WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


На правах рукописи

ЦИЗИНА ЕЛЕНА АЛЕКСАНДРОВНА

ОСОБЕННОСТИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ЛИМФОЦИТОВ И НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ У ЖЕНЩИН ДЕТОРОДНОГО ВОЗРАСТА ПРИ ДИСБИОТИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЯХ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ

03.03.01 – физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Чебоксары 2012

Работа выполнена на кафедре анатомии, физиологии и гигиены Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования « Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова»

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Ильина Наталья Анатольевна

Официальные оппоненты: Самойлова Алла Владимировна, доктор медицинских наук, профессор кафедры цитологии, эмбриологии и гистологии ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова» Панихина Анна Витальевна, кандидат биологических наук, доцент кафедры естественнонаучных дисциплин Чебоксарского политехнического института (филиала) ФГБОУ ВПО «Московский государственный открытый университет им. В.С. Черномырдина»

Ведущая организация: Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанский (Приволжский) федеральный университет»

Защита диссертации состоится «21» декабря 2012 г. в 1230 часов на заседании диссертационного совета Д 212.300.03 на базе ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный педагогический университет им. И.Я. Яковлева» (428000, г. Чебоксары, ул. К. Маркса, 38, ФГБОУ ВПО «ЧГПУ им. И.Я.

Яковлева», http://www.chgpu.edu.ru).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГБОУ ВПО «ЧГПУ им. И.Я. Яковлева»

Автореферат разослан «20» ноября 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета канд. биол. наук, доцент Лежнина М. Н.

1.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В 2006 году стартовал национальный проект «Здоровье», основной целью которого является укрепление здоровья населения России, снижение уровня заболеваемости. В условиях существующих политических и социально-экономических преобразований в стране, на сегодняшний день, возникает потребность перехода к новой современной концепции: популяция организма – среда обитания – профилактика (В. А. Черешнев и соавт., 2002).

Здоровье – индивидуальное психосоматическое состояние, выражающееся в способности человека оптимально удовлетворять основные жизненные потребности, обеспечивается совокупностью как общих, так и местных иммунных факторов. Иммунитет – это комплекс реакций, направленных на поддержание гомеостаза при встрече организма с агентами, которые расцениваются как чужеродные, независимо от того, образуются ли они в самом организме или поступают в него извне (Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин, 1996).

Одним из нарушений общего и местного иммунитета, является вагинальная инфекция, вызванная дисбиотическим процессом во влагалищном биотопе, вследствие чего отмечается усиленный рост облигатноанаэробных бактерий (Л. С. Целкович, Р. А. Родкина., В. А. Тум, 1997;

Ю. Э. Доброхотова, С. В. Ясин, Н. В. Кареева, 2006). Ярким проявлением дисбиоза влагалища является бактериальный вагиноз, частота которого среди женщин репродуктивного возраста составляет 15–25%, а среди пациенток с хроническими заболеваниями влагалища – 64–80% (А. С. Анкирская, 2005).

По определению многих авторов, бактериальный вагиноз (БВ) – это дисбиотическое состояние биотопа влагалища, вызванное усиленным ростом преимущественно облигатно-анаэробных бактерий и резким снижением концентрации лактобактерий (В. Н.Серов, 2003; А. Л.Тихомиров и соавт., 2004). Отсутствие выраженной воспалительной реакции предполагает использование термина «дисбактериоз влагалища» или «вагиноз». Частота обнаружения его во многом зависит от контингента обследуемых женщин.

Она составляет 17–19% в группах планирования семьи, 24–37% среди лиц, находящихся на лечении в клиниках венерических заболеваний, 15–37% – у беременных женщин и у 61–87% среди пациенток с дисбиотическими нарушениями, у которых отмечают снижение количество лакто- и бифидобактерий и увеличение числа других видов микроорганизмов (G. MarguezDavila, C. E. Martunez-Barreda, 1985).

Вся эта картина активно поддерживается иммунной системой вагинальной стенки (местный иммунитет). У женщин, проживающих на территории с повышенным радиационным фоном, бактериальный вагиноз встречается в 62% случаев (В. М.Коршунов и соавт., 1999).

В норме во влагалище у женщины обитает так называемая нормальная микрофлора. Нормальная микрофлора находится в постоянном равновесии между собой и окружающей средой. Она не допускает появление никакой другой инфекции, и не допускает изменение соотношения возбудителей, живущих во влагалище в норме. При нарушении микрофлоры изменяется равновесие между бактериями – нормальными обитателями влагалища. (W. D. Le Bar, 1996; H. L. Kent., 1997). Именно иммунная система способствует восстановлению нормальной микрофлоры влагалища при ее незначительных нарушениях.

Механизмы развития бактериального вагиноза в настоящее время во многом остаются неясными. Важно отметить, что в нашей стране к основным триггерным факторам развития бактериального вагиноза относят эндогенные факторы (А. В. Самойлова и соавт., 2004, 2009). В то же время значение других показателей иммунитета, даже таких ключевых, как лимфоциты и нейтрофильные фагоциты, остается мало изученным. Нейтрофилы традиционно относятся к фагоцитирующим клеткам (В. Е. Пигаревский, 1982, 1992; Н. М. Бережная, 1988; М. М. Бакуев, 1992; А. А. Воробьев и соавт. 1995; Д. Н. Маянский и соавт., 1996; А. Ройт и соавт.,2000).

Однако фагоцитоз, хотя и важный, но не единственный способ реализации гранулоцитами своих эффекторных функций.

Нейтрофилы – это секреторные клетки, способные выделять биологически активные продукты, с помощью которых они могут осуществлять внеклеточный киллинг, а также, вступая в медиаторные контакты с гуморальными системами и клетками крови, соединительной ткани, оказывать регуляторное действие (А. В. Зурочка, 1991; В. Е. Пигаревский, 1992; А. В.

Жогин, 2003; I. W. Lillard et al., 1999; D. Yang et al., 2001).

В свете изложенного выше целью диссертационной работы является изучение динамики функциональной активности лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у женщин 25-45 лет при дисбиотических нарушениях репродуктивной системы.

Для решения поставленной цели исследований были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить динамику активности факторов клеточного иммунитета у здоровых и с дисбиотическими нарушениями генитального тракта женщин детородного возраста.

2. Исследовать характер колебаний показателей гуморального иммунитета организма.

3. Оценить состояние облигатной микрофлоры репродуктивного тракта.

4. Разработать научно обоснованные рекомендации по профилактике дисбиотических нарушений репродуктивной системы у женщин 25-45 лет.

Научная новизна. Впервые выявлено, что возникающие разные степени дисбиотических нарушений у женщин детородного возраста зависят от характера взаимодействия клеточного, гуморального звеньев иммунной системы с репродуктивной системой организма.

Установлена причинно-следственная связь функциональной активности лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов периферической крови с интенсивностью роста вагинальной микрофлоры.

Отмечено увеличение количества транзиторной микрофлоры и снижение уровня лактобактерий, что свидетельствует о нарушении естественного микробиоценоза генитального тракта.

Теоретическая и практическая значимость. Сформулированы новые научные положения и разработки, дополняющие современную теорию об особенностях физиологической активности лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов у женщин 25–45 лет в условиях дисбиотических нарушений репродуктивной системы. Установлена взаимосвязь между клеточными, гуморальными показателями естественного иммунитета и состоянием микробиоценоза генитального тракта.

Теория работы построена на известных фактах о закономерностях функционирования репродуктивной системы и согласуется с опубликованными данными отечественных и зарубежных ученых в области физиологии размножения. Научная идея базируется на обобщении передового опыта использования современных методов и средств профилактики нарушений микробиоценоза у женщин.

Разработаны практические рекомендации, направленные на повышение естественной резистентности организма женщин детородного возраста и профилактику дисбиотических нарушений.

Реализация результатов исследований. Научные положения, выводы и рекомендации диссертационной работы используются в учебном процессе ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова», ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия», ФГБОУ ВПО «Омский государственный педагогический университет».

Полученные результаты исследований рекомендуются к использованию при написании учебных пособий по физиологии человека и микробиологии для студентов высших учебных заведений педагогических и медико-биологических специальностей.

Апробация работы. Основные научные положения диссертации доложены на V Международном симпозиуме «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (Пекин, 2008), Международных молодежных научных форумах «Университетское образование: традиции и инновации» (Ульяновск, 2008 - 2010), Международной научной конференции «Новые задачи современной медицины» (Пермь, 2012), научнопрактических конференциях ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова» (Ульяновск, 2007–2012) и ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет» (Ульяновск, 2007–2008), расширенном заседании кафедры анатомии, физиологии и гигиены ФГБОУ ВПО УлГПУ им. И.Н. Ульянова (Ульяновск, 2012).

Научные положения, выносимые на защиту:

1. В условиях дисбиотических изменений репродуктивной системы у женщин развивается депрессия клеточного и гуморального звеньев иммунитета.

2. Изменения состояния микробиоценоза генитального тракта характеризуются увеличением количества транзиторных микроорганизмов и снижением числа основных симбионтов.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в т. ч. 3 статьи в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях согласно перечню ВАК Минобрнауки РФ, а также методические рекомендации.

Структура и объем диссертации. Работа включает следующие разделы: введение (5 с.), обзор литературы (32 с.), собственные исследования (43 с.), обсуждение результатов исследования (17 с.), общие выводы (1с.), практические рекомендации (1с.), список литературы (19 с.) и приложения (4 с.). Диссертация изложена на 125 страницах компьютерного исполнении, иллюстрирована 17 таблицами и 23 рисунками. Список литературы включает 189 источников, в том числе 52 зарубежных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Организация, материалы и методы исследований.

Работу выполняли в течение 2007–2012 гг. на кафедре анатомии, физиологии и гигиены ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова» в соответствии с государственным планом НИОКР (01.2010 № 01201067214), на базе ГУЗ ЦК МСЧ «Женская консультация» и центральной клинико-биохимической лаборатории г. Ульяновска. Обследовано 172 женщины, из них 40 чел. здоровые (контрольная группа) и 132 чел. с диагнозом бактериальный вагиноз (опытная группа) в возрасте от 25 до 45 лет из диапазона детородного возраста 15–49 лет. Диагноз был поставлен на основании жалоб и клиниколабораторных исследований (схема).

Критериями включения пациентов в исследования являлись пол;

письменное согласие пациенток; наличие амбулаторных карт; состояние клеточных и гуморальных факторов неспецефической резестентности, естественного микробиоценоза генитального тракта и здоровья организма. При сборе анамнеза у наблюдаемых женщин не отмечено признаков острых воспалительных процессов в течение четырех недель до момента обследований.

Для проведения исследований использованы следующие методы:

I. Гематологические – а) определение числа лейкоцитов, относительного и абсолютного Схема исследований Объект изучения Женщины в возрасте от 25 до 45 лет Условия экспериментов Критерии исследований: пол; письменное согласие пациенток; наличие амбулаторных карт;

состояние клеточных и гуморальных факторов неспецефической резестентности, естественного микробиоценоза генитального тракта и здоровья организма I серия наблюдений Группа II серия наблюдений Женщины с дисбиотическими нарушениями (132 чел.) I, II Здоровые женщины (40 чел.) Методы исследований Гематологические Биохимические Иммунологические Бактериологические Математические Внедрение научных положений в учебный процесс:

ФГБОУ ВПО «УлГПУ им. И.Н. Ульянова» ФГБОУ ВПО «УлГСХА» ФГБОУ ВПО «ОмПГУ» количества нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови (содержание лейкоцитов и лейкограмму определяли общепринятым методом с использованием клавишного механического счетчика лейкоцитарной крови СЛ–1 (ЗАО «ЛОиП», г. Санкт-Петербург, 1999), камеры Горяева (А. А.

Кудрявцев, Л. А. Кудрявцева, 1973);

б) определение количества Т-лимфоцитов методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Еа-РОК) (M. Jondal, 1999);

в) определение субпопуляций лимфоцитов (исследовали мембранные маркеры субпопуляций лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+, CD20+ лимфоциты) с помощью моноклональных антилимфоцитарных антител к дифференцировочным антигенам поверхности клеток в реакции непрямой иммунофлюоресценции в модификации на поли-Д-лизине («Sigma», Германия) с использованием диагностикумов ГНУ «Институт иммунологии РАМН» Минздравсоцразвития РФ, ЛТ-1 (пан-Т-клеточная популяция функционально зрелых Т-лимфоцитов, экспрессирующих мембранассоциированные детерминанты СD-3 антигенов), ЛТ-4 (субпопуляции хелперно/индукторных Т-клеток, экспрессирующих антигены СD-4) и ЛТ-8 (субпопуляции супрессорно/цитотоксических Т-клеток, экспрессирующих антигены СD-8) (С. В. Сибиряк и соавт., 1997);

II. Биохимические – а) изучение активности миелопероксидазы в нейтрофильных гранулоцитах (Э. Пирс, 1962);

б) изучение концентрации катионных белков нейтрофильных гранулоцитов (А. И.Карпищенко, 1999);

в) постановка теста восстановления нитросинего тетразолия (НСТтест; B. H. Park, S. Fikring, 1968; А. Н. Маянский, А. Н. Галлиулин, 1984);

г) выявление уровня щелочной фосфатазы При проведении цитохимических исследований применялась оценка результатов по G. Astaldi и L. Verga (1957), основанная на выявлении специфической окраски различной степени интенсивности в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов;

д) выявление уровня кислой фосфатазы (М. Г. Шубич, 1980).

III. Иммунологические – а) определение уровня циркулирующих иммунных комплексов (Ю. А.

Гриневич, 1981);

б) определение иммуноглобулинов классов A, M, G. (G. Mancini, 1999);

в) определение фагоцитарной реакции нейтрофильных лейкоцитов (В. С.Гостев, 1964; А. Н. Маянский, Д. Н. Маянский, 1989).

IV. Математические – Статистическую обработку полученных результатов исследований проводили с использованием пакета специальных прикладных программ Microsoft Office Excel 7.0 c вычислением значений средней арифметической (М), средней ошибки средней арифметической – m, критерия Стьюдента – t и степени вероятности – Р. Достоверным считали различия при Р0,05 (О. Ю. Реброва, 2002).

2.2. Характер изменений уровня клеточных и гуморальных факторов естественного иммунитета у женщин здоровых и при дисбиотических нарушениях репродуктивной системы 2.2.1. Динамика показателей клеточного иммунитета. Изменение количества Т-клеток и соотношения их основных субпопуляций является значимыми показателями состояния иммунитета. В связи с этим, в собственных исследованиях изучали показатели абсолютного и относительного содержания Т-лимфоцитов периферической крови у женщин с дисбиотическими нарушениями.

Исследования показали, что количество лейкоцитов, палочкоядерных, сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови у женщин 1 группы по сравнению со здоровыми лицами было статистически не достоверным (p>0,05).

Изучение субпопуляционного состава лимфоцитов у обследованных женщин показало, что содержание CD4+ лимфоцитов, CD8+ лимфоцитов и соотношение CD4/CD8 субпопуляций Т-лимфоцитов (иммунорегуляторный индекс) у женщин 1-й группы повышалось, однако это повышение не было статистически значимым. Таким образом, содержание субпопуляций Т-лимфоцитов в обеих группах не имело достоверных различий.

Вследствие неспецифической стимуляции конканавалином А (Кон А) лимфоциты секретируют лимфокины, в том числе фактор торможения миграции лейкоцитов. В связи с этим, по степени торможения миграции лейкоцитов судят о лимфокинпродуцирующей способности лимфоцитов, а, следовательно, и об их функциональной активности. Усиление миграции лейкоцитов свидетельствует об иммунодефицитном состоянии организма, снижение процента миграции лейкоцитов по сравнению с нормой указывает на активацию Т-лимфоцитов.

При учете результатов посева по интенсивности роста выделенных культур всех обследованных делили на четыре группы:

1 группа – очень скудный рост – рост только на жидких питательных средах; на плотной питательной среде рост отсутствует.

2 группа – скудный рост – на плотной питательной среде рост до колоний микроорганизмов определенного вида.

3 группа – умеренный рост, на плотной питательной среде рост от до 100 колоний.

4 группа – обильный рост, на плотной питательной среде рост более 100 колоний Результаты исследований РБТЛ свидетельствовали об отклонениях этого показателя у женщин третьей и четвертой групп по сравнению со здоровыми, выявили общую для всех обследованных тенденцию к повышению трансформации лимфоцитов в бластные формы женщин с нарушениями вагинального микробиоценоза.

Следовательно, у женщин с дисбиотическими нарушениями отмечалось снижение функциональной способности лимфоцитов периферической крови к трансформации в бласты под воздействием лимфоцитарного митогена.

Наибольших значений показатели цитопатогенной активности лимфоцитов было выявлено у обследованных с умеренным и обильном росте вагинальной микрофлоры на питательных средах (0,54±0,02 и 0,48±0,соответственно; у здоровых 0,74±0,09; р<0,05). У женщин с незначительными изменениями микробиоценоза влагалища (очень скудный и скудный рост) повышение цитотоксического индекса не наблюдалось или было статистически не достоверно (0,7±0,3 и 0,6±0,2 соответственно).

Изучение эффекторных реакций клеточного иммунитета выявило высокую цитотоксическую активность лимфоцитов на фибробласты периферической крови 1-4 групп. Максимальное увеличение цитопатогенной активности лимфоцитов было выявлено у обследованных с умеренным и обильном росте вагинальной микрофлоры на питательных средах (0,54±0,02 и 0,48±0,06 соответственно; р<0,05).

У обследованных 1–4 групп выявлено увеличение количества лейкоцитов в периферической крови до 8,2±1,3х109/л (р<0,001) против 6,4±0,5х109/л в группе сравнения, подобные изменения обнаружены и при изучении пула нейтрофильных гранулоцитов (НГ).

Одним из важных показателей, характеризующих протективную роль системы фагоцитоза, является фагоцитарное число, отражающее способность клеток к захвату возбудителей. Результаты определения фагоцитарного числа у больных БВ представлены на рисунке 1.

Таким образом, при изучении фагоцитарной реакции нейтрофилов периферической крови у женщин с нарушениями микробиоценоза было выявлено достоверное снижение значений фагоцитарного показателя при выраженных изменениях микрофлоры влагалища (третья и четвертая группа), что свидетельствует о сокращении количества нейтрофилов с функциями фагоцитов. Одновременно, среднее число микробов, поглощенных одним активным нейтрофилом, и функция киллинга изменялись тоже только в этих группах обследованных.

Активность миелопероксидазы при нарушениях микробиоценоза повышалась при увеличении интенсивности роста выделенной микрофлоры, достигая у женщин, входящих в третью и четвертую группу, статистической достоверности. Так же выявлен факт, что дисбиотические нарушения приводят к повышению уровня щелочной и кислой фосфатаз, при определении уровня ЩФ и КФ наблюдалась аналогичная тенденция – увеличение показателей в первые годы заболеваний с последующим снижением ниже значений группы сравнения.

у.е.

14,* * 9,5,5,9 5,Примечание: * – здесь и далее знак достоверности у обследуемых женщин Рис. 1. Динамика фагоцитарного числа обследуемых женщин Максимальных значений уровень щелочной фосфотазы достигал у группы, с широким диапазоном изменений вагинальной микрофлоры (рис.2).

Достоверное повышение показателей РТМЛ обнаружены только при умеренном и обильном росте выделенных микроорганизмов (р<0,05). Следовательно, показано изменение функциональной активности лимфоцитов при увеличении интенсивности роста вагинальной микрофлоры.

Результаты исследований РБТЛ выявили общую для всех обследуемых тенденцию к повышению трансформации лимфоцитов в бластные формы у женщин с нарушениями естественного микробиоценоза генитального тракта (р<0,05).

При изучении гуморального иммунитета было выявлено отсутствие статистически достоверных различий количественных показателей CDво всех группах. Показатели сывороточных иммуноглобулинов достоверно изменялись, в 1-4 группах, по сравнению со здоровыми, уровень Ig G был снижен в 1,6 раза (р<0,05), Ig А – в 1,7 раза (р<0,05). Наибольшим изменениям подвергался уровень Ig E – до194±38 МЕ/мл (в контроле – 85±МЕ/л; р<0,01). При изучении фагоцитарной реакции нейтрофилов периферической крови у женщин с нарушением миробиоценоза было выявлено достоверное снижение значений фагоцитарного показателя во всех иссле- 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа Здоровые нмоль/с * л 7* 7776666651 группа 2 группа 3 группа 4 группа Здоровые Рис. 2. Динамика уровня щелочной фосфатазы у обследованных женщин дуемых группах, что свидетельствует о сокращении количества нейтрофилов с функциями фагоцитов.

Выявлены энзиматические дефекты нейтрофильных фагоцитов, ведущие к дисфагоцитозу. Показано достоверное увеличение показателей НСТ-теста у женщин групп 1–4, по сравнению со здоровыми, при увеличении интенсивности роста выделенных культур (р<0,05).

Изучение ферментной системы нейтрофильных гранулоцитов обнаружили повышение активности миелопероксидазы, щелочной и кислой фосфатаз при увеличении интенсивности роста выделенной вагинальной микрофлоры у женщин с дисбиотическими нарушениями.

2.2.2. Динамика показателей гуморального иммунитета. Определяли содержание В-лимфоцитов (СD20+-клетки), а также уровень Ig A, Ig M, Ig G. Выявили, что абсолютное количество CD20+-лимфоцитов было незначительно снижено по отношению к здоровым женщинам и составило 0,25±0,07·109/л (р>0,05). Уровень сывороточных Ig M у этой группы обследованных недостоверно изменялся по отношению к группе сравнения (р>0,05). У женщин с нарушениями микробиоценоза наблюдали также выраженное снижение содержания – до 1,27±0,05 г/л при 2,2±0,08 г/л (р<0,05) в группе сравнения (рис.3). Следовательно, уровень Ig G был снижен в 1,раза (р<0,05), Ig А – в 1,7 раза (р<0,05).

Данные показатели свидетельствуют о снижении специфического иммунного ответа и местного иммунитета на слизистых оболочках, что может способствовать развитию и поддержанию хронической урогениталь- г/л Ig A * Ig M Ig G * Нарушение Здоровые микробиоценоза Рис. 3. Изменение содержания иммуноглобулинов у обследованных женщин МЕ/мл Нарушение микробиоценоза 194.38* Здоровые 85,0 50 100 150 2Рис. 4. Показатели иммуноглобулинов Е у обследованных женщин ной инфекции. Следовательно, статистически значимой разницы в содержании пула CD20 лимфоцитов во всех группах выявлено не было.

Наибольшим изменениям у обследованных женщин подвергался уровень Ig E. Из представленных данных на рисунке 4 видно, что в группах 1–4 наблюдалось увеличение уровня Ig Е до 194±37 МЕ/мл (в контроле – 85±11 МЕ/л; р<0,01).

Изучение уровня сывороточных иммуноглобулинов выявило достоверные изменения показателей Ig A и G при дисбиотических нарушениях.

Наибольшим изменениям у подвергался уровень Ig E – до 194±37 МЕ/мл (в контроле – 85±11 МЕ/л; р<0,01).

Достоверное повышение показателей РТМЛ (значительное усиление торможения миграции лейкоцитов) обнаружены только при умеренном и обильном росте выделенных микроорганизмов. Следовательно, показано изменение активности лимфоцитов, выявляемое в РТМЛ при увеличении интенсивности роста вагинальной микрофлоры. Результаты исследований РБТЛ выявили общую для всех обследованных тенденцию к повышению трансформации лимфоцитов в бластные формы у женщин с нарушениями вагинального микробиоценоза.

Изучение аффинности Е-рецепторов Т-лимфоцитов показало, что количество всех фракций Еа-РОК было снижено, однако статистически достоверным оно было лишь у средне- и высокоаффинных Еа-РОК, что также свидетельствует о снижении профессиональной активности лимфоцитов.

2.3. Характер изменений состояния микробиоценоза у женщин при дисбиотических нарушениях репродуктивной системы.

Резульаты исследования бактериальной флоры включающего содержание лейкоцитов, интенсивность роста флоры, оценку слизи и эпителия у обследованных женщин, представлена в таблице 1.

1. Особенности влагалищного содержимого у женщин Количество женщин (%) Основные С дисбиотическими Здоровые показатели нарушениями (группа сравнения) (n=40) (n=132) <10 28±2,7 28±10–20 72±5 72,5±0,>20 0 скудная 24±1 12±умеренная 76±6 80±обильная 0 8,5±0,3* + 26±2 17±+ + 74±5 83±<10 32±3 33±10–20 51±3 49±>20 17±5 18±Эпителий Слизь Микрофлора Лейкоциты С <дисбиотическими 10--нарушениями >Группа сравнения 0 10 20 30 40 50 60 70 % Рис. 5. Содержание лейкоцитов во влагалищном отделяемом у обследованных женщин % + ++ Группа сравнения С дисбиотическими нарушениями Рис. 6. Показатели секреции цервикальной слизи у обследованных женщин Из таблицы видно, что у женщин с бактериальным вагинозом содержание лейкоцитов во влагалищном отделяемом (рис. 5) и количество слущенного эпителия не увеличивалось. Это свидетельствует об отсутствии воспалительного процесса и способность влагалища к самоочищению.

В то же время, у обследованных женщин выработка цервикальной слизи по сравнению с контрольной группой увеличилась, не достигая, однако, достоверных значений (рис. 6).

Почти в два раза снизилось количество пациенток со скудной и появились женщины с обильной вагинальной микрофлорой. Бактериологическое исследование включало изучение качественного (идентифицированного до рода) и количественного состава микрофлоры влагалища обследованных женщин.

Анализ высеянной микробной флоры выявил существенные различия в составе бактериальной флоры у пациенток с бактериальным вагинозом, по сравнению с показателями в группе здоровых женщин.

У женщин с бактериальным вагинозом 32,8% выделенных штаммов являлись аэробами, 67,2% – облигатными и факультативными анаэробами. У здоровых женщин соотношение аэробных и анаэробных микроорганизмов существенно не отличалось – 36,1% и 63,9% соответственно. Изменения коснулись качественного состава микрофлоры.

Исследования вагинального отделяемого выявили изменение состава вагинальной микробиоты. Проведенные исследования обнаружили наличие нарушений микрофлоры влагалища у 63,41% женщин c БВ и у 7,49% обследованных в группе сравнения (рис. 7).

Состав микрофлоры вагинального отделяемого у обследованных представлен на рисунке 8. Из представленных данных видно, что лактобактерии высевались у пациенток с БВ в 3,8 раза реже, относительно женщин группы сравнения (р<0,001). Снижение количественных показателей лактобактерий (<104 КОЕ/мл) у пациенток с БВ наблюдали в 3,8 раза чаще, чем у здоровых женщин (р<0,01).

1 - Дисбиотические изменения 36,6% 2 - Группа сравнения 7,5% 92,5% Нормоценоз * 63,4% Нарушения микроценоза Рис. 7. Частота выявления нарушений микрофлоры влагалища у обследованных женщин % * 40 * * 30 * * * Дисбиотические нарушения Здоровые лица Рис. 8. Микрофлора вагинального биотопа у обследованных женщин Микроорганизмы рода Stаphylococcus у пациенток с БВ выявляли достоверно чаще, чем в группе сравнения: 69,4±5,3% и 15,4±3,8% соответственно (р<0,01). У пациенток с БВ частота обнаружения стафилококков в 4,5 раза была больше, чем у здоровых (р<0,01). Видовой состав стафилококков представлен: S. еpidermidis, S. haemolythicus, S. аureus, S. hominis и S. saprophyticus. У 12,4% женщин выявили S. haemolyticus, тогда как в группе сравнения данный микроорганизм не обнаружили. При оценке количественного содержания данного микроорганизма установлено, что у 82 % пациенток с БВ степень обсемененности S. haemolyticus составила >104 КОЕ/мл, что является показателем массивного роста бактерий.

У 3,9±0,2% обследованных с БВ был обнаружен S. аureus, колонизационная активность во всех выявленных случаях была >104 КОЕ/мл. В группе сравнения золотистый стафилококк не выявлен. Наиболее частым представителем рода Staphylococcus явился вид S. еpidermidis, представители которого были высеяны при БВ в 47,3±3,1% и у 10,3±1,9% здоровых женщин. У пациенток с БВ S. еpidermidis высевали в 4,6 раза чаще, чем в группе сравнения (р<0,01). S. hominis был выделен у 6,3±1,3% женщин с Грибы Энтерококки Стрептококки Стафилококки Лактобактерии Энтеробактерии Коринебактерии БВ, во всех случаях показатели колонизации превышали 104 КОЕ/мл. В группе сравнения данный возбудитель не обнаруживали. Следовательно, у женщин с БВ микроорганизмы рода Stаphylococcus встречались достоверно чаще (p<0,01). Лидирующее место принадлежало S. еpidermidis, S. haemolyticus и S. hominis высевали только у пациенток с БВ.

Анализ частоты обнаружения представителей семейства Enterobacteriaceae показал, что у пациенток с БВ энтеробактерии были обнаружены достоверно чаще, чем в группе сравнения (35,2±3,3% и 4,3±0,3%; р<0,001).

У пациенток с БВ энтеробактерии обнаруживались в 8,2 раза чаще, чем в группе сравнения (р<0,001), массивный рост (>104 КОЕ/мл) также встречался значительно чаще, чем у здоровых (15,4±4,3% и 3±0,8%; p<0,01).

Из выявленных энтеробактерий более 68,3% составила E. сoli, которая колонизировала влагалище пациенток с БВ достоверно чаще, чем женщин группы сравнения (32,7±4,3% и 4 ±0,9%; p<0,001).

Частота обнаружения E. сoli у пациенток с БВ была в 8,2 раза выше, чем в группе сравнения (р<0,001). Массивная интенсивность колонизации (>104 КОЕ/мл) наблюдалась только у женщин с БВ (21,4±3,8%; р<0,001), в группе сравнения отмечали лишь скудный рост колоний (<104 КОЕ/мл).

Klebsiellа spp. была выделена у 6,5±2,3% женщин с БВ и у 1,3±0,1% женщин в группе сравнения. Во всех случаях обнаружения Klebsiellа spp. у пациенток с БВ рост колоний превышал 104 КОЕ/мл, в то время, как в группе сравнения интенсивность колонизации была <104 КОЕ/мл. У обследованных с БВ достоверно чаще, чем в группе сравнения обнаруживали Enterococcus faecalis (25,4±3,5% и 5,4±2,9%; р<0,01). Массивный рост колоний (>104 КОЕ/мл) в данной группе также встречался значительно чаще – у 30,3±5,6% обследованных, тогда как у здоровых он не превышал 1,9±0,7% (р<0,001).

Бактерии рода Corynebacterium у пациенток с БВ были выявлены в 13,6 раз чаще, чем в группе сравнения (25,8±4,2% и 1,9±0,4%; р<0,001).

Кроме того, у пациенток с БВ отмечено увеличение видового разнообразия коринебактерий, характеризующееся появлением видов С. рyogenes, С. hofmani и C. minutissium, выделенных в единичных случаях. Наиболее частым представителем рода явилась C. хerosis, которую обнаруживали только при вагинозе (17,4±7,8% случаев; р<0,05), во всех случаях обнаружения C.

хerosis интенсивность колонизации была >104 КОЕ/мл.

Частота встречаемости Candida albicans при БВ была выше в 4,1 раза относительно группы сравнения (21,5±3,3% и 5,2±3,4%; р<0,05). Интенсивность колонизации кандид >104 КОЕ/мл наблюдалась у 59,2±5,7% женщин с БВ. В группе сравнения во всех случаях имел место только скудный рост колоний бактерий (<104 КОЕ/мл).

С незначительной частотой были обнаружены микроорганизмы рода Streptococcus у 6,7±3,8% женщин с БВ и у 3,1±2,4% женщин группы сравнения. Из патогенных видов стрептококков выявлялись S. pyogenes и S.

pneumoniaе, которые были обнаружены в единичных случаях у больных БВ, в группе сравнения S. pyogenes и S. pneumoniaе не выделены. Однако во всех случаях обнаружения этих видов наблюдали массивный рост колоний (>104 КОЕ/мл).

Таким образом, у пациенток с БВ микрофлора вагинального биотопа характеризовалась более широким видовым спектром микроорганизмов и высокими показателями интенсивности колонизации бактерий относительно здоровых женщин.

Установлено также, что у пациенток с БВ достоверно чаще обнаруживались гарднереллы. Так, в этой группе обследованных гарднереллы были выделены у 43,3±3,5% женщин, тогда как у здоровых данный показатель не превышал 8,6±2,7%. Различия между основной группой и группой сравнения явились статистически значимыми (p<0,02). Исследования показали, что у пациенток с БВ данный микроорганизм выявляли в 5,0 раз чаще, чем в группе сравнения. Следовательно, у при бактериальном вагинозе обнаружено увеличение количества транзиторной и снижение уровня облигатной флоры, что свидетельствует о нарушении микробиоценоза влагалища. Значительный интерес представляло выявление у больных женщин особой группы микроорганизмов, обладающих свойствами паразитов – микоплазм, хламидий и вирусов.

Представители семейства Mycoplasmataceae у пациенток с БВ обнаруживались в 5,5 раза чаще, чем в группе сравнения – у 34,1% и у 10,9% женщин соответственно. Среди них лидирующее место по частоте встречаемости принадлежало уреаплазмам (U. urealyticum), которые обнаруживали достоверно чаще у больных БВ относительно здоровых лиц (21,97±3,45% и 5,0±0,59% соответственно; p<0,05). Во влагалищном содержимом было обнаружено два вида микоплазм: Mycoplasma genitalium и Mycoplasma hominis. Однако, частота их выявления колебалась от 7,6% для Mycoplasma genitalium до 4,5% для Mycoplasma hominis (р<0,05) от всех выделенных штаммов микоплазм.

Частота обнаружения хламидий у больных БВ была в 3,1 раза выше относительно группы сравнения. Так, хламидии были выделены у 87,4% обследованных с БВ и у 28,2±4,4% (р<0,05) женщин из группы сравнения.

Обследование больных показало, что они инфицированы представителями семейства герпесвирусов, такими как вирус простого герпеса – Herpes simplex virus 2 и цитомегаловирус – CMV, а также папилломавирусами – HPV 16 и HPV 18.

Таким образом, микроскопическое изучение бактериальной флоры во влажных мазках показало достоверно более обильную бактериальную влагалищную флору у женщин с бактериальным вагинозом по сравнению с практически здоровыми женщинами. При БВ наблюдалось нарушение микроценоза влагалища, проявлявшееся снижением частоты встречаемости и показателей плотности колонизации представителей нормальной микрофлоры – лактобактерий и повышением данных показателей у патогенной и условно-патогенной флоры в изученном биотопе.

У пациенток с БВ выявлена достоверно высокая частота встречаемости энтеробактерий, таких как E. сoli и Enterococcus faecalis. Чаще, чем у здоровых при бактериальном вагинозе встречались и условно-патогенные стафилококки – S. еpidermidis. Только при БВ высевали патогенные стафилококки (S. haemolyticus) и стрептококки (S. pyogenes, S. pneumoniaе).

У женщин с бактериальным вагинозом повышалась обсемененность вагинального биотопа также гарднереллами, коринебактериями и грибами рода Candida. Увеличение показателей частоты обнаружения и плотности колонизации патогенных и условно-патогенных микроорганизмов у обследованных сопровождалось выявлением хламидий, микоплазм и вирусов.

Микроскопическое исследование препаратов из влагалищного содержимого при БВ показало, что у женщин с бактериальным вагинозом содержание лейкоцитов во влагалищном отделяемом, количество слущенного эпителия и выработка цервикальной слизи по сравнению со здоровыми женщинами достоверно не увеличивалось, что свидетельствует об отсутствии воспалительного процесса.

Следовательно, изучение микробиоты влагалища у женщин с БВ показало, что у них отмечается значительное нарушение микроэкологической системы, проявляющееся достоверным расширением спектра микроорганизмов с преобладанием анаэробных бактерий. Повышенная генерация анаэробов сопровождалась уменьшением частоты выделения молочнокислых бактерий, в частности, лактобактерий. Выявленное увеличение количества транзиторной и снижение уровня облигатной микробиоты свидетельствует о выраженном нарушении микробиоценоза влагалища.

3. ВЫВОДЫ 1. Доказана корреляция между физиологической активностью иммунной системы у женщин 25–45 лет и частотой, характером дисбиотических нарушений репродуктивной системы.

2. При нарушениях состояния микробиоценоза генитального тракта у 63, 4 % обследуемых женщин развивалась депрессия как клеточного, так и гуморального звеньев естественного иммунитета, выражающаяся в значительном сокращении числа симбионтов и повышении количества транзиторной микрофлоры (Р0,05).

3. Установлено, что в этих условиях у пациенток содержание CD3+ лимфоцитов и их субполяций, а также CD20+ лимфоцитов и соотношение CD4/CD8 не имели достоверных изменений; однако происходило угнетение их функциональной активности при одновременном увеличении интенсивности роста вагинальной микрофлоры.

4. У женщин при дисбиотических нарушениях выявлено достоверное уменьшение количества фагоцитирующих нейтрофилов, в том числе с энзиматическими дефектами, ведущими к дисфагоцитозу.

5. Разработаны научные рекомендации, способствующие повышению уровня неспецифической резистентности у женщин детородного возраста, поддержанию состояния естественного микробиоценоза и профилактике дисбиотических нарушений.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Научные разработки, выводы и рекомендации диссертационных исследований используются в учебном процессе ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова», ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия», ФГБОУ ВПО «Омский государственный университет», а также рекомендуются к использованию при написании учебных пособий по физиологии человека и микробиологии для студентов высших учебных заведений по педагогическим и медико-биологическим специальностям.

5. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Найденова, Е. А. Микрофлора репродуктивного тракта женщин при дисбиотических нарушениях / Е. А. Найденова, Н. А. Ильина, Е. П.

Тарабрина // Методические рекомендации. – Ульяновск : УлГПУ им. И. Н.

Ульянова, 2007. – 28 с.

2. Цизина, Е. А. Изучение влияния взаимосвязи между состоянием естественного иммунитета и нормоценоза влагалища на здоровье женщин / Е. А. Цизина, Н. А. Ильина // Молодой ученый. – 2011. – Т. 2. – № 8. – С. 152–156.

3. Цизина, Е. А. Количественные и функциональные изменения ферментной системы нейтрофильных гранулоцитов у женщин при бактериальном вагинозе / Е. А. Цизина, Н. А. Ильина, Ю. Ю. Красноперова // Педагогико-психологические и медико-биологические проблемы физической культуры и спорта. – 2011. – № 1 (22). – Режим доступа: http: // www. kamgifk. ru / magazin / 21 _ (4) _ 2011 _ 22. pdf.* 4. Цизина, Е. А. Состояние микробиоценоза влагалища женщин в условиях бактериального вагиноза / Е. А. Цизина, Н. А. Ильина, В. Г. Малышев // Педагогико-психологические и медико-биологические проблемы физической культуры и спорта. – 2011. – № 1 (22). – Режим доступа:

http: // www. kamgifk. ru / magazin / 21 _ (4) _ 2011 _ 29. pdf. * 5. Цизина, Е. А. Оценка состояния клеточного иммунитета у женщин при дисбиотических нарушениях / Е. А. Цизина, Н. А. Ильина // Мат. Междунар. науч. конф. – Пермь : Меркурий, 2012. – С. 35–38.

6. Цизина, Е. А. Микрофлора влагалища женщин при бактериальном вагинозе / Е. А. Цизина // Мат. междунар. науч. конф. – Пермь : Меркурий, 2012. – С. 38–40.

7. Цизина, Е. А. Содержание CD20+ лимфоцитов и иммуноглобулинов в переферической крови женщин с бактериальным вагинозом / Е. А.

Цизина // Естественные и технические науки. – 2012. – № 1. – С. 108.* * - публикации в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, определенных ВАК Минобрнауки России для докторских и кандидатских диссертаций Подписано к печати 19.11.2012 г. Бумага писчая. Печать оперативная.

Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 6Отдел полиграфии ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный педагогический университет им. И.Я. Яковлева» 428000, г. Чебоксары, ул. К. Маркса,







© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.