт скармливания хитозана в качестве биодобавки к пробиотическому препарату «Проваген» / О.В. Буханцев, Р.В. Рогов, П.Н. Абрамов // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: сборник научных трудов молодых ученых, выпуск 7. - Москва, 2011. - С.53-56.
  11. Application experience of chitosan in veterinary practice / M.A. Frolova, A.I. Albulov, A.J. Samujlenko, S.M. Shinkarev, O.V. Buhantsev // Adv. Chitin Sci.: the 10th International Conference of the European Chitin Society. – St.-Petetersburg, 2011. – Vol. 11. – P. 8-9.
  12. Изучение влияния хитозана в составе рациона кормления на продуктивность цыплят-бройлеров / М.А. Фролова, А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, О.В. Буханцев, П.А. Красочко // Ветеринарна медицина: мiжвiдомчий тематичний науковий збiрник. – 2011. - Випуск 95. - С. 414-415.
  13. Лечебная эффективность хитозановых препаратов / М.А. Фролова, А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, С.Д. Антонов, С.М. Шинкарев, А.В. Гринь, О.В. Буханцев, Ю.Д. Фролов // Ветеринарна медицина: мiжвiдомчий тематичний науковий збiрник. – 2011. - Випуск 95. - С. 232-233.
  14. Перспективы получения биологически активных добавок к пище на основе морепродуктов / А.И. Албулов, М.А. Фролова, А.Я. Самуйленко, В.П. Варламов, В.М. Быкова, О.В. Буханцев // Морские прибрежные экосистемы. Водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки: тезисы докладов четвертой международной научно-практической конференции. - Южно-Сахалинск, 2011. - С. 192-193.
  15. Хитозансодержащие биологически активные добавки – источники активных компонентов пищи / А.И. Албулов, М.А. Фролова, В.П. Варламов, А.В. Гринь, О.В. Буханцев, В.М. Быкова // Пищевая и морская биотехнология – для здорового питания и решения медико – социальных проблем: материалы IV Научно-практической конференции. - Светлогорск, 2011. - С. 6-7.
  16. Хитозан в составе пробиотической кормовой добавки «Проваген» / Е.В. Крапивина, Д.В. Иванов, А.И. Феськов, А.И. Албулов, М.А. Фролова, О.В. Буханцев // Ветеринария и кормление. – 2012. - №1. –С. 30-31.
  17. Крапивина, Е.В. Влияние выпаивания телятам разных доз пробиотика «Проваген» и комплекса этого пробиотика с хитозаном на микробиоцидную активность нейтрофилов крови / Е.В. Крапивина, Д.В. Иванов, А.И. Феськов, М.А. Фролова, А.И. Албулов, О.В. Буханцев // Научный журнал КубГАУ [Электронный ресурс].- Краснодар: КубГАУ, 2012. - № 02(76). – 12 с. - Режим доступа: http://ej.kubagro.ru/2012/02/pdf/54.pdf
  18. Перспективы применения хитозана и его производных в составе ветфарм-препаратов / М.А. Фролова, А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, В.П. Варламов, А.В. Гринь, О.В. Буханцев // Фармацевтические и медицинские биотехнологии: материалы международной научно-практической конференции. – М., 2012. – С. 295-296.
  19. Влияние комплекса хитозан-пробиотик на морфо-биохимические показатели гомеостаза молодняка свиней / О.В. Буханцев, Р.В. Рогов, М.А. Фролова, А.И. Албулов // Ветеринария и кормление. – 2012. - №2. –С. 32-33.
  20. Применение хитозана и белковых гидролизатов в комплексе с пробиотиком «Муцинол» при откорме поросят / О.В. Буханцев, Р.В. Рогов, М.А. Фролова, А.И. Албулов, А.В. Гринь, Р.С. Краснокутский, П.Н Абрамов // Свиноводство. – 2012. - №3. –С. 69-71.
  21. Рогов, Р.В. Применение белкового гидролизата при лечении гипотрофии поросят / Р.В. Рогов, О.В. Буханцев, П.Н. Абрамов // Актуальные проблемы инфекционной патологии в ветеринарной медицине: материалы II-ой конференции молодых ученых.- Покров, 2012. – С. 35-39.
  22. Буханцев, О.В. Технология комплексной переработки отходов промысла креветки / О.В. Буханцев, Р.В. Рогов // Актуальные проблемы инфекционной патологии в ветеринарной медицине: материалы II-ой конференции молодых ученых.- Покров, 2012. – С. 162-164.
  23. Эффективность применения хитозана в качестве пребиотика при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных / А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, М.А. Фролова, О.В. Буханцев, В.И. Еремец, А.А. Раевский, Ю.Д. Фролов // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: материалы одиннадцатой Международной конференции. - Мурманск, 2012. – С. 245-249.





© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.