WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

ГОРЯЙНОВА

Елена Геннадиевна

Репаративная регенерация кожи белых крыс
в репродуктивном периоде онтогенеза,
ее физиологическая регуляция
и пути интенсификации

03.03.05 – биология развития, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук

Ставрополь – 2012

Работа выполнена в
ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный университет»
и Южном научном центре Российской академии наук.

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор
Тимченко Людмила Дмитриевна.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор
Квочко Андрей Николаевич;

кандидат биологических наук
Бондарева Надежда Ивановна.

Ведущая организация:

ФГАОУ ВПО «Южный федеральный
университет».

Защита диссертации состоится 21 марта 2012 г. в 12.00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 212.256.09 в Ставропольском государственном университете по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина, 1, корп. 2, комн. 506.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольского государственного университета.

Автореферат разослан 15 февраля 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета        Ржепаковский И.В.

e-mail: labim@stavsu.ru

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Репаративная регенерация млекопитающих является сложным многоступенчатым полинаправленным процессом, в основе которого лежит комплекс многочисленных биохимических, иммунологических и генетических механизмов, рассматриваемых в регенеративном процессе в качестве гомеостатических и регуляторных (Слепушкин В.Д. и др., 1988; Ченцова М.И., 1991; Воронкина И.В., 2003; Храмцов Ю.С., 2006; Калинская Н.С., 2009; и др.). Эти механизмы репаративной регенерации подвержены высокой изменчивости в онтогенезе, и восстановление поврежденных тканей протекает с различной интенсивностью (Одинцова И.А., 2004; Плечева Д.В., 2004; Лаврушина Е.Е., 2007; Мусина Л.А., 2009). В связи с этим очевидно, что для наиболее объективной оценки регенераторного потенциала, на тот или иной момент жизни, необходим учет, как можно большего перечня его критериев. Так, Казначеев К.С. (1999), Жижина Г.П. (2002), Цейликман О.Б. (2005), Калинская Н.С. (2009), Schulze-Osthoff et al. (1998) единодушны во мнении о необходимости комплексного подхода к оценке регенераторного потенциала не только с учетом степени морфофункциональной полноценности ткани, но и с учетом функциональной активности организма, заключающегося в контроле соотношения уровня пролиферативных процессов к уровню повреждения.

Большой интерес представляют возрастные колебания регенераторной активности организма. Зачастую объектом исследования являются дети в ранний детский, дошкольный и школьный период, так как именно в этом возрасте высока степень травматизации (Степанович В.В., 2004). Внимание исследователей также направлено на заключительный период онтогенеза, когда отмечается снижение интенсивности процессов метаболизма, что влечет за собой замедление процессов репарации во всех органах и тканях (Донцов В.И., 2000; Маркушин А.В., 2003; Курилов И.Н., 2007, 2009; Трофимов А.В., 2009).

Однако в доступной литературе, к сожалению, отсутствуют четкие сведения об активности репаративной регенерации и механизмах её регуляции на различных этапах репродуктивного периода, который является длительным и ответственным. Именно в этот период онтогенеза в организме отмечается высокая гормональная активность, поэтому к уровню физиологических и биохимических процессов, тесно связанных с морфологической полноценностью тканей, предъявляются повышенные требования (Хомулло Г.В., 1987; Слепушкин В.Д., 1988; Солопаев Б.П., 1990; Гололобов В.Г., 1997; Торчинов А.М., Ханукоева А.К., 2000; Илющенко В.Г., 2003; Калинская Н.С., 2009).

При этом важная проблема регенерации тканей высших млекопитающих и человека состоит в том, что она происходит довольно медленно и зависит от места локализации и глубины раневого дефекта (Лиознер Л.Д., 1972; Саркисов Д.С., 1993).

Несмотря на большое количество средств природного и синтетического происхождения, обладающих репаративными свойствами, интерес к этой проблеме остается высоким, так как существующие препараты не всегда достаточно эффективны. Не исключено, что данный факт может быть обусловлен использованием этих средств без учета особенностей регенерации и патогенеза раневого процесса в связи с возрастом и тяжестью повреждения.

Многие исследователи считают приоритетным использование средств из эмбриональных тканей млекопитающих, что обусловлено повышенным содержанием в них различных биологически активных веществ, способствующих стимуляции восстановительных процессов (Шумаков В.И. и др., 2002; Смирнов С.В., Кисилев И.В. и др., 2003). Однако наиболее эффективные средства, например, препараты на основе стволовых клеток и эмбрионально-плацентарных тканей являются дорогостоящими и эпидемически проблематичными (Плечева Д.В., 2004).

В то же время, имеются единичные сообщения об альтернативных регенеринстимулирующих средствах на основе эмбриональных тканей птиц (Попов Г.К. и др., 2006; Тимченко Л.Д. и др., 2007; Ржепаковский И.В. и др., 2008). Состав эмбриональных тканей птицы и сырьевых субстратов, полученных из нее в процессе технологической переработки, позволяет рассчитывать на высокую активность, безопасность и биосовместимость с организмом реципиента (ТимченкоЛ.Д. и др., 2001; Затона Е.Г., 2008; Сварич М.В., 2008). Однако пока еще мало препаратов на основе эмбриональной ткани птиц, а их потенциал и спектр влияния на показатели гомеостаза и регенераторной активности еще полностью не раскрыты.

Вышеизложенное обусловливает необходимость изучения изменчивости нормативных показателей регенерации в репродуктивном периоде онтогенеза, как на местном, так и на регуляторном уровне, в том числе для половозрелых белых крыс, используемых традиционно в качестве биологической модели для оценки влияния различных новых препаратов. Такие сведения являются фундаментальной базой этиопатогенетического подхода к поиску путей интенсификации репаративных процессов.

Целью исследования явилась комплексная оценка регенераторного потенциала и репаративных процессов в коже крыс репродуктивного периода онтогенеза, а также изучение репаративной регенерации под влиянием нового биологически активного препарата на основе эмбрионально-яичной массы при различных типах повреждения.

В соответствии с этим были определены следующие задачи:

1) исследовать особенности регенераторного потенциала и репаративной регенерации кожи, а также их регуляторных механизмов у белых крыс в репродуктивном периоде онтогенеза (с 5 до 18 месяцев);

2) оценить клинические показатели регенерации кожи у экспериментальных животных под влиянием нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель» при различных типах повреждения;

3) исследовать гистологические и цитологические показатели кожи белых крыс при репаративной регенерации с использованием нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель» при различных типах повреждения;

4) изучить динамику гематологических показателей при различных типах повреждения покровных тканей у белых крыс при применении биологически активного препарата «Биорегенерин-гель»;

5) изучить динамику уровня общего белка, его фракций, а также перекисное окисление липидов в крови у белых крыс при разных типах повреждения покровных тканей под влиянием нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель»;

6) изучить иммунологические и цитохимические показатели крови белых крыс при использовании нового препарата «Биорегенерин-гель» при различных типах повреждения кожи.

Научная новизна исследования. Впервые на основании комплекса гематологических, биохимических, цитохимических, цитологических и гистологических показателей определены параметры регенераторного потенциала у белых лабораторных крыс на разных этапах репродуктивного периода онтогенеза.

Установлен характер и подтверждена изменчивость непосредственных критериев репаративной регенерации кожи во взаимосвязи с динамикой морфофункциональных показателей организма, отражающих регуляторные механизмы регенерации. Выявлены сроки ее максимальной и минимальной активности в ходе репродуктивного периода онтогенеза, как в норме, так и при повреждении.

Дано этиопатогенетическое обоснование рационального выбора регенеринстимулирующих средств на основе комплекса показателей регенераторного потенциала и репаративной активности кожи, а также физиологических особенностей организма.

Впервые с учетом комплекса показателей (гематологических, биохимических, цитохимических, иммунологических, цитологических и гистологических) изучено и подтверждено регенеринстимулирующее влияние нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель» на основе эмбрионально-яичной массы, его универсальность вне зависимости от типа повреждения, а также определены перспективы его применения. Приоритетность выполненных исследований подтверждена патентом РФ № 2433171 «Способ получения биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы для приготовления противоожоговой пластины и противоожоговая пластина на его основе».

Теоретическая и практическая значимость исследования. Установленные сведения о соотношении уровня митотической активности, апоптоза и некроза и выявленная коррелятивная зависимость этих критериев с показателями регуляторных механизмов регенерации кожи крыс, углубляют и расширяют представление о морфофункциональных особенностях и регенераторном потенциале кожи в репродуктивном периоде онтогенеза.

Показатели регенераторного потенциала, а также репаративной активности на разных этапах репродуктивного периода онтогенеза могут использоваться в качестве этиопатогенетической основы при целевом выборе препаратов для повышения уровня регенерации.

Расширен спектр знаний о влиянии препаратов на основе эмбриональных тканей птиц на интенсивность репаративного процесса.

Дано экспериментальное обоснование целесообразности применения нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель» в качестве перспективного регенеринстимулирующего средства при разных типах повреждения.

Эффективность применения препарата «Биорегенерин-гель» подтверждена на животных в участковой ветеринарной лечебнице № 2 г. Ставрополя.

Результаты исследования используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторных занятий по дисциплине «Биология развития и размножения» на медико-биолого-химическом факультете в Ставропольском государственном университете, на биолого-химическом факультете в Ставропольском филиале Московского государственного гуманитарного университета им. М.А. Шолохова, а также на кафедре анатомии, акушерства и хирургии ФГОУ ВПО Самарская ГСХА по дисциплинам «Хирургия», «Акушерство», «Гистология», и при проведении научных исследований. Внедрены в научно-исследовательской деятельности, практической работе и образовательной деятельности лаборатории биомедицины научно-исследовательского института биологии ФГАОУ ВПО «Южный федеральный университет» (г. Ростов-на-Дону). Материалы диссертационной работы используются участковой ветеринарной лечебнице № 2 г. Ставрополя.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных научных конференциях студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН (г. Ростов-на-Дону, 2007, 2008, 2009, 2010 гг.); на III Всероссийском конкурсе научных студенческих работ, посвященном 295-летию М.В. Ломоносова (г. Москва, МГУ им. Ломоносова, 2006 г.); на Всероссийском смотре-конкурсе научно-технического творчества студентов высших учебных заведений «ЭВРИКА-2007» (г. Новочеркасск, 2007 г.); на VI Международной научно-практической конференции «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (г. Астрахань, 2008 г.); на научной конференции «Университетская наука - региону» (г. Ставрополь, 2006, 2007, 2008, 2009, 2011 гг.); на международной научно-практической конференции, посвященной 30-летию ФГОУ ВПО КБГСХА им. В.М. Кокова (г. Нальчик, 2011 г.).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Репаративная активность кожи на протяжении репродуктивного периода онтогенеза изменчива и отражает динамику регенераторного потенциала, установленного для крыс на основе комплекса морфофункциональных показателей кожи во взаимосвязи с уровнем физиологических процессов, регулирующих механизмы регенерации.

2. Новый биологически активный препарат «Биорегенерин-гель» на основе эмбрионально-яичной массы оказывает выраженное стимулирующее действие на репаративную регенерацию кожи и может быть использован при разных типах повреждений покровных тканей.

Публикации. По теме диссертационного исследования опубликована 21 работа, в которых в полном объеме отражено его содержание, в том числе 3 из них изданы в периодических изданиях из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК Министерства образования и науки России и рекомендованных для публикации основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени, а также получен патент РФ на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 162 страницах компьютерного текста и состоит из содержания, введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы, включающего 323 источника, в том числе 51 зарубежного автора. Диссертация иллюстрирована 26 таблицами, 32 микро- и макрофотографиями, 4 диаграммами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальная работа выполнена на кафедре общей биологии, в проблемной научно-исследовательской лаборатории экспериментальной иммуноморфологии, иммунопатологии, иммунобиотехнологии Ставропольского государственного университета и на базовой кафедре иммунологии и микробиологии Южного научного центра Российской академии наук при СГУ в течение 2008-2011 гг. Цитохимические и иммунологические исследования проводили на базе Ставропольского научно-исследовательского противочумного института.

Исследования проведены на 240 белых крысах сток Wistar репродуктивного возраста, с исходной массой тела 260-350 г. Все процедуры, включая эвтаназию, проводили, под эфирным наркозом.

Эксперимент состоял из двух этапов. Первый этап включал оценку интенсивности регенераторного потенциала кожи на разных этапах репродуктивного периода онтогенеза, с учетом гистологических и цитологических особенностей и на основании морфофункциональных показателей крови, а также оценку интенсивности репарации на 7-е сутки после повреждения на основании тех же критериев. Для этого были созданы четыре (1, 2, 3 и 4) группы крыс (5, 7, 9 и 18 месяцев), по 30 особей в каждой: У всех животных в области шейных позвонков моделировали резаную рану кожного покрова одинакового размера и глубины.

На втором этапе проводили оценку влияния нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель» на интенсивность репаративных процессов кожи и морфофункциональные показатели крови на 2-е, 4-е, 10-е сутки после повреждения. Были созданы четыре группы животных (5, 6, 7 и 8) по 30 особей в каждой. У животных 5-й и 6-й групп на задней поверхности спины моделировали резаную рану кожного покрова одинакового размера. Животным 5-й группы рану ушивали обычным хирургическим шелком (№4), а животным 6-й группы такой же хирургической нитью с препаратом «Биорегенерин-гель». У животных 7-й 8-й экспериментальных групп моделировали термический ожог. В 7-й группе животным рану ежедневно обрабатывали актовегин гелем с гентамициновой мазью (1:1), а в 8-й группе использовали новый биологически активный препарат «Биорегенерин-гель». Гистологическим и цитологическим контролем служили показатели свежеиссеченного лоскута кожи ранее использованных здоровых животных 9-ти месяцев 3-й и 5-й групп, а гематологическим, биохимическим, иммунологическим, цитохимическим контролем - результаты, установленные до повреждения в соответствующей группе.

Подсчет форменных элементов крови проводили в камере с сеткой Горяева. Содержание гемоглобина определяли гематиновым методом Сали с помощью гемометра ГС-3. Проводили расчет среднего содержания гемоглобина в одном эритроците и цветового показателя (Кондрахин И.П., 2004).

Общий белок сыворотки крови определяли колориметрическим биуретовым методом с помощью биохимического фотометра Stat fax 1904+R (США). Белковые фракций в сыворотке крови определяли турбидиметрическим методом при помощи ФЭК-56ПМ (Россия) (Кондрахин И.П., 2004).

Уровень МДА определяли в 7-й и в 8-й группах по методу Ishichara Minoru (Гаврилов В.Б., 1987).

Динамику популяции и субпопуляции лимфоцитов определяли методом непрямой иммунофлюоресценции (Медицинская иммунология, 1999).

В нейтрофилах определяли активность МПО по методике Грехема - Кнолля; СДГ - по Нарциссову Р.П. (1969); ЩФ - методом азотсочетания по Кэплоу Л. (1955); КФ - по Гольдбергу А. и Барку Т. (1965); КБ - по Пигаревскому В.Е. (1981); Г-6-Ф-азы - по Хейхоу Ф.Г. Дж. (1983), НАДФ-оксидазы - по Windhorst D.B. (1967). При оценке цитохимических реакций использовали полуколичественные показатели выявления активности энзимов по степени интенсивности окраски цитоплазмы по Kaplow L.S. (1963).

Гистологические исследования проводили по общепринятой методике с окраской гематоксилин-эозином и по Ван-Гизону, в зависимости от задач исследования (Семченко В.В., 2006). Микроморфометрию гистологических срезов кожи проводили с помощью стандартного окуляр-микрометра МОВ-1-16 (Россия).

Митотический индекс определяли путем подсчета соотношения одноядерных клеток к двуядерным в эпителии кожи, не менее чем в двадцати полях зрения (Сычева Л.П., 2007; Rakic S., 2000). Количество апоптозных и некротических клеток определяли в гомогенате кожи по методике Абдувалиевой А.А. и Гильдиевой М.С. (2006) с использованием элементов методики трипсинизации и подсчета живых и мертвых клеток (Дьяконов Л.П., 2000). Апоптозный индекс рассчитывали по формуле, предложенной Logsdon M.D., Meyn R.E., Besa P.C. et al. (1999), а некротический индекс - по формуле, рекомендованной Лушниковым Е.Ф., Абросимовым А.Ю.(2001).

Микрофотографирование осуществляли при помощи комплекса визуализации изображения, состоящего из микроскопа «Микмед-2» (Россия) и цифровой фотокамеры «Olympus-5060» (Япония). Результаты экспериментов подвергали вариационно-статистической обработке (Арешидзе Д.А., 2003). Достоверность различий сравниваемых показателей, а также сравнение варьирующих признаков, измеряемых в различных единицах, оценивали с использованием программы Primer of Biostatistics (Version 4.03) по критерию Стьюдента и критерию расчета коррелятивной зависимости. Достоверными считали различия при P 0,05.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Регенераторный потенциал, динамика репаративной регенерации кожи и её регуляторных механизмов у крыс репродуктивного периода онтогенеза

Регенераторный потенциал кожи определяется комплексом ее морфофункциональных показателей и физиологическими особенностями организма. Его оценивали у белых крыс сток Wistar на протяжении репродуктивного периода онтогенеза.

Гистологически у белых крыс на протяжении репродуктивного периода отмечали изменения толщины эпидермиса и дермы, а также количества крупных и мелких кровеносных сосудов. Наиболее выражены эти различия между животными 5-ти и 18-ти месячного возраста. Так, у животных 5-ти месяцев толщина эпидермиса на 10,4%, а толщина дермы на 11,5% выше, чем в 18 месяцев. С возрастом отмечали снижение митотической активности эпителия и повышение апоптозного индекса структурных элементов кожи. У животных 5-ти месяцев уровень апоптоза на 36% ниже, а уровень митоза в 2,4 раза выше, чем у животных 18-ти месяцев. Достоверных изменений некротического индекса не установлено.

На протяжении репродуктивного периода онтогенеза отмечали снижение уровня гемоглобина и количества эритроцитов. Так, наиболее высокие значения гемоглобина (190,2±4,62 г/л) и эритроцитов (6,79±0,45·1012/л) выявлены у крыс в возрасте 5-ти месяцев, а низкие - в 18 месяцев (147,5±3,86 г/л и 5,67±0,14·1012/л соответственно). Отмечали возрастное снижение уровня общего белка и белков альбуминовой фракций, наряду с повышением белков глобулиновой фракции. В 5 месяцев уровень общего белка на 22,8%, а в 7 месяцев на 20,0% выше значения, отмеченного у крыс 18-ти месяцев.

В течение репродуктивного периода онтогенеза отмечается изменение ферментативной активности нейтрофилов, что выражается в снижении уровня КБ, МПО, СДГ, Г-6-Ф-азы, НАДФ - оксидазы, КФ и ЩФ. Наиболее высокие значения исследуемых показателей зафиксированы у животных в возрасте 5-ти месяцев, а наиболее низкие у 18-тимесячных крыс. В 18 месяцев отмечали достоверное снижение КФ и ЩФ относительно, значений выявленных в 5 месяцев на 19,1% и 14,9% соответственно.

У животных 18-ти месяцев отмечали более низкие значения общего числа Т-лимфоцитов (CD3), в том числе Т-хелперов (CD4) и цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8а) в сравнении с результатами животных от 5-ти до 9-ти месяцев. У 18-тимесячных крыс значения CD3 ниже на 12,8%, СD4 - на 3,9%, СD8a - на 4,6% и СD19 - на 7,4%, чем у животных в возрасте 5-ти месяцев.

Таким образом, у белых крыс сток Wistar более высокие значения показателей, отражающих уровень регенераторного потенциала, отмечены в возрасте 5-ти месяцев, а на заключительном этапе репродуктивного периода онтогенеза (18 месяцев) - самые низкие. Наиболее стабильные значения всех показателей у животных в пределах одной группы зафиксированы в 9 месяцев. Значения всех исследуемых показателей лежат в рамках нормы, установленной Лангом С.М. и Уилсоном Р.П. (1993), что позволяет считать их нормативными для крыс в репродуктивном периоде онтогенеза. Установленные данные, по-нашему мнению, могут быть положены в основу прогнозирования скорости репаративной активности кожи в разные возрастные периоды.

На 7-е сутки после нанесении резаной раны размеры струпа у животных 5-ти и 7-ми месяцев существенно меньше, чем в 18-месяцев.

К этому времени у животных в возрасте 5-ти и 7-ми месяцев на гистосрезах отмечали повышение толщины эпидермиса за счет увеличения митотической активности клеток базального слоя и восстановления нормальных клеточных элементов, а в дерме - образование молодой соединительной ткани с большим количеством пролиферирующих клеток и упорядоченно расположенными коллагеновыми волокнами и кровеносными сосудами различного диаметра. В 18 месяцев отмечали самую низкую толщину эпидермиса и дермы, присутствие лишь мелких кровеносных сосудов, рыхлость в расположении соединительнотканных волокон. При этом толщина эпидермиса была на 18,4%, а дермы на 19,5% ниже значений, установленных, в 5 месяцев.

Митотический индекс у животных в возрасте 5-ти и 7-ми месяцев к 7-м суткам после повреждения превышал уровень апоптозного и некротического индексов в гомогенате кожи. У 9-тимесячных крыс соотношение митотического индекса к апоптозному и митотического к некротическому на этим же сутки составили 1,1:1 и 1,2:1 соответственно. Наиболее высокий показатель некротического и апоптозного индексов, наряду с низким показателем митотического индекса, зарегистрирован у животных 18-ти месяцев.

Установленная динамика репаративного процесса сопровождается изменениями гематологических, биохимических, иммунологических, цитохимических показателей. Значения уровня гемоглобина и количества эритроцитов у животных в возрасте 5-ти, 7-ми и 9-ти месяцев к 7-м суткам после повреждения не имели достоверных отличий от результатов, зафиксированных до повреждения. В 18 месяцев уровень гемоглобина на 20,4%, а количество эритроцитов на 10,2% ниже значений, выявленных до повреждения, а также ниже данных, установленных у животных других групп. Достоверное изменение уровня лейкоцитов к 7-м суткам после повреждения отмечено у животных 18-ти месяцев на 22,3% по сравнению с исходными значениями. Помимо того, у крыс в 18 месяцев по сравнению со здоровыми животными этого же возраста установлено достоверное повышение абсолютного числа моноцитов на 39,7% и сегментоядерных нейтрофилов на 51,2%, в то время как в остальных группах количество этих клеток достоверно не отличалось от исходных данных.

Во всех возрастных группах к 7-м суткам после нанесения резаной раны отмечали снижение уровня общего белка и белков альбуминовой фракции, а также увеличение - глобулиновой фракции. Так, у животных 18-ти месяцев уровень общего белка на 26,0% ниже исходного значения и на 27,2% ниже результата, установленного у 5-тимесячных крыс.

В нейтрофилах у животных всех возрастных групп после повреждения, по сравнению со здоровыми, отмечали снижение уровня КБ, МПО, Г-6-Ф-азы, НАДФ-оксидазы при одновременном повышении СДГ, а также КФ и ЩФ. При этом наиболее высокие значения отмечали в 5 месяцев, а низкие - зафиксированы в 18 месяцев (табл. 1).

Таблица 1

Уровень ферментативной активности нейтрофилов в крови белых крыс сток Wistar на разных этапах репродуктивного периода онтогенеза

на 7-е сутки после нанесения резаной раны, (M±m)

№ группы, n=30

КБ,

у.е.

КФ,

у.е.

МПО, у.е.

ЩФ,

у.е.

НАДФ-оксидаза, у.е.

СДГ,

у.е.

Г-6-Ф-аза, у.е.

5 месяцев

1,49±

0,09

2,67±

0,15

1,93±

0,13

2,26±

0,08

2,61±

0,08

2,05±

0,11

1,04±

0,1

7 месяцев

1,45±

0,13

2,49±

0,12

1,82±

0,14

2,09±

0,13

2,56±

0,16

1,96±

0,14

0,95±

0,09

9 месяцев

1,31±

0,08

2,37±

0,12

1,74±

0,12

2,05±

0,07

2,43±

0,11

1,83±

0,09

0,98±

0,07

18 месяцев

1,22±

0,1

2,28±

0,11

1,58±

0,11

1,99±

0,09

2,31±

0,11

1,72±

0,12

0,64±

0,12

*(P<0,05) - в сравнении с данными предыдущей группы,

(P<0,05) - в сравнении с данными 1-й группы.

У крыс 18-ти месяцев на 7-е сутки после нанесения резаной раны отмечали повышение числа CD3 и CD8а на 20% и на 18% соответственно. У животных 5-ти месяцев количество клеток CD3 на 8,8% ниже значения, отмеченного у крыс 18-ти месяцев. У крыс пяти месяцев количество CD8а и CD19 превышали значения, выявленные у восемнадцатимесячных животных на 10,7% и на 8,5%, а у животных семи месяцев - на 11,9% и 6% соответственно.

Таким образом, репаративная активность у белых крыс сток Wistar на протяжении репродуктивного периода онтогенеза изменчива и определяется динамикой регенераторного потенциала. У животных 5-ти месяцев к завершению эксперимента отмечали наиболее интенсивное восстановление исследуемых показателей, а у животных 18-ти месяцев интенсивность репаративной активности снижается.

Установленные корреляции между непосредственными критериями уровня регенерации (митотический и апоптозный индекс), степенью повреждения кожи (некротический индекс) и всеми исследуемыми морфофункциональными показателями организма (гематологическими, цитохимическими и биохимическими), свидетельствуют о взаимосвязи исследуемых параметров между собой на всех этапах онтогенеза, что обусловливает этиопатогенетическую целесообразность комплексной оценки репаративной активности.

Клиническая оценка интенсивности процесса регенерации
покровных тканей белых крыс при различных типах повреждения
под влиянием отдельных форм препарата на основе
активированной эмбрионально-яичной массы

Принимая во внимание сложность репаративного процесса, в состав нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель» включены следующие компоненты: активированная эмбрионально-яичная масса, гентамицин, бриллиантовый зеленый, анестезин, амарантовое масло и желатин в качестве формообразующего средства. Его действие оценивали на белых крысах сток Wistar в возрасте 9-ти месяцев при двух типах повреждения, отличающихся по сложности механизма патогенеза, а также типу и времени заживления.

Резаные раны в 5-й (обычная хирургическая нить) и 6-й (нить с препаратом «Биорегенерин-гель») группах ушивали путем стягивания краев. Заживление протекало по принципу первичного натяжения, на фоне экссудативного воспаления. Интенсивность процесса регенерации к 2-м суткам эксперимента в обеих группах существенно не отличалась, что сопровождалось развитием воспалительного отека, экссудацией серозного характера, гиперемией кожи вокруг раны. У животных 6-й группы уже к 4-м суткам установлено ослабление признаков воспалительной реакции, заключающееся в уменьшении количества экссудата, изменении характера экссудации с тенденцией к упрощению и снижению уровня гиперемии. В то время как у крыс 5-й группы отмечали отечность раневых краев, гиперемию и обильную экссудацию. К 10-м суткам состояние животных в обеих группах оценивали как стабильное, однако, в 5-й группе полного восстановления кожного покрова не выявлено, в то время как у животных 6-й группы, в области повреждения отмечали сформированный линейный рубец.

При термическом ожоге у животных 7-й (актовегин-гель и гентамициновая мазь) и 8-й (препарат «Биорегенерин-гель») групп к 2-м суткам эксперимента состояние животных было одинаково тяжелым. Наиболее выраженные различия в интенсивности репарации установлены к 10-м суткам. У животных 7-й группы установлено, что ткань в зоне повреждения некротизирована, отечна, края раны неровные, возвышаются над зоной некроза. Выражена тенденция распространения некроза на прилежащие участки эпидермиса (рис. 1). У большинства крыс отсутствует или слабо заметен и прерывист демаркационный вал. Признаков эпителизации не отмечено. У животных 8-й группы в зоне ожога отмечали признаки островковой, тотальной или краевой эпителизации эпидермиса, местами, с едва заметной прорастающей шерстью. По периферии наблюдали четко выраженную зону демаркационного воспаления, резко отделяющую очаг некроза от здоровой кожи. Признаков гнойного воспаления не отмечено, очаги поражения локальные, практически округлые с ровными краями (рис. 2).

Рис. 1. 7-я группа: влажный некроз на месте ожога, отсутствие линии демаркационного воспаления на границе ожога со здоровой тканью (10 сутки).

Рис. 2. 8-я группа: эпителизация поврежденной кожи на месте ожога, четкая линия демаркационного воспаления (10 сутки).

Таким образом, применение нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель» и пропитанных им хирургических нитей, сокращает сроки восстановления кожи при резаных ранах и ожогах.

Гистологические и цитологические показатели кожи белых крыс при
репаративной регенерации под влиянием различных форм нового

биологически активного препарата «Биорегенерин-гель»

У животных 5-й и 6-й групп к 2-м суткам после нанесения резаной раны отмечали низкую пролиферативную активность эпителия и соединительной ткани. К этому времени наблюдали низкое количество кровеносных сосудов крупного и мелкого диаметра в грануляционной ткани, по сравнению со значением у здоровых животных в этом же возрасте. У животных 5-й группы к 4-м суткам толщина эпидермиса и дермы была ниже значений, выявленных в 6-й группе на 22,7% и 15% соответственно. Коллагеновые волокна дермы у животных 5-й группы ориентированы вертикально, в то время как в 6-й группе имели горизонтальную ориентацию.

К 10-м у животных 6-й группы толщина эпидермиса была на 50,1% выше значения, выявленного в 5-й группе. Толщина дермы также превышала показатели 5-й группы на 26,9%. Дермоэпидермальное соединение выражено четко, структуры клеток не размыты. В сосудистом слое дерме, количество кровеносных сосудов достоверно не отличалось от результатов, зафиксированных в контроле, при этом, вблизи сосудов отмечали активную пролиферацию фибробластов. По периферии рубца в регенерированной коже наблюдали рост волос, а также восстановление нормальной структуры сальных желез.

У животных 5-й и 6-й групп к 2-м суткам эксперимента отмечали снижение митотического индекса, наряду, с повышением апоптозного и некротического индексов, по сравнению со значениями, выявленными у здоровых животных. При этом у животных 6-й группы уже к 4-м суткам установлено повышение митотического индекса, а также снижение уровня апоптоза и некроза, относительно 2-х суток эксперимента. Наряду с тем, как у животных в 5-й группе сохранялась тенденция к снижению митотического индекса, при этом наблюдали рост уровня апоптоза и некроза.

К 10-м суткам после нанесения резаной раны у животных 5-й и 6-й групп отмечали рост митотической активности, а также снижение некротической гибели клеток, что отразилось в значениях исследуемых соотношений. Так, в 5-й группе соотношение митотического индекса к апоптозному и митотического индекса к некротическому составило 1:1,7 и 1,4:1; а в 6-й - 1,3:1 и 5,7:1 соответственно.

При термическом ожоге у животных 7-й и 8-й групп к 2-м суткам после повреждения на гистологических срезах, отобранных по периферии раны, отмечали низкую пролиферативную активность эпидермиса и дермы. В центре раны отмечали некроз, при этом коллагеновые волокна и окружающие их клетки представляли собой гомогенную массу. Среди погибших клеток зафиксированы нейтрофилы и макрофаги. Визуализируются элементы разрушенных волосяных фолликулов. К 4-м суткам у животных 7-й и 8-й групп по периферии раны наблюдали увеличение толщины эпидермиса относительно 2-х суток после повреждения на 24,5% и 33,6% соответственно. У крыс 7-й группы в дерме краев раны отмечали отек, при этом сосочковый и сетчатый слои инфильтрированы нейтрофилами. В центре раны происходит полное расплавление коллагеновых пучков. Волосяных фолликулов не обнаружено. В то время как в дерме крыс 8-й группы, при снижении интенсивности отека, наблюдали образование грануляционной ткани, в которой формировались кровеносные сосуды. Гистологическая картина, отмеченная на 10-е сутки после повреждения у животных 7-й группы, свидетельствовала о преобладании в центре раны воспалительно-дегенеративных процессов. В глубоких слоях дермы среди некротизированных тканей отмечали немногочисленные фибробласты, сосуды повреждены и слабо дифференцируются. По периферии раны в эпидермисе наблюдали пролиферацию клеток базального слоя с явлениями миграции на поверхность незрелой грануляционной ткани. В дерме по периферии раны отмечены единичные волосяные фолликулы, а также признаки активизации микроциркуляции. У животных 8-й группы к этому времени под образовавшимся струпом, в центре раны подрастал эпидермальный регенерат. В дерме, под базальным слоем эпидермиса, выявлялись периваскулярно расположенные клетки фибробластического ряда. Практически у всех животных в дерме выявлялись волосяные фолликулы (до 2-3 в поле зрения). Новообразованные кровеносные сосуды, имели упорядоченное расположение, постепенно формировали слой сосудистых петель, типичный для нормально организованной грануляционной ткани.

У животных 8-й группы уже к 4-м суткам наблюдали повышение митотического индекса и снижение уровня клеточной гибели, что свидетельствует о преобладании процессов пролиферации, а соответственно о повышении восстановительной активности. Наряду с этим, у животных 7-й группы к этим же суткам продолжал нарастать апоптозный и некротический индекс. К 10-м суткам в 8-й группе соотношение митотического индекса к апоптозному составило 1:2,2; а митотического индекса к некротическому - 1:2,3; а у животных 7-й группы - 1:5,9 и 1:7,9 соответственно.

Таким образом, независимо способа заживления повреждения новый биологически активный препарат «Биорегенерин-гель» сокращает сроки заживления в среднем на 6 дней, стимулирует митотическую активность эпителия и соединительной ткани, способствует формированию полноценных структурных элементов, что выражается в образовании и упорядочении расположения коллагеновых волокон, активном ангиогенезе, формировании придатков кожи на фоне снижения деструктивных процессов.

Гематологические показатели при различных типах повреждения кожи под влиянием разных форм биологически активного препарата

«Биорегенерин-гель»

У животных 5-й и 6-й групп к 2-м суткам эксперимента, наряду со снижением уровня гемоглобина и эритроцитов, выявлено повышение общего количества лейкоцитов, в том числе - сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов, по сравнению с установленными нормативами, что может свидетельствовать о развитии воспалительного процесса. При этом у животных 6-й группы уже к 4-м суткам установлено повышение уровня гемоглобина и числа эритроцитов, а общее количество лейкоцитов оставалось достаточно высоким. В то время как в 5-й группе достоверных изменений по исследуемым показателям не выявлено. К 10-м суткам у животных 5-й группы отмечали повышение уровня гемоглобина на 9,2% и снижение числа лейкоцитов на 14,5% по сравнению с 4-ми сутками. Количество моноцитов и сегментоядерных нейтрофилов у животных 5-й группы снизилось относительно 4-х суток на 30,1% и 31,3% соответственно. На эти же сутки в 6-й группе наблюдали повышение уровня гемоглобина на 28,6%, снижение числа моноцитов на 21,1% и сегментоядерных нейтрофилов - на 14,3% относительно 4-х суток после повреждения, что приближалось к результатам, полученным до повреждения.

При термическом ожоге у крыс 7-й и 8-й групп к 2-м суткам эксперимента отмечали достоверное снижение уровня гемоглобина (на 42,1% и 35,4%) и количества эритроцитов (на 32,2% и 24,3%), наряду, с повышением общего числа лейкоцитов (на 31,04% и 26,1%) по сравнению с контролем. Анализируя результаты гематологических исследований на протяжении всего эксперимента, лишь к 10-м суткам в обеих группах установлены достоверные изменения. Так, в 8-й группе уровень гемоглобина на 47,0% выше, а количество лейкоцитов на 11,5% ниже соответствующих значений, выявленных в 7-й группе на эти же сутки. У животных 7-й группы число сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов относительно 4-х суток после повреждения снизилось на 17,9% и 20%, а в 8-й группе - на 22,4% и 26,5% соответственно. При этом все значения, отмеченные в восьмой группе, приближались к контролю, зафиксированному у здоровых животных, и лежат в пределах общепринятой нормы для лабораторных крыс.

Таким образом, вне зависимости от механизма патогенеза раневого процесса и формы нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель», его использование способствует более интенсивному восстановлению уровня гемоглобина и количества эритроцитов крови, а также снижению (оптимизация) числа лейкоцитов, сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов на 6 суток раньше, чем в группах, где применяли традиционные средства.

Уровень белка, его фракций в сыворотке крови и активность
перекисного окисления липидов при различных типах повреждения кожи под влиянием биологически активного препарата «Биорегенерин-гель»

В 5-й и 6-й группах к 2-м суткам после повреждения отмечали снижение уровня общего белка в сыворотке крови на 23,9% и 26,5% соответственно, а также снижение уровня альбумина и повышение - глобулина, что характерно для воспалительного процесса. Уже к 4-м суткам после повреждения у крыс 6-й группы отмечали повышение значения исследуемого показателя на 16,8%, в то время как в 5-й группе достоверных изменений не выявлено. На 10-е сутки эксперимента в 6-й группе наблюдали повышение уровня общего белка на 22,7%, что на 14,1% выше, чем в 5-й группе. Соотношение альбуминов к глобулинам в 5-й группе составило 1:1,78; а в 6-й группе - 1:1,5; что практически соответствовало данным, установленным до эксперимента.

При термическом ожоге в обеих группах к 2-м суткам эксперимента, в сравнении с исходными значениями, отмечали снижение содержания общего белка в сыворотке крови на 27,7% и на 20,6% соответственно. При этом в 7-й группе соотношение альбумина к глобулину составило 1:2,23; а в 8-й - 1:2,13. К 4-м суткам достоверных изменений между значениями исследуемых показателей обеих групп не выявлено. К 10-м суткам в 8-й группе уровень общего белка на 18,4% превышал значение, выявленное у животных 7-й группы, находясь в пределах допустимых норм. В обеих группах отмечали повышение концентрации альбумина и снижение уровня глобулина, при этом в 7-й группе соотношение альбумина к глобулину составило 1:1,78; а в 8-й - 1:1,56.

Результаты исследований уровня МДА в крови белых крыс при термическом ожоге под влиянием нового препарата «Биорегенерин-гель» в сравнении с традиционными средствами представлены в таблице 2.

Таблица 2

Динамика уровня МДА в крови белых крыс сток Wistar при термическом повреждении кожи под влиянием препарата «Биорегенерин-гель», (M±m)

Сутки эксперимента

Уровень МДА нмоль/мл.

7 группа (n=30)

8 группа (n=30)

до эксперимента (контроль)

6,62±0,45

2-е сутки

14,05±0,85

13,38±0,57

4-е сутки

15,86±0,61

11,47±0,92*

10-е сутки

10,29±0,53

6,93±0,68*

7 группа - использовали актовегин-гель и гентамициновую мазь (1:1);

8 группа - использовали препарат «Биорегенерин-гель».

В обеих группах отличия между разными сутками после ожога достоверны.

*(P<0,05)- в сравнении с данными 7-й группы; (P<0,05) - в сравнении с данными контроля.

В обеих группах к 2 суткам после ожога отмечена достоверная динамика нарастания уровня МДА, которое продолжается до 4-х суток при использовании актовегин геля в комплексе с гентамициновой мазью, а при применении препарата «Биорегенерин-гель» уже с этих суток установили достоверное снижение значения исследуемого показателя. К 10-м суткам, относительно 4-х суток у крыс обеих групп отмечали снижение уровня МДА в крови: в 7-ой группе - на 35,1 %, а в восьмой - на 39,6 %. При этом значение данного показателя в восьмой группе практически достигло исходного уровня, в то время как в седьмой группе оставалось выше него на 48,5% (табл. 2).

Таким образом, в группах, где использовали новый препарат «Биорегенерин-гель» независимо от типа повреждения отмечали повышение уровня общего белка и снижение белков глобулиновой фракции раньше, чем при использовании традиционных средств. Применение препарата «Биорегенерин-гель» при ожоге способствует снижению активности малонового диальдегида в более короткие сроки.

Иммунологические и цитохимические показатели крови у крыс
с различными типами повреждения кожи под влиянием нового
биологически активного препарата «Биорегенерин-гель»

У животных 5-й, 6-й, 7-й и 8-й групп, как под влиянием препарата «Биорегенерин-гель», так и при использовании традиционных средств отмечали повышение изменение соотношения популяции лимфоцитов вплоть до 10-х суток эксперимента. К 10-м суткам у животных в группах, где использовали «Биорегенерин-гель» установлено снижение количества CD8a на 11,3% и 13,8% и восстановление числа CD 19 по сравнению с результатами, выявленными в группах, где использовали традиционные средства.

У животных, которым применяли различные формы нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель», уже к 4-м суткам отмечали изменение ферментативной активности в нейтрофилах, характеризующееся снижением активности КФ и ЩФ, СДГ, наряду с повышением КБ, МПО, НАДФ-оксидазы и Г-6-Ф-азы. Результаты функциональной активности нейтрофилов и динамика популяции лимфоцитов свидетельствуют об ингибировании ферментов, снижении интенсивности воспалительного процесса и повышении пролиферативной активности.

ВЫВОДЫ

  1. Регенераторный потенциал кожи белых крыс сток Wistar, характеризующийся комплексом ее морфофункциональных показателей и физиологическими особенностями организма, на протяжении репродуктивного периода онтогенеза не одинаков, что определяет и динамику репарации при повреждении. Наиболее интенсивно процесс репаративной регенерации протекает в возрасте от 5 до 9 месяцев, а на заключительном этапе репродуктивного периода онтогенеза (18 месяцев) скорость восстановительных процессов снижается.
  2. На всех этапах репродуктивного онтогенеза установлена коррелятивная взаимосвязь между непосредственными критериями регенерации (митотический и апоптозный индекс), степенью повреждения кожи (некротический индекс) и всеми исследуемыми морфофункциональными показателями организма (гематологическими, цитохимическими и биохимическими), что обусловливает этиопатогенетическую целесообразность комплексной оценки репаративной активности, являющейся основой для рационального выбора регенеринстимулирующих средств с учетом возрастного периода.
  3. Репаративная регенерация кожи под влиянием нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель» вне зависимости от его формы (гель и нить) и типа повреждения протекает на 6 дней быстрее, в сравнении с традиционными препаратами актовегин-гель и гентамициновая мазь (1:1), а также обычной хирургической нитью.
  4. Клиническая оценка репаративной активности кожи под влиянием препарата «Биорегенерин-гель» свидетельствует об улучшении общего состояния животных, уменьшении количества раневого экссудата, ускорении лизиса некротизированных тканей, формировании зоны демаркационного воспаления, раннем образованием грануляции и быстром сокращением размеров раны.
  5. Динамика гистологических показателей кожи белых крыс под влиянием препарата «Биорегенерин-гель» при любом типе повреждения свидетельствует об активизации пролиферативной активности клеток базального слоя эпидермиса, фибробластов, интенсивном образовании коллагеновых волокон и кровеносных сосудов различного диаметра уже к 4-м суткам.
  6. Баланс клеточной пролиферации, запрограммированной и индуцированной гибели клеток в коже под влиянием различных форм препарата «Биорегенерин-гель» уже к 4-м суткам после повреждения смещается в сторону митоза. К 10-м суткам после моделирования резаной раны соотношение уровня митоза к уровню апоптоза составило 1,3:1; а митоза к некрозу - 5,7:1. При термическом ожоге уровень апоптозного и некротического индекса у крыс под влиянием препарата «Биорегенерин-гель» был ниже, а митотический индекс - в 3,5 раза выше, чем при использовании традиционных средств.
  7. Использование препарата «Биорегенерин-гель» при порезах и термических ожогах сопровождается восстановлением гемограммы в целом, что заключается в повышении уровня гемоглобина на 28,6% и 35,4%, а эритроцитов - на 8,4% и 28,5% соответственно, и нормализацией лейкоформулы, заключающейся в снижении сегментоядерных нейтрофилов на 14,3% и 22,4%, и моноцитов 21,1% и 26,5% соответственно.
  8. Применение препарата «Биорегенерин-гель» сопровождается нормализацией уровня функциональной активности нейтрофилов, что заключается в повышении уровня КБ, МПО, НАДФ-оксидазы, Г-6-Ф-азы и снижении КФ, ЩФ, СДГ, а также коррекцией соотношения лимфоцитов с различными кластерами дифференцировки CD3, CD4, CD8a, CD19, заключающейся в снижении числа цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8a) и восстановлении количества В-лимфоцитов (CD19).
  9. Репаративный процесс в коже под влиянием препарата «Биорегенерин-гель» при нанесении резаной раны и термическом ожоге сопровождается повышением уровня общего белка на 22,7% и 17,1% соответственно, восстановлением альбумин-глобулинового соотношения до 1:1,5; а также снижением активности малонового диальдегида на 39,6% при термическом ожоге.

ПРАКТИЧЕСКИЕ рекомендации

1. Показатели регенераторного потенциала кожи белых лабораторных крыс в ходе репродуктивного периода онтогенеза могут быть использованы в качестве нормативных и диагностических критериев, а также в научных целях при испытании других препаратов на этом виде животных.

2. Научные разработки и патентная документация могут служить основой для проведения расширенных доклинических и клинических испытаний и организации дальнейшего производства с целью использования нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель» для животных и человека при различных повреждениях кожных покровов.

3. Материалы диссертационной работы могут быть использованы при составлении учебно-методических материалов и организации учебного процесса по биологии размножения и развития, гистологии, хирургии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

  1. Затона, Е.Г. Состояние микроциркуляторного русла и показатели развития эмбриона под влиянием модулированного излучения полупроводникового лазера / Е.Г. Затона // Доклады Московского общества испытателей природы: Материалы третьего Всероссийского конкурса научных студенческих работ, посвященного 295-летию М.В. Ломоносова - М.: Изд-во «Графикон», 2006. - Т. 38 - С. 89-90.
  2. Тимченко, Л.Д. Некоторые показатели развития куриных эмбрионов под влиянием низкочастотного лазерного облучения / Л.Д. Тимченко, Е.Г. Затона // Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе: Материалы 51-й научно-методической конференции «Университетская наука - региону», посвященная 75-летию СГУ. - Ставрополь: Изд-во СГУ, 2006. - С. 207-210.
  3. Тимченко, Л.Д. Испытание эффективности противоожоговых пластин «Биорегенерин ПП-1» / Л.Д. Тимченко, И.В. Ржепаковский, В.Н. Вакулин, Е.Г. Затона, М.В. Сварич // Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе: Материалы 52-й научно-методической конференции «Университетская наука - региону». - Ставрополь: Изд-во СГУ, 2007. - С. 240-242.
  4. Затона, Е.Г. Новые средства для повышения регенеративных свойств кожи и слизистых оболочек на основе биологически активной субстанции «Иммовит» / Е.Г. Затона, М.В. Сварич // III ежегодная научная конференция студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН: Тезисы докладов. - Ростов на Дону: Изд-во ЮНЦ РАН, 2007. - С. 20-21.
  5. Тимченко, Л.Д. Моделирование и изучение биологически активных препаратов и биоматериалов для активизации процесса регенерации тканей живого организма / Л.Д.Тимченко, М.В. Сварич, Е.Г. Затона // Сборник конкурсных работ Всероссийского смотра-конкурса научно-технического творчества студентов высших учебных заведений «ЭВРИКА-2007». - Новочеркасск: Изд-во Оникс +, 2007. - С.133-134.
  6. Тимченко, Л.Д. Морфологические показатели и общий белок крови белых крыс в заключительном периоде онтогенеза под влиянием нового биологически активного препарата «Биокомфорт» / Л.Д. Тимченко, Е.Г. Затона, М.В. Сварич, И.В. Ржепаковский, В.Н. Вакулин // Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе. - Ставрополь: СГУ, 2008. - С. 179-182.
  7. Затона, Е.Г. Влияние лазерного облучения куриного эмбриона на уровень альфа-фетопротеина в эмбрионально-яичной массе / Е.Г. Затона // IV ежегодная научная конференция студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН: Тезисы докладов. - Ростов-на-Дону: ЮНЦ РАН, 2008. - С. 11-12.
  8. Затона, Е.Г. Влияние биологически активного препарата «Биорегенерин-гель» на концентрацию малонового диальдегида в крови белых крыс при термических повреждениях / Е.Г. Затона, М.В. Сварич, Н.М. Хлыстунова // IV ежегодная научная конференция студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН: Тезисы докладов. - Ростов н/Д: Изд-во ЮНЦ РАН, 2008. - С. 12-13.
  9. Тимченко, Л.Д. Экспериментальное обоснование выбора оптимальных сроков развития и путей повышения биологической активности тканей куриного эмбриона с целью использования при разработке биологически активных препаратов / Л.Д. Тимченко, И.В. Ржепаковский, А.П. Трунова, Е.Г. Затона, М.В. Сварич // Астраханский медицинский журнал (приложение): Материалы 6-й международной научно-практической конференции «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (г. Астрахань, 8-11 сентября 2008 г.). - 2008. - № 3. - С. 205-208.
  10. Затона, Е.Г. Белковый обмен у белых крыс линии вистар в репродуктивном и заключительном периоде развития / Е.Г. Затона, М.В. Походенко // V ежегодная научная конференция студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН: Тезисы докладов. - Ростов н/Д: Изд-во ЮНЦ РАН, 2009. - С.18-19.
  11. Тимченко, Л.Д. Сравнительная оценка цитохимических показателей нейтрофилов крыс репродуктивного и заключительного этапов онтогенеза / Л.Д. Тимченко, Е.Г. Затона, М.В. Походенко, О.В. Логвиненко // Проблемы развития экологии и биологии на Северном Кавказе: Материалы 54 научной конференции «Университетская наука - региону». - Ставрополь: Изд-во СГУ, 2009. - С. 71-74.
  12. Тимченко, Л.Д. Оценка функциональной активности лимфоцитов под влиянием биологически активных препаратов при разных повреждениях кожи у лабораторных крыс репродуктивного и заключительного периода онтогенеза / Л.Д. Тимченко, Е.Г. Затона, М.В. Походенко // Вестник МГОУ. Серия «Естественные науки». - 2009. - № 4. - С. 163-168.
  13. Затона, Е.Г. Репаративная регенерация кожи лабораторных крыс в репродуктивном периоде онтогенеза под влиянием нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель» / Е.Г.Затона // VI ежегодная научная конференция студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН: Тезисы докладов. - Ростов н/Д: Изд-во ЮНЦ РАН, 2010. - С. 19-20.
  14. Тимченко, Л.Д. Ферментативная активность нейтрофилов лабораторных крыс в репродуктивном периоде онтогенеза при повреждении покровных тканей под влиянием нового биологически активного препарата на основе эмбрионально-яичной массы / Л.Д. Тимченко, Е.Г. Затона, М.В. Походенко // Вестник МГОУ. Серия «Естественные науки». - 2010. - № 1. - С. 71-75.
  15. Тимченко, Л.Д. Влияние нового биологически активного препарата «Биокомфорт» на ферментативную активность нейтрофилов лабораторных крыс заключительного периода онтогенеза при повреждении покровных тканей / Л.Д. Тимченко, М.В. Походенко, Е.Г. Затона, И.В. Ржепаковский // Аграрная Россия. - 2010. - № 2. - С. 32-34.
  16. Тимченко, Л.Д. Морфологические особенности кожи белых крыс в заключительный период онтогенеза / Л.Д. Тимченко, М.В. Походенко, Е.Г. Горяйнова, И.В. Ржепаковский // Современные научно-практические достижения в морфологии животного мира: Материалы I Международной научно-практической интернет конференции. - Брянск: Изд-во Ладомир, 2011. - С. 46-48.
  17. Горяйнова, Е.Г. Гистологическая оценка влияния препарата «Биорегенерин-гель» на регенераторную способность кожи белых крыс линии Wistar при экспериментальном ожоге / Е.Г. Горяйнова // Биоразнообразие, биоресурсы, новые материалы и здоровье населения региона: Материалы 56-й научно-методической конференции «Университетская наука - региону». - Ставрополь: Изд-во СГУ, 2011. - С. 152-158.
  18. Горяйнова, Е.Г. Особенности раневого процесса кожи белых крыс при термической травме под влиянием нового биологически активного препарата «Биорегенерин-гель» / Е.Г. Горяйнова // Биоразнообразие, биоресурсы, новые материалы и здоровье населения региона: Материалы 56-й научно-методической конференции «Университетская наука - региону». - Ставрополь: Изд-во СГУ, 2011. - С. 159-162.
  19. Горяйнова, Е.Г. Динамика апоптозного, некротического и митотического индексов в коже белых крыс линии Wistar в репродуктивном периоде онтогенеза в норме и при повреждении / Е.Г. Горяйнова // Современные проблемы теории и практики инновационного развития АПК: Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 30-летию ФГОУ ВПО КБГСХА им. В.М. Кокова. - Нальчик: Изд-во КБГСХА, 2011. - С. 107-109.
  20. Горяйнова, Е.Г. Уровень общего белка и его фракций в сыворотке крови белых крыс на протяжении репродуктивного периода онтогенеза в норме и в процессе заживления резаной раны / Е.Г. Горяйнова // Современные проблемы теории и практики инновационного развития АПК: Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 30-летию ФГОУ ВПО КБГСХА им. В.М. Кокова. - Нальчик: Изд-во ООО «Полиграфсервис и Т», 2011. - С.109-111.
  21. Патент № 2433171 РФ. Способ получения биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы для приготовления противоожоговой пластины и противоожоговая пластина на его основе / Л.Д. Тимченко, И.В. Ржепаковский, В.Н. Вакулин, Е.Г. Затона, М.В. Походенко. - Приоритет от 16.06.2010; Опубл. 10.11.2011. - Бюл. № 31.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Г-6-Ф-аза - глюкозо-6-фосфатаза

ПОЛ - перекисное окисление липидов

КБ - катионные белки

СДГ - сукцинатдегидрогеназа

КФ - кислая фосфатаза

ЩФ - щелочная фосфатаза

МДА - малоновый диальдегид

CD3 - Т-лимфоцит

МПО - миелопероксидаза

CD4 - Т-хелпер

НАДФ - оксидаза - никотинамидадениндинуклеотидфосфат-оксидаза

CD8а - цитотоксический Т-лимфоцит

CD19 - В-лимфоцит






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.