WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

ЛЮБОВЦЕВА ЕВГЕНИЯ ВЯЧЕСЛАВОВНА

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕЙРОАМИННЫХ СТРУКТУР  ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕКА ПРИ ДЕЙСТВИИ АКУПУНКТУРЫ

03.03.04 — гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук

Саранск 2012

Работа выполнена  на кафедре цитологии, эмбриологии, гистологии Чувашского государственного университета им.И.Н. Ульянова

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор, член-корр РАМН

Кузнецов Сергей Львович

Официальные оппоненты: д.м.н., профессор, зав. каф. Гистологии, эмбриологии и цитологии 

  Ивановской государственной медицинской академии, член корр.

  РАМН, Виноградов Сергей Юрьевич

  д.м.н., профессор, зав.каф. гистологии и эмбриологии Самарского 

государственного медицинского института,

Ямщиков Николай Васильевич

д.м.н., зав. каф. акушерства и гинекологии ЧГУ им. .Н.Ульянова.

Самойлова Алла Владимировна

Ведущая организация:  Московский медико-стоматологический университет

Защита состоится: 5 октября 2012 г. в 14.00 часов на заседании Диссертационного совета Д 212.117.01 при ФГБОУ ВПО «МГУ им. Н.П.Огарева» по адресу 430005, г. Саранск, ул. Большевистская, 68

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П.Огарева» (430000, г. Саранск, ул. Большевистская, 68)

Автореферат диссертации опубликован на официальном сайте

«Мордовского государственного университета им. Н.П.Огарева» (430000, г. Саранск, ул. Большевистская, 68)

Автореферат диссертации разослан:

Ученый секретарь диссертационного совета

Д.б. н., профессор Балашов Владимир Павлович

  -3-

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ



Актуальность темы. В настоящее время во всем мире при лечении многих заболеваний широко используется акупунктура (Вогралик М.В., 1988; Любовцев В.Б., 1998; Гурьянова Е.А., 2004, 2006, 2011; Zukauskas, G., 1991; Chou L.W., 2009; Park Y.C., 2009; Zhang Y., 2009). Многие исследователи пытались определить структуру акупунктурных точек, высказывая по этому поводу разные мнения (Вогралик В.Г., Вогралик В.М., 1988, 1996; Любовцев В.Б., 1998; Кирпичникова Е.А., 2003). Однако, никому из исследователей пока не удалось определить, как влияют те или иные акупунктурные воздействия на гистофизиологическую перестройку органов,  не выявлены тонкие механизмы регуляции некоторых иммунологических и эндокринных  органов после акупунктуры.

Как известно, регуляция многих органов на месте происходит при помощи нейромедиаторов, расположенных в особых биоаминсодержащих структурах совместно с адренергическим звеном вегетативной нервной системы (Любовцева Л.А., 1993; Самойлова А.В., 1994; Ермолаев В.В., 1997; Агафонкин С.А., 2006; Кирпичникова Е.А., 2011).  Кроме того, лечение большинства заболеваний любыми методами очень часто связано  с воздействием на иммунную и, связанную с ней, кроветворную систему организма. Вследствие чего, возникла необходимость выявить действие  акупунктуры на автономную регуляцию кроветворной и иммунной систем через нейромедиаторы и структуры их содержащие. Центральным органом кроветворения и иммунитета является костный мозг (Петров Р.В с соав., 1978, Chain B.M.,1986). В нем происходит антигеннезависимая дифференцировка В-лимфоцитов и он является единственным органом у взрослого человека, в котором происходит миелоидное кроветворение (Максимов А. А., 1929). Именно здесь нейромедиаторы участвуют в размножении, дифференцировке клеток и их созревании.

Гипоталамус регулирует процессы иммуногенеза с помощью центров медиобазальной области, вследствие чего, изменение нейромедиаторного окружения в этих центрах вызывает нарушение процессов обмена биоаминов  в структурах их содержащих, а, следовательно, происходит изменение и в кроветворных органах. Исследуя нейромедиаторный статус гипоталамуса, костного мозга, а также периферической крови, мы опосредованно изучали действие акупунктуры  на изменение иммунных процессов в организме и их регуляцию. В доступной нам литературе,  мы не нашли данных о внутриорганном взаимодействии нейромедиаторов в биоаминсодержащих структурах  костного мозга, гипоталамуса и крови в изучаемые сроки, а также межорганных взаимодействий нейромедиаторных систем,  и участия их  в процессах кроветворения и иммуногенеза после акупунктуры.

Таким образом, мы попытались определить местную нейроаминную регуляцию,  как в самих изучаемых органах, так и выявить взаимодействие межорганных регулирующих структур после акупунктуры при помощи методов корреляционного анализа нейромедиаторных изменений в органах их содержащих, и создать гипотетическую схему их взаимодействия.

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования является выявление  влияния акупунктуры на биоаминные cтруктурно-функциональные перестройки гипоталамуса, костного мозга и крови и их взаимодействия между собой.

В связи с поставленной целью были определены задачи исследования.

  1. Изучить количественные изменения нейроаминов: гистамина, КА, серотонина в аминосодержащих структурах  гипоталамуса и костного мозга крыс сразу после снятия иглы, спустя 30 мин и 4 часа, с экспозицией 10 мин в точку  ТА TR20.
  2. Определить взаимодействие нейромедиаторов между собой в биоаминсодержащих структурах гипоталамуса, костного мозга, а также межструктурные связи и обозначить влияние этих веществ на процессы происходящие в изучаемых органах сразу после снятия иглы с экспозицией 10 мин., спустя 30 мин. и 4 часа в точку TR20.
  3. Вычислить серотониновый индекс в изучаемых структурах и выявить ведущий медиатор после акупунктуры на изучаемых сроках воздействия.
  4. Сравнить в динамике влияние биоамин-инактивирующих веществ (гепарина и МАО) на биоаминпродуцирующие и поглощающие структуры гипоталамуса, костного мозга и крови после введения акупунктурной иглы в точку TR-20. 
  5. Исследовать влияния акупунктуры на миелограмму костного мозга с 10 мин. экспозицией иглы в точку TR-20.
  6. Выявить влияние акупунктуры на содержание биогенных аминов в форменных элементах крови крыс, а также эритропоэтинов в плазме крови человека, и на гемодинамику структурных элементов в ней в  зависимости от локализации точек (TR-20 Х, V 43, а также при их совместном воздействии), и времени экспозиции иглы в них 10 и 20 мин.
  7. Создать гипотетическую схему влияния акупунктуры на  взаимодействия изучаемых органов между собой во временном аспекте.

Научная новизна

1. Местная регуляция костного мозга зависит от нейромедиаторных структур гипоталамуса (нервных клеток, макрофагов и глиоцитов). Определено, что акупунктура с 10-мин. экспозицией в точку TR-20 существенно влияет на содержание биогенных аминов в нейроцитах, макрофагах и глиоцитах гипоталамуса, а также на гранулярные люминесцирующие и тучные клетки костного мозга, и оказывает значительное воздействие на корреляционные взаимодействие между нейромедиаторами в этих структурах.

2. Нейромедиаторные структуры интактного гипоталамуса находятся в отрицательных взаимодействиях с биоаминами костного мозга, что говорит о том, что между гипоталамусом и костным мозгом нет прямого взаимодействия по изучаемым веществам.

3. Выявлено, что акупунктура с 10-ти мин. экспозицией в точку TR-20 влияет на численное соотношение тучных и гранулярных люминесцирующих клеток в структурах костного мозга, миелограмму в зависимости от времени после воздействия акупунктуры.

4. Акупунктура с 10-ти мин. экспозицией в точку TR-20 увеличивает содержание сукцинатдегидрогеназы в молодых клетках эритроидного, эозинофильного и нейтрофильного рядов, а так же в лимфоцитах и бластных формах клеток. Снижает содержание моноаминоксидазы в зрелых и увеличивает ее в молодых клетках костного мозга.

5. Содержание изучаемых нейромедиаторов в клетках крови и их численное соотношение зависит от нейроаминного баланса биогенных аминов в биоаминосодержащих структурах костного мозга. Содержание эритропоэтинов в плазме крови, биогенных аминов в форменных элементах крови, общий анализ крови и лейкоцитарная формула зависит от времени экспозиции иглы и от локализации точки.

Научно- практическая значимость: на основании данных диссертационного исследования выявлено влияние акупунктуры на активность некоторых гормонов крови, а также на изменение нейроаминов в биоаминсодержащих структурах костного мозга и гипоталамуса. Найдено, что гипоталамус влияет на биоаминсодержащие структуры костного мозга опосредованно. Между биоаминсодержащими структурами гипоталамуса и костного мозга у интактных животных определяются отрицательные связи по изучаемым нейроаминам, что говорит о том, что они функционируют независимо друг от друга. При воздействии акупунктуры в точку TR 20, макрофаги гипоталамуса и ГЛК костного мозга, возможно, функционируют параллельно относительно друг друга, создавая  на некоторое время положительные корреляционные связи, изменяя миело- и лимфопоэз в костном мозге .





Результаты исследования существенно расширяют представления об адаптационных механизмах функционирования эндокринных и кроветворных органов. Для практической акупунктуры важны полученные результаты о том, что рефлексогенное воздействие приводит к перераспределению в структурах гипоталамуса и  костного мозга нейроаминов: гистамина, КА и серотонина, что влияет на миелограмму и лейкоцитарную формулу крови.  Показано, что ферменты и гепарин в основных биоаминсодержащих структурах участвуют в регуляции содержания нейроаминов в изучаемых органах. Акупунктура, произведенная  в  точку TR 20, влияет на корреляционные взаимоотношения между гипоталамусом, костным мозгом и кровью. Ведущими медиаторам после акупунктуры в гипоталамусе становятся КА, а в костном мозге в первую очередь, серотонин и только потом, гистамин.

Полученные результаты используются в лекциях, читаемых на кафедрах: нормальной  и патологической физиологии; цитологии, эмбриологии, гистологии; восстановительной медицины ФГОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова», Институте усовершенствования врачей Минздрава ЧР, а также на курсах усовершенствования врачей по акупунктуре в Москве. По этим данным написано методическое пособие для практических врачей акупунктуристов.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1.        У крыс нейроамины в гипоталамусе в наибольшем количестве определяются в макрофагах, нервных волокнах, нейроцитах и глиоцитах, а в костном мозге в тучных и гранулярных люминесцирующих клетках (ГЛК). В гипоталамусе преобладают нервные клетки, а в костном мозге - тучные и ГЛК распределяются в равной степени. Тучные и ГЛК отсутствуют в крови.

2.        Акупунктура влияет на корреляционную связь между нейромедиаторами в биоаминсодержащих структурах костного мозга, гипоталамуса, и выход дифференцирующихся клеток в кровь. Иглоукалывание изменяет корреляционную связь между биоаминсодержащими структурами гипоталамуса и костного мозга, и зависит от времени после воздействия акупунктуры.

3.        Акупунктура влияет на миелограмму, а также на биоамининактивирующие вещества и фермент аэробного окисления, регулирующие поступление биоаминов в межклеточное пространство.

4.        Ведущим медиатором по серотониновому индексу в изучаемых структурах костного мозга и крови является серотонин. При иглоукалывании на время эксперимента снижается серотониновый индекс в гранулярных люминесцирующих и тучных клетках, результатом чего является резкое увеличение числа бластных форм клеток во всех кроветворных рядах. В гипоталамусе ведущим нейроамином являются КА как до, так и после акупунктуры.

5.        Акупунктура влияет на содержание биогенных аминов в структурах крови, эритропоэтина в плазме, на гемодинамику структурных элементов в ней и зависит от воздействия на избранные точки (TR-20, V-43 и при совместном воздействии на них) и времени экспозиции иглы в них (10 или 20 мин).

Апробация работы

Результаты исследований изложены на научно-практической конференции «Здоровье населения и физическое воспитание», г. Чебоксары, 1994; Российской научно-практической конференции «Экология здоровья природопользования», г. Саратов, 1997; на II съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока, Новосибирск, 1998; на XXVII студенческой конференции ЧГУ, г. Чебоксары, 1999; на международном конгрессе «Восстановительная медицина и реабилитация», г. Москва, 2005; на международной конференции «Конференция посвященная 100-ю со дня рождения И.С. Кудрина», г. Тверь, 2006; «Бабухинские чтения», г. Орел, 2006; заседании Чувашской ассоциации рефлексотерапевтов (2002, 2003, 2004, 2005, 2006 гг.), г.  Санкт-Петербург на научном совещании «Актуальные проблемы учения о тканях»(2006), на конгрессе по акупунктуре в Индии (2006); на конгрессе «Традиционная медицина» г. Москва (2007); международном конгрессе «Здоровье и образование в ХХ1 веке», г. Москва (2007), конференции «Естествознание и гуманизм», г.Томск (2007), на конференции АСВОМЕД, г. Сочи (2007); на международной конференции, посвященной 65-летию Ивановской школы морфологов, г. Иваново (2009); международном конгрессе «Здравница) г. Москва (2009); международном  конгрессе «Здоровье и образование в ХХ1 веке», г. Москва (2009), 4 междунар. Научной школы «Наука и инновации – 2009» г. Йошкар-Ола; Международный конгр. «Здравница», 2009, г. Москва; 5 международ. научн. школа «Наука и инновации 2010», Йошкар-Ола, 2010; 8 Всероссийской конференции по патологии клетки, Москва. 11-12 ноября. 2010; 6 международ. научн. школе «Наука и инновации 2011», Йошкар-Ола, 2011, Х1  Конгрессе международной ассоциации морфологов. Самара. 29-31 мая, 2012 г..

Публикации результатов исследования

Основные положения диссертации доложены  в 54 опубликованных статьях, 3 из которых являются международными, 23 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикаций результатов диссертационных работ

Структура и объем диссертации

Диссертационный материал изложен на 194 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка цитируемой литературы, содержащего 261 источников, из них отечественных 160 и зарубежных 101. Диссертация, иллюстрирована 36 таблицами, 60 рисунками и диаграммами.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал исследования

Исследования проведены на 245 белых беспородных крысах.  Крысы содержались в виварии с искусственной вентиляцией и контролируемым световым режимом (день – 8:00 – 20:00, ночь – 20:00 – 8:00), получали стандартную пищу и воду. Материал  был взят в осенне-зимний период

Материалом исследования являлся гипоталамус, ККМ и кровь крыс-самцов весом от 150 до 180 грамм, а также кровь человека. В эксперименте у крыс органы брали под глубоким эфирным наркозом и замораживали в криостате при температуре минус 20 градусов, делали срезы толщиной 15 мкм. Структуры гипоталамуса выделяли из фронтальных срезов мозга по методу Palcovits (1973) в соответствии с координатами по атласу  Konig and Klippel (1963). Исследовали супраоптическое ядро А 5780, переднее гипоталамическое поле А5780 – А6360, паравентрикулярное ядро А 5150 – А 5780, одним блоком аркуатное ядро и срединное возвышение А3750 – А 4620, заднее гипоталамическое поле А 3180 – а 3750.

Костный мозг, после замораживания бедренной косточки,  извлекали из нее и делали срезы, отпечатки и мазки. Производили параллельное окрашивание. Кровь у крыс брали из бедренной вены. 

При нахождении точки акупунктуры  (ТА) на теле животного мы пользовались атласом Vо11 (1976). Точки акупунктуры ТR20 (20Х )  и V-43 находили с помощью прибора ПЭА-1 на предварительно выбритом участке и анатомо- топографического метода - по расположению непосредственно над основанием ушной раковины, а V-43 (рис. 1), и измерением электрокожного сопротивления с помощью стандартного прибора Элитерис 5 УМ 003. Измерение осуществлялось при стабилизированном постоянном токе величиной 2 мкА при напряжении 1V.

Локализация точек акупунктуры следующая: ТА TR 20 (TE 20) – находится в заушной области над границей волосяного покрова, на уровне вершины ушной раковины (воздействует на гипоталамус) (Рис.1). Под кожным покровом в районе точки находятся верхняя ушная мышца, височная мышца, височная кость; V-43 (UB 43)- находится на пересечении горизонтальной линии, проведенной через вершину остистого отростка IV грудного позвонка, и вертикальной, отстоящей на 3 цуня от заднесрединного меридиана (воздействует на органы иммунной системы) (Рис.1).

Согласно международной классификации данные меридианы относятся к классическим акупунктурным меридианам и соответствуют: TE (Triple Energizer) - меридиан трех полостей туловища, UB (Urinary bladder)- меридиан мочевого пузыря.

Иглу вводили в найденную ТА у крыс на 10  мин под  эфирным наркозом. Контролем служили крысы, которым в таких же условиях проводили акупунктуру в кожу  бедра вне ТА. После проведения реакции по методу Фалька вместе со свежими мазками, использованные препараты перекрашивали методом Гленнера на МАО.

Первая группа - интактные животные (45 крыс) исследовалась без воздействия (табл. 1).

Вторая группа - контрольные животные (45 крыс) подвергалась воздействию акупунктурной иглы в течение 10 мин. рядом с точкой акупунктуры 20Х,  в месте, где электрокожное сопротивление 100 кОм и выше.

Третья группа - (45 крыс) подвергалась воздействию иглотерапии в точку гипоталамуса 20Х с обеих сторон (рис. 1), ЭКС 55-65 кОм. Время экспозиции  иглы равнялось 10 мин. Материал брали сразу после снятия иглы.

Четвертая группа (45 крыс) подвергалась воздействию иглотерапии в точку гипоталамуса 20Х с обеих сторон, ЭКС 55-65 кОм. Время экспозиции  иглы равнялось 10 мин. Органы брали через 30 мин после снятия иглы.

Пятая группа (45 крыс) подвергалась воздействию иглотерапии в точку гипоталамуса 20Х с обеих сторон, ЭКС 55-65 кОм. Время экспозиции  иглы равнялось 10 мин. Органы брали через 4 часа после снятия иглы.

Для изучения влияния иглоукалывания на человека, исследования проведены на 9 группах добровольцах студентах мужского пола в возрасте от 20 до 25 лет. В каждую группу входили по 10 человек. Взятие крови производили с 9 до 12 часов утра в осеннее-зимний период.

Таблица 1

Материал исследования

Вид  животного

Материал

Группы животных

Крыса

Срезы,

мазки

1.Интактные

2,3 –

контроль-

ные

4.Взятие

органов сразу,

через 30 мин

и 4 часа после

10 мин

экспозиции

иглы

5. Взятие органов сразу, через

30 мин и 4

часа

после

20 мин

экспозиции

иглы

Воздействие

Без

Воздействия

Рядом с ТА

20Х (TR-20)

И V-43

В область ТА 

20Х(TR-20) и

V-43

В область 

TR-20 и V-43

Число особей

Гипота-

ламус

15

90

45

45

КМ

15

90

45

45

Человек

Кровь

10

80

80

80-

Крыса

Кровь

15

90

45

45

Число исследований

Всего

8840

440

2800

2800

2800

У 1-й  группы брали кровь из вены и делали общий анализ крови с лейкоцитарной формулой, а также исследовали  ряда гормонов, среди которых был эритропоэтин. 

2-группе  делали иглоукалывание рядом с точкой с 10 мин экспозицией брали кровь через 30 мин. после снятия иглы и через 4 часа после иглоукалывания.

3-группе  делали иглоукалывание рядом с точкой 20- Х с 20 мин экспозицией брали кровь через 30 мин. после снятия иглы и через 4 часа после иглоукалывания.

4 - делали иглоукалывание в точку  TR-20  с 10 мин экспозицией и брали кровь из вены через 30 мин. после снятия иглы,  и через 4 часа после иглоукалывания.

5-ей группе студентов делали иглоукалывание в точку  TR-20  с 20 мин экспозицией и брали кровь через 30 мин. после снятия иглы и через 4 часа после иглоукалывания.

6-группе  делали иглоукалывание в точку  V-43 с 10 мин экспозицией и брали кровь через 30 мин. после снятия иглы и через 4 часа после иглоукалывания.

7-группе  делали иглоукалывание в точку  V-43 с 20 мин экспозицией и брали кровь через 30 мин. после снятия иглы и через 4 часа после иглоукалывания.

8-группе  делали иглоукалывание одновременно в точку  V-43+ TR-20 с 10 мин экспозицией и брали кровь через 30 мин. после снятия иглы и через 4 часа после

иглоукалывания.

9-группе  делали иглоукалывание одновременно в точку  V-43+ TR-20 с 20 мин экспозицией и брали кровь через 30 мин. после снятия иглы и через 4 часа после иглоукалывания.

2.2. Методы исследования.

  1. Люминесцентно-гистохимический метод Кросса, Евена, Роста (Cross S.A., Even S.W., Rost F.W., 1971) для выявления тканевого гистамина.
  2. Для выявления аминосодержащих структур применялся люминесцентно-гистохимический метод Фалька-Хилларпа в модификации Е.М. Крохиной (1967).
  3. Количественно концентрации Г, КА и С в тканях оценивались с применением микрофлуориметрической насадки к люминесцентному микроскопу ФМЭЛ-1А. Параметры снимались с измерительной части усилителя вольтметра при напряжении 800 вольт с зондом 0,5. Замер интенсивности свечения производился в единицах флуоресценции - условные единицы (у. е.). Люминесцентные методы исследования позволяют обнаружить в структурах присутствие вещества до 10 пкг и обладают пространственной избирательностью, обеспечивающей возможность оценить локализацию вещества в микроструктурах (Зарубина И.Л. с соав., 1978). При определении концентрации гистамина применяли интерференционный фильтр N 7 (на длине волны 515 нм), катехоламинов -  N 6 (48О нм), серотонина - N 8 (525 нм), гепарина - N 9 (540 нм).
  4. Для изучения миелограммы и лейкоцитарной формулы брали мазки от всех животных,  в каждой серии опытов, и в каждом мазке костного мозга по А. Паппенгейму подсчитывали по 500 клеток.
  5. Лейкоцитарную формулу определяли методом Романовского Гимзы по обычным параметрам (в дальнейшем изложении при описании миелограммы и лейкоцитарной формулы указаны пределы процентных колебаний).
  6. Полученные цифровые данные обрабатывались статистически по специально разработанной программе «Статистика» на компьютере IBM совместимом - Pentium 366 MMX с привлечением пакета программ Microsoft office (Word и Excel). В работе приводятся следующие показатели: М средняя арифметическая величина; m ошибка средней арифметической величины. Статистическую достоверность определяли критерием Стьюдента (t). Для удобства обработки цифровые значения умножали на 100.
  7. Корреляционный анализ применялся для выявления взаимосвязи между количественными показателями интенсивности люминесценции КА, серотонином и гистамином в изучаемых структурах гипоталамуса, костного мозга у контрольных животных и после воздействия акупунктуры, при этом учитывали не менее 100 объектов. При анализе взаимосвязи между исследуемыми признаками существование и сила предполагаемой корреляции определялась путем проверки нулевой статистической гипотезы о  равенстве нулю коэффициента корреляции (т.е. об отсутствии связи между признаками) (Петри А.,Сэбин К., 2003). Вычислялось значение вероятности (р): при значении р > 0,05 при любом значении коэффициента корреляции нулевая гипотеза не отклонялась и значение r не подвергалось интерпретации. Методом корреляционного анализа нами были изучены внутри каждого из изучаемых органов следующие пары нейромедиаторов: КА и С, КА и гистамин, а также - С и гистамин в ГЛК и тучных клетках костного мозга, а также между нервными клетками, макрофагами и глиоцитами гипоталамуса. Между изучаемыми органами в названных структурах исследовали взаимосвязь КА-КА, С-С, Г-Г.
  8. Вычисление серотонинового индекса осуществлялось для  определения ведущей роли одного из нейромедиаторов в каждой конкретной ситуации.
  9. Учитывая, что ферментативное ингибирование биоаминов осуществляется моноаминоксидазой, нами проводилась окраска на МАО по Гленнеру (Glenner G.G. et al., 1957).
  10. Сукцинатдегидрогеназу (СДГ) исследовали по Г. Лабори (1974)
  11. Методом  Массона-Фонтаны выявляли несвободный серотонин и его предшественников (индолсодержащие вещества).
  12. Окраска полихромным толуидиновым синим по Унна применяли для определения  сульфатированности гепарина и состояния тучных клеток (Ромейс Б., 1954).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ЛОКАЛИЗАЦИЯ БИОГЕННЫХ  АМИНОВ В СТРУКТУРАХ ГИПОТАЛАМУСА

В исследуемых срезах гипоталамуса содержание КА и серотонина выявляется с одной стороны в виде диффузного свечения, а с другой – здесь определяются разные по размеру группы крупных и средне люминесцирующих нервных клеток,  клетки глии и макрофаги. Таких групп (ядер) несколько. Определяются группы ярко люминесцирующих мелких  клеток, между которыми расположены нервные волокна и макрофаги (рис.2).

Рис. 2. Нервные клетки и группы биоаминсодержащих клеток в медиобазальной  доле гипоталамуса крыс: а. нервные клетки, б. нервные волокна в адвентиции сосудов, в. макрофаги. Метод Фалька. Микроскоп МЛ-2. Об. 10. Ок. 40. Гомаль 1,7. 

Содержание нейромедиаторов в гипоталамусе крыс очень сильно зависит от сезона. Так, содержание КА и серотонина в фоновом свечении в наибольшем количестве определяется в декабре, тогда как в глиоцитах  в марте.  В макрофагах наибольшее содержание КА отмечено в декабре, а серотонина  - в марте. В нейроцитах содержание КА в максимальном количестве отмечено в марте, а серотонина - в декабре. В наибольшем количестве КА определяются в глиоцитах (121 у.е.)  чуть в меньшем - в нейроцитах (105 у.е.), в то время как содержание серотонина в наибольшем количестве определяется в макрофагах.

При исследовании нервных клеток, нами выявлено, что клетки имеют разные размеры  (от 15 до 90 мкм). Их в группе на срезе определяется разное число (от 5 до 25 клеток). Это может зависеть от глубины среза. В области аксонального холмика в некоторых нейроцитах определяются группа гранул с желтой люминесценцией. Впервые серотонин в виде гранул в аксональном холмике определила Михеева З.И. (1975). Наибольшее содержание гистамина концентрируется в макрофагах.

В нервных клетках медиобазальной области гипоталамуса сразу после снятия иглы содержание гистамина имеет тенденцию к повышению, через 30 мин приближается  к уровню нормы, и к 4  возрастает в 2 раза (табл. 2), достигая своего пика.  В цитоплазме нейроцитов сразу после снятия иглы  изменения содержания КА не происходит. Через 30 мин их содержание увеличивается в 1,5 раза а через 4 часа увеличивается в 2,4 раз по сравнению с 1 группой. Содержание серотонина сразу после снятия иглы повышается, а к 30 мин. и 4 часам незначительно снижается, но остается выше уровня интактных животных в 1,3 раза (табл.2, рис.3,4,5).

Число  макрофагов резко увеличилось, но выявляемые клетки уменьшились в размерах и потеряли свою основную форму. Сразу после снятия иглы содержание гистамина в них имеет тенденцию к понижению и это длится до 30 мин, далее его содержание к 4 часам резко увеличивается (табл. 3, рис.3,4,5).

Таблица 2

Содержание биогенных аминов в зимний  период в нервных клетках гипоталамуса крыс после воздействия акупунктуры

Название изучаемых веществ

Интактные

Контрольные

Сразу после снятия иглы

ч/з 30

мин.

ч/з 4 ч

Гистамин

24±0,3

26±0,8

31,0±0,3*

28,5±0,9

50,9±1,7

КА

10,5±1,6

11,0±2,4

10,9±0,01

6,8±0,01

25,9±0,1

Серотонин

5,9±0,9

5,7±0,9

23,6±0,02

21,3±0,1

9,7±0,07*

Примечание: *-р<0,01. Данные приведены в условных единицах (у. е.)

  Таблица 3

Содержание биогенных аминов в макрофагах  гипоталамуса крыс после воздействия акупунктуры, у.е., в зимний  период

Название изучаемых веществ в у.е.

ГЛК

Интактные

Сразу после снятия иглы

ч/з

30 мин

ч/з

4 часа

Гистамин

72±1,0

68,9±1,3

37±0,3

104

КА

45±0,2

51,9±0,1

121±1,6

720

Серотонин

49±1,4

43,2±0,8*

35,1±0,9

21

Примечание: *-р<0,01. Данные приведены в условных единицах (у. е.)

Красным цветом отмечено повышение нейроаминов, синим – понижение.

Сразу после снятии иглы содержание КА в макрофагах имеет тенденцию к повышению и повышаются к 30 мин (табл. 3), при этом макрофаги – единичны, а в некоторых из них часть гранул перестает люминесцировать. Пик содержания КА наблюдается к 4 ч после снятия иглы. Содержание серотонина в макрофагах к 30 мин уменьшается в 1,2 раза, а к 4 часам снижается вдвое (табл. 3). Содержание гистамина к 30 мин резко снижается, а к 4 резко увеличивается до 104 у.е.

В глиоцитах содержание КА постепенно снижается и к 4 ч.становится минимальным, при этом люминесцируют единичные клетки. Содержание серотонина сразу после экспозиции незначительно снижается,  к 30 мин  увеличивается на 13 у.е. (табл. 4, рис.3,4,5). Содержание гистамина также сразу понижается, а к 30 мин. повышается.

Таблица 4

Содержание биогенных аминов в глиоцитах гипоталамуса крыс после воздействия акупунктуры, у.е., в зимний  период

Название изучаемых веществ

Интактные

Сразу после снятия иглы

ч/з 30 мин

ч/з 4 часа

Гистамин

37±0,3

31,0±0,3*

41,5±0,9

Не люминес

КА

121±1,6

118±0,01

74,8±0,01

Не люминес

Серотонин

49,1±0,9

43,6±0,2

62,3±0,7

Не люминес

Примечание: *-р<0,01. Данные приведены в условных единицах (у. е.)

Рис 3. Содержание гистамина в биоаминсодержащих структурах гипоталамуса до и после воздействия акупунктуры

Рис. 4. Содержание катехоламинов в биоаминсодержащих структурах гипоталамуса до и после воздействия акупунктуры.

Рис. 5. Содержание серотонина в биоаминсодержащих структурах гипоталамуса до и после воздействия акупунктуры

Корреляционный анализ нейроаминов в структурах гипоталамуса

В нервных клетках  гипоталамуса индекс корреляции между всеми биоаминами отрицательный за его исключением между серотонином и гистамином сразу после снятия иглы (табл.5).

  Таблица 5

Корреляционный анализ в нервных клетках, глиоцитах, макрофагах гипоталамуса в разные сроки после воздействия акупунктуры

Структуры

Интактные

Сразу после снятия иглы

Через 30 мин

Через 4 часа

КА/С

КА/Г

С/Г

КА/С

КА/Г

С/Г

КА/С

КА/Г

С/Г

КА/С

КА/Г

С/Г

Нервные клетки

-0,6

-0,2

0,4

-0,2

-0,3

0,76

-0,04

-0,2

0,3

-0,03

-0,2

0,2

Макрофаги

0,9

0,6

0,7

-0,8

0,75

0,6

-0,3

-0,3

0,9

-0,3

-0,1

0,2

Глиоциты

-0,4

-0,4

-0,75

-0,4

-0,3

-0,7

-0,8

-0,5

-0,7

0,6

0,7

-0,8

Красным цветом отмечены сильные положительные, синим – отрицательные связи, зеленым – средние.

Наибольшие изменения в индексе  корреляции акупунктура вызывает в макрофагах,  к 4 ч. они становятся отрицательными.

В глиоцитах к 4 ч. индекс корреляции остается отрицательным только между серотонином и гистамином. Здесь результат индекса корреляции  прямо противоположен по отношению к нервным клеткам (см. табл. 5).

Серотониновый индекс

В гипоталамусе мы впервые встречаемся с тем, что серотониновый индекс ниже 1 во всех изучаемых структурах. По полученным данным, можно предположить, что  иглотерапия на всех изучаемых сроках усиливает действие адренергического звена вегетативной нервной системы в гипоталамусе и через нее воздействует на органы, регулируемые им.

Локализация МАО в гипоталамусе после воздействия акупунктуры

Акупунктура увеличивает содержание МАО в нервных клетках, и к 4 часам содержание этого фермента становится максимальным. В макрофагах содержание МАО повышается до 30 мин, а через 4 часа после акупунктуры  наблюдается  снижение этого фермента. В глиоцитах сразу после снятия иглы содержание МАО вначале повышается, через 30 мин – снижается и далее МАО в этих клетках не определяется.

Локализация гликозоаминогликанов в гипоталамусе.

Под воздействием акупунктуры в изучаемые сроки сульфатированность гликозоаминогликанов  изменяется мало.

ЛОКАЛИЗАЦИЯ НЕЙРОАМИНОВ В СТРУКТУРАХ КОСТНОГО МОЗГА

Нами выявлено, что в той или иной мере в костном мозге у крыс биогенные амины содержатся во всех клетках. Больше всего биогенных аминов в зрелых формах клеток и меньше в бластах (рис.6,7,8).

 





© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.