WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Тихоокеанском институте биоорганической химии им. Г.Б.Елякова

Дальневосточного отделения Российской академии наук

На правах рукописи

Артюков  Александр Алексеевич

Разработка биотехнологических основ получения некоторых биологически активных веществ из океанического сырья

03.00.14 Биологические ресурсы

Диссертация

в виде научного доклада на соискание ученой степени

доктора биологических наук

Владивосток  -  2012

Научный консультант:                доктор химических наук, профессор,

Козловская Эмма Павловна

Официальные оппоненты:                Зориков Петр Семенович,

доктор биологических наук, профессор,

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Горнотаежная  станция Дальневосточного отделения Российской академии наук, директор

                                               Пивненко Татьяна Николаевна,

доктор биологических наук, профессор,

ФГУП Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр, зав. сектором биохимии

Крылов Александр Васильевич,

доктор биологических наук, профессор,

Амурский филиал Федерального государственного бюджетного учреждения науки Ботанический сад-институт Дальневосточного отделения Российской академии наук, главный научный сотрудник

Ведущая организация: Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Приморская государственная сельскохозяйственная академия"

Защита состоится  « 30 »  мая  2012 г. в  10.30  часов на заседании диссертационного совета Д. 005. 005. 02 при Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова Дальневосточного отделения Российской академии наук (ТИБОХ ДВО РАН) по адресу: 690022, г. Владивосток, проспект 100 лет Владивостоку, 159, ТИБОХ ДВО РАН.

Факс: (4232)314050, e-mail: komand@piboc.dvo.ru

С диссертацией в виде научного доклада можно ознакомиться в филиале Центральной научной библиотеке ДВО РАН Тихоокеанского института биоорганической химии ДВО РАН и на сайте ВАК: vak.ed.gov.ru

Диссертация в виде научного доклада разослана  «­­­­­­­­­­­­­­­­  »       2012 г

Ученый секретарь диссертационного

совета Д 005.005.02

кандидат химических наук, доцент  Командрова Н. А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Биотехнология является одной из ведущих отраслей науки и промышленности в большинстве экономически развитых стран мира. В дальнейшем ее роль, в связи с сокращением традиционных источников биологического сырья на планете, будет только возрастать. Основой биотехнологии является использование современных наукоемких технологий в производстве лекарственных, пищевых, кормовых и других ценных веществ, необходимых для обеспечения нормальной жизнедеятельности человека, а также в сохранении биоразнообразия и воспроизводстве природного и сельскохозяйственного сырья. По оценкам ФАО, 25-30 миллионов тонн совокупного мирового вылова теряются в результате неправильного обращения с сырьем и примерно столько же теряется в качестве отходов промышленной переработки. Эти потери представляют собой очень большой сырьевой резерв, который не используется должным образом. Морские гидробионты являются уникальным возобновляемым сырьем для производства природных соединений различных по химическому строению и биологической активности.

При обработке промысловых морских организмов отходы составляют до 60 % от массы улова. Основные исторически сложившиеся направления использования таких отходов – производство кормовой муки и жира. В настоящее время ни у кого не вызывает сомнения тот факт, что отходы промышленной переработки многих морских организмов, в особенности, беспозвоночных (моллюсков, иглокожих, ракообразных), водорослей, представляют ценное сырье для получения биологически активных веществ (БАВ) различной химической природы. Эти биологически активные вещества, обладающие противомикробным, противовирусным и противораковым действием, могут эффективно использоваться для профилактики и лечения различных заболеваний иммунной и сердечно-сосудистой систем, суставов, коррекции липидного и углеводного обмена. Лекарства морского происхождения играют значительную роль в народной медицине народов, населяющих побережье Мирового океана. Особую актуальность эта проблема приобретает в настоящее время с появлением ,,заболеваний века,, - иммунодефицита, лучевого поражения, злокачественных новообразований. Состояние здоровья населения России усугубляется в значительной степени неблагоприятной экологической обстановкой и недоброкачественными пищевыми продуктами и напитками. Только 15 % городского населения проживает на территориях с уровнем загрязнения атмосферного воздуха в пределах гигиенических нормативов. Улучшение экологической обстановки в регионах невозможно без разработки новой методологии для оценки экологических факторов и внедрения современных наукоемких технологий утилизации и переработки отходов производств. Для сохранения здоровья населения необходимо создавать новые функциональные продукты, направленные на снижение воздействия неблагоприятных факторов на здоровье населения, а в отдельных случаях устраняющих их.

Производство и широкое применение БАВ из морских организмов ограничивается в настоящее время высокой себестоимостью этих препаратов. И одним из путей снижения стоимости БАВ является создание комплексных малоотходных технологий переработки сырья морского происхождения, включая производство пищевой, кормовой, технической продукции, биологически активных добавок, фармакологических субстанций и лекарственных препаратов.

Цель и задачи исследований. Цель диссертационной работы:

- разработать комплексные технологии получения биологически активных веществ из морских гидробионтов (БАВ) для применения в фармакологической, парафармацевтической и пищевой промышленности;

- создать на их основе лекарственные и парафармацевтические препараты и разработать рекомендации по их применению;

-расширить сырьевую базу производства БАВ и лекарственных субстанций на их основе за счет введения новых промысловых видов и использования отходов рыбоперерабатывающей промышленности.

Для достижения поставленной цели сформулированы и последовательно реализованы следующие задачи:

-разработаны комплексные технологии переработки моллюсков, иглокожих, ракообразных и водорослей;

- технологии масштабированы, внедрены на Опытном производстве ТИБОХ ДВО РАН и адаптированы к конкретным производствам;

-разработаны рецептуры новых лекарственных и парафармацевтических препаратов;

-выпущены опытные партии БАВ и продуктов на их основе;

-проведены испытания медико-биологических свойств БАВ и продуктов на их основе;

-разработаны рекомендации по использованию парафармацевтических препаратов;

-создано производство лекарственных субстанций на Опытном производстве ТИБОХ ДВО РАН.

Научная новизна. Работа охватывает многолетние исследования, связанные с поиском новых БАВ в океаническом сырье, его ресурсоведческой оценкой, выполнением всего цикла создания технологий от лабораторных методик до опытно-промышленного производства.

Впервые разработаны технологии получения биологически активных соединений из ряда непромысловых видов морских гидробионтов, а также отходов переработки марикультурного сырья, рыб и крабов.

       Впервые исследованы физико-химические и фармакологические свойства полисахаридов (зоостерина, фукоидана, уронофукана), низкомолекулярных соединений различной химической структуры (полигидроксинафтохинонов, каротиноидов, розмариновой кислоты, флавоноидов и фенолкарбоновых кислот), белков (лектинов, гемоцианина, оксигемоглобина и коллагенового белка голотурий), ферментов (протеолитических и др.), а также продуктов биокаталитической конверсии белков – пептидов морского коллагена. Впервые изучен водорастворимый представитель витаминов группы P – 7,3’-дисульфат лютеолин.

Выполненные исследования позволяют создать производство БАВ для фармацевтической, парафармацевтической пищевой и косметической промышленности. Новизна принятых в работе научных и технических решений подтверждена 6 международными патентами (USA, EP и WO) и 53 патентами Российской Федерации.

Практическая значимость работы. В результате проведенного скрининга выявлены биоресурсы морского происхождения, которые содержат БАВ, обладающие протеолитической и и коллагенолитической активностью, противовирусным, антикоагулянтным и противовоспалительным действиями. Определены запасы наиболее перспективных источников БАВ, разработаны методы их добычи, хранения и транспортировки. Исследован состав отходов некоторых рыбоперерабатывающих производств и разработаны способы извлечения из них биологически активных субстанций. Созданы высокоэффективные технологии получения биологически активных веществ из морских гидробионтов и промышленных отходов рыбоперерабатывающих предприятий. Разработаны пилотные установки для выпуска опытно-промышленных партий морских полисахаридов, белков и ферментов, низкомолекулярных соединений, пептидов –  продуктов биокаталитической конверсии белков морских гидробионтов.

Разработаны опытно-промышленные регламенты получения лекарственных субстанций эхинохрома А и коллагеназы камчатского краба для выпуска лекарственных препаратов серии “Гистохром” и ферментного препарата “Коллагеназа КК”. Подготовлена и утверждена нормативно-техническая документация на производство лекарственных средств и биологически активных добавок. На основании результатов, полученных ТИБОХ ДВО РАН, Федеральным управлением медико-биологических и экстремальных проблем при Минздраве России оформлены и утверждены “Методические указания по применению зостерина в лечебно-профилактическом питании на свинцово-цинковых производствах и предприятиях поливалентных металлов” (Москва, 1995г.). В 2003 году постановлением Министерства труда РФ разрешено использовать напитки группы VITA, содержащие пектин морской травы Zostera, как лечебно-профилактические средства охраны труда взамен молока. Технология получения пектина (зостерина) была дважды реализована по неисключительной лицензии на рыбокомбинатах Приморского края. Технология получения фукоидана из Laminaria japonica также была реализована по неисключительной лицензии на ООО ”Биополимер”. В ТИБОХ ДВО РАН выпускаются в настоящее время биологически активные добавки к пище: “Гербамарин”, ”Экстракт морского ежа”, “Зостерин”, “Марихит”,”Хитохром С” и др. Биологически активные добавки к пище “Гербамарин” получили серебряную медаль на Международной выставке в Брюсселе как высокотехнологичная продукция и входили в тройку самых реализуемых на территории России БАД.

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. Биоресурсы морского происхождения – богатый источник БАВ.
  2. Биологически активные субстанции, полученные из океанического сырья и представляющие собой уникальные полисахариды, белки и витаминоподобные соединения, не продуцируемые другими видами лекарственного сырья, но накапливающиеся в модифицированном виде (производные) в морских гидробионтах, могут являться основой нового направления – морской фармакологии.
  3. Разработанные комплексные технологии получения  биологически активных веществ из отходов промышленной переработки океанического сырья позволяют значительно расширить сырьевую базу производства БАВ и рационально использовать природные ресурсы.
  4. Особенности механизма действия пигментов морских ежей выделяют их из ряда известных биоантиоксидантов и открывают перспективу для создания на их основе лекарственных препаратов нового поколения – корректоров метаболизма.
  5. Пектин морских трав семейства Zosteraceae (зостерин) обладает широким спектром биологической активности, проявляя антидотное, гипохолестеринемическое, антибактериальное, геропротекторное, противоязвенное и антиаллергическое действие.
  6. Полифенольные соединения морских трав семейства Zosteraceae (розмариновая кислота, 7,3’-дисульфат лютеолина, лютеолин, диосметин и хризоэринол, кофейная кислота и ее этиловый эфир) представляют собой уникальный набор новых лекарственных субстанций противовоспалительного, иммуномодулирующего, канцерпревентивного и антивирусного действия.
  7. Разработанная универсальная технология комплексной переработки морской звезды P. pectinifera позволяет получать каротиноидные препараты, обогащенные астаксантином и проявляющие иммуномодулирующую, противовоспалительную и антиоксидантную активность.
  8. Продукт биотрансформации коллагеновых белков дальневосточного трепанга, апостатин, обладает выраженными антикоагулянтным и противоопухолевым действиями, что позволяет разработать на его основе новые средства профилактики заболеваний опорно-двигательного аппарата и сердечно-сосудистой системы.

Личный вклад автора заключается в теоретическом обосновании проблемы, выборе направления исследования и непосредственном участии в выполнении экспериментальных и методологических исследований, а также создании и оформлении нормативно-технической документации, внедрении технологий в производство и выпуске опытно-промышленных партий продукции. Анализ результатов медико-биологических исследований БАД, их теоретическое обоснование, разработка концептуальных представлений об адаптационном действии полигидроксилированных нафтохинонов как метаболических корректоров осуществлены непосредственно автором.

Апробация работы. Исследования проводились в соответствии с тематическим планом НИР Тихоокеанского института биоорганической химии ДВО РАН, государственными программи, хозяйственными договорами в период с 1987 по 2011 гг.

Различные разделы работы доложены на V Всесоюзной конференции Методы получения и анализа биохимических препаратов” (Юрмала, 1987); на Всесоюзном семинаре “Проблемы производства продукции из красных и бурых водорослей” (Владивосток, 1987); на Всесоюзном совещании “Биологически активные вещества при комплексной утилизации гидробионтов” (Владивосток, 1988); на X, XI и XIII Международных конференциях по лектинам (Prague, 1988; Tartu, 1989 и Berlin, 1991 ); на Всесоюзной научно-практической конференции “Иерсиниозы (микробиология, эпидемиология, клиника, патогенез, лабораторная диагностика)” (Владивосток, 1989); на Региональной конференции Сибири и Дальнего Востока "Перспективы развития малотоннажной. химии" (Красноярск, 1989); на VI, IX и XI Международных симпозиумах по морским природным продуктам (Senegal, Dakar, 1989; Townsville, Queensland, 1998; Italy, Sorrento, 2004); на Всесоюзной конференции “Методы получения, анализа и применения ферментов” (Юрмала, 1990); на Всесоюзной конференции по химии пищевых веществ, свойствам и использованию биополимеров в пищевых продуктах (Могилев, 1990); на III Всесоюзном совещании "Культивирование клеток животных и человека" (Пущино, 1990); на Рабочем совещании “Иммуномодуляторы природного происхождения” (Владивосток, 1990); на Всесоюзном совещании "Биологически активные вещеcтва гидробионтов - новые лекарственные, лечебно-профилактактические и технические препараты" (Владивосток, 1991); на Всесоюзной конференции “Рациональное использование биоресурсов Тихого океана“ (Владивосток, 1991); на 8 Международной конференции по применению химических веществ в лечении рака (Japan, Kyoto, 1993); на Межгосударственной научной конференции "Комплексная переработка пищевого сырья и основные направления расширения ассортимента продуктов питания" (Владивосток, 1993); на Региональной  Ассамблее “Здоровье населения Дальнего Востока” (Владивосток: Уссури, 1996); на Научной конференции ТИБОХ “Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии” (Владивосток, 1998); на III Дальневосточной региональной конференции с всероссийским участием “Новые научные технологии в Дальневосточном регионе ” (Благовещенск, 1999); на 5-th  International marine biotechnology conference (Townsville, Australia, 2000); на научной конференции Биоактивные вещества из морских макро- и микроорганизмов и наземных растений Дальнего Востока (Владивосток, 2001); на 1-ом Международном конгрессе "Биотехнология – состояние и перспективы развития" (Москва, 2002); на III Съезде Биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002);  на VII и VIII Международных съездах “Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения ” (Санкт-Петербург-Пушкин, 2003; Финляндия, Миккели, 2004); на 1-й и 2-й Региональных научных конференциях “Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии” (Владивосток, 2004; 2006); на V Дальневосточном региональном конгрессе с международным участием “Человек и лекарство” (Владивосток, 2008); на XVI Росcийском  симпозиуме  по  растровой  электронной  микроскопии  и  аналитическим  методам  исследования  твердых  тел  РЭМ’2009 (Черноголовка, 2009); на Научно-практической  конференции “Биологически  активные  вещества:  фундаментальные  и  прикладные вопросы получения и применения” (Новый Свет, Крым, Украина, 2009);  на Научном форуме “Дни  иммунологии в Санкт-Петербурге 2009” (Санкт-Петербург, 2009); на Конференции с международным участием “Актуальные проблемы химии природных соединений” (Узбекистан, Ташкент, 2010); на Межрегиональном форуме “Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии – междисциплинарные проблемы” (Санкт-Петербург, 2010);  международной научно-технической конференции “Инновационные технологии переработки продовольственного сырья” (Владивосток, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 174 научных работ, среди которых 1 монография, 39 статей, (в том числе 26 – в журналах, рекомендованных ВАК РФ) и 60 российских и международных патентов.

Благодарности. Автор выражает свою искреннюю признательность за помощь в работе, консультации и проведение медико-биологических испытаний сотрудникам ТИБОХ ДВО РАН, а также коллегам из других институтов (ТИНРО-Центр, НИИЭМ СО РАМН, ВГМУ и др.). Особую благодарность автор выражает первому директору института академику Георгию Борисовичу Елякову за создание лаборатории биотехнологии и постоянную поддержку этого направления; д.х.н., профессору Людмиле Алексеевне Еляковой за всестороннюю поддержку исследований и д.х.н, профессору Козловской Эмме Павловне, моему научному консультанту, за многолетнее сотрудничество и неоценимую помощь.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Сбор и заготовку океанического сырья осуществляли во время командировок на предприятия рыбодобывающей и перерабатывающей промышленности Дальнего Востока (Сахалин, Камчатка, Приморье), на Морской экспериментальной станции ТИБОХ ДВО РАН, расположенной в бухте Троицы залива Посьет Японского Моря (Хасанский район Приморского края).

При исследовании противоопухолевой активности БАВ были использованы следующие штаммы опухолей мышей: лимфоидная лейкемия (1.1210), эпитермальная карцинома легкого Льюиса (LLC), солидные и асцитные варианты саркомы 37 и карциномы Эрлиха (тетраплоидный штамм). Все перечисленные штаммы получены из ВОНЦ РАМН (г. Москва). Клетки карциномы Эрлиха, адаптированные для роста in vitro, - из Института по изысканию новых антибиотиков РАМН (г. Москва). Эксперименты проводились на белых аллогенных мышах, линейных мышах C57BL/6, DBA/2, CBA/C3H, BALB/C и мышах-гибридах BDF1 (C57BL x DBA/2).

Индивидуальные биологически активные соединения из морских гидробионтов были получены непосредственно при разработке лабораторных методик и проанализированы физико-химическими методами (ЯМР, масс-спектрометрии ИК- и УФ-спектроскопии и другими аналитическими методами).

Клинические испытания биологически активных веществ и препаратов на их основе проводили с использованием всего современного арсенала биохимического и клинического анализа (определение холестерина, липидов, цитокинов, глюкозы, инсулина, С-пептида, печеночных проб и т.д.), имеющихся в Приморском кардиологическом центре и Медобъединении ДВО РАН (г. Владивосток).

Противовирусную активность БАВ в отношении вирусов иммунодефицита человека (ВИЧ) и клещевого энцефалита (ВКЭ) определяли на моделях in vitro (культуры клеток) и in vivo (лабораторные животные). Эксперименты с ВИЧ проводили в Научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи (г. Москва), а с ВКЭ – в НИИ эпидемиологии и микробиологии СО РАМН (г. Владивосток).

Результаты и обсуждение

1. Ракообразные: разработка технологии комплексной переработки крабов

1.1. Комплекс протеолитических ферментов Коллагеназа краба

       Многолетние исследования ферментов морских организмов, проводимые в ТИБОХ ДВО РАН показали, что наиболее перспективными источниками получения протеолитических ферментов в промышленных масштабах являются промысловые виды крабов. В настоящее время промысловое значение на Дальнем Востоке имеют три вида крабов: Paralithodes camtschaticus (камчатский), Paralithodes platypus (синий) и Paralithodes brevis (колючий). Общий объем вылова крабов составляет более 100 тысяч тонн в год. Согласно технологическим нормам для данного вида сырья отходы составляют 26% от массы сырца. Основными отходами производства продукции являются панцирь (10-15%) и внутренности краба (3-5%), которые в измельченном виде выбрасываются в море, что значительно ухудшает экологическую ситуацию в традиционных районах промысла. Внутренности краба содержат 70-80% воды, 10-15% белка, 3-10% жира. Панцирь краба в зависимости от возраста имеет следующий состав: хитин - 5-18%, вода - 60-85%, липиды - 0,2-0,8%, органический азот - 1,5-2,4% и минеральные соли - 9-12%. Таким образом, в море ежегодно сбрасывается 10-15 тысяч тонн органических соединений, в том числе 15 тысяч тонн белка. Следует отметить, что в течение последних десятилетий постоянно ощущается дефицит полноценного белкового питания для основной массы населения России.

       

Рис. 1. Схема комплексной переработки промысловых видов крабов

       В связи с вышесказанным ясно, что разработка технологии комплексной переработки отходов крабоперерабатывающей промышленности и ее внедрение в производство позволяет решить две проблемы: получить дешевый источник промышленных ферментов, полноценного белка и продуктов его гидролиза, минеральных добавок и сорбентов, а также улучшить экологическую ситуацию в районах промысла. Схема комплексной переработки крабов, разработанная в лаборатории биотехнологии ТИБОХ ДВО РАН приведена на рис.1.

       Нам удалось разработать достаточно простую и весьма эффективную схему выделения ряда индивидуальных ферментов (эластазы, коллагеназы, карбоксипептидаз А и Б) и комплекса протеолитических ферментов, названного нами “Коллагеназа”. Комплекс пептид-гидролаз “Коллагеназа” (ТУ 9281-009-02698170-93) обладает широким спектром действия и превосходит по удельной активности такие известные коммерческие препараты как “Проназа”, “Протелин”, “Террилитин”, “Субтилизин”, “Протосубтилин”,“Химопсин” и др., устойчив в диапазоне рН 4.8-12.0, стабилен в течение 4-х лет и обладает способностью гидролизовать нативные коллаген и эластин. Эти свойства и определили такие области его использования как медицина, ветеринария, косметическая, пищевая и кожевенная промышленность, производство моющих средств.

Изучение свойств комплекса пептид-гидролаз проводилось в рамках Государственной научно-технической программы “Мировой океан”. Разработка технологического процесса очистки “Коллагеназы” и выпуск опытных партий фермента осуществлялись в рамках Государственной научно-технической программы “Новейшие методы биоинженерии” (1992-2005 гг.). В настоящее время комплекс пептид-гидролаз “Коллагеназа” выпускается на опытно-экспериментальном участке ТИБОХ ДВО РАН.

       Медицина: Коллагеназа КК®, регистрационный номер 96/252/2, 96/252/7, 96/252/1. Приказ МЗ РФ № 252 от 18.06.1996г.

Лекарственный препарат представляет собой высокоочищенный комплекс коллагенолитических ферментов, который был зарегистрирован ТИБОХ ДВО РАН под торговой маркой “Коллагеназа КК”. МЗ РФ рекомендовал использовать препарат для ферментативного очищения ран различной этиологии, любой локализации и на любой стадии раневого процесса как сразу после проведения хирургической обработки и гемостаза, так и при лечении длительно незаживающих ран при наличии на их поверхности влажного некроза (особенно соединительнотканного происхождения) или избытка фибрина, мешающего заживлению. Сравнение активности известных коммерческих медицинских ферментов: “Химопсина”, “Террилитина”, “Карипазима”, “Протеазы С”, “Лизоамидазы” и “Коллагеназы КК” показало, что последняя обладает наиболее высокой некролитической и фибринолитической активностью и более эффективно очищает гнойные раны у экспериментальных животных.

Выпущена опытно-промышленная партия (100000 ампул) “Колагеназы КК” на АО “Биомед” им И.И.Сеченова в виде лиофильного порошка в ампулах по 250 ед. Клинические испытания проводились в Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова, Институте хирургии им. А.В. Вишневского РАМН и МНТК “Микрохирургия глаза” (г. Москва). Препарат использовали при лечении абсцессов, флегмон, гнойных бурситов, хронического остеомиелита (свищевая форма), парапроктита, карбункулов, подкожных панарициев и рожистых воспалений (буллезно-некротическая форма). Кроме того, в отделении экстренной хирургии Городской детской клинической больницы (г. Владивосток) Коллагеназу КК использовали для лечения детей с разлитым острым перитонитом. Совместно с Военно-медицинской академией (г. Санкт-петербург) разработаны способы лечения склеродермии и рубцов с использованием Коллагеназы КК

       На основе “Коллагеназы краба” и синтетического сорбента ”Гелевин” было создано перевязочное средство “Коллавин”. Сравнение сорбционно-литического эффекта “Коллавина” и известных перевязочных средств: “Гелевина”, “Лизосорба”, “Теральгима”, “Сипралина”, “Дальцекс-Трипсина”, “Профезима”, - показали, что при наличии в ранах большого количества некротических тканей, наиболее эффективным средством является “Коллавин”. Выпуск “Коллавина” осуществлен на базе опытного производства “Химико-фармацевтического института (г. Санкт-Петербург).

       Клинические испытания в Главном военном клиническом госпитале им Н.Н.Бурденко (одна тысяча ампул препарата была передана в МЧС) позволяют также рекомендовать “Коллагеназу КК” для использования в военно-полевой хирургии и при формировании аптечек для Гражданской обороны и МЧС.

       Ветеринария. На основе ферментного комплекса “Коллагеназа краба” созданы мази для лечения некробактериозов и других гнойно-некротических процессов у животных: ”Некролаза” (РУ № 000069-ОП, ТУ 10.07.093-92);”Колхит” (РУ № 000096-ОП, ТУ 9337-008-02698170-93);“Неогелаза” (РУ № 000095-ОП, ТУ 9337-006-02698170-93); “Хитокол” (РУ № 000097, ТУ 9937-007-02698170-93). Препараты успешно прошли расширенные клинические испытания в животноводческих хозяйствах Московской области и Приморского края и были рекомендованы Главным ветеринарным управлением к использованию на территории Российской Федерации.

       Пищевая промышленность. По данным многолетних исследований, известно, что морские беспозвоночные имеют в составе своих тканей белки, не уступающие по аминокислотному составу, а часто и превосходящие традиционные источники белкового питания по количеству незаменимых аминокислот. Технологический процесс производства гидролизатов, легко усвояемых белковых продуктов, из отходов перерабатывающей промышленности с использованием протеолитического комплекса “Коллагеназа краба” включает следующие стадии: измельчение сырья, ферментолиз, фильтрация или центрифугирование, упаривание, ультрафильтрация, сушка.

       По предложенной технологии выпускаются гидролизаты белков: краба (ТУ 9267-020-02698170-94); кальмара (ТУ 9267-025-02698170-94); рыбной муки (ТУ 9267-021-02698170-94); молок (ТУ 9267-012-02698170-94); мидии (ТУ 9267-022-02698170-94); сои (ТУ 9267-026-02698170-94); казеина (ТУ 9267-023-02698170-94); минтая (ТУ 9267-022-02698170-94) и желатина (ТУ 9267-024-02698170-94). Создана новая технология получения желатина с использованием “Коллагеназы краба”, которая прошла успешную апробацию на Московском желатиновом заводе. Пептиды желатина нашли широкое применение в питательных комплексах для спортсменов. На все виды гидролизатов утверждена требуемая нормативно-техническая документация. В малотоннажном объеме гидролизаты выпускаются на опытном заводе ТИБОХ ДВО РАН и используются при выпуске биологически активных добавок к пище “Гербамарин” (БАД) на ОАО “Уссурийский бальзам” с 1995 года. Пищевые гидролизаты всех указанных видов предназначены для использования в качестве белково-аминокислотной добавки при производстве продуктов питания и БАД. Гидролизаты и ферментный комплекс предназначены для использования в биотехнологии, в медицинской промышленности, других областях народного хозяйства и для реализации населению.

       Изучение физико-химических и иммунохимических свойств гидролизатов белков, полученных с использованием “Коллагеназы краба” показало, что они представлены средними и небольшими пептидами, аминокислотами и практически не содержат антигенных структур исходных белков (белков сои, кальмара, минтая, казеина и т.д.).

       Технологии производства белковых гидролизатов были разработаны в рамках Государственных программ: “Соя ”, “Дети России ”и “Рыба ”.

       Следует отметить, что использование “Коллагеназы краба” в пищевой промышленности не ограничивается только получением легко усвояемых белковых продуктов. Комплекс нашел широкое применение в пивоваренной промышленности для повышения качества солода, а также осветления и стабилизации пива. Выпуск новых сортов пива с использованием “Коллагеназы краба” (ТУ 9281-009-02698170-93) осуществлялся на Московском экспериментальном заводе напитков (1993-1997 гг.).

       Кожевенная промышленность. Разработана технология получения одежных кож и кож для верха обуви из сырья крупного рогатого скота, а также особо эластичных кож из свиного сырья с использованием ферментного комплекса “Коллагеназа краба” (ТУ 9281-009-026998170-93). Технология позволяет сократить общую продолжительность процесса, улучшить качество кож и экологическую ситуацию на кожевенных заводах за счет отказа от введения поверхностно-активных веществ и сульфида натрия на стадии “отмока” и двукратное сокращение количества сульфида натрия на стадии “золение”. Эффективность технологии была оценена на “Московском кожевенно-обувном комбинате” и кожевенном заводе им. Тельмана (АО “Роскон”, г. Москва). По физико-химическим свойствам кожи, выработанные с использованием “Коллагеназы краба”, соответствуют нормам ГОСТа 939-88.

       Косметика. В НПО “Косметология” МЗ РФ (г. Москва) было проведено экспериментальное изучение безопасности, фармакологических свойств и биохимических механизмов действия “Коллагеназы краба”, а также её влияния на морфологическую структуру кожи. На основании проведенных исследований рекомендовано использование комплекса ферментов “Коллагеназа краба” (ТУ 9281-009-02698170-93) в концентрации 0,75% для разработки косметических средств, предназначенных для ухода за увядающей кожей лица. В ТИБОХ ДВО РАН разработана рецептура крема “Молодость”.

       Комплекс “Коллагеназа краба” используется для получения пептидов коллагена (ТУ 9267-024-02698170-94) и растительных белков (ТУ 9267-026-02698170-94; ТУ 9267-014-02698170-94), широко применяемых в косметических средствах.

       Моющие средства. Изучение физико-химических свойств и спектра действия ферментного комплекса “Коллагеназа краба” (ТУ 9281-009-02698170-93) показало, что в его состав входят нейтральные и щелочные протеиназы, амилазы, липазы и β-глюканазы. Комплекс устойчив при щелочных значениях рН (до 13,0). Эти свойства позволяют использовать “Коллагеназу краба” в качестве биологической добавки в моющих средствах (порошки, пасты) для удаления пищевых и белковых загрязнений.

       Присутствие в комплексе “Коллагеназа краба” высоко активных коллагеназ и эластаз позволило создать на его основе шампунь для удаления перхоти. Выпуск шампуня “Шахноз” осуществлен совместным Узбекско-Корейским предприятием (г. Ташкент).

1.2 Хитин и хитозан

Среди обилия известных полисахаридов растительного, микробного и животного происхождения хитин и хитозан занимают особое место, так как их молекулы построены не из глюкозы, как у большинства углеводов (например, целлюлоза), а из N-ацетил-D-глюкозамина (хитин) или D-глюкозамина (хитозан). Эти линейные полисахариды представляют собой углеводные цепи, в которых мономеры 2-ацетамид-2-дезокси-D-глюкозы превращаются в полимер за счет образования -1,4-глюкозидных связей. Обычно, полностью дезацетилированный хитин (хитозан) не встречается в природе, а получается химическим гидролизом амидных связей в хитине (дезацетилирование).

Основным промышленным сырьем для получения хитина являются представители ракообразных (Crustacea), в том числе морского происхождения: панцири крабов, креветок, омаров и криль. При создании технологии комплексной переработки отходов крабового промысла нами были разработаны пилотные установки для выпуска опытно-промышленных партий хитина и хитозана с использованием кислотно-щелочного способа. Предложенные технологические приемы и аппаратурно оформленные линии были внедрены на ряде крабодобывающих и перерабатывающих предприятий Дальнего Востока (Приморье: рыбокомбинаты о. Попова, пос. Зарубино, рыбоколхоз “Восток”; Камчатка: рыбколхоз имени В.И.Ленина), а также на химфармзаводе (г. Партизанск). Выпускаемый хитозан был успешно реализован как на территории России, так и за рубежом. Его успешно использовали научно-исследовательские институты для разработки технологий очистки воды и почвы, а также при ликвидации последствий загрязнения окружающей среды радионуклидами. Одним из элементов разработанной нами технологии являлась операция предварительного извлечения белка из панциря промысловых крабов и креветок в виде белковых гидролизатов, пептиды которых содержали значительные количества незаменимых аминокислот, таких как лизин и триптофан. Ферментолиз белков панциря и других белок-содержащих остатков осуществляли ферментным комплексом “Коллагеназа КК”, также получаемого из отходов переработки крабов, и разрешенного в Российской Федерации для использования в пищевой промышленности.

2. Иглокожие: разработка комплексной технологии переработки морских ежей, звезд и голотурий

2.1 Морские ежи: разработка технологии получения эхинохрома А и создание на его основе лекарственных и профилактических препаратов

Морские ежи – представители большинства биоценозов дальневосточных морей, могут быть использованы не только как промысловые объекты для пищевой промышленности, но и как богатый источник уникальных биологически активных веществ. К таким веществам относятся, в первую очередь, полигидроксинафтохиноновые пигменты панцирей и игл – спинохромы. Всесторонние исследования выявили ценную особенность спинохромов – множественность механизмов, по которым они способны осуществлять свое антиокислительное действие. К ним относятся перехват свободных радикалов, хелатирование металлов – катализаторов пероксидации, способность регулировать активность некоторых ферментов, в том числе и липоксигеназ, во многом определяющих окислительный статус клеток организмов. В отличие от эндогенных антиоксидантов, таких как витамин Е и убихинон, нафтохиноны способны нейтрализовать действие основных инициаторов неферментативного процесса окисления мембранных липидов – катионов железа, накапливающихся в зоне ишемического повреждения ткани, и ряд других свойств. Перечисленные особенности механизма действия выделяют пигменты морских ежей из ряда известных биоантиоксидантов и открывают перспективу для создания на их основе лекарственных препаратов нового поколения с широким спектром действия.

Рис. 2. Схема комплексной переработки различных представителей семейства иглокожих

В конце 90-х годов прошлого столетия творческий коллектив, созданный из исследователей разных лабораторий ТИБОХ ДВО РАН и Всесоюзного кардиологического научного центра (ВКНЦ), приступил к созданию новых кардиологических средств на основе одного из пигментов морских ежей – эхинохрома А (ЭХА). Разработка технологии получения этого соединения и организация его опытно-промышленного производства были поручены лаборатории биотехнологии ТИБОХ ДВО РАН. За прошедший период были разработаны и реализованы на производстве несколько технологий комплексной переработки различных представителей семейства иглокожих, которые представлены на рис 2.

       Согласно предложенной схеме рациональной переработки представителей семейства иглокожих сегодня производятся ЭХА, комплекс каротиноидов и пептиды коллагена. ЭХА, природный пигмент нафтохиноновой природы, выделяют из плоских морских ежей Scaphechinus mirabilis A. Agassiz, где он присутствует в виде кальциевых или натриевых солей в составе игл и панциря. При обработке ежей этанолом в присутствии разбавленной серной кислоты происходит разрушение солей эхинохрома с высвобождением последнего в Н+-форме, которая легко растворима в этаноле. Серная кислота, освобождая  эхинохром из солевых комплексов, нейтрализуется кальций карбонатной основой панциря ежей (CaCO3) с образованием нерастворимого в воде и этаноле сульфата кальция (CaSO4, гипс). Эхинохром экстрагируется этанолом. После концентрирования экстракт, содержащий эхинохром, очищают от сопутствующих примесей перерастворением эхинохрома в хлороформе с последующим удалением растворителя. ЭХА кристаллизуют из диоксана, сушат и сублимируют. Аппаратурная схема производства фармакологической субстанции “Эхинохром A” приведена на рис. 3.

Рис. 3. Аппаратурная схема производства фармакологической субстанции “Эхинохром A”

       Механизм физиологического действия эхинохрома А, как корректора метаболизма. ЭХА – витаминоподобное природное вещество, сходное по химическому строению как с витаминами группы К, так и с витамином С. Как видно из рис. 4, ЭХА в отличие от витамина К2 является сильно гидроксилированным природным нафтохиноном.

Рис. 4 Структура эхинохрома А, витаминов К2 и С

       Согласно работам академика М.М. Шемякина, гидроксилирование нафтохинонов уменьшает их способность свертывания крови от 100 до 50000 раз в зависимости от степени замещения. Установлено, что ЭХА, в отличие от витаминов группы К, не обладает способностью коагулировать кровь и останавливать кровотечения. Утратив основную функцию по коагуляции крови и получению Gla-белков, полигидроксилированный ЭХА, сохраняет другие физиологические функции соединений группы витаминов К, а именно участвует в процессах, связанных с транспортом электронов, и может принимать участие в регуляции тех же физиологических процессов, что и витамины этой группы.

       Наличие “редуктоновой” группировки в структуре ЭХА, сближает его по физиологическому действию с другим известным витамином - аскорбиновой кислотой. “Ред-окс” соединения, способные проявлять антиокислительные свойства, обычно характеризуются стандартными окислительно-восстановительными потенциалами (табл.1). Как видно из таблицы, окислительно-восстановительные потенциалы витамина С и ЭХА равнозначны, поэтому эти соединения могут быть взаимозаменяемыми в ряде окислительно-восстановительных реакций, протекающих в организме. Следует отметить, что потенциал ЭХА незначительно отличается и от такового для убихинона Q10, то есть ЭХА способен переносить электроны в реакциях, в которых обычно функционирует витамин Q10.

Таблица 1. Окислительно-восстановительные потенциалы эхинохрома А и  некоторых антиоксидантных витаминов

Витамин

Окислительно-востановительный потенциал

Убихинон (кофермент Q10)

100 мв

Аскорбиновая кислота (витамин С)

80 мв

Эхинохром А

80 мв

Токоферол (витамин Е)

300 мв

Менадион (витамин К3)

394 мв

Витамин С (аскорбиновая кислота) – соединение, которое попадает в организм человека только из пищи, всасываясь в желудочно-кишечном тракте. Попав в кровь, аскорбиновая кислота может проникнуть в клетки двумя путями.

  1. В результате окисления, в том числе ферментом - аскорбатоксидазой, она переходит в форму дегидроаскорбиновой кислоты, которая транспортируется в клетки по глюкозным каналам (Glut-1, и др.). В цитозоле клетки дегидроаскорбиновая кислота восстанавливается NAD(H), NADP(H+) и GSH вновь до аскорбиновой кислоты.

2. В результате действия транспортных белков альбуминовой фракции крови HSVCT-1 и HSVCT-2 (витамин С транспортные белки человека). В этом случае аскорбиновая кислота поступает в цитозоль клетки в нативном виде.

       Аскорбатоксидаза узнает “редуктон” ЭХА и окисляет его до тетраольного фрагмента со скоростью, близкой к таковой окисления аскорбиновой кислоты. Кроме того, эхинохром А за счет наличия “редуктонового” фрагмента также связывается транспортерами витамина С и становится способным проникать в клетки методом облегченной диффузии. То есть, ЭХА может проникать в клетку теми же транспортными путями, что и витамин С. Кроме связывания с HSVCT-1 и HSVCT-2, ЭХА может связываться с другими альбуминовыми транспортерами, занимая в этих белках сайты связывания, например, жирных кислот. ЭХА, проникнув в клетку посредством облегченной диффузии с транспортерами аскорбиновой кислоты HSVCT-1 и HSVCT-2, попадает в зону действия конституционного фермента плазматических мембран клеток – хинонзависимой оксидоредуктазы (NQO1; DT-диафораза). При взаимодействии ДТ-диафоразы (NQO1) с эхинохромом А и NAD(P)H клеток происходит двухэлектронное восстановление ЭХА до этилполигидроксинафталина (рис.2), который самопроизвольно поглощает кислород (О2) клетки и превращается обратно в исходный ЭХА, образуя при этом Н2О2 (пероксид водорода).

Рис. 4 Схема взаимодействия ДТ-диафоразы (NQO1) с эхинохромом А и NAD(P)H клеток

       Расходование внутриклеточного кислорода при реакции взаимодействия ЭХА и ДТ-диафоразы, в присутствии NAD(P)H, и образование в этой реакции пероксида водорода создает в клетках дефицит кислорода. Образующийся в результате реакции дополнительный для клетки пероксид водорода играет роль биохимического мессенджера, который через ряд внутриклеточных посредников активирует семейство ядерных рецепторов клетки, индуцирующих пролиферацию пероксисом (Peroxisome proliferator-activated receptors, PPARs). Это семейство транскрипционных факторов (PPAR, PPAR и PPAR) играет ключевую роль в регуляции метаболизма клетки и уменьшает воспаление. Проведенные клинические исследования действия низких концентраций эхинохрома А полностью подтвердили механизм действия этого соединения как агониста семейства факторов PPAR.

       эХА снижал количество глюкозы в крови не только у пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС), но и у больных диабетом 2 типа. Он положительно влиял на углеводный обмен: снижал количество инсулина, С-пептида и гликолизированного гемоглобина. ЭХА нормализовал липидный статус крови, уменьшая количество холестерина и липопротеидов низкой плотности. ЭХА снижал уровень адреналина, предотвращал ишемические и гипоксивные процессы в кардиомиоцитах, уменьшал количество кортизола в крови, увеличивал физическую выносливость и понижал воспаление. ЭХА благотворно влиял на эндотелиальную дисфункцию, увеличивая уровень NO в крови и понижая количество тканевых металлопротеиназ (ММП-9/ТИМП).

Таким образом, ЭХА, выполняя в клетке функции витаминов группы К и антиоксидантов (витамина С, убихинона Q10), выступает как корректор процессов метаболизма и может быть отнесен к группе лекарственных средств, объединяемых по физиологическому действию на организм как корректоры метаболизма. ЭХА может применяться в качестве средства лечения и профилактики заболеваний метаболического синдрома, таких как сердечно-сосудистые, нарушение липидного и углеводного обмена, старения и другие.

       В настоящее время в ТИБОХ ДВО РАН на основе эхинохрома А разработаны лекарственные препараты, которые выпускаются под торговой маркой Гистохром®. “Раствор Гистохрома 1% для инъекций” (РN002363/01 от 23.07.2008) применяется при лечении острого инфаркта миокарда и ишемической болезни сердца. Клинические испытания показали, что препарат уменьшает зону некроза в 1,5 раза, восстанавливает функцию левого желудочка, уменьшает частоту реперфузивных аритмий, способствует восстановлению сократительной функции сердца, ингибирует агрегацию эритроцитов и  не имеет побочных и токсичных эффектов. “Раствор Гистохрома 0.02% для инъекций” (РN002363/02 от 23.07.2008) применяется для лечения воспалительных заболеваний сетчатки и роговицы глаза. Результаты клинических испытаний показали, что препарат эффективен для лечения: гемофтальмов, химических ожогов, диабетической ретинопатии, дистрофии сетчатки, увеитов, кератитов и катаракты.

       Кроме того, на основе эхинохрома разработаны и выпускаются биологически активные добавки к пище: “Тимарин”, “Экстракт морского ежа”, “Марихит ” и “Хитохром С”. Биологически активные добавки прошли клиническую апробацию в Приморском кардиологическом центре и на базе Медобъединения ДВО РАН (г. Владивосток) и подтвердили свою эффективность как препараты метаболической коррекции.

2.2 Морские звезды: разработка технологии получения комплекса каротиноидов и пептидов коллагена

Каротиноиды - жирорастворимые пигменты, синтез которых осуществляют только растения, в том числе водоросли и фитопланктон. Каротиноиды определяют окраску растений и животных от желтой (-каротин, зеаксантин) до розовато-красной (астаксантин, кантаксантин). Они защищают клетки и ткани от окислительного стресса, предотвращают коронарные заболевания сердца и сосудов, укрепляют иммунную систему организма, ингибируют развитие некоторых опухолей. Наиболее известной физиологической ролью каротиноидов является провитаминная активность.

Самым эффективным антиоксидантом среди каротиноидов, улавливающим свободные радикалы и гасящим синглетный кислород, является астаксантин. Астаксантин обладает солнцезащитными (УФ-протекторными) и противовоспалительными свойствами, проявляет иммуномодулирующую активность.

Рис.6. Структура астаксантина

Природным источником астаксантина являются микроводоросли рода Haematococcus. Ракообразные аккумулируют в своих панцирях астаксантин, приобретенный в процессе питания. Красно-розовой цвет мяса лососевых рыб также является результатом накопления каротиноидов, главным образом, астаксантина, усвоенного с пищей. Продукты и пищевые добавки, содержащие природный астаксантин, имеют высокую питательную ценность и полезны для здоровья. Искусственное разведение лососевых рыб определяет высокую потребность в астаксантине, который является важной составной частью их рациона питания. Синтетический астаксантин высокотоксичен и неустойчив во времени. В большинстве случаев источником каротиноидов служат отходы, получаемые при переработке ракообразных. При этом конечный продукт представляет собой концентрат каротиноидов (или масляный раствор), в состав которого входит астаксантин и его эфиры в комплексе с фосфолипидами. Содержание астаксантина в конечном продукте составляет в среднем 4–5%. Известен способ экстракции каротиноидов из зоопланктона. К недостаткам данной технологии относится низкое содержание астаксантина в целевом продукте, а также пожароопасность вследствие использования кетонового растворителя. Известен метод получения каротиноидов из морских ежей, в основном, из панцирей, игл и гонад, его недостатком также является использование пожароопасных растворителей: серного эфира, ацетона и гексана. К тому же, содержание астаксантина в морских ежах очень незначительно. Еще одним природным источником каротиноидов, в том числе астаксантина, могут служить морские звезды. Основными каротиноидами этих иглокожих являются катаксантины и стереоизомеры астаксантина. Известные способы получения каротиноидов из морских звезд обладают рядом недостатков, среди которых главными являются низкий выход каротиноидов, обусловленный, вероятно, низким содержанием их в сырье, и использование пожароопасных (ацетон) и токсичных (метанол) реактивов.

На сублиторали дальневосточных морей широко распространены морские звезды Patiria pectinifera Mueller et Troschel. В связи с развитием марикультуры эти хищные иглокожие в массовом количестве скапливаются возле морских огородов. Необходимость сбора и уничтожения этих хищников позволяет одновременно обеспечить достаточную сырьевую базу для производства каротиноидных препаратов. Используя традиционные подходы предварительной обработки влагосодержащего сырья, которое необходимо обезводить перед процессом экстракции липидных материалов, мы разработали универсальную технологию комплексной переработки морской звезды P. pectinifera. Сущность метода заключается в последовательном проведении операций обезвоживания, экстракции, хроматографической очистки, деминерализации отходов, депротеинизации, ферментолиза и получения пептидов морского коллагена. После хроматографической очистки концентрата экстракта получают комплекс каротиноидов, содержащий астаксантин, лютеин, зеаксантин и некоторые другие (рис. 7).

Рис. 7. ВЭЖ хроматограмма образцов астаксантина (по оси Х – время удерживания вещества; по оси Y – интенсивность поглощения при 475 нм). (А) - комплекс каротиноидов P. Pectinifera,  (В) – астаксантин (Sigma).

Выход комплекса каротиноидов составляет 0.80–1.00% от веса исходного сырья (4–5% от сухого веса), а содержание астаксантина в нем – до 50%.

Морские звезды после экстракции каротиноидов деминерализуют соляной кислотой или растворами разрешенных комплексонов (этилендиаминтетрауксусная кислота) и депротеинизируют раствором едкого натра. Полученные коллагеновые остовы звезд гидролизуют протеолитическим комплексом “Коллагеназа краба” и получают биологически активные пептиды коллагена.

С точки зрения новых источников коллагена интересен еще один представитель семейства иглокожие – голотурия Apostichopus japonicus.

2.3 Голотурии: разработка технологии получения пептида коллагена из Apostichopus japonicus Selenka

       Продукт трансформации коллагеновых белков дальневосточного трепанга, получивший название апостатин, был получен путем гидролиза тела голотурии Apostichopus japonicus S. ферментным комплексом “Коллагеназа краба”. По данным физико-химического анализа он представляет собой полипептид с молекулярной массой 12212 дальтон (метод масс-спектрометрии). На рис. 8 приведен результат масс-спектрометрического анализа коллагенового белка из голотурии A. japonicus, свидетельствующий о высокой чистоте полученного продукта. Как показал сравнительный анализ аминокислотного состава апостатина и коллагенов, выделенных из других источников, для него характерно повышенное содержание отрицательно заряженных аминокислот – аспарагиновой и, особенно, глутаминовой, оксикислот -  серина, треонина и, особенно, тирозина, а также валина. По содержанию глицина, оксипролина и пролина выделенный белок соответствует классическому коллагену. Апостатин обладает выраженной антикоагулянтной способностью, нетоксичен, безопасен при длительном применении и обладает высокой растворимостью в биосовместимых жидкостях и растворах. На его основе могут быть разработаны антикоагулянтные препараты, косметические средства и биологически активные пищевые добавки как средства профилактики и дополнительной терапии при заболеваниях опорно-двигательного аппарата и ухода за кожей (для восстановления коллагеновых связей и придания коже особой упругости и молодости).

Рис.8. Масс-спектр коллагенового белка, полученного ферментолизом тел голотурии Apostichopus japonicus

       В экспериментах на животных показано, что апостатин обладает противоопухолевой активностью в отношении солидного и асцитного варианта опухоли Эрлиха. Противоопухолевая активность апостатина имеет определенные черты сходства как с  эндостатином, так и с сульфатированными полисахаридами.

3. Морские травы и водоросли

3.1 Разработка технологии комплексной переработки трав семейства Zosteracea

       Морские травы широко распространены в морях, омывающих территорию России. В дальневосточных морях России наиболее распространенными видами являются филлоспадикс (Phyllospadix iwatensis.), зостера морская (Zostera marina) и азиатская (Z. asiatica Maki.). Запасы Z. marina только в заливе Петра Великого Японского моря определены в 16 тыс. тонн сырой массы, Z. asiatica - 28 тыс. тонн, а общая биомасса Phyllospadix iwatensis Makino у материкового побережья Японского моря составляет 140-190 тыс. тонн. Данные многолетних исследований морских трав семейства Zosteracea показали, что они являются богатым источником клетчатки (до 25%), углеводов (до 30%), белка (до 2,5%) и минеральных веществ (до 20%), в зависимости от вида. В морских травах обнаружены следующие классы химических соединений: алкалоиды, аминокислоты, витамины, дубильные вещества, полиненасыщенные жирные кислоты, моно- и олигосахариды, пектины, полисахариды, фенолкарбоновые кислоты и флавоноиды. Схема комплексной переработки трав семейства Zosteracea, разработанная в лаборатории биотехнологии  ТИБОХ ДВО РАН приведена на рис. 9.

3.1.1. Зостерин. Среди многообразия органических природных соединений морского происхождения полисахариды морских водорослей и трав представляют самую внушительную по своей биомассе "продукцию" Мирового океана. Полисахариды обеспечивают ряд физико-механических и физико-химических характеристик, необходимых морскому растению для выживания в столь своеобразной среде. Морские полисахариды обладают уникальными свойствами, которые изучены далеко не полностью, и есть все основания полагать, что исследования этой группы соединений могут привести к впечатляющим открытиям.

Рис. 9. Схема комплексной переработки трав семейства Zosteracea

       Одним из таких полисахаридов является зостерин, получивший свое название в соответствии с источником его выделения - морскими травами, принадлежащими к семейству Zosteracea. В результате многолетних исследований сотрудниками ТИБОХ была полностью расшифрована структура молекулы зостерина, который представляет собой сложный полимер пектиновой природы, состоящий в основной цепи из блоков α(1→4) полигалактуроновой кислоты, соединенных между собой (1→2) связями рамнозы. Примерно на четверть молекула зостерина представляет собой апиогалактуронан, содержащий уникальный моносахарид D-апиозу, присоединенную (1→2) и (1→3) связями к галактуронану. Другие боковые цепи зостерина содержат D-ксилозу, D-галактозу, L-арабинозу и 2-О-метил-D-ксилозу.

       Пектины - растворимые пищевые волокна, которые используют в пищевой, косметической и фармакологической промышленности. В промышленных масштабах наиболее рентабельными источниками пектина являются яблочный и свекольный жмых, кожура цитрусовых и корзинки подсолнечника. Содержание пектина в таком сырье составляет от 10 до 35%. Содержание зостерина в морских травах составляет 10-20 % от сухого веса, в зависимости от вида водорослей и сезона. Важными особенностями структуры зостерина, отличающими его от других широко используемых пектинов (яблочного, свекловичного, цитрусового и подсолнечного) являются низкая степень метоксилирования и наличие остатка апиозы. Первая, из которых, обеспечивает его высокие адсорбционные свойства, а вторая обусловливает его относительную устойчивость к действию внеклеточных ферментов и обеспечивает тем самым возможность его пролонгированного применения. Как было установлено при ликвидации радиационного загрязнения, вызванного аварией на Чернобыльской АЭС, зостерин ускоряет выведение инкорпорированных радионуклидов (в том числе изотопов цезия) из организма экспериментальных животных и человека (исследование собственного излучения человека, СИЧ; заключение всесоюзного научного центра радиационной медицины, Киев; заключение НИИ радиационной медицины, Минск). Широкомасштабные исследования, проведенные Межотраслевой проблемной лабораторией, учрежденной Минцветметом СССР и Академией наук СССР, показали высокую эффективность зостерина в лечебно-профилактических мероприятиях по оздоровлению персонала свинцово-плавильных и горно-обогатительных предприятий СССР (Приморский край, Казахстан, Украина, Северная Осетия - “Электроцинк”), а также целесообразность его использования в составе новых антидотных и антимутагенных лекарственных препаратов. Исключительный интерес представляют экспериментальные данные о противоопухолевых свойствах зостерина и его способности продлевать жизнь нормальных животных, т.е. выступать в качестве потенциального геропротектора, а также его способность снижать содержание холестерина в крови, что обеспечивает антисклеротический эффект. В настоящее время на основе зостерина разработаны усиленные антидотные композиции - таблетки, безалкогольные бальзамы, пасты и т.п. Большинство из этих продуктов прошли успешную апробацию в клинике НИИ питания РАМН и уже рекомендованы Институтом питания к промышленному выпуску в качестве лечебно-профилактических продуктов специального назначения.

       Начатое в 1986 г исследование медико-биологических свойств зостерина сегодня нашло широкий отклик у враче й-специалистов, успешно продолжающих изучать прикладные возможности этого уникального биополимера. В немалой степени данному процессу способствуют формы применения зостерина (растворы, коктейли, пищевые добавки, композиции и т.д.), органолептические показатели, совместимость со многими видами медикаментозной терапии, а также свойство зостерина уменьшать дозировку и продолжительность приема известных лекарственных средств.

       Исследование медико-биологической активности зостерина в значительной степени стимулировало дальнейшее изучение его физико-химических, гелеобразующих и ионосвязывающих свойств. Доступность соответствующего растительного сырья в экологически чистых морях Дальнего Востока, простота производственного процесса извлечения зостерина позволили ТИБОХ ДВО РАН впервые спроектировать производственные линии для получения зостерина по бесспиртовой технологии, а также развернуть производство этого биопрепарата на территории Приморского края. Осуществляемый с 1986 г. выпуск достаточного количества зостерина позволил не только оценить его медико-биологические свойства, но и привел к появлению на рынке зостерин- содержащей парафармацевтической продукции: антидотных напитков специального назначения группы "Vita", безалкогольных бальзамов и таблетированных композиций, объединенных общим названием "Гербамарин". Проведенные токсикологические исследования показали отсутствие каких-либо негативных влияний зостерина на жизненно важные функции организма.

Рис. 10.  Виды биологической активности зостерина

       Слабой стороной большинства работ по изучению активности перорально назначаемых биополимеров является отсутствие данных по фармакокинетике конкретного биополимера. Изучение поступления 3Н-зостерина и его метаболитов в кровяное русло и ткани органов указывает на возможность всасывания, по крайней мере, низкомолекулярных фрагментов зостерина в тонкой кишке с последующим распределением его молекул по органам и тканям организма. Выясненные закономерностей фармакокинетики зостерина позволяют объективно осмысливать механизм его терапевтического действия и прогнозировать направленность эффекта. Анализ установленных видов биологической активности, антидотного действия, а также клинико-терапевтических эффектов зостерина позволяет подчеркнуть глубокую связь биологических эффектов с особенностями молекулярной структуры, физико-химическими свойствами и фармакокинетикой исследуемого биополимера. С одной стороны, зостерин является высокоактивным полианионным адсорбентом, который, проходя по желудочно-кишечному тракту, связывает и выводит из организма ионы тяжелых металлов, желчные кислоты, патогенные микроорганизмы (включая их прямое ингибирование), проявляет антидотную, гипохолестеринемическую, антибактериальную, геропротекторную, противоязвенную и антиаллергическую активность. С другой стороны, низкомолекулярный зостерин и его фрагменты попадают в кровяное русло, ткани и органы и непосредственно контактируют с клетками, в частности, иммунокомпетентными, что в свою очередь индуцирует реактивные изменения их функционального состояния. При изучении механизма иммуностимулирующего действия зостерина нами оценены результаты контактного (специфического) влияния его молекул на иммунокомпетентные клетки и фагоциты в изолированной системе in vitro. На рисунке 10 представлены виды биологической активности зостерина, непосредственно наблюдаемый эффект и прогнозируемая доля специфического действия молекул зостерина, обусловливающая тот или иной биологический эффект.

3.1.2. Полифенольный комплекс. Полифенольные соединения, наряду с белками, углеводами и нуклеиновыми кислотами, являются компонентами растительных тканей, в которых выполняют определенные физиологические функции, такие как: регуляция ростового процесса, регуляция и формирование опорно-структурной функции растений, защита растений от агрессивных воздействий среды. Распространенность фенольных соединений в растительных объектах зависит от их структуры и метаболизма. Попадая с пищей в организм человека, они сохраняют, а в ряде случаев приобретают новые направления в реализации биологической активности. Обеспеченность организма человека растительными полифенольными соединениями в значительной степени зависит от пищевого рациона. Следует обратить внимание на то, что содержание биофлавоноидов в растениях колеблется в. довольно широком диапазоне от 15 - 30 мг до 1.2 г на кг. Приблизительная суточная норма необходимого потребления биофлавоноидов для организма человека составляет 50 -100 мг, и достигнуть такого потребления только за счет продуктов питания довольно сложно. В настоящее время выпускается достаточно много биологически активных добавок к пище на основе биофлавоноидов. В качестве источника биофлавоноидов используют лозу и косточки винограда, мелиссу, мяту, розмарин, ромашку, барбарис, одуванчик, воробейник, незабудочник и другие растения. В отличие от присутствующих на рынке продуктов, комплекс полифенольных соединений (ПФК) Z. marina представлен более широким набором флавоноидов (лютеолин, сульфаты лютеилина, апигенин, диосметин, хризоэриол, гиспидулин и некоторыми другими) и фенолкарбоновых кислот (п-гидроксибензойная, протокатехиновая, ванилиновая, галловая, кофейная, розмариновая и феруловая). Он превосходит их по уровню антирадикальной активности за счет присутствия розмариновой кислоты. По оценкам перспективных рынков возможный рыночный потенциал разрабатываемых технологий на основе полифенольного комплекса зостеры составляет от 500 до 800 миллионов рублей в год в России и 10 - 15 миллионов долларов США - за рубежом. В ТИБОХ ДВО РАН разработаны способы получения как комплекса полифенольных соединений, так и индивидуальных полифенолов: розмариновой кислоты и дисульфата лютеолина (рис. 11).

Рис. 11. Анализ полифенольных соединений морской травы зостеры методом ВЭЖХ: (а) спиртовый экстракт (ПФК); (б) очищенная розмариновая кислота (РК); (в) высокоочищенная РК  и  (г) 7,3’-дисульфат лютеолина

Розмариновая кислота (РК), С18Н16О8, является природным полифенольным антиоксидантом, содержащимся во многих лекарственных растениях, особенно в растениях семейства Lamiaceae. Она является сложным эфиром кофейной и 3,4-гидроксифенил молочной кислот (рис.12). РК обладает широким спектром биологической активности, в том числе: противовирусной, антикомплементарной, антидепрессантной, антимутагенной, нейропротекторной, иммуномодулирующей, антилейкозной  и противоопухолевой.

Рис. 12. Структура розмариновой кислоты

       Широкое применение РК лимитировано недостаточным ее выпуском в связи с ограниченностью сырьевой базы и сложностью технологических процессов производства. В основном ее выпуск ограничен галеновыми препаратами в виде экстрактов. Общая средняя годовая потенциальная потребность только в розмариновой кислоте в России оценивается в объемах около 5 тонн в год, если ее будет употреблять только 1% больных вирусным гепатитом. В этой связи возникла необходимость в поиске стабильного и распространенного, возобновляемого источника сырья и разработке простого, воспроизводимого технологического способа получения розмариновой кислоты.

Рис.13. Структура лютеолина (а) и 7,3’-дисульфата лютеолина (б).

       Флавоноиды, в частности, лютеолин и его производные (рис.13) обладают антиоксидантным, капилляроукрепляющим, противовоспалительным, фитоэстрогенным, антиаллергическим, канцерпревентивным, антибактериальным и противовирусным эффектами. Они оказывают антиспазмолитическое действие, в том числе на сосуды сердца и головного мозга; положительно влияют на обменные процессы в миокарде; обладают антиаритмическим действием; тормозят агрегацию тромбоцитов и их адгезию к эпителию сосудистой стенки; нормализуют реологию крови и углеводный обмен; проявляют антиатеросклеротическое, антигипертензивное, противоязвенное и гепатопротекторное действие. Полигидроксифенольные соединения растений настолько важны для сохранения здоровья человека, что были отнесены к витаминам группы Р. Хотя эти соединения не синтезируются в организме человека, многие важные физиологические процессы не могут осуществляться без участия этих вторичных растительных метаболитов. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) и американское агентство по надзору в области питания и лекарственных средств (FDA) рекомендуют для сохранения здоровья и продления жизни употреблять не менее 50 мг лютеолина. В ряде случаев действие лютеолина превосходит эффекты кверцетина, широко используемого в медицине витаминного комплекса. Особо следует отметить его фитоэстрогенное действие, в результате уменьшается риск развития рака молочной железы, продляется детородный возраст, уменьшаются последствия, связанные с наступлением климакса и т.д. Преимущество лютеолина, полученного из зостеры, в том, что он находится водорастворимой форме, и потому для достижения эффекта его требуется значительно меньше, чем в случае выделения его из другого растительного сырья.

       Изучение биологической активности лютеолина и его дисульфата на экспериментальных моделях аллоксанового диабета и гиперлипидемии показало, оба соединения нормализуют углеводный и липидный обмен.

3.2 Разработка технологии получения полисахаридов из отходов переработки бурой водоросли Laminaria japonica

Бурые водоросли - это многоклеточные растения; своим названием они обязаны присутствующему в них бурому пигменту фукоксантину. Из наиболее ценных и распространенных полисахаридов бурых водорослей заслуживает внимания альгиновая кислота, содержащаяся во всех крупных бурых водорослях в количестве до 40% от массы сухого вещества. Другие полисахариды бурых водорослей - фукоиданы, или фукансульфаты. Присутствие фукоиданов в водорослях определяют обычно по наличию в гидролизатах L-фукозы – основного моносахарида в составе вышеназванных полисахаридов. В последнее время особое внимание исследователей обращено к сульфатированным полисахаридам водорослей в связи с их ярко выраженной антикоагулянтной активностью. Актуальность поиска таких соединений связана в первую очередь с профилактикой и лечением тромбоэмболий, вызванных осложнениями многих заболеваний и хирургическим вмешательством. Из литературы известно, что в результате фракционирования удалось получить препараты фукоидана, которые по антикоагулянтной активности не уступают или даже превосходят гепарин. Это - полисахариды из бурых водорослей Sargassum linifolium, Dictyota dichotoma, Padina pavonia, Eisenia bicyclis и Laminaria religiosa.

Антикоагулянтный эффект фукоидана оценивался in vivo и in vitro. Наименее токсичными оказались полисахариды с низкой метахроматической и антикоагулянтной активностью. Механизм антикоагулянтного действия фукоиданов реализуется посредством ингибирования активности факторов, "внутреннего" пути свертывания крови - XI, XII и VII, а не через антитромбин III (AT-III), как это происходит в случае гепарина. То есть, фукоиданы могут быть эффективны при антикоагулянтной терапии у больных с врожденным и приобретенным дефицитом AT-III. Мори с соавторами, изучая полисахариды бурой водоросли Undaria pinnatifida, обнаружил зависимость антикоагулянтной активности (в том числе и способности снижать содержание липопротеидов в сыворотке крови) от молярного соотношения входящих в их состав фукозы и галактозы.

Фукоиданы как природные полиэлектролиты обладают высокой степенью сродства с двухвалентными катионами тяжелых металлов. Различия в адсорбционных свойствах фукоиданов зависят от конкретного источника их получения. Установлено, что фукоидан, из бурой водоросли Ascophyllum nodosum, связывает двухвалентные катионы в следующей последовательности: Pb>Ba>Cd>Sr>Cu>Fe> Co>Zn>Mg>Mn>Cr>Ni>Hg>Ca. Необходимо отметить очень низкое сродство фукоидана к ионам кальция, которые играют существенную роль в жизнедеятельности организмов. В экспериментах на животных сочетанное введение свинца и исследуемого фукоидана приводило к значительному снижению всасывания свинца и поступления его в организм. Биологическая активность фукоидана из Ascophyllum nodosum зависела от вязкости его растворов, а также от наличия и положения в полимерной молекуле функциональных групп.

       Известно, что сульфатированные полисахариды морских водорослей угнетающе действуют на РНК- и ДНК-содержащие вирусы. В этом плане фукоиданы не являются исключением. Недавно установлено, что фукоиданы из бурых водорослей Macrocystis pyrifera и F. vesiculosus ингибируют цитопатическое действие вируса везикулярного стоматита. Исключительно важными являются результаты работ, указывающие на перспективность поиска сульфатированных полисахаридов, обладающих в условиях in vitro селективным ингибирующим действием на вирус иммунодефицита человека (ВИЧ). Как и другие сульфатированные полисахариды, фукоиданы блокируют процесс узнавания и связывания между гликопротеином оболочки gpl20HIV и клеточным рецептором CD4 . Следует добавить, что анти-ВИЧ активность сульфатированных полисахаридов не коррелирует с их антикоагулянтными свойствами и, вероятнее всего, эти два эффекта взаимонезависимы. Обнадеживающие данные получены японскими исследователями, установившими синергизм анти-ВИЧ эффекта in vitro при сочетанном применении фукоидана с азидотимидином. Для клинического применения были рассчитаны дозы, а именно, 0,1 мкг/мл фукоидана и 0,014 мкМ азидотимидина. Создание такой концентрации препаратов в сыворотке крови больных ВИЧ вполне достижимо. Считают, что использование фукоидана в комбинации с азидотимидином значительно снизит побочные эффекты, возникающие в ходе лечения больных.

       Принимая во внимание фармакологическую важность полисахаридов бурой водоросли L. japonica, мы разработали технологии извлечения уронофукана и фукоидана из отходов ее промышленной переработки. Традиционное использование L. japonica – варка шинкованной водоросли и получение из нее в дальнейшем различных видов пищевой продукции. Отходами этого производства являются выварочные воды, представляющие собой типичный экстракт водорослей, полученный “горячим способом”. Кипячение L. japonica приводит к значительной деградации биополимеров, денатурации белков, образованию новых соединений в результате реакции конденсации и т.д. Учитывая эти аспекты, мы все же рискнули разработать технологию получения низкомолекулярных фрагментов полисахаридов из отваров бурых водорослей, способных проявлять противовирусную активность и антидотные свойства (рис. 14).

Рис. 14. Схема технологического процесса получения кислых полисахаридов из отходов промышленной переработки Laminaria japonica

       Мы получили высокоочищенный продукт полисахаридной природы с небольшим разбросом по размерам, используя современные приемы получения биополимеров с заданной молекулярной массой и освободившись от присутствия альгиновых кислот с помощью соляной кислоты. Физико-химический анализ показал, что данный продукт имеет в своем составе фрагменты уроновых кислот и сульфатированную фукозу. Молекулярная масса полученного полисахарида 20–24 кДa. Анализ методом ЯМР показал, что полученный продукт представляет собой единый полисахарид, а не смесь уроновых кислот и фукоидана. Данный полисахарид представляет собой сульфатированный уронофукан, структура которого была устойчива к высокотемпературному режиму во время кипячения L. japonica.

       Вторым полисахаридом L. japonica, выделенным из отходов промышленной переработки этой бурой водоросли, являлся фукоидан. В последние годы огромную популярность приобрело пищевое использование водорослей в виде гелеобразных паст. Однородная консистенция, получаемая за счет гелеобразующих свойств альгиновой кислоты, сохраняет набор полезных микро- и макроэлементов водорослей, йод-содержащих соединений, липидов и других внутриклеточных ингредиентов. Необходимо отметить, что водоросли, обитающие в растворимом “содержании таблицы Менделеева” (морская вода), накапливают и ионы тяжелых металлов, концентрация которых иногда превышает безопасные нормы, предусмотренные санитарным законодательством РФ. Поэтому обязательной стадией обработки шинкованной L. japonica должна являться  кислотная обработка, приводящая к удалению ионов тяжелых металлов из тканей водоросли в виде водорастворимых хлоридов. При мягкой кислотной обработке ламинарии, особенно при пониженной температуре 2-4 С, происходит “холодная” экстракция кислоторастворимого фукоидана в наиболее нативном (высокополимерном) виде. Используя предложенную технологию переработки отходов водорослей, методом ультрафильтрации с применением мембран, пропускающих глобулярные белки с размерами 100 и 300 kDa, мы получили препараты фукоидана с молекулярной массой 150-300 kDa и чистотой 93%. Данная технология позволяет получать любые соли фукоидана (H+, Na+, K+, Mg2+).

       Уронофукан оказывал высокое противовирусное действие в экспериментах in vitro на Т-лимфобластоидных клетках МТ4, инфицированных ВИЧ-1. Установлено наличие полной защиты клеток МТ4 от цитопатического действия вируса иммунодефицита человека 1-типа., характеризующаяся прямой нейтрализацией in vitro вируса с помощью эффективных доз уронофукана, а также ингибированием адсорбции вируса на клетках-мишенях, предварительно обработанных этим биополимером. Выявлено дозозависимое ингибирование уронофуканом активности обратной транскриптазы.

       Серьезным ограничением на пути использования сульфатированных полисахаридов в медицине является их высокая антикоагулянтная активность. Мы установили, что антикоагуляционный эффект уронофукана был более чем в 10 раз ниже такового для гепарина, и в 2 раза ниже, чем у фукоидана. Несмотря на то, что уронофукан проявлял анти-ВИЧ активность при концентрациях, более чем в 100 раз ниже, чем его антикоагуляционная активность, этот препарат был снят со второй стадии испытаний в США (поиск новых анти-ВИЧ препаратов) вследствие его побочного гепариноидного действия.

       При изучении ингибирующего влияния уронофукана на развитие вирус- индуцированного лейкоза Раушера исследуемый полисахарид вводили внутрибрюшинно лабораторным мышам ежедневно в течение 5 дней. Введение уронофукана тормозило гибель мышей только на ранних стадиях развития инфекции. Судя по наблюдаемым эффектам, сульфатированные фукозосодержащие полисахариды вмешиваются в процессы лиганд-рецепторных взаимоотношений между вирусом и клеткой-мишенью.

       Кроме того, была исследована способность уронофукана и фукоидана выводить ионы свинца из организма лабораторных животных. Как показали эксперименты, их антидотное действие слабее, чем у зостерина, поэтому лечебно-профилактические продукты на их основе обладают умеренным детоксицирующими свойствами.

4. Моллюски. Биогликаны и лектины из отходов промышленной переработки мидии Crenomytilus grayanus

       Двустворчатые моллюски – наиболее распространенный класс моллюсков, имеют раковину с двумя, чаще симметричными створками. По способу питания относятся к фильтраторам. Из промысловых двустворчатых моллюсков наиболее широко известны мидии, устрицы, гребешки и другие. Многотоннажная добыча этого океанического сырья ставит вопрос о его комплексной переработке с целью получения максимального количества полезной для человека продукции. В лаборатории была разработана технология комплексной переработки моллюсков для получения биогликана митилана, лектинов, оксигемоглобина и пептидных гидролизатов (рис.15).

       4.1 Технология получения митилана и лектинов 

       Мидия Crenomytilus grayanus широко распространена в морях Дальнего Востока и является одним из массовых объектов промысла, перерабатываемых для деликатесной пищевой продукции. Трудности “ручного” вскрытия раковин стимулировали технологов рыбной индустрии к созданию аппаратов и производственных режимов разделки, где добытую мидию обрабатывают паром. Проводимая термообработка мидии приводит к естественному раскрытию створок и внутренняя жидкость моллюска совместно с пароконденсатом являются отходами первой стадии переработки мидий.

Рис. 15. Схема комплексной переработки моллюсков

       Химический анализ отходов, выполненный в ТИБОХ ДВО РАН, показал наличие в них значительного количества биополимеров, низкомолекулярных органических и минеральных веществ. Основным биополимером выварочных вод оказался биогликан – митилан, выделенный ранее экстракционными методами из мантии мидий. Митилан состоит из полисахаридного и белкового компонентов, которые связаны прочной, но не ковалентной связью. Молекулярная масса митилана составляет 3 MDa. Полисахаридный компонент митилана является гликогеноподобным -1,4; 1,6-D-глюканом, содержащим небольшое число -1,2 и -1,3 глюкозидных связей в точках разветвления и отличающимся более высокой степенью разветвленности. Используя физико-химические особенности биогликана мидий (высокая молекулярная масса, водорастворимость, определенная кислотоустойчивость и др.), мы разработали технологию получения митилана из существующих отходов промышленной переработки мидий. Биогликан, полученный предложенным способом, соответствовал всем характеристикам образца, выделенного ранее из целой мидии и проявлял те же виды фармакологической активности при испытании на экспериментальных животных.

       Одновременно с митиланом, используемые мидийные воды содержали полипептиды, проявляющие способность агглютинировать эритроциты и опухолевые клетки. Данные белки были выделены из раствора методом аффинной хроматографии с использованием в качестве сорбента галактозо-содержащие сшитые полимеры. Были получены лектины Л-1 и Л-2. Лектин Л-1 был обычным галактозоспецифическим лектином, а Л-2 оказался агглютинином с неизвестной углеводной специфичностью. Л-1 выдерживал термообработку при 55-60 С, а Л-2 сохранял свою агглютинирующую активность при нагревании до 100 С. Оба белка (Л-1 и Л-2) входили в состав белков, ассоциированных с митиланом. При изучении физиологической активности лектинов мидии Л-1 и Л-2 была обнаружена их противоопухолевая активность in vivo на моделях асцитной и солидной карциномы 37. Для выяснения механизма действия белковых компонентов митилана была исследована динамика взаимодействия Л-1 с клетками карциномы Эрлиха. Результаты экспериментов показали, что Л-1 вызывает выход ионов калия из клеток карциномы Эрлиха. Добавление в инкубационную среду галактозы (0.2 mM), специфически блокирующую лектиновую активность, приводило к значительному снижению выхода ионов К+, что свидетельствовало о специфическом взаимодействии Л-1 с рецепторными лигандами клеток карциномы Эрлиха.

       Таким образом, предложенная технология получения биологически активных соединений из отходов переработки мидии позволяет получить фармакологические субстанции в высокоочищенном или индивидуальном состоянии (по результатам электрофоретического анализа белков в денатурирующем полиакриламидном геле).

       Биогликан митилан выпускается на опытном участке ТИБОХ ДВО РАН для проведения различных медико-биологических исследований. Получено разрешение на применение в составе косметических средств. На основе митилана созданы композиции косметических кремов, которые выпускались на фабрике “СВОБОДА” (г. Москва). Лектины мидии также используются в различных исследованиях и применяются в тест-системах для определения присутствия онкологических маркеров.

4.2 Оксигемоглобин морского моллюска Scapharca (Anadara) broughtoni Schrenk,

       По данным Всемирной организации здравоохранения, железодефицитной анемией (ЖДА) страдают 2 миллиарда человек в мире. Скрытый дефицит железа (предстадия ЖДА) обнаруживается у 30%  жителей Европы и России. ЖДА возникает при уменьшении количества гемоглобина крови, по сравнению с физиологической нормой, из-за недостаточности поступления железа с пищей. В настоящее время в мире интенсивно ведутся поиски альтернативных источников гемопротеинов, филлогенетически удаленных от млекопитающих. Это связано с тем, что крупный рогатый скот, традиционный источник гемопротеинов медицинского назначения, подвержен вирусным заболеваниям, опасным для человека. Возможность загрязнения вирусными инфекциями конечной медицинской продукции, получаемой из крови КРС, и определяет важность и актуальность поиска альтернативных заменителей гемосодержащих белков, сырьевое происхождение которых не связано с млекопитающими.

Многие белки морских гидробионтов, запасающие кислород и переносящие его по всему организму, являются гемосодержащими протеинами. К ним относятся гемоцианины и рассеянные гемоглобины. Сотрудниками нашей лаборатории был проведен скрининг промысловых видов морских гидробионтов, имеющих повышенное содержание гемопротеинов, которые могут быть использованы для профилактики железодефицитных состояний человека. На основании проведенных исследований разработана технология получения биологически активной железосодержащей пищевой добавки из гемолимфы морского моллюска Scapharca (Anadara) broughtoni. Гемолимфу, являющуюся отходом промышленной переработки этого моллюска и содержащую большое количество дыхательных пигментов, замораживают для проведения гемолиза клеточных структур и удобства транспортировки и хранения. Замороженную гемолимфу дефростируют, центрифугируют, фильтруют на мембране с размером пор 0,2 мкм, концентрируют и отмывают от посторонних примесей водой на ультрафильтрационной установке с мембраной, пропускающей глобулярные белки с молекулярной массой 300 кДа и ниже, с получением оксигемоглобина. По данным атомно-адсорбционного спектрального анализа препарат содержит 0,2% железа. По данным спектрального анализа гемопротеин анадары является рассеянным оксигемоглобином (рис.16). 

Рис. 16. Спектр поглощения гемопротеина из Scapharca broughtoni

Далее оксигемоглобин подвергают частичному ферментативному гидролизу. Гидролиз в соотношении гемопротеин : протеолитический фермент 100:1–2 проводят в течение 4–5 часов при температуре 29–39°С. В качестве протеолитического фермента используют комплекс протеиназ камчатского краба или папаин, или пепсин. Полученный гемопротеин отмывают дистиллированной водой от низкомолекулярных продуктов гидролиза и концентрируют на ультрафильтрационной установке с мембраной на 30 кДа. Получают биологически активную пищевую добавку гемопротеиновой природы, содержащую двухвалентное железо в количестве 3–5% от массы сухого вещества.

Результатом выполненного исследования является создание новой технологии получения железосодержащей биологически активной пищевой добавки, в которой содержание железа в 15–20 раз выше по сравнению с содержанием железа в добавке, полученной из крови сельскохозяйственных животных.

в отличие от получения железосодержащих биологически активных пищевых добавок из крови сельскохозяйственных животных, получение железосодержащего продукта из моллюска S. broughtoni, филогенетически удаленного от млекопитающих и не подверженного опасным для человека вирусным заболеваниям, обеспечивает отсутствие патогенных вирусных частиц и не требует дополнительной очистки.

Созданная технология позволяет использовать новое, нетрадиционное океаническое сырье для получения железосодержащей биологически активной добавки, а также  расширяет арсенал железосодержащих биологически активных добавок к пище, существующих на фармацевтическом рынке.

5. Биологически активные добавки к пище

5.1 Свойства и характерные особенности  сиропных  бальзамов “Гербамарин”

Состав безалкогольных сиропов бальзамных “Гербамарин” представляет собой гармоничное сочетание биологически активных веществ (БАВ). Источником их получения являются лекарственные растения и морские гидробионты (кальмар, мидия, лосось,  зостера, ламинария и другие). При получении БАВ из морских гидробионтов используются современные технологии, разработанные и запатентованные в Тихоокеанском институте биоорганической химии. В состав бальзама входят следующие БАВ: аминокислоты, пептиды, полисахариды, витамины, флавоноиды, органические кислоты, минеральные и  другие вещества.

Отметим, что действие природных веществ, особенно их комплексов, значительно мягче действия синтетических лекарственных средств, поскольку их химическая структура гораздо ближе к метаболитам организма человека, и они не воспринимаются им как чужеродные. Особенностью действия комплекса БАВ “Гербамарина” является не арифметическое суммирование их активности, а синергизм, обусловленный взаимодействием и взаимовлиянием входящих в его состав компонентов. Системный и специфический характер действия на отдельные органы, ткани и рецепторы организма каждого из видов сиропов бальзамных серии “Гербамарин” составляет основу их уникальности. Эффект специфичности достигается  действием отдельных компонентов схожих по эффекту, но отличных по механизму его реализации, а также пролонгацей циркуляции этих компонентов в организме человека.

        Сироп бальзамный “Гербамарин®, общеукрепляющий”, представляет собой композицию БАВ с иммунностимулирующими и энтеросорбентными свойствами и является эффективным и безопасным дополнительным терапевтическим средством для больных, перенесших тяжелые инфекции, подвергшихся неблагоприятным воздействиям внешней среды и имеющих нарушения психоэмоционального статуса. Активные компоненты этого вида бальзама нормализуют нарушенный обмен веществ, способствуют улучшению пищеварения, устранению запоров и отёков, что, в свою очередь, ведёт к нормализации веса у людей, склонных к ожирению.

Сироп бальзамный “Гербамарин® для больных гипертонией и ожирением”, содержащий композицию БАВ с кардиотропными и гипотензивными свойствами, является эффективным и безопасным средством профилактики гипертонической болезни (ГБ). Благодаря сбалансированному и дозированному сочетанию БАВ растений и морских организмов этот бальзам обладает такими качествами, как мягкость фармакологического действия, плавность нарастания максимального лечебного эффекта, широта терапевтического спектра, наличие соединений с различным и часто взаимно потенцирующим действием. Рекомендуется в качестве профилактического и вспомогательного средства при терапии сердечно-сосудистых заболеваний.

Сиропный бальзам “Гербамарин® печеночный” содержит натуральные ингредиенты растительного и морского сырья. Растительные ингредиенты подобраны таким образом, чтобы их совместное терапевтическое действие было направлено на различные функции гепатобилиарной системы организма.

Сиропный бальзам “Гербамарин® диабетический” содержит композицию БАВ, нормализующих углеводный обмен. Рекомендуется в качестве вспомогательного средства при сахарном диабете. При использовании этого бальзама в комплексной терапии сахарного диабета появляется возможность уменьшить дозы противодиабетических препаратов, а при диабете лёгкой степени тяжести даже отказаться от них. Его можно сочетать с диетой, используемой в качестве монотерапии, а также с сахаропонижающими препаратами.

Медико-биологические исследования бальзамов, проведённые в независимых клинических учреждениях, подтверждают их системный и многоцелевой характер действия на организм человека (НИИ питания РАМН, Российская Медицинская Академия Последипломного Образования, Москва; Медицинский государственный университет, Медицинское .объединеие ДВО РАН, Центр медицины катастроф, неотложных состояний и скорой медицинской помощи, Дальневосточная клиническая центральная бассейновая больница водздрава МЗ РФ, Владивосток). “Гербамарин” оказывает лечебное действие не сразу, а постепенно, как бы наращивая своё присутствие в организме и проверяя его потребность в тех или иных БАВ. Эти бальзамы полезны и здоровым людям: они защищают организм против широкого спектра современных факторов риска (разнообразные стрессы, патогенные микроорганизмы, вирусы, токсины, химиотерапевтические средства, ионизирующее излучение и другие), повышают качество жизни и обеспечивают организм набором жизненно важных компонентов.

5.2 Свойства и характеристика биологически активной добавки к пище “Золотой рог”

       “Золотой рог” - серия оригинальных лечебно-профилактических пищевых композиций на основе биологически активных веществ морских гидробионтов и мёда. БАД рекомендуется как общеукрепляющее средство для коррекции нарушенных физиологических функций организма. Постоянное применение различных форм композиций «Золотой рог» позволяет оказывать системное фармакологическое действие на организм человека.

       “Золотой рог” - 1. Композиция включает в себя новый мощный и эффективный антиоксидант хиноидной природы - эхинохром. При резком повышении интенсивности перекисного окисления липидов (при различных видах стресса и других патологиях, у больных и пожилых людей), приводящем в конечном итоге к развитию широкого спектра патологических состояний, наблюдается корригирующее влияние эхинохрома на состояние антиоксидантной системы организма. Поскольку эхинохром слабо растворим в водных средах, форма его применения в сочетании с мёдом оптимизирует его растворимость и биоусвояемость. Данную композицию рекомендуется применять сублингвально, оставляя во рту под языком в течение нескольких минут, что способствует более эффективному всасыванию этого антиоксиданта в кровь.

       ”Золотой рог”- 2. Данная композиция наряду с эхинохромом содержит биологически активные вещества липидной природы из морского ежа. Липидная компонента этой композиции в сочетании с мёдом способствует повышению его эффективности при поступлении в организм через желудочно-кишечный тракт.

       “Золотой рог”-3. В состав композиции входит комплекс БАВ из бурой водоросли ламинарии (Laminaria japonica L.). Фармакологическое действие композиции обусловлено высоким содержанием хлорофилина (в виде комплекса с ионами меди), полиненасыщенных жирных кислот, каротиноидов, фитостеринов,а также уникальным микроэлементным составом близким по составу человеческой крови и высоким содержанием легко усвояемого природного йода, большая часть которого находится в виде йодитов (90%). Данная композиция рекомендуется для профилактики атеросклероза, улучшения обменных процессов в гепатоцитах и увеличения скорости восстановления мембран клеток при гепатитах, циррозах и других поражениях печени.

       “Золотой рог” - 4. В состав композиции входит комплекс биологически активных веществ, полученных из уникального диетического продукта - морской водоросли Fucus sp. Главными активными компонентами этой композиции являются аминокислоты, пептиды и широкий спектр витаминов (А, В1, В2, В3, В6, В12, С, Д, Е). Данная композиционная форма способствует омолаживанию кожных покровов и организма в целом, оказывает благотворное влияние на регенерационные процессы и обладает пластической функцией. Рекомендуется для применения при болезнях метаболического профиля.

Исследование, проведенное на репрезентативной группе больных с различными степенями алиментарного ожирения с привлечением биохимических методов диагностики, позволило выявить положительный эффект БАД "Золотой рог", направленный, главным образом, на улучшение потенциала антиоксидантной системы организма. Данные клинического изучения БАД свидетельствуют, что в комплексной терапии ИБС она достоверно снижает атерогенный фактор. К концу второго месяца терапии уровень систолического артериального давления у больных, по данным казуального измерения, снижается на 20%, по сравнению с исходным. Клинически антиоксидантный эффект БАД проявился в увеличении порога толерантности к физической нагрузке и преимущественном уменьшении эпизодов безболевой ишемии миокарда. На фоне курсовой терапии выявлено позитивное влияние на психоэмоциональный статус больных.

       Таким образом, результаты клинических испытаний свидетельствуют о хорошей переносимости и высоких органолептических свойствах БАД “Золотой рог”, которая нормализует ритм сердечной деятельности, способствует снижению атерогенного фактора, оказывает положительное влияние на состояние белкового и углеводного обмена, гепатобилиарной системы и системы гемостаза.

В связи с вышесказанным целесообразно рекомендовать применение БАД “Золотой рог” в лечебно-профилактических целях при соматических заболеваниях, сопровождающихся нарушением липидного обмена и снижением антиоксидантной защиты организма, таких как ожирение, атеросклерозе, ишемической болезни сердца, гипертонической болезни, нейроциркуляторной дистонии и др.

Заключение

       Всестороннее освоение биоресурсов Мирового океана, прогрессирующее из года в год, постоянно выдвигает задачи полноценного использования возобновляемого биологического сырья, добываемого с большими затратами. Развитие биотехнологических исследований, направленных на изучение БАВ морских гидробионтов и создание эффективных приемов их извлечения из океанического материала, является ключевым в процессе создания новых лекарственных препаратов, парафармацевтических средств и функциональных продуктов питания. До последнего времени основные лекарственные препараты, как правило, производились с использованием сырья растительного, микробного и животного происхождения. Нам впервые удалось показать перспективу использования океанических ресурсов для получения фармакологических препаратов (Коллагеназа КК, серия препаратов Гистохром), лечебно-профилактических средств охраны труда (напитки группы Vita) и ряда биологически активных добавок. Препараты, созданные на основе БАВ морского происхождения, обладали широким спектром фармакологического действия, а некоторые из них были отнесены к препаратам нового поколения – метаболическим корректорам.

       Хочется отметить, что успехи работ прикладной направленности невозможны без фундаментальных исследований новых морских природных соединений и всестороннего изучения их биологической активности.

Выводы

  1. Проведен скрининг морских гидробионтов и отходов их переработки с целью выявления новых источников БАВ, обладающих коллагенолитической активностью, противовирусным, антикоагулянтным, антидотным, противоопухолевым и противовоспалительным действием.
  2. Впервые разработаны технологии получения БАВ из отходов промышленной переработки океанического сырья (комплекс пептид-гидролаз из гепатопанкреаса краба, гидролизаты белков рыб и моллюсков, лектинов, биогликана митилан) и непромысловых видов гидробионтов (зостерин, полифенольный комплекс, розмариновая кислота, дисульфат лютеолина, астаксантин, коллаген и его пептиды).
  3. Впервые созданы новые лекарственные препараты на основе пигментов морских ежей “Гистохром” для кардиологии и офтальмологии и ферментного комплекса пептид-гидролаз краба “Коллагеназа КК”.
  4. Разработанные технологии реализованы на опытном производстве ТИБОХ ДВО РАН и фармацевтических предприятиях России.
  5. Впервые созданы парафармацевтические препараты на основе БАВ морских гидробионтов и исследованы их медико-биологические свойства.
  6. Впервые установлено, что биологически активные добавки на основе БАВ морских гидробионтов могут использоваться для лечения и предупреждения развития метаболического синдрома.
  7. Создана основа для разработки новых противовирусных и канцерпревентивных препаратов на основе БАВ, получаемых по разработанным технологиям.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Монография

  1. Лоенко Ю.Н., Артюков А.А., Козловская Э.П., Мирошниченко В.А., Еляков Г.Б. Зостерин / Владивосток: Дальнаука, 1997. 212 с.

Статьи в журналах, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки РФ

  1. Пирожникова В.В., Артюков А.А. Выделение и свойства дезоксирибонуклеазы из молок горбуши (Oncorhynchus gorbuscha (Walb.) // Известия СО АН СССР. Сер. биол. 1987. № 3. С. 112–115.
  2. Сахаров И.Ю., Литвин Ф.Е., Артюков А.А., Кофанова Н.Н. Очистка и характеристика коллагенолитической протеазы А из гепатопанкреаса Paralithodes camtschatica // Биохимия. 1988. Т. 53. № 11. С. 1844–1849.
  3. Лоенко Ю.Н., Артюков А.А., Лямкин Г.П., Глазкова В.Е., Руцкова Т.А. Лектины и агглютинины морских водорослей // Раст. ресурсы. 1990. Т. 26. № 2. C. 263–274.
  4. Попов А.М., Лямкин Г.П., Артюков А.А., Лоенко Ю.Н., Еляков Г.Б. Изучение фармакокинетики зостерина – пектина из морской травы Zostera asiatica // Докл. АН СССР. 1990. T. 315. № 1. C. 232–235.
  5. Лоенко Ю.Н., Лямкин Г.П., Артюков А.А., Еляков Г.Б. Биологически активные полисахариды морских водорослей и морских цветковых растений // Раст. ресурсы. 1991. T. 27. № 3. C. 150–160.
  6. Лоенко Ю.Н., Глазкова В.Е., Артюков А.А., Оводова Р.Г. Лектины морских беспозвоночных // Успехи современной биологии. 1992. T. 112. № 5–6. C. 785–794.
  7. Шапошникова Г.М., Бородина Н.П., Снегирева А.Е., Шевлягин В.Я., Лоенко Ю.Н., Попов А.М., Артюков А.А., Еляков Г.Б. Ингибирующее влияние полисахаридов морского генеза на развитие вирусиндуцированного лейкоза Раушера // Докл. РАН. 1992. T. 324. № 4. C. 881–884.
  8. Сахаров И.Ю., Литвин Ф.Е., Артюков А.А. Физико-химические свойства коллагенолитической протеазы C камчатского краба // Биохимия. 1992. T. 57. № 1. C. 40–45.
  9. Sakharov I.Y., Dzunkovskaya A.V., Artyukov A.A., Zakharova N.N. Purification and some properties of elastase from hepatopencreas of king crab Paralithodes camtschatica // Comp. Biochem. Physiol. 1993. V. 106B, N 3. P. 681–684.
  10. Sakharov I.Y., Litvin F.E., Artyukov A.A. Purification and characterization of 2 serine collagenolytic proteases from crab Paralithodes camtschatica // Comp. Biochem. Physiol. 1994. Vol. 108B, N 4. P. 561–568.
  11. Rasskazov V.A., Elyakova L.A., Kozlovskaya E.P., Sova V.V., Artyukov A.A. Hydrolytic enzymes of marine invertebrates and prospects for their utilization // Marine Technol. Soc. J. 1996. Vol. 30, N 1. P. 29-34.
  12. Касьяненко Ю.Н., Ковалева Ю.В., Эпштейн Л.М., Артюков А.А. Получение и свойства производных ДНК из молок  лососевых // Известия ТИНРО. 1997. Т. 120. С. 37–43.
  13. Крылова С. Г., Зуева Е. П., Разина Т. Г., Амосова Е. Н., Попов А. М., Артюков А.А., Козловская Э. П. Влияние апотромбостатина и тиакарпина на эффективность цитостатической терапии крыс с перевиваемой опухолью // Вестник ДВО РАН. 2007. № 6. С. 111–115.
  14. Лупач Н.М., Потапов В.Н., Хлудеева Е.А., Баофен Я., Артюков А.А., лукьянов П.А. Оксидантный статус и эндотелиальная дисфункция у больных стабильной стенокардией // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2007. № 25. С. 51–54.
  15. Крылова Н.В., Леонова Г.Н., Попов А.М., Артюков А.А., Майстровская О.С., Козловская Э.П. Противовирусная активность комплексного препарата розмариновой кислоты, полученной из Zostera asiatica в отношении возбудителя клещевого энцефалита // Тихоокеанский мед. журн. 2009. № 3. С. 86–88..
  16. Крылова Н.В., Леонова Г.Н., Майстровская О.С., Попов А.М.,  Артюков А.А., Козловская Э.П. Изучение активности препарата Люромарин in vitro в отношении вируса клещевого энцефалита // Антибиотики и химиотерапия. 2010. Т. 55. № 7–8. С. 17–19.
  17. Ehrlich H., Elkin Yu.N., Artyukov A.A., Kozlovskaya E., Stonik V.A., Safronov P.P., Kurek D.V., Bazhenov V.V., Kummer K., Vyalikh D., Molodtsov S.L., Sivkov V.N., Born R., Ruhnow M., Meissner H., Richter G. The Spines of sand dollar Scaphechinus mirabilis (Agassiz 1863): analytical and structural study // J. Adv. Microscopy Res. 2010. V. 5. N 2. P. 100–109.
  18. Елькин Ю.Н., Чередниченко А.И., Кольцова Е.А., Артюков А.А. Масс-спектрометрия с ионизацией захватом электронов эхинохрома А // Масс-спектрометрия. 2011. Т. 8. № 2. С. 147–149.
  19. Крылова Н.В., Леонова Г.Н., Попов А.М., Артюков А.А., Козловская Э.П. Изучение эффективности препарата Люромарин при экспериментальном клещевом энцефалите у мышей // Антибиотики и химиотерапия. 2011. Т. 56, № 7–8. С. 13–15.
  20. Попов А.М., Артюков А.А., Глазунов В.П., Мандрон Е.В., Кривошапко О.Н., Козловская Э.П. Противоопухолевая и антикоагулянтная активность коллагенового белка из голотурии Apostichopus japonicus, модифицированного протеолитическими ферментами // Биология моря. 2011. Т. 37,  № 3. С. 217–222..
  21. Попов А.М., Кривошапко О.Н., Артюков А.А. Сравнительная оценка фармакологической активности лютеолина и 7,3-дисульфата лютеолина при моделировании разных патологий // Биофарм. журн. 2011. Т. 3, № 4. С. 27–33.
  22. Попов А.М., Портнягина О.Ю., Артюков А.А., Санина Н.М., Мазейка А.Н., Костецкий Э.Я., Цыбульский А.А Адъювантный эффект тубулярных иммуностимулирующих коплексов, модифицированных эхинохромом А, в отношении порового белка из Yersinia pseudotuberculosis // Мед. иммунология. 2011. Т. 13, № 2–3. С. 139–144.
  23. Цыбульский А В., Попов А.М., Артюков А.А., Костецкий Э.Я., Кривошапко О.Н., Мазейка А.Н., Козловская Э.П. Сравнительное изучение лечебного действия лютеолина, розмариновой кислоты и эхинохрома А при экспериментальной кардиопатологии индуцированной стрессом // Биомед. химия. 2011. Т. 57, № 3. С. 314–325.
  24. Ehrlich H., Elkin Yu. N., Artyukov A.A., Stonik V.A., Safronov P.P., Bazhenov V.V., Kurek D.V., Varlamov V.P., Born R., Meissner H., Richter G. Simple method for preparation of nanostructurally organized spines of sand dollar Scaphechinus mirabilis (Agassiz, 1863) // Marine Biotechnol. 2011. V. 13, N 3. P. 402– 410.
  25. El’kin Y.N., Cherednichenko A.I., Kol’tsova E.A., Artyukov A.A. Electron capture mass spectrometry of echinochrom A // J. Anal. Chem. 2011. V. 66, N 14. P. 1477–1479.
  26. Krivoshapko O.N., Popov A.M., Artyukov A.A., Kostetsky E. Y. Peculiarities of the corrective effects of polar lipids and bioantioxidants from sea hydrobionts in impairments of lipid and carbohydrate metabolism // Biochemistry (Moscow) Suppl. Ser. B: Biomed. Chem. 2011. Vol. 5, N 2. P. 152–157.

Патенты

  1. А.с. 1343591 СССР, МКИ4 А 61 К 35/56. Способ получения коллагеназы / Сахаров И.Ю., Джунковская А.В., Артюков А.А., Сова В.В., Саканделидзе О.Г., Козловская Э.П.  № 3992368/28-14. Заявл. 13.12.85. Опубл. 30.04.92. Бюл. № 16.
  2. А.с. 1464322 СССР, МКИ4 А 61 К 37/46. Способ получения протеина, обладающего противоопухолевой активностью / Оводова Р.Г., Глазкова В.Е., Артюков А.А, Курика А.В., Беседнова Н.Н., Лоенко Ю.Н., Оводов Ю.С.  № 3972074/28-14. Заявл. 03.10.85. Опубл. 07.03.89. Бюл. № 9.
  3. А.с. 1526226 СССР, МКИ4 С 12 N 9/64. Способ получения коллагеназы / Сахаров И.Ю., Литвин Ф.Е, Артюков А.А., Кофанова Н.Н. № 4340904/30-13. Заявл. 09.12.87. Опубл. 30.11.89. Бюл. № 44.
  4. А.с. 1567626 СССР, МКИ5 С 12 N 11/04. Способ получения иммобилизованных клеток, обладающих сорбитолдегидрогеназной активностью / Кощеенко К.А., Донова М.В., Ковалев В.В., Артюков А.А., Оводова Р.Г. № 4379646/31-13. Заявл. 17.02.88. Опубл. 30.05.90. Бюл. № 20.
  5. А.с. 1693051 СССР, МКИ5 С 12 N 11/04. Способ получения гранулированного биокатализатора / Ковалев В.В., Донова М.В., Артюков А.А. № 4729056/13. Заявл. 08.08.89. Опубл. 23.11.91. Бюл. № 43.
  6. Пат. 1508535 Российская Федерация, МКИ4 С 07 С 50/32. Способ получения 2,3,5,7,8-пентагидрокси-6-этил-1,4-нафтохинона / Артюков А.А., Кочергина Т.Ю., Купера Е.В., Кольцова Е.А., Петухов П.В. № 4328761/31-04. Заявл. 04.09.87. Опубл. 27.08.96. Бюл. № 24.
  7. Пат. 1624973 Российская Федерация, МКИ5 С 08 В 37/00 /C 08 J 11/04. Способ получения биогликана из мидий / Оводова Р.Г., Глазкова В.Е., Оводов Ю.С., Молчанова В.И., Гефт В.Н., Михейская Л.В., Артюков А.А., Лоенко Ю.Н № 4648483/05. Заявл. 26.01.89. Опубл. 20.08.96. Бюл. № 23.
  8. Пат. 1782601 Российская Федерация, МКИ5 А 61 К 35/78. Способ лечения гастроэнтерологических заболеваний / Мирошниченко В.А., Папернова Н.Ю., Оводов Ю.С., Оводова Р.Г., Щеникова Н.В., Лямкин Г.П., Артюков А.А., Лоенко Ю.Н. № 4877596/14. Заявл. 02.10.90. Опубл. 23.12.92. Бюл. № 47.
  9. Пат. 1814764 Российская Федерация, МКИ5 A 61 K 31/557 /A 61 K 47/48. Способ получения средства для лечения гнойно-некротических ран / Гафуров Ю.М., Василенко С.К., Артюков А.А., Костив Е.П. № 4848928/14. Заявл. 20.04.90. Опубл. 20.03.95. Бюл. № 8.
  10. Пат. 1833544 Российская Федерация, МКИ5 А 61 K 31/33. Вещество, проявляющее кардиопротекторную активность / Левицкий Д.О., Лебедев А.В., Садретдинов С.М., Швилкин А.В., Афонская Н.И., Руда М.Я., Ундровинас А.И., Розенштраух Л.В., Флейдервиш И.А., Максимов О.Б., Мищенко Н.П., Кольцова Е.А., Артюков А.А., Глебко Л.И., Новиков В.Л., Ануфриев В.Ф., Еляков Г.Б., Серебрякова Л.И., Цкитишвили О.В., Черпаченко Н.М. № 4764884/14. Заявл. 06.12.89. Опубл. 07.08.93. Бюл. № 29.
  11. Пат.№1699350 СССР МПК С 12 N 9/64 Способ очистки коллагеназы / Сахаров И.Ю., Артюков А.А., Березин В.И. № 4806988. Заявл. 29.03.90. Опубл.15.12.91. Бюл. № 31.
  12. Пат. СССР №1833167 (приоритет от 13.12.91). Безалкогольный напиток “Flora-Vita” / Платова Е.А., Кудряшова А.А., Артюков А.А., Лоенко Ю.Н., Иванов Л.Г., Федосов Ю.В., Бокарев А.В., Козловский В.А.
  13. Пат. СССР № 1833165 (приоритет от 22.12.91). Безалкогольный напиток “Vita-marina”/ Платова Е.А., Кудряшова А.А., Артюков А.А., Лоенко Ю.Н., Иванов Л.Г., Федосов Ю.В., Бокарев А.В., Козловский В.А. 
  14. Пат. СССР № 1833166 (приоритет от 13.12.91). Безалкогольный тонизирующий напиток “Algue-Vita” / Платова Е.А., Кудряшова А.А., Артюков А.А., Лоенко Ю.Н., Иванов Л.Г., Федосов Ю.В., Бокарев А.В., Козловский В.А
  15. Пат. 1836085 Российская Федерация, МКИ5 А 61 K 31/18, 35/60, A 23 J 3/30. Способ получения белкового гидролизата / Артюков А.А., Козловская Э.П., Сахаров И.Ю., Кофанова Н.Н., Лагуткин Н.Г., Платова Е.А., Федосов Ю.В. № 5037717/14. Заявл. 18.05.92. Опубл. 23.08.93. Бюл. № 31.
  16. Пат. 1836100 Российская Федерация, МКИ5 А 61 K 37/18, 35/60, A 23 J 3/30. Способ получения белкового гидролизата / Артюков А.А., Кофанова Н.Н., Балаганский А.П., Сахаров И.Ю., Платова Е.А., Федосов Ю.В. № 5037716/14. Заявл. 18.05.92. Опубл. 23.08.93. Бюл. № 31.
  17. Пат. 2000064 Российская Федерация, МКИ5 А 23 L 1/0524. Способ получения пектина из морских трав / Артюков А.А., Лоенко Ю.Н., Ковалев В.В., Платова Е.А., Федосов Ю.В., Еляков Г.Б. № 5037519/13. Заявл. 15.04.92. Опубл. 07.09.93. Бюл. № 33.
  18. Пат. № 2014086 Российская Федерация, МКП А 61 L 15/12. Способ удаления некротических тканей / Сахаров И.Ю., Глянцев С.П., Адамян А.А., Добыш С.В., Литвин Ф.Е., Артюков А.А., Кузнецова В.А. № 5002616/14. Заявл. 19.09.91. Опубл. 15.06.94. Бюл. № 14
  19. Пат. 2019186 Российская Федерация, МКИ5 A 61 K 35/80. Способ ингибиции ВИЧ-инфекции / Быковский А.Ф., Миллер Г.Г., Покидышева Л.Н., Титова И.В., Артюков А.А., Попов А.М., Прозоровский С.В., Лоенко Ю.Н., Хесс Джозеф(US), Еляков Г.Б., Стоник В.А., Исаков В.В. № 4915132/14. Заявл. 28.02.91. Опубл. 15.09.94. Бюл. № 17.
  20. Пат. 2039460 Российская Федерация, МКИ6 A 23 J 3/00. Способ получения белкового гидролизата / Артюков А.А, Козловская Э.П., Козловский А.С., Кофанова Н.Н., Альшевская Е.К., Сахаров И.Ю., Вожжова Е.И. № 93031307/13. Заявл. 09.06.93. Опубл. 20.07.95. Бюл. № 20.
  21. Пат. 2040261 Российская Федерация, МКИ6 A 61 K 35/26. Способ получения гемоцианина / Артюков А.А, Козловский А.С., Козловская Э.П., Руцкая Т.А., Сахаров И.Ю. № 93028930/14. Заявл. 18.06.93. Опубл. 27.07.95. Бюл. № 21.
  22. Пат. № 2031939 Российская Федерация. МКП C12 N1/20 Способ получения основы питательных сред для культивирования микроорганизмов / Гиршович Е.С.; Сахаров И.Ю.; Герасимова Г.А.; Козлова Н.В.; Артюков А.А.; Литвин Ф.Е. № 93016879/13. Заявл. 31.03.1993. Опубл. 27.03.1995. Бюл. № 24.
  23. Пат. 2055482 Российская Федерация, МКИ6 A 23 J 3/04, 3/00, 3/34, A 61 K 35/60. Способ получения белково-нуклеинового гидролизата / Гафуров Ю.М., Козловская Э.П., Рассказов В.А., Галкин В.В., Артюков А.А., Козловский А.С., Арзамасцев Е.В. № 94017640/13. Заявл. 13.05.94. Опубл. 10.03.96. Бюл. № 7.
  24. Пат. 2058135 Российская Федерация, МКИ6 A 61 K 7/50, C 11 D 3/386. Биологическия добавка к моющим средствам для удаления белковых загрязнений / Артюков А.А., Козловская Э.П., Козловский А.С., Гафуров Ю.М., Батырева А.К., Сахаров И.Ю. № 93028929/14. Заявл. 18.06.93. Опубл. 20.04.96. Бюл. № 11.
  25. Пат. 2088104 Российская Федерация, МКИ6 А 23 J 3/34, 3/30, 3/04, 3/08, 3/10, 3/12, 3/14. Способ получения белковых гидролизатов из белоксодержащего сырья / Козловская Э.П., Артюков А.А., Альшевская Е.К., Козловский А.С., Балаганский А.П., Корниенко В.Г. № 96108006/13. Заявл. 30.04.96. Опубл. 27.08.97. Бюл. № 24.
  26. Пат. 2092077 Российская Федерация МКИ6 А 23 L 1/09, 1/30? A 61 K 35/78. Композиция ингредиентов для сиропа бальзама “Гербамарин” / Гафуров Ю.М., Лоенко Ю.Н., Горовой П.Г., Рассказов В.А., Козловская Э.П., Козловский А.С., Артюков А.А., Емец Ю.А., Мазурик В.Г., Колей О.Н., Савостьянова Г.Е., Еляков Г.Б., Бокарев А.В.  №. 96121711/13. Заявл. 14.11.96. Опубл. 10.10.97.. Бюл. № 28.
  27. Пат. 2093046 Российская Федерация, МКИ6 A 23 L 1/30, 1/308, A 61 K 35/78, A 23 L 2/00. Лечебно-профилактическая пищевая композиция «Гербамарин» / Лоенко Ю.Н., Козловская Э.П., Артюков А.А., Ковалев В.В., Козловский А.С., Горовой П.Г., Гафуров Ю.М., Рассказов В.А., Попов А.М., Еляков Г.Б. № 96108185/13. Заявл. 06.05.96. Опубл. 20.10.97. Бюл. № 29.
  28. Пат. 2093166 Российская Федерация, МКИ6 A 61 K 35/39. Ранозаживляющее средство “Коллагеназа КК” широкого спектра действия / Козловская Э.П., Артюков А.А., Козловский А.С., Вожжова Е.И., Кофанова Н.Н., Еляков Г.Б. № 95122189/14. Заявл. 29.12.95. Опубл. 20.10.97. Бюл. № 29.
  29. Пат. 2122856 Российская Федерация, МКИ 61K35/60. Способ получения нуклеопротеидного комплекса / Эпштейн Л.М., Касьяненко Ю.Н., Артюков А.А. № 95111141/14. Заявл. 28.06.95. Опубл. 10.12.98.
  30. Пат. 2134107 Российская Федерация, МКИ6 A 61 K 31/05, 9/08. Препарат “Гистохром” для лечения воспалительных заболеваний сетчатки и роговицы глаз / Еляков Г.Б., Максимов О.Б., Мищенко Н.П., Кольцова Е.А., Федореев С.А., Глебко Л.И., Красовская Н.П., Артюков А.А. № 98118370/14. Заявл. 2.10.98. Опубл10.08.99. Бюл. № 22.
  31. Пат. 2137400 Российская Федерация, МКИ6 A 23 L 1/30, 1/305, 1/308, A 61 K 35/78, 35/12. Способ производства лечебно-профилактической пищевой композиции «Золотой Рог» / Козловская Э.П., Лоенко Ю.Н., Артюков А.А., Козловский А.С., Максимов О.Б., Елякова Л.А., Звягинцева Т.Н., Еляков Г.Б., Эпштейн Л.М., Касьянов С.П., Акулин В.Н. № 98108343/13. Заявл. 12.05.98. Бюл. № 26.
  32. Пат. 2137472 Российская Федерация, МКИ6 A 61 K 31/05, 9/08. Лекарственный препарат “Гистохром” для лечения острого инфаркта миокарда и ишемической болезни сердца / Еляков Г.Б., Максимов О.Б., Мищенко Н.П., Кольцова Е.А., Федореев С.А., Глебко Л.И., Красовская Н.П., Артюков А.А. № 98118369/14. Заявл. 12.10.98. Опубл. 20.09.99. Бюл. № 26.
  33. Пат. 2165161 Российская Федерация, МПК7 A 23 L 1/30, 1/39, 1/06, 2/385, C 12 G 3/06, A 23 G 3/00. Биологически активная добавка к пище / Емец. Ю.А., Мазурик В.Г., Савостьянова Г.Е., Колей О.Н., Морозова И.П., Лоенко Л.Н., Козловская Э.П., Козловский А.С., Артюков А.А., Рассказов В.А., Еляков Г.Б., Попов А.М. № 2000117778/13. Заявл. 07.07.00. Опубл. 20.04.01. Бюл. № 11.
  34. Пат. 2165162 Российская Федерация, МПК7 A 23 L 1/30, 1/39, 1/06, 2/385, C 12 G 3/06, A 23 G 3/00. Биологически активная добавка к пище / Емец. Ю.А., Мазурик В.Г., Савостьянова Г.Е., Колей О.Н., Морозова И.П., Лоенко Л.Н., Козловская Э.П., Козловский А.С., Артюков А.А., Рассказов В.А., Еляков Г.Б., Попов А.М. № 2000117779/13. Заявл. 07.07.00. Опубл. 20.04.01. Бюл. № 11.
  35. Пат. 2165719 Российская Федерация, МПК7 A 23 L 1/30, 1/39, 1/06, 2/385, C 12 G 3/06, A 23 G 3/00. Биологически активная добавка к пище / Емец. Ю.А., Мазурик В.Г., Савостьянова Г.Е., Колей О.Н., Морозова И.П., Лоенко Л.Н., Козловская Э.П., Козловский А.С., Артюков А.А., Рассказов В.А., Еляков Г.Б., Гафуров Ю.М., Горовой П.Г., Бокарев А.В. № 2000117780/13. Заявл. 07.07.00. Опубл. 27.04.01. Бюл. № 12.
  36. Пат. 6,384,084 США, МПК7 A 61 K 31/05. Histochrome and its therapeutic use in ophthalmology disease / Elyakov G.B., Maximov O.B., Mischenko N.P., Koltsova E.A., Fedoreev S.A., Glebko L.I., Krasovskaya N.P., Artjukov A.A. Appl. № 09/832,789, Filed: Apr. 12, 2001. Priority data: Oct. 12, 1998, № 98118370 (RU).
  37. Пат. 6,410,601 США, МПК7 A 61 K 31/12. Histochrome and its therapeutic use in acute myocardial infarction and ischemic heart disease / Elyakov G.B., Maximov O.B., Mischenko N.P., Koltsova E.A., Fedoreev S.A., Glebko L.I., Krasovskaya N.P., Artjukov A.A. Appl. № 09/832,864, Filed: Apr. 12, 2001. Priority data: Oct. 12, 1998, № 98118369 (RU).
  38. Заявка WO 00/21518 Россия, МПК7 А 61 К 31/122, 9/08, А 61 Р 43/00. Лекарственный препарат “Гистохром”для лечения глазных заболеваний / Еляков Г.Б., Максимов О.Б., Мищенко Н.П., Кольцова Е.А., Федореев С.А., Глебко Л.И., Красовская Н.П., Артюков А.А. № PCT/RU99/00248. Заявл. 21.07.99. Опубл. 20.04.00. Приор. 12.10.98, № 98118370 (Россия).
  39. Заявка WO 00/21519 Россия, МПК7 А 61 К 31/122, 9/08, А 61 Р 9/10. Лекарственный препарат “Гистохром”для лечения острого инфаркта миокарда и ишемической болезни сердца / Еляков Г.Б., Максимов О.Б., Мищенко Н.П., Кольцова Е.А., Федореев С.А., Глебко Л.И., Красовская Н.П., Артюков А.А. PCT/RU99/00249. Заявл. 21.07.99. Опубл. 20.04.00. Приор. 12.10.98, № 98118369 (Россия).
  40. Pat. EP 1121929 B1 European Patent Office, Int.CI.7 A 61 K 31/122/ Composition comprising di- and trisodiumsalts of echinochrome for treating ocular conditions / Elyakov G.B., Maximov O.B/, Koltsova E.A., Fedoreev S.A., Glebko L.I., Krasovskaya N.P., Artjukov A.A. Appl. 03.11.2004. Filed: 21.07.1999. Priority data: Oct. 12, 1998, № 98118369 (RU).
  41. Pat. EP 1121930 B1 European Patent Office, Int.CI.7 A 61 K 31/122. Drug preparation “Histochrom” for treating acute myocardial infarction and ischemic heart disease / Elyakov G.B., Maximov O.B/,Mischenko N.P., Koltsova E.A., Fedoreev S.A., Glebko L.I., Krasovskaya N.P., Artjukov A.A. Appl. 14.11.2007. Filed: 21.07.1999. Priority data: Oct. 12, 1998, № 98118369 (RU).
  42. Пат. 2280076 Российская Федерация, МПК С 12N 9/48, C 12N 9/64. Ферментный препарат из гепатопанкреаса промысловых видов крабов и способ его получения / Артюков А.А., Мензорова Н.И., Козловская Э.П., Кофанова Н.Н., Козловский А.С., Рассказов В.А. №2004135771. Заявл. 06.12.04. Опубл. 20.07.06. Бюл. №20.
  43. Пат. 2283298 Российская Федерация, МПК С 07С 50/32. Способ получения 2,3,5,7,8-пентагидрокси-6-этил-1,4-нафтохинона / Артюков А.А., Купера Е.В., Кольцова Е.А.Ю Кочергина Т.Ю., Руцкова Т.А. № 2005126564. Заявл. 22.08.05. Опубл. 10.09.06. Бюл. №25.
  44. Пат. 2286162 Российская Федерация, МПК А 61 К 35/56, А 61 Р 17/00. Способ лечения кожных проявлений склеродермии / Козловская Э.П., Артюков А.А, Козловский А.А., Самцов А.В., Барбинов В.В., Озерская О.С., Атаманчук А.А. № 2005111606. Заявл. 19.04.05. Опубл. 27.10.05. Бюл. №30.
  45. Пат. 2286685 Российская Федерация, МПК А 23 L 1/333. Способ получения железосодержащей биологически активной пищевой добавки / Руцкова Т.А., Кофанова Н.Н., Козловская Э.П., Глазунов В.П., Артюков А.А. № 2005107886. Заявл. 21.03.05. Опубл. 10.11.06. Бюл. №31.
  46. Пат. 2286791 Российская Федерация, МПК А 61 К 35/56, А 61 Р 17/02. Способ лечения рубцов / Козловская Э.П., Артюков А.А, Козловский А.А., Самцов А.В., Барбинов В.В., Озерская О.С., Атаманчук А.А. № 2005111607. Заявл. 19.04.05. Опубл. 10.11.06. Бюл. №31.
  47. Пат. 2302250 Российская Федерация, МПК А 61 К 35/56, А 61 Р 7/02. Средство, обладающее антикоагулянтным действием, и способ его получения / Попов А.М., Артюков А.А, Ли И.А., Глазунов В.П., Кофанова Н.Н., Козловская Э.П. № 2006104772/15. Заявл. 15.02.06. Опубл. 10.07.07. Бюл. №19.
  48. Пат. 2302429 Российская Федерация, МПК7 С 08 В 037/15. Способ получения фукоидана из ламинарии / Врищ Э.А., Ковалев Н.Н., Эпштейн Л.М., Якуш Е.В., Беседнова Н.Н., Артюков А.А., Кузнецова Т.А., Запорожец Т.С. №2005132687/13. Заявл. 24.10.2006. Опубл. 10.07.07. Бюл.№10.
  49. Пат. 2335127 Российская Федерация, МПК А 01 N 1/02. Способ консервации плоского морского ежа / Артюков А.А, Купера Е.В., Руцкова Т.А., Глазунов В.П., Долгих С.Н., Козловская Э.П. № 2007123813/15. Заявл. 25.06.07. Опубл. 10.10.08. Бюл. №28.
  50. Пат. 2337696 Российская Федерация, МПК А 61 К 35/56, А 61 Р 3/06. Способ коррекции нарушения липидного обмена / Потапов В.Н.. Лупач Н.М., Веселкина Е.Ю., Хлудеева Е.А., Артюков А.А., Курика А.В., Козловская Э.П., Рассказов В.А., Долгих С.Н. № 2007109006/14. Заявл.12.03.06. Опубл. 10.11.08. Бюл. № 31.
  51. Пат. 2340216 Российская Федерация, МПК А 23 L 1/30.  Биологически активная добавка к пище и способ ее получения / Артюков А.А., Глазунов В.П., Козловская Э.П., Козловский А.С., Купера Е.В., Руцкова Т.А., Курика А.В., Попов А.М.№ 2007122609/13. Заявл.15.06.07. Опубл. 10.12.08. Бюл. № 34
  52. Пат. 2352554 Российская Федерация, МПК C07C 50/32. Способ получения 2,3,5,7,8,-пентагидрокси-6-этил-1,4-нафтохинона / Артюков А.А.. Козловская Э.П., Купера Е.В., Руцкова Т.А.. Балаганский А.П.. Глазунов В.П., Маханьков В.В.  № 2007131681. Заявл. 20.08.07. Опубл. 20.04.09. Бюл. № 11.
  53. Пат. 2359686 Российская Федерация, МПК А61К 35/56, А61Р 9/00. Способ коррекции эндотелиальной дисфункции / Потапов В.Н.. Лупач Н.М., Веселкина Е.Ю., Хлудеева Е.А., Артюков А.А., Курика А.В., Козловская Э.П., Рассказов В.А., Долгих С.Н., Лукьянов П.А. № 2007125205/14. Заявл. 03.07.07. Опубл. 27.06.09. Бюл. № 18.
  54. Пат. 2360683 Российская Федерация, МПК А61К 31/722, А61Р3/00.  Композиция для коррекции патологических нарушений углеводного, липидного обмена и антиоксидантного статуса организма / А.А. Артюков, Э.П. Козловская, А.М. Попов, В.П. Глазунов, А.С. Козловский, Е.В. Купера, Т.А. Руцкова, А.В. Курика и А.П. Балаганский. № 2008114994. Заявл. 16.04.08. Опубл. 10.07.09. Бюл. № 19.
  55. Пат. 2362573 Российская Федерация, МПК А61К 35/56, А61К 38/17.  Способ получения спинохрома А и белка морских ежей, взаимодействующего с полигидроксинафтохиноном / А.А. Артюков, Е.В. Купера, Т.А. Руцкова, Н.Н. Кофанова, А.В. Курика, В.П. Глазунов, Э.П. Козловская. № 2008114993. Заявл. 16.04.08. Опубл. 27.07.09. Бюл. № 21.
  56. Пат. 2396244 Российская Федерация, МПК C07C 49/215. Способ получения пурпурогаллина / Артюков А.А.. Маханьков В.В., Купера Е.В., Руцкова Т.А., Козловская Э.П. № 2008151492. Заявл. 23.12.08. опубл. 10.08.10. Бюл. № 22.
  57. Пат. 2401827 Российская Федерация, МПК С07С 69/732. Способ получения розмариновой кислоты / Артюков А.А., Купера Е.В., Руцкова Т.А., Маханьков В.В., Новиков В.Л., Глазунов В.П., Козловский А.С., Попов А.М., Козловская Э.П., № 2009105341, заявл. 16.02.2009. опубл. 20.10.10. Бюл. № 29.
  58. Пат. 2411939 Российская Федерация, МПК А 61 К 31/122. Способ получения 2,3,6,7-тетрагидроксинафтазарина / Артюков А.А., Купера Е.В., Руцкова Т.А., Маханьков В.В., Глазунов В.П.,. Козловская Э.П., Кольцова Е.А., № 2009126951, заявл. 13.07.2009. опубл. 20.02.11. Бюл. № 5
  59. Пат. 2432959  Российская Федерация, МПК А 61 K 36/88. Средство, обладающее антиоксидантным, кардиопротекторным, противодиабетическим, противовоспалительным,  гепатопротектовным, противоопухолевым и противовирусным действием / Попов А.М., Артюков А.А,  Кривошапко  О.Н., Крылова Н.В, Леонова Г.Н., Козловская Э.П. № 2010141686/15 . Заявл. 11.10.2010. Опуб. 10.11.11. Бюл. № 31.
  60. Пат. 2432960  Российская Федерация, МПК А 61 К 36/88. Способ получения 7,3’-дисульфата лютеолина / Артюков А.А, Кочергина Т.Ю.,  Руцкова Т.А., Купера Е.В., Новиков В.Л., Глазунов В.П., Маханьков В.В., Козловская Э.П  № 2010141321. Заявл. 7.10.2010. Опуб. 10.11.11. Бюл. № 31.

Статьи в научных журналах, сборниках научных трудов

  1. Лоенко Ю.Н., Глазкова В.Е., Артюков А.А., Руцкова Т.А., Оводова Р.Г. Противоопухолевая активность нового галактозомпецифического лектина из промыслового моллюска Crenomytilus grayanus // Химиотерапия опухолей в СССР. 1987. № 50. С. 120–123.
  2. Лоенко Ю.Н., Оводова Р.Г., Ковалев В.В., Артюков А.А. Противоопухолевая активность зостерина – пектина из морской травы Zosteraсeae // Химиотерапия опухолей в СССР. 1987. № 50. С. 141–144.
  3. Глазкова В.Е., Купера Е.В., Лоенко Ю.Н., Артюков А.А. Оптимизация стадии экстракции в технологическом процессе получения митилана, обладающего иммуностимулирующей противоопухолевой активностью // Химиотерапия опухолей в СССР. 1988. № 51. С. 120–125.
  4. Лоенко Ю.Н., Глазкова В.Е., Артюков А.А., Михайлов В.В., Курика А.В., Оводова Р.Г., Руцкова Т.А. К характеристике нового галактозоспецифического лектина из мидии Японского моря Crenomytilus grayanus // Изучение и применение лектинов. Тарту, 1989. Т. 1: Общие вопросы. Химия и биохимия лектинов (Уч. зап. Тартус. ун-та; Т. 869. Тр. по химии, вып. 19): С. 145–147.
  5. Запорожец Т.С., Беседнова Н.Н., Лямкин Г.П., Лоенко Ю.Н., Артюков А.А. Влияние зостерина – пектина из морской травы Zostera на выживаемость животных с экспериментальным псевдотуберкулезом // Иерсиниозы (микробиология, эпидемиология, клиника, патогенез, лабораторная диагностика): Тез. Всесоюз. науч.-практ. конф. (12–13 сент. 1989 г.). Владивосток, 1989. Ч. 2. C. 27–29.
  6. Лоенко Ю.Н., Лямкин Г.П., Артюков А.А., Ковалев В.В., Иванов Л.Г. Модифицирующее действие зостерина на метастатический процесс в эксперименте // Химиотерапия опухолей в СССР. 1991. № 56. C. 53–55.
  7. Лоенко Ю.Н., Лямкин Г.П., Ковалев В.В., Артюков А.А., Иванов Л.Г. Снижение зостерином токсического действия 5-фторурацила в эксперименте на мышах // Химиотерапия опухолей в СССР. 1991.№ 56. C. 50–52.
  8. Шляхова А.В., Богданович Р.Н., Артюков А.А., Козловская Э.П. Иммунопрофилактика хронической патологии респираторного тракта: [тез. докл.] объед. иммунол. форума, Санкт-Петербург, 30 июня – 5 июля 2008 // Рос. иммунол. журн. 2008. Т. 2. № 2–3: С. 207–208.
  9. Кривошапко О.Н., Попов A.M., Артюков А.А. Применение биоантиоксидантов при нарушениях липидного и углеводного обмена //Здоровье. Медицинская экология. Наука, 2009. № 4–5 (39–40). С. 86–89.
  10. Попов А.М., Артюков А.А., Кривошапко О.Н., Петровичева С.Е., Цыбульский А.В., Козловская  Э.П. Противовоспалительные и иммуномодулирующие свойства препарата “Люромарин” при окислительном стрессе: материалы науч. форума “Дни  иммунологии в Санкт-Петербурге  2009”,  Санкт-Петербург, 8–11 июня 2009 г.  // Мед. иммунол. 2009. Т. 11, № 4–5. С. 331–332.
  11. Попов А.М., Цыбульский А.В., Артюков А.А., Кривошапко О.Н. Влияние лютеолина, розмариновой кислоты и эхинохрома А на иммунитет при моделировании стресс-индуцированной кардиопатологии : труды межрегион. форума “Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии – междисциплинарные проблемы”, (27 – 30 сент. 2010 г., Санкт-Петербург) // Рос. аллергол. журн. 2010. № 5, вып. 1. С. 228–229.
  12. Попов А. М., Артюков А. А., Цыбульский А. В., Кривошапко О. Н. Оценка иммуномодулирующей активности эхинохрома А из морского ежа Scaphechinus mirabilis: XIV всерос. науч. форум Дни иммунологии в Санкт-Петербурге, 23–26 мая 2011 г. // Мед. иммунол. 2011. Т. 13, № 4–5. С. 329–330.

Публикации в сборниках материалов конференций

  1. Глазкова В.Е., Лоенко Ю.Н., Артюков А.А. Кислоторастворимый белковый адгезин. Получение и применение для выделения и иммобилизации клеток // Методы получения и анализа биохимических препаратов: Тез. докл. V Всесоюз. конф. (г. Юрмала, 26–28 окт. 1987 г.). Рига, 1987. С. 163.
  2. Пирожникова В.В., Артюков А.А.  Способ одновременного получения ДНК и кислой дезоксирибонуклеазы из молок лососевых рыб // Методы получения и анализа биохимических препаратов: Тез. докл. V Всесоюз. конф. (г. Юрмала, 26-28 окт. 1987 г.). Рига, 1987. С. 229.
  3. Кузнецова С.М., Рочев Ю.А., Артюков А.А. Культура клеток морского ежа Scaphechinus mirabilis – возможный источник получения эхинохрома // II Междунар. школа-конф. молодых ученых соц. стран "Молекуляр. основы биотехнологии":, 9–15 нояб. 1987 г.: Тез. докл. Пущино, 1987. C. 74–75.
  4. Лямкин Г.П., Артюков А.А., Ковалев  В.В., Лоенко Ю.Н. Влияние зостерина, альгината натрия и различных видов пектинов на связывание и выведение свинца из организма // Всесоюз. семинар “Проблемы производства продукции из красных и бурых водорослей”, Владивосток, 1987. С.67 – 68.
  5. Loyenko Yu.N., Artyukov A.A., Glazkova V.E., Rutskova Т.А. Galactozospecifical lectin from the mussel Crenomytilus grayanus. II Abstracts of Papers of the X-th International Lectin Conference. Czechoslovakia, Prague, 1988. P.3.
  6. Глазкова В.Е., Молчанова В.И., Михейская Л.В., Оводова Р.Г., Артюков А.А., Беседнова Н.Н. Дальневосточная мидия – источник биологически активных веществ // Биологически активные вещества при комплексной утилизации гидробионтов: Тез. докл. Всесоюз. совещ., 24–26 мая 1988 г., Владивосток, 1988. C. 77-78.
  7. Запорожец Т.С., Оводова Р.Г., Артюков А.А., Глазкова В.Е., Лоенко Ю.Н. Лектиновая активность полисахарид-белкового комплекса, выделенного из мидии Crenomytilus grayanus // Биологически активные вещества при комплексной утилизации гидробионтов: Тез. докл. Всесоюз. совещ., 24–26 мая 1988 г. Владивосток, 1988. C. 74–75.
  8. Лоенко Ю.Н., Ковалев В.В., Бурцева Т.И., Артюков А.А., Лямкин Г.П. Изменение транссудационно-резорбтивной функции брюшины под влиянием зостерина // Биологически активные вещества при комплексной утилизации гидробионтов: Тез. докл. Всесоюз. совещ., 24–26 мая 1988 г. Владивосток, 1988.C. 103–104.
  9. Ковалев В.В., Артюков А.А., Лоенко Ю.Н., Лямкин Г.П. Использование морской травы зостеры для получения низкоэтерифицированного пектина // Регион. конф. Сибири и Дал. Востока "Перспективы развития малотоннаж. химии", 3–5 окт. 1989: Тез. докл. Красноярск, 1989. С. 143.
  10. Lyamkin G.P., Artyukov A.A., Loyenko Yu.N. The application of marine natural polysaccharides to remove lead ions from organism // Proceedings of the VI International Symposium on marine natural products. Senegal, Dakar, 1989. P. 12.
  11. Kofanova N.N.,  Popov A.M.,  Artyukov A.A.  High-active collagenase of marine invertebrates // Proc. of the sixth Intern. symp. on marine natural products. - Dakar (Senegal), 1989. - P. 4
  12. Loyenko Yu.N., Glazkova V.E., Mihkailov V.V., Artyukov A.A., Rutskova T.A. The selectivity of the interection of lectins isolated from Crenomytilus grayanus with some spp. // Abstracts of Papers of the 11-th International Lectin Conference. Estonia,Tartu University, 1989. P.45.
  13. Glazkova V.E.,  Ovodova R.G.,  Artyukov A.A.,  Loyenko Yu.S.,  Lakhtin V.M.,  Ovodov Yu.S.  Isolation and characterization of adhesin from the mussel Crenomytilus grayanus // Book of abstrs of the eleventh Intern. lectin conf., Estonia, June 4-9, 1989. - Tarty, 1989. - P. 22.
  14. Loenko Yu.N.,  Glazkova V.E.,  Mikhailov V.V.,  Artyukov A.A.,  Rutskova T.A.,  Ovodova R.G.  The Selectivity of the interaction of lectins isolated from Crenomytilus grayanus with some spp. of microorganisms // Book of abstrs of the eleventh Intern. lectin conf., Estonia, June 4-9, 1989. - Tarty, 1989. - P. 45.
  15. Lyamkin G.P.,  Artyukov A.A.,  Loenko Yu.N.  The Application of marine natural polysaccharides to remove lead ions from organism // Proc. of the sixth Intern. symp. on marine natural products. - Dakar (Senegal), 1989. - P. 12.
  16. Артюков А.А., Кофанова Н.Н., Сахаров И.Ю., Шевченко Л.А., Михайлов В.В. Новые морские микроорганизмы - продуценты эластолитических ферментов // Методы получения, анализа и применения ферментов: Тез. докл. Всесоюз. конф. (г. Юрмала, 10-14 дек. 1990 г.). Рига, 1990. С. 22.
  17. Артюков А.А., Кофанова Н.Н., Сахаров И.Ю., Селезнева А.И., Прокопович А.В., Родина З.В. Получение коллагенолитической протеазы из отходов переработки морских беспозвоночных для медицины // Методы получения , анализа и применения ферментов: Тез. докл. Всесоюз. конф. (г. Юрмала, 10–14 дек. 1990 г.). Рига, 1990. С. 23.
  18. Лямкин Г.П., _Лоенко Ю.Н., Артюков А.А. и др. Применение низкометоксилированного пектина из морских трав (зостерина) в качестве элемента лечебно-профилактического питания при свинцовой интоксикации // Всесоюз. конф. по химии пищевых веществ, свойствам и использованию биополимеров в пищевых продуктах (Могилев, 1990 г.): Тез. докл. Могилев, 1990. C. 209.
  19. Мирошниченко В.А., Шаронов А.С., Суровенко Т.Н., Папернова Н.Ю., Калина Т.И., Лоенко Ю.Н., Лямкин Г.П., Артюков А.А. Иммуномодулирующее действие пектина морских трав - зостерина // Иммуномодуляторы природного происхождения: Тез. докл. рабочего совещ. (Владивосток, 9–10 окт. 1990 г.). Владивосток, 1990. C. 36–37.
  20. Рочев Ю.А., Кузнецова С.М., Гаврилюк Б.К., Артюков А.А., Кольцова Е.А. Культуры клеток иглокожих // III Всесоюз. совещ. "Культивирование клеток животных и человека" (Пущино, 1990 г.): Тез. докл. Пущино, 1990. C. 47.
  21. Glazkova V.E.,  Fedoreyeva L.I.,  Ovodova R.G.,  Artyukov A.A.,  Ovodov Yu.S.  Physico-chemical characterization of lectins from the mussel Crenomytilus grayanus // 13th Intern. lectin meet., Aug. 11-17, 1991, Berlin: Abstrs. - Berlin, 1991.
  22. Loyenko Yu.N., Popov A.M., Aminin D.L., Artyukov A.A., Glazkova V.E. Macrophagal cytotoxity for tumor cells induced by lectin from mussel Crenomytillus grayanus. II Abstracts of Paper of the 13-th International Lectin conference. Germany, Berlin, 1991. P.32
  23. Loenko Yu.N.,  Glazkova V.E.,  Artyukov A.A.,  Ovodova R.G.  Immunomodulating activity of a new galactose-specific lectin isolate from the mussel Crenomytilus grayanus residing in the Japan sea // 13th Intern. lectin meet., Aug. 11-17, 1991, Berlin: Abstrs. - Berlin, 1991. - P. 33.
  24. Rutzkova T.A.,  Loenko Yu.N.,  Artyukov A.A.,  Glazkova V.E.  Immunomodulating activity of agglutinin from red alga Tichocarpus crinitus // 13th Intern. lectin meet., Aug. 11-17, 1991, Berlin: Abstrs. - Berlin, 1991. - P. 47
  25. Балаганский А.П., Артюков А.А. Получение хитина, хитозана, аминокислотно-пептидного гидролизата, протеиноминерального концентрата как комплексное использование продукции крабового и крилевого промыслов // Всесоюз. совещ. "Биол. актив. вещеcтва гидробионтов – новые лекарств., лечеб.-профилакт. и техн. препараты", 23–27 сент. 1991 г.: [Тез. докл.]. Владивосток, 1991. С. 102–103.
  26. Запорожец Т.С., Лоенко Ю.Н., Беседнова Н.Н., Артюков А.А. Антибактериальная и иммуномодулирующая активность фукоидана – полисахарида из морской водоросли Laminaria japonica // Всесоюз. совещ. "Биол. актив. вещеcтва гидробионтов – новые лекарств., лечеб.-профилакт. и техн. препараты", 23–27 сент. 1991 г.: [Тез. докл.]. Владивосток, 1991. С. 113–114.
  27. Иванова Е.П., Лоенко Ю.Н., Артюков А.А., Гафуров Ю.М., Оводова Р.Г., Иванов Л.Г., Романенко Л.А., Мирошниченко В.А., Красных М.А. Влияние полисахаридов морских гидробионтов на клинические штаммы Campylobacter spp. // Всесоюз. совещ. "Биол. актив. вещеcтва гидробионтов – новые лекарств., лечеб.-профилакт. и техн. препараты", 23-27 сент. 1991 г.: [Тез. докл.].  Владивосток, 1991. С. 133-134.
  28. Кофанова Н.Н., Артюков А.А. Протеолитические ферменты гидробионтов. Свойства и способы получения // Всесоюз. совещ. "Биол. актив. вещеcтва гидробионтов - новые лекарств., лечеб.-профилакт. и техн. препараты", 23-27 сент. 1991 г.: [Тез. докл.].  Владивосток, 1991. С. 7
  29. Купера Е.В., Артюков А.А., Лябина С.Г., Лоенко Ю.Н. К характеристике биологически активной фракции каротиноидов, выделенной из морской звезды Patiria pectinifera // Всесоюз. совещ. "Биол. актив. вещеcтва гидробионтов – новые лекарств., лечеб.-профилакт. и техн. препараты", 23–27 сент. 1991 г.: [Тез. докл.]. - Владивосток, 1991. C. 101–102.
  30. Лоенко Ю.Н., Иванов Л.Г., Лябина С.Г., Артюков А.А. Антиметастатическая активность фукоидана // Всесоюз. совещ. "Биол. актив. вещеcтва гидробионтов – новые лекарств., лечеб.-профилакт. и техн. препараты", 23–27 сент. 1991 г.: [Тез. докл.]. Владивосток, 1991. C. 114–115.
  31. Лоенко Ю.Н., Аминин Д.Л., Глазкова В.Е., Артюков А.А., Попов А.М. Биохимические особенности цитотоксического действия лектина из мидии Японского моря Crenomytilus grayanus // Всесоюз. совещ. "Биол. актив. вещеcтва гидробионтов – новые лекарств., лечеб.-профилакт. и техн. препараты", 23–27 сент. 1991 г.: [Тез. докл.]. Владивосток, 1991. С. 83–84.
  32. Лоенко Ю.Н., Иванов Л.Г., Артюков А.А., Попов А.М. Геропротекторные свойства полисахаридов морских водорослей и трав // Всесоюз. совещ. "Биол. актив. вещеcтва гидробионтов – новые лекарств., лечеб.-профилакт. и техн. препараты", 23–27 сент. 1991 г.: [Тез. докл.]. Владивосток, 1991. С. 134.
  33. Лоенко Ю.Н., Глазкова В.Е., Оводова Р.Г., Артюков А.А. Иммуномодулирующая активность нового галактозоспецифичного лектина из мидии Японского моря Crenomytilus grayanus // Всесоюз. совещ. "Биол. актив. вещеcтва гидробионтов – новые лекарств., лечеб.-профилакт. и техн. препараты", 23–27 сент. 1991 г.: [Тез. докл.]. Владивосток, 1991. С. 82–83.
  34. Лоенко Ю.Н., Иванов Л.Г., Попов А.М., Артюков А.А. Иммунопотенцирующие свойства зостерина – пектина из морских трав // Всесоюз. совещ. "Биол. актив. вещеcтва гидробионтов – новые лекарств., лечеб.-профилакт. и техн. препараты", 23–27 сент. 1991 г.: [Тез. докл.]. Владивосток, 1991. С. 115.
  35. Руцкова Т.А., Сундукова Е.В., Артюков А.А. Получение высокоочищенной -галактозидазы из отходов переработки морепродуктов // Всесоюз. совещ. "Биол. актив. вещеcтва гидробионтов – новые лекарств., лечеб.-профилакт. и техн. препараты", 23–27 сент. 1991 г.: [Тез. докл.]. Владивосток, 1991. C. 22.
  36. Мирошниченко В.А., Оводов Ю.С., Оводова Р.Г., Папернова Н.Ю., Щеникова Н.В., Лоенко Ю.Н., Артюков А.А. Интенсификация методов лечения гастродуоденальной системы у детей дополнительным введением в диету пектина морских трав – зостерина // Рациональное использование биоресурсов Тихого океана: Тез. докл. Всесоюз. конф., Владивосток, 8–10 окт. 1991 г. Владивосток, 1991. С. 235–237.
  37. Artyukov A.A.,  Kozlovskaya E.P.,  Grishin Yu.I.,  Loyenko Yu.N.,  Krashevsky S.V.  Radioprotectory properties of blood hydrolysates from plants and animals // The Intern. symp. on clinical hyperthermy, activational, immunomodulating and radiosensitizing therapy of tumours, Vladivostok, Russia, Sept. 19-26, 1992: Abstr. book. - Vladivostok, 1992. - P. 109
  38. Krashevsky S.V., Loyenko Yu.N., Artyukov A.A., Kozlovskaya E.P.,Fedosov Yu.V. Experimental study of radioprotective and antitumor properties of immunomodulating biopreparations. // Abstracts of Papers of the 8-th International Conferencce on chemical modifiers of Cancer Treatment. Japan, Kyoto, 1993. P.203.
  39. Артюков А.А., Кудряшева А.А., Голомовзая Е.А., Лоенко Ю.Н.  Безалкогольные напитки детоксикационного действия // Межгосударств. науч. конф. "Комплексная переработка пищевого сырья и основные направления расширения ассортимента продуктов питания", Владивосток, 27–30 сент. 1993 г.: Тез. докл. Владивосток, 1993. С. 22–23.
  40. Голомовзая Е.А., Артюков А.А., Лоенко Ю.Н., Жигинас З.М. Безалкогольные напитки специального назначения // Межгосударств. науч. конф. "Комплексная переработка пищевого сырья и основные направления расширения ассортимента продуктов питания", Владивосток, 27–30 сент. 1993 г.: Тез. докл. Владивосток, 1993. C. 93.
  41. Лоенко Ю.Н., Артюков А.А., Козловская Э.П., Гафуров Ю.М., Попов А.М., Козловский А.С., Ковалев В.В., Еляков Г.Б. "Гербамарин" ("Herba" – трава, растение; "Marinus" – морской) – новое парафармацевтическое средство массовой экодетоксикации населения Дальнего Востока // Здоровье населения Дальнего Востока: Регион. Ассамблея: (Тез. докл.). Владивосток: Уссури, 1996. C. 258.
  42. Kozlovskaya E.P.,  Artyukov A.A.,  Kofanova N.N.,  Vozshova E.I.,  Kozlovsky A.S.  Proteases of the Kamchatka crab Paralithodes camschatica // Ninth Intern. symp. on marine natural products, Townsville, Queensland, July 5-10, 1998: Symp. proc. Townsville, 1998. Abstr. A5.
  43. Купера Е.В., Кочергина Т.Ю., Артюков А.А. Оптимизация процесса получения эхинохрома из плоских морских ежей Scaphechinus mirabilis // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: Материалы науч. конф. ТИБОХ ДВО РАН [9–16 дек. 1997 г., Владивосток]. Владивосток: Дальнаука, 1998. С. 173–174.
  44. Руцкова Т.А., Артюков А.А. Гемагглютинирующая активность некоторых видов водорослей залива Петра Великого // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: Материалы науч. конф. ТИБОХ ДВО РАН [9–16 дек. 1997 г., Владивосток]. Владивосток: Дальнаука, 1998. С. 172–173.
  45. Артюков А.А., Козловская Э.П., Купера Е.В., Кочергина Т.Ю., Корниенко В.Г. Морские ежи – источник новых биологически активных и лекарственных веществ // Новые научные технологии в Дальневосточном регионе: Материалы III Дальневост. регион. конф. с всерос. участием, 27–29 сент. 1999 г. Благовещенск, 1999. C. 35–36.
  46. Лоенко Ю.Н., Попов А.М., Козловский А.С., Артюков А.А., Козловская Э.П. Биохимические особенности действия биологически активных пищевых добавок – Гербамарин // Новые научные технологии в Дальневосточном регионе: Материалы III Дальневост. регион. конф. с всерос. участием, 27–29 сент. 1999 г. Благовещенск, 1999. С. 45–46.
  47. Fedoreyev S.A.,  Mischenko N.P.,  Kol'tsova E.A.,  Glebko L.I.,  Krasovskaya N.P.,  Artyukov A.A.,  Maksimov O.B.,  Elyakov G.B.  A New drug, histochrome, from the sea urchin // IMBC 2000 [5th Intern. marine biotechnology conf.], Townsville, Australia, 29 Sept. - 4 Oct., 2000: Progr. and abstrs. - Townsville, 2000. - P. 53.
  48. Руцкова Т.А., Артюков А.А., Исаков В.В. Микоспоринподобные аминокислоты из Crenomytilus grayanus // Биоактивные вещества из морских макро- и микроорганизмов и наземных растений Дальнего Востока (материалы науч. конф.). Владивосток: Дальнаука, 2001. С. 177–178.
  49. Артюков А.А., Козловский А.С., Козловская Э.П., Кофанова Н.Н., Сахаров И.Ю., Еляков Г.Б. "Коллагеназа КК" – новый лекарственный препарат морского происхождения // 1-ый Междунар. конгр. "Биотехнология – состояние и перспективы развития", Москва, 14–18 окт. 2002 г.: Материалы.  М. 2002.  С. 73.
  50. Артюков А.А., Герасименко И.И., Руцкова Т.А., Купера Е.В., Имбс Т.И. Фосфолипиды морских ежей как ингибиторы окисления // III Съезд Биохим. о-ва, Санкт-Петербург, 26.06.2002 – 01.07.2002: Тез. науч. докл. СПб. 2002.  С. 326–327.
  51. Артюков А.А., Герасименко Н.И., Купера Е.В., Руцкова Т.А. Липидный состав и антиоксидантная активность отходов производства медицинского препарата "Гистохром" // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы VII Междунар. съезда, Санкт-Петербург-Пушкин, 3–5 июля 2003 г. СПб.; Пушкин, 2003. С. 14–17.
  52. Mech N.N.,  Lee I.A.,  Popov A.M.,  Glazunov V.P.,  Artyukov A.A.  New biological active additives on the basis of echinochrome a from flat marine urchin Scaphechinus mirabilis // Proc. XI Intern. symp. on Marine Natural Products, Sorrento, Italy, Sept. 4-9, 2004. - Sorrento, 2004. - P. 73
  53. Мех Н.Н., Попов А.М., Ли И.А., Артюков А.А., Глазунов В.П. Кардиопротекторная и антиульцерогенная активность новых БАД на основе эхинохрома А // VIII Междунар. съезд "Актуал. проблемы создания новых лекарств. препаратов природ. происхождения", Миккели, Финляндия, 21–23 июня 2004: Материалы съезда. Миккели, 2004. С. 570-575.
  54. Артюков А.А., Глазунов В.П., Курика А.В., Кофанова Н.Н., Ли И.А., Попов А.М., Козловская Э.П. Изучение взаимодействия эхинохрома А с компонентами крови человека in vitro и in vivo. Модель биохимического и физиологического действия эхинохрома в организме // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: Тез. докл. регион. науч. конф., 16–18 нояб. 2004, Владивосток. Владивосток: ДВО РАН, 2004. С. 124.
  55. Артюков А.А., Купера Е.В., Руцкова Т.А., Герасименко Н.И., Кофанова Н.Н., Глазунов В.П., Козловский А.С., Курика А.В., Попов А.М., Козловская Э.П.  Новые биологически активные пищевые добавки антиоксидантного действия на основе эхинохрома // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: Тез. докл. регион. науч. конф., 16–18 нояб. 2004, Владивосток. Владивосток: ДВО РАН, 2004. С. 125.
  56. Артюков А.А., Глазунов В.П., Курика А.В., Козловская Э.П., Куликов А.П., Полякова Н.В., Метелев А.Ю. Применение рентгенофлуоресцентного анализа с полным отражением для исследования микроэлементов в лекарственных препаратах, биологически активных пищевых добавках и других соединениях морского происхождения // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: Тез. докл. регион. науч. конф., 16–18 нояб. 2004, Владивосток. Владивосток: ДВО РАН, 2004. С. 123.
  57. Артюков А.А., Попов А.М., Ли И.А., Кофанова Н.Н., Козловская Э.П., Глазунов В.П. Противоопухолевая активность продукта биотрансформации коллагенового белка из морских беспозвоночных // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: Тез. докл. регион. науч. конф., 16–18 нояб. 2004, Владивосток. Владивосток: ДВО РАН, 2004. С. 64.
  58. Кофанова Н.Н., Герасименко Н.И., Артюков А.А., Бусарова Н.Г., Козловская Э.П. Липолитические ферменты гепатопанкреаса камчатского краба Paralitodes camtschatica // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: Тез. докл. регион. науч. конф., 16–18 нояб. 2004, Владивосток, Владивосток: ДВО РАН, 2004. С. 66.
  59. Ли И.А., Мандрон Е.В., Попов А.М., Артюков А.А., Кофанова Н.Н. Антикоагулянтная активность апостатина – продукта биотрансформации коллагенового белка из морских беспозвоночных // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: Тез. докл. регион. науч. конф., 16–18 нояб. 2004, Владивосток. Владивосток: ДВО РАН, 2004. С. 118.
  60. Мех Н.Н., Попов А.М., Ли И.А., Глазунов В.П., Артюков А.А. Кардиопротекторная и антиульцерогенная активность новых БАД на основе эхинохрома А // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: Тез. докл. регион. науч. конф., 16–18 нояб. 2004, Владивосток. Владивосток: ДВО РАН, 2004. С. 126.
  61. Руцкова Т.А., Артюков А.А., Козловская Э.П., Кофанова Н.Н., Глазунов В.П. Способ выделения и некоторые физико-химические свойства гемосодержащего белка из Scapharca broughtoni // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: Тез. докл. регион. науч. конф., 16–18 нояб. 2004, Владивосток. Владивосток: ДВО РАН, 2004. С. 65.
  62. Артюков А.А., Руцкова Т.А., Купера Е.В., Глазунов В.П., Маханьков В.В., Рассказов В.А., Попов А.М. Биотрансформация природных полиоксинафтохинонов пероксидазой в присутствии перекиси водорода // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: тез. докл. II регион. науч. конф., Владивосток, 19–21 дек. 2006. Владивосток, 2006. C. 36–37. Владивосток: ДВО РАН, 2006. C. 36–37.
  63. Артюков А.А., Руцкова Т.А., Купера Е.В., Глазунов В.П., Маханьков В.В., Рассказов В.А., Курика А.В., Попов А.М. Взаимодействие эхинохрома А с основными ферментами антиоксидантной защиты организма // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: тез. докл. II регион. науч. конф., Владивосток, 19–21 дек. 2006. Владивосток, 2006. C. 135. Владивосток: ДВО РАН, 2006. C. 36-37.
  64. Артюков А.А., Козловский А.С., Маханьков В.В., Рассказов В.А. Пероксид водорода – основной или резервный источник кислородного обеспечения иглокожих? // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: тез. докл. II регион. науч. конф., Владивосток, 19–21 дек. 2006. Владивосток, 2006. С. 6–7. Владивосток: ДВО РАН, 2006. C. 36-37.
  65. Артюков А.А., Купера Е.В., Руцкова Т.А., Кофанова Н.Н., Курика А.А, Глазунов В.П., Попов А.М. Поиск новых источников эхинохрома для производства лекарственных и профилактических средств // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: тез. докл. II регион. науч. конф., Владивосток, 19–21 дек. 2006. Владивосток, 2006. C. 26. Владивосток: ДВО РАН, 2006. C. 36–37.
  66. Кофанова Н.Н., Артюков А.А. Аспартатные протеиназы из гепатопанкреаса камчатского краба Paralithodes camtschaticus // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: тез. докл. II регион. науч.конф., Владивосток, 19–21 дек. 2006. Владивосток, 2006. C. 73–74. Владивосток: ДВО РАН, 2006. C. 36–37.
  67. Лупач Н.М., Потапов В.Н., Хлудеева Е.А., Артюков А.А., Лукьянов П.А. Коррекция оксидантного статуса у больных ишемической болезнью сердца // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: тез. докл. II регион. науч. конф., Владивосток, 19–21 дек. 2006. Владивосток, 2006. C. 123. Владивосток: ДВО РАН, 2006. C. 36–37.
  68. Попов А.М., Ли И.А., Артюков А.А. Общее протективное действие бад «Эхиaзан» и «Тимарин» при экспериментальном стрессе // Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии: тез. докл. II регион. науч. конф., Владивосток, 19–21 дек. 2006. Владивосток, 2006. C. 133. Владивосток: ДВО РАН, 2006. C. 36–37.
  69. Попов А.М., Ли И.А., Артюков А.А., Атопкина Л.Н. Противоопухолевая и цитопротективная активность эхинохрома A // Исследования в области физико- химической биологии и биотехнологии: тез. докл. II регион. науч. конф., Владивосток, 19–21 дек. 2006. Владивосток, 2006. C. 130. Владивосток: ДВО РАН, 2006. C. 36–37.
  70. Шляхова А. А.[!А. В.], Богданович Р.Н., Артюков А.А., Козловская Э.П. Применение БАД «Тимарин» у пациентов с хронической патологией распираторного тракта // Человек и лекарство: материалы V Дальневост. регион. конгр. с междунар. участием, Владивосток, 18–19 сент. 2008 г. – Владивосток: Медицина ДВ, 2008. – С. 91.
  71. Елькин Ю. Н., Сафронов П. П., Артюков А. А., Эрлих Г. Структура карбонатных игл плоских морских ежей // XVI Рос.  симп.  по  растровой  электронной  микроскопии  и  аналитическим  методам  исследования  твердых  тел  РЭМ’2009, Черноголовка, 31 мая – 3 июня 2009 г. : тез. докл. – Черноголовка, 2009. – С. 226.
  72. Кривошапко О. Н., Попов А. М., Артюков А. А. Применение морских антиоксидантов при патологиях, связанных с метаболическим  синдромом  //  Науч.-практ.  конф.  Биологически  активные  вещества:  фундаментальные  и  прикладные вопросы получения и применения, Новый Свет, Крым, Украина, 25–30 мая 2009. – Украина, 2009. – С. 331
  73. Артюков А.А., Купера Е.В., Руцкова Т.А., Кофанова Н.Н. Коллагеновые белки морского ежа Scaphechinus mirabilis // Конф. с международ. участием «Актуальные проблемы химии природных соединений», Узбекистан, Ташкент, 12–13 окт. 2010: сб. тез. – Ташкент, 2010. – С. 135.
  74. Кривошапко О.Н., Попов А.М., Артюков А.А. Перспективы применения биоантиоксидантов при патологиях, связанных с метаболическим синдромом // Конф. с международ. участием «Актуальные проблемы химии природных соединений», Узбекистан, Ташкент, 12–13 окт. 2010: сб. тез. – Ташкент, 2010. – С. 242.
  75. Кофанова Н.Н., Артюков А.А. Каротиноиды: свойства, основные функции и область применения // Инновационные технологии переработки продовольственного сырья: материалы междунар. науч.-техн. конф., Владивосток, 16–18 нояб. 2011 г. – Владивосток: Дальрыбвтуз, 2011. – С. 289–290.
  76. Руцкова Т. А., Артюков А. А., Купера Е. В., Козловская Э. П. Морские ежи как новый источник лечебных и профилактических средств // Инновационные технологии переработки продовольственного сырья: материалы междунар. науч.-техн. конф., Владивосток, 16–18 нояб. 2011 г. – Владивосток : Дальрыбвтуз, 2011. – С. 198–200.



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.