WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

 

На правах рукописи

БАХТИН АРТУР АЛЕКСАНДРОВИЧ

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ТОНКОЙ КИШКИ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ СЕРОВОДОРОДСОДЕРЖАЩИМ ГАЗОМ (экспериментальное исследование).

03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Саранск – 2012

Работа выполнена на кафедре гистологии и эмбриологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития России

Научный руководитель:        доктор медицинских наук, профессор

       Наумова Любовь Ивановна

Официальные оппоненты:        

  Профессор, д.м.н., зав. кафедрой гистологии и

  эмбриологии, Ямщиков Николай Васильевич

  (Самарский государственный медицинский

университет, г. Самара)

Профессор, д.м.н., зав.кафедрой гистологии и 

эмбриологии Степанова Ирина Петровна

(Смоленский государственная медицинская

  академия,  г. Смоленск)

Ведущая организация: Саратовский государственный медицинский

университет им. В. И. Разумовского

Защита состоится «5» октября 2012 г. в «12.00» часов на заседании Диссертационного Совета Д 212.117.01 в ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» по адресу: 430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» по адресу: 430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

Объявление о защите и автореферат диссертации размещены на официальном сайте Мордовского государственного университета
им. Н. П. Огарёва www.mrsu.ru и интернет-сайте ВАК http://vak2.ed.gov.ru

Автореферат разослан « ____ » _________________ 2012г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук,

профессор

В.П.Балашов 

Общая характеристика работы.

Актуальность проблемы. Эпителиальные клетки кишечника находятся в постоянном контакте с множеством чужеродных антигенов, поступающих с пищей к так называемым биологическим барьерам, основной задачей которых является поддержание гомеостаза организма. Необходимая для этого целостность эпителия обеспечивается интенсивными процессами клеточной регенерации, изучение механизмов регуляции которых относится к разряду наиболее интенсивно разрабатываемых научных направлений (Темчура В.В., 2001).

Смена эпителия в тонкой кишке происходит быстро, о чем свидетельствуют показатели митотического индекса (МИ) и индекса апоптоза (ИА) эпителия тонкой кишки. Отношение МИ к ИА особенно высоко в области крипт и нижней трети ворсинок и низкое в области боковых поверхностей ворсинок. Это дало основание сделать  вывод, что репродуктивной зоной эпителия тонкой кишки является не только крипта, но и  нижняя треть ворсинок (Романова Т.А., 2010). 

Так как кишечник постоянно подвергается воздействию различных биотических и абиотических неблагоприятных факторов, которые в конечном итоге приводят к формированию гипоксии, в нем должны происходить, помимо деструктивных процессов, и изменения адаптивного характера (Звягинцева Т.Д., Гриднева С.В., 2005;  Михайлова З.М.  с соавт., 2010). В том числе и сдвиг  клеточного соотношения,  который является необходимым для поддержания адекватного функционирования.

Ухудшение экологической ситуации в результате воздействия химических токсикантов является одним из факторов, определяющих изменение физиологических функций и процессов физиологической регенерации в человеческом организме и обуславливающих развитие широкого спектра заболеваний, в том числе, тонкой кишки (Забродский П.Ф. с соавт., 1994; Боева О.И., 1998; Fleming L.E. et al., 1992). Уже в начальном периоде токсического воздействия  изменяется состав и функции клеток слизистой оболочки тонкой кишки (Давлатова И.С., 2010), что, вероятнее всего, связано с изменением регуляторных связей в клеточном цикле. Нарушение контроля над соотношением пролиферации и клеточной гибели ведет к сдвигам гомеостаза, изменению гистоархитектоники и развитию целого ряда различных  патологических состояний (Заводиленко К.В., 2006; Манских В.Н., 2007; Бажанова Е.Д., 2011).

Можно сказать, что вопросы пролиферативной  активности, клеточной гибели  и реактивности в системе «крипта-ворсинка» при воздействии токсических экзогенных факторов остаются открытыми, поскольку отсутствуют данные о  влиянии соединительнотканного  каркаса на пролиферативные возможности кишечного эпителия на фоне действия патогенных факторов. Решение  этих вопросов необходимо для понимания развития патологических процессов в тонкой кишке в условиях изменённой внешней среды, что создаст возможность правильного подхода к диагностике, профилактике и лечению подобного рода заболеваний.

Цель исследования: проанализировать морфологические особенности  слизистой оболочки тонкой кишки при воздействии сероводородсодержащего газа.

Задачи исследования:

1. Выявить особенности пролиферации и апоптоза эпителия слизистой оболочки тонкой кишки  крыс в условиях хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

2. Охарактеризовать соединительнотканную строму и сосуды стенки тонкой кишки крыс в условиях хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

3. Определить с помощью иммуногистохимического метода маркеры пролиферации и апоптоза (p27kip1, Ki-67, Bcl-xl, Integrin beta 5, Cadgerin pan) в эпителии слизистой оболочки тонкой кишки крыс в условиях хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

4. На основании  комплекса исследований дать характеристику процессам регенерации в системе крипта-ворсина в условиях хронического воздействия сероводородсодержащего  газа.

Научная новизна исследования.

Выявлены особенности  процессов пролиферации и апоптоза в эпителии слизистой оболочки тонкой кишки в динамике на фоне хронического воздействия природного газа Астраханского месторождения. Дано морфологическое обоснование преобразованиям соединительнотканной стромы тонкой кишки крыс в зависимости от продолжительности действия сероводородсодержащего газа сроком от 30 до 120 дней. Определен вклад соединительнотканных компонентов стенки  тонкой кишки в процессы регенерации эпителиального пласта слизистой оболочки тонкой кишки крыс, при воздействии полютантов. Выявлено распределение маркеров пролиферации и апоптоза (p27kip1, Ki-67, Bcl-xl, Integrin beta 5, Cadgerin pan) с помощью иммуногистохимического метода в зависимости от срока воздействия сероводородсодержащего газа Астраханского месторождения. Установлено, что в условиях хронического воздействия природного газа Астраханского месторождения интенсивность апоптоза эпителиоцитов тонкой кишки крыс нарастает, а пролиферации снижается, происходит нарушение межклеточных взаимодействий. Кроме того, показана качественная и количественная  трансформация соединительнотканных компонентов стенки тонкой кишки крыс при воздействии полютантов.

Научно практическая значимость.

В работе приведена динамическая морфофункциональная характеристика процессов апоптоза и пролиферации эпителиоцитов тонкой кишки крысы на фоне длительного воздействия сероводородсодержащего газа в концентрации 3 мг/м3. Полученные данные позволяют выявить особенности регенеративных процессов в эпителии тонкой кишки в зависимости от срока хронического эксперимента и продемонстрировать негативное влияние длительно действующего природного газа малой концентрации на процессы пролиферации эпителиальных клеток тонкой кишки. С позиций оценки клеточного обновления, рассматривается экологически обусловленная патология пищеварительной системы, что позволяет подвести морфологическую базу для объяснения некоторых клинических и диагностических проявлений заболеваний органов пищеварительного тракта при воздействии сероводородсодержащего газа. Эта оценка клеточного обновления, с точки зрения баланса пролиферации и апоптоза, может рассматриваться как одна из основ терапевтической стратегии. Результаты исследования дают возможность разработать морфологический прогноз эволюции патологических изменений слизистой оболочки тонкой кишки и тактику курации больных с  заболеваниями органов пищеварения после воздействия сероводородсодержащего газа.

Положения, вносимые на защиту:

1. В условиях хронического воздействия сероводородсодержащим газом Астраханского месторождения, сроком от 30 до 120 дней,  интенсивность апоптоза клеток эпителия слизистой оболочки тонкой кишки крыс  нарастает как в ворсинках, так и в криптах.

2. Длительное воздействие сероводородсодержащим газом, сроком от 30 до 120 дней,  в малых концентрациях (3мг/м3) сопровождается количественными и качественными изменениями соединительнотканной стромы.

3. Длительное воздействие сероводородсодержащим газом в течение 120 суток в концентрации по сероводороду 3мг/м3 вызывает стойкие изменения гистологических, гистохимических и иммуногистохимических показателей кишечной стенки крыс.

Апробация работы. Результаты работы доложены и обсуждены: на 87-89 итоговых научно-практических конференциях сотрудников академии, врачей города и области, г. Астрахань,  2010-2012 гг.; г. Ханты-Мансийск, 5-6 октября 2011 г.; на II международной научной конференции, посвященной 80-летия академика РАЕН, заслуженного работника высшей школы РФ, д.б.н., профессора Д.Л.Теплого,  г. Астрахань, 2011г.;  на Х Конгрессе Международной ассоциации морфологов, г. Ярославль 29-30 сентября, 2011г.; XI Конгресс Международной ассоциации морфологов, г. Самара 29 мая - 1 июня, 2012г.; г. Астрахань, 27-29 сентября 2012 г. на международной научной конференции посвященной памяти профессора Р.И. Асфандиярова «Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза в норме и при воздействии антропогенных факторов».

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 126 стр. машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов, глав собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы. Указатель литературы включает 79 отечественных и 47 иностранных источников. Работа иллюстрирована 3 таблицами, 42 рисунками.

Содержание работы.

Материалы и методы. Работа представляет собой экспериментальное комплексное исследование, выполненное на 70 беспородных крысах - самцах массой 180-220 г., прошедших карантин в течение 30 суток в специальном помещении вивария и в дальнейшем находящихся на стандартном лабораторном содержании. Протокол экспериментов в разделах выбора, содержания животных, моделирования патологических процессов  составлен по принцам биоэтики, правилам лабораторной практики (GLP), соответствующим этическим нормам, изложенным в Женевской конвенции (1971), «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и согласно приказу МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики» (Минздрав ССР № 755 от 12.08. 1977), положениям «Хельсинской Декларации по вопросам медицинской этики» и «Международным рекомендациям по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1989). Проведение экспериментальных исследований было оценено этической комиссией (заключение №1 от 27 января 2012 г.).

Моделирование патологии при воздействии сероводородсодержащего газа проводилось путем помещения животных на 4 часа в специальные затравочные камеры производства Московского института профзаболеваний и гигиены труда им. Эрисмана объемом 200 литров. Животные были распределены на 5 групп. Экспериментальные группы , в количестве 60 животных, подвергались воздействию природного газа в концентрации 3мг/м3 по сероводороду на протяжении 5 суток в неделю в течение 1, 2, 3 и 4 месяцев. Контролем служили 10 крыс того же возраста, находившиеся в стандартных условиях вивария. Выведение животных из опыта проводилось по всем требованиям соответствующих нормативных документов. В качестве непосредственного метода эвтаназии использовалась ингаляция смертельной дозы эфира для наркоза (этоксиэтан) (Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А., 1974).

После фиксации  извлеченных органов 10% нейтральным забуференным формалином были приготовлены парафиновые блоки. Обзорные гистологические препараты получали путем окраски срезов толщиной 5-7 мкм гематоксилином и эозином (70 шт.). Коллагеновые волокна выявляли окраской по Ван Гизону (70 шт.), эластические ­- с помощью окраски резорцин-фуксином по Вейгерту (70 шт). Гликозоаминогликаны и сиаломуцин определяли ШИК-реакцией в сочетании с альциановым синим (70 шт.), общий белок окрашивали прочным зеленым (70 шт.). Иммуногистохимический метод исследования проводился с помощью антител к Cadgerin pan, Integrin beta 5, Ki-67, bcl-xl, p27kip1 и системы детекции фирмы SpringBioscience (США), всего было поставлено 700 иммуногистохимических проб. В соответствии с принципами системного количественного анализа (Автандилов Г.Г., 1996) исследовались  глубина крипт, высота ворсинок, толщина мышечной и подслизистой  оболочек. Всего было изготовлено 1050 препаратов, из них 150 приходилось на контроль и 900 на экспериментальные группы. Фотографирование микропрепаратов производилось на камеру Levenguk C510.

Для установления достоверности полученных данных при анализе результатов исследования все материалы были подвергнуты статистической обработке. Материалы обрабатывались на персональном компьютере с помощью программ «Microsoft Office Windows 2007», «Microsoft Office Excel 2007». При обработке полученного материала использовались следующие статистические подходы и показатели: определение средних величин, оценка достоверности различий по коэффициенту Стьюдента (Плохинский Н.А., 1961, Лакин Г.Ф., 1990).

Собственные результаты исследования.

  Динамические изменения слизистой оболочки тонкой кишки под влиянием  сероводородсодержащего газа, отмечались уже через один месяц эксперимента. Это прежде всего, отеком слизистого и подслизистого слоев, а также соединительнотканной прослойки межмышечного слоя. В собственной пластинке слизистой оболочки и в подслизистой основе определялась умеренная клеточная инфильтрация преимущественно клетками лимфоцитарно-макрофагального рядов, а также  увеличением числа эозинофилов, что может говорить о начале воспалительной реакции. Явных процессов коллагенообразования в первый месяц эксперимента не наблюдалось, однако при окрашивании  прочным зеленым отмечалось снижение количества общего белка в стенке тонкой кишки. 

  К концу второго  месяца воздействия сероводородсодержащим газом в предельно допустимой концентрации отмечалось усиление инфильтрации, происходило нарастание протеолитической активности в отношении эластических волокон. Сиаломуцины, обнаруживаемые до этого только на поверхности энтероцитов и в секрете бокаловидных клеток, определялись уже и в собственной пластинке слизистой и подслизистой основе. Отмечалось явное начало коллагенообразования с рыхлым расположением волокон и большим количеством основного вещества.  Причем процесс разрастания соединительной ткани  имел четкую направленность от сосудов подслизистого слоя в сторону системы «крипта - ворсинка». В результате формирования жесткого соединительнотканного каркаса нарушалось питание слизистой оболочки, и снижались её регенераторные свойства. Ввиду того, что основной процесс, происходящий в стенке тонкой кишки, был направлен на коллагенизацию, количество общего белка в структурах тонкой кишки продолжало снижаться.

Наиболее выраженные гистологические и гистохимические изменения стенки тонкой кишки отмечались в течение третьего месяца хронического воздействия природным газом. В результате повреждения эластического каркаса кишечной стенки  наблюдалось истончение мышечного слоя, разобщение гладких миоцитов. Кроме того, отмечалось нарушение целостности ворсинок, вследствие как отека, так и дезорганизации эластической ткани. Нарушенная барьерная функция эпителиальной выстилки способствовала повышенному проникновению содержимого кишечника в толщу слизистой оболочки. Поступающие из просвета антигены усиливали миграцию лимфоидных клеток из собственной пластинки и подслизистой оболочки в эпителиальный слой и просвет кишечника. В брыжейке тонкой кишки, а также в подслизистой основе отмечались изменения, связанные  с кровеносными сосудами, — это, прежде всего, выбухание ядер эндотелиоцитов и расположение их группами. При окрашивании кровеносных сосудов прочным зеленым резко снижалась интенсивность и однородность окраски их стенки, отмечалось периваскулярное отложение белка. При окраске ШИК-реакцией, альциановым синим к концу четвертого месяца эксперимента отмечалось дальнейшее отложение сиаломуцинов в собственной пластинке слизистой оболочки и подслизистой основе. В условиях нарастающей гипоксии и развивающегося хронического воспаления происходит усиленная пролиферация фибробластов. В результате наблюдалась нарастающая фуксинофилия собственной пластинки слизистой оболочки и подслизистой основы тонкой кишки, а также соединительнотканной перегородки мышечной оболочки. Мышечная пластинка слизистой оболочки носила фрагментированный характер и  прерывалась участками соединительной ткани (рис.1, рис.2). Встречались также участки, где мышечная пластинка слизистой оболочки полностью замещалась соединительной тканью. Отложение коллагена в данных участках носило как диффузный, так и гомогенный характер. Вследствие столь неблагоприятного фонового окружения энтероцитов, было обнаружено перераспределение дифференцировки камбиальных элементов тонкой кишки с увеличением числа бокаловидных экзокриноцитов. Кроме того, помимо увеличения количества последних,  наблюдалась и качественная трансформация их секрета.  Если в контрольной группе  секрет бокаловидных экзокриноцитов содержал,  в основном, нейтральный муцин с незначительным включением сиаломуцина,  то уже через 4 месяц эксперимента в них преобладали сиаломуцины.

В настоящее время известно, что межклеточные взаимодействия обеспечиваются четырьмя разными группами факторов: адгезивными молекулами, экстрацеллюлярным матриксом, растворимыми медиаторами и онкогенами (Темчура В.В., 2001). Особое внимание обращается на взаимодействие клеток и экстрацеллюлярного матрикса. В частности, установлено, что экстрацеллюлярный матрикс может модулировать пролиферацию, дифференцировку и даже миграцию клеток (Труфакин В.А., Трунова Л.A., 1994). Связь с экстрацеллюлярным матриксом осуществляется с помощью интегриновых рецепторов (интегринов), взаимодействующих с его компонентами: коллагенами, гликопротеидами, гепаринсульфатами, гликозаминогликанами. Являясь  трансмембранными образованиями, интегриновые рецепторы одновременно взаимодействуют как с компонентами экстрацеллюлярного матрикса, так и с белками цитоскелета клеток.

Уже через один месяц наблюдалось снижение экспрессии Integrina beta 5 (рис. 9). Уменьшение интегринов можно связать с процессами усиления слущивания энтероцитов  на фоне усиленного апоптоза. Вследствие этого уже через один месяц хронической ингаляции сероводородсодержащего газа отмечалось изменения, связанные с пролиферативной активностью эпителия. Это, прежде всего, повышение экспрессии p27kip1 (рис. 8), что говорит о более детальном контроле митотической активности эпителия, чтобы не пропустить клетку с поврежденным хромосомным аппаратом.  Кроме того, повышенная  выработка белка p27kip1, блокирует  комплекс циклинзависимая киназа-2/циклин-Е, циклинзависимая киназа-2/циклин-А, что приводит к остановке митотического деления в фазе G1и S (Мушкамбаров Н.Н., Кузнецов С.Л., 2003). Остановка митотического цикла по своей сути является ничем иным, как прохождением «сверочных точек». Первая «сверочная точка» приходится на фазу G1. С этой точкой связана гиперэкспрессия белка p27kip1, нарастание которого, по мере увеличения срока эксперимента, было зафиксировано в нашей работе. Если защитным механизмам удастся справиться с повреждениями, то клетка перейдет в следующий период жизненного цикла, если процесс восстановления затянется или повреждения окажутся слишком значительными, увеличится экспрессия белков, отвечающих за апоптоз. Соответственно экспрессия белков, отвечающих за митоз, начнет снижаться. В том числе, уменьшится содержание маркера пролиферации Кi-67 (рис.8), что было обнаружено в результатах работы.

Вследствие более «детальной проверки» энтероцитов, находящихся в фазе митоза, и действия абиотических факторов, все больше клеток «выбраковывается» из дифферона с помощью одного из механизмов клеточной гибели - апоптоза. Последний – это физиологический процесс, его нарушение ведет к нелегитимному выживанию клеток и к заболеваниям опухолевого и неопухолевого характера. Программа апоптоза запускается в двух случаях: неудовлетворительное состояние самой клетки или негативная сигнализация снаружи (Белкина А.В., 2005; Суханова Г.А., Акбашева О.Е., 2009). К факторам, вызывающим апоптоз изнутри, относятся чрезмерные плохо репарируемые или полностью нерепарируемые повреждения ДНК, а так же серьезные повреждения мембран, особенно митохондриальных. Наиболее опасными  в данном случае являются оксид азота и супероксидный радикал. В работах Шишкиной Т.А. (2008) и Давлатовой И.С. (2010) показано, что хроническое воздействие сероводородсодержащим газом Астраханского месторождения в малой концентрации повышает образование оксида азота и увеличивает активность ПОЛ, в том числе, в структурах тонкой кишки. В делящихся клетках добавляется еще один фактор риска – сам процесс деления. Таким образом, в популяциях часто обновляющихся клеточных линий, к которым относится и эпителий тонкой кишки, деления повышают вероятность апоптоза. 

Уже к концу первого месяца  эксперимента отмечалось снижение экспрессии противоапоптотического  маркера Bcl-xl, что свидетельствует об увеличении клеточной гибели. Преобладание апоптозов над митозами приводит к атрофии. Кроме того, данный срок эксперимента характеризуется повышением экспрессии p27kip1 и снижением маркера пролиферации Ki-67 и Integrin beta 5 (рис. 8, рис.9).

Во второй месяц эксперимента в эпителии отмечались иммуногистохимические показатели c незначительным повышением их значений относительно предыдущего срока, что расценивалось, как стабилизация адаптивных процессов. Кроме того, сохранялась тенденция к повышению экспрессии р27kip1 и снижению экспрессии таких маркеров, как Ki-67, bcl-xl, Cadgerin, Integrin beta 5. Данное соотношение маркеров клеточной экспрессии  говорит об усугублении атрофических процессов, происходящих в эпителии. Уменьшение экспрессии Integrin beta 5  отражается на состоянии базальной мембраны.

  К концу третьего срока эксперимента  в иммуногистохимических исследованиях продолжало нарастать количество р27kip1 и снижаться количество всех остальных маркеров.

Четвертый месяц эксперимента характеризовался максимальным значением p27kip и минимальными Integrin beta 5, Cadherin pan, bcl-xl и  Ki-67 (рис. 3, рис.4).

Как уже сказано выше, действие природного газа приводит к образованию и накоплению активных форм кислорода с формированием оксидативного стресса и антиоксидантной недостаточности. В результате  повышается проницаемость мембран, особенно чувствительны к радикалам мембраны митохондрий (Наумова Л.И., 2002; Суханова Г.А., Акбашева О.Е., 2009). Через поврежденные мембраны митохондрий диффундируют различные белки, активирующие каспазный каскад апоптоза. В результате увеличивается количество проапоптотических и снижается концентрация противоапоптотических факторов, в том числе Bcl-xl. Снижение его экспрессии было обнаружено в эпителии тонкой кишки  пропорционально увеличению срока эксперимента.  Белки группы Вcl регулируют перенос Са2+ через мембраны эндоплазматического ретикулума и митохондрий и отменяют сигнал для входа экстрацеллюлярного Са2+, предотвращая, таким образом, повышение цитозольного Са2+ в клетке и запуск апоптоза. Что касается апоптоза «по команде», то в этом случае запрограммированная клеточная гибель развивается, если не выполняется хотя бы одно из условий: отсутствие ростового фактора, потеря связи с опорным субстратом или контакт клеток между собой. Также апоптоз запускается при действии антимитогенных факторов, например, глюкокортикоидов, ФНО и  многих других (Чернышева А.Л. с соавт., 2003; Sheng X. et al., 1998). В работе показано, что хроническое действие природного газа приводит к изменению качественного состава экстрацеллюлярного матрикса. Это сопровождается накоплением сиаломуцинов и разрушением базальной мембраны. Соответственно, связь эпителиальных клеток с базальной мембраной уменьшается, что проявляется уменьшением количества интегриновых связей и снижением концентрации Integrin beta 5 (рис.5, рис 6), что является дополнительным фактором запуска апоптоза. Что касается изучаемого нами Cadgerin pan, уменьшение его экспрессии (рис. 9) мы связываем с уходом Са2+, необходимого для поддержания межклеточных связей, в клетки из-за снижения в последних Bcl-xl на фоне действия природным газом.

Таким образом, четвертый месяц эксперимента характеризовался грубыми деструктивными изменениями: отмечалась резкая гиперплазия бокаловидных клеток, выявлены  изменения, происходящие в соединительнотканном каркасе, обнаружено преобладание апоптоза над пролиферативными процессами, смена процентного соотношения пула различных энтероцитов, что приводят к изменениям морфометрических показателей (рис.7).  Выявленные изменения изучаемых иммуногистохимических маркеров  полностью согласовались с полученной гистологической картиной. При хроническом воздействии сероводородсодержащим газом в эпителии тонкой кишки происходит преобладание апоптоза над пролиферацией. Причем запрограммированная клеточная гибель запускалась как в ответ на действие внешних факторов «по команде», так и «изнутри».

Выводы:

1. По мере увеличения срока (от 30 до 120 дней) хронического воздействия сероводородсодержащим  газом  отмечалось преобладание  процесса апоптоза над процессами пролиферации, что морфологически проявлялось уменьшением глубины крипт, высоты ворсинок, а также  толщины мышечной оболочки и подслизистой основы.

2. При хроническом воздействии сероводородсодержащим  газом происходили изменения соединительнотканной стромы, выражавшиеся в интенсивном коллагенообразовании,  дезорганизации эластической ткани, замещении нейтральных гликозаминогликанов на сиаломуцины.

3.  По мере увеличения срока хронического воздействия сероводородсодержащим  газом  отмечалось нарушение клеточных контактов эпителиоцитов тонкой кишки, что характеризовалось снижением экспрессии таких маркеров, как  Cadgerin pan и Integrin beta 5.

4.  При хронической ингаляции сероводородсодержащего газа отмечается сдвиг дифференцировки камбиальных элементов тонкой кишки с увеличением количества бокаловидных экзокриноцитов.

5. В условиях хронического воздействия сероводородсодержащим газом происходит уменьшение таких иммуногистохимических показателей, как Ki-67, Bcl-xl, Integrin beta 5, Cadgerin pan и увеличение p27kip1, что  в комплексе с гистохимическими и морфометрическими показателями рассматривается как деструктивный процесс.

Практические рекомендации.

1. Полученные данные позволяют выявить особенности регенеративных процессов в эпителии тонкой кишки в зависимости от срока хронического эксперимента и продемонстрировать негативное влияние длительно действующего природного газа малой концентрации на пролиферативную способность слизистой тонкой кишки .

2. Практические рекомендации работы заключаются в рассмотрении экологически обусловленной патологии желудочно-кишечного тракта с позиции оценки клеточного обновления, что позволяет подвести морфологическую базу для объяснения некоторых клинических и диагностических проявлений заболеваний органов пищеварения при воздействии эндогенных и экзогенных токсических факторов. Оценка клеточного обновления с точки зрения баланса пролиферации и апоптоза может рассматриваться как одна из основ терапевтической стратегии.

3.  Результаты исследования дают возможность разработать морфологический прогноз эволюции патологических изменений слизистой оболочки тонкой кишки и тактику курации больных с заболеваниями органов пищеварительного тракта после воздействия эндогенных и экзогенных токсических факторов.

 

.

 

Список работ опубликованных по теме

Список работ по теме диссертации:

  1. Бахтин А.А. Проницаемость сосудов легких при воздействии сероводородсодержащим газом./ Бахтин А.А.// Материалы 89-ой итоговой студенческой научной конференции, посвященной 450-летию г. Астрахани. – 2008.– С.15.
  2. Бахтин А.А. Изменения иммуногистохимических показателей Cadgerin pan в системе крипта-ворсинка тонкой кишки при воздействии сероводородсодержащего газа  Астраханского месторождения / Наумова Л. И., Бахтин А.А. // «Актуальные вопросы современной медицины»: Сборник трудов Астраханской государственной медицинской академии. – Астрахань: АГМА, 2011. – С. 50-51
  3. Бахтин А.А. Иммуногистохимические показатели p27kip1в стенке тонкой кишки при воздействии сероводородсодержащего газа Астраханского месторождения. // «Актуальные вопросы современной медицины»: Сборник трудов Астраханской государственной медицинской академии. – Астрахань: АГМА, 2011. – С. 51-52.
  4. Бахтин А.А. Иммуногистохимическая характеристика p27kip1 в тонкой кишке при воздействии неблагоприятных экологических факторов. / Бахтин А.А..// “Свободные радикалы, антиоксиданты и старение.” Материалы II Международной научной конференции. – 2011.– С.181-183.
  5. Бахтин А.А. Особенности гистохимических показателей в тонкой кишке при воздействии неблагоприятных экологических факторов / Бахтин А.А..// Современные проблемы науки и образования. – 2012. - №1. – www.science-education.ru/101-5345



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.