WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


 

На правах рукописи

ЖУКОВА ОЛЬГА ВАДИМОВНА

ФОРМИРОВАНИЕ КОНСОРЦИУМА МИКРООРГАНИЗМОВ ДЛЯ ОЧИСТКИ СТОЧНЫХ ВОД ПРОИЗВОДСТВ ОРГАНИЧЕСКОГО СИНТЕЗА ОТ УГЛЕВОДОРОДОВ НЕФТИ

Специальность 03.02.08  - Экология (в химии и нефтехимии)

03.01.06 - Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата технических наук

Казань 2012

Работа выполнена на кафедре  ботаники и  зоологии  федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования Казанский (Приволжский) федеральный университет

Научный руководитель:  доктор биологических наук, профессор

  Морозов Николай Васильевич

Официальные оппоненты:  Шулаев Максим Вячеславович,  доктор
технических наук, доцент  кафедры 

химической кибернетики ФГБОУ ВПО 

«Казанский национальный исследовательский

технологический университет», г. Казань

Азимов Юсуф Исмагилович,

доктор технических наук, профессор кафедры

статистики, эконометрики и естествознания 

Института экономики и финансов

ФГАОУ ВПО «Казанский  (Приволжский) 

федеральный университет », г. Казань

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный
  университет», г. Уфа

Защита состоится «31» октября 2012г в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.080.02 при ФГБОУ ВПО «Казанский национальный научно-исследовательский технологический университет» по адресу: 420015, г Казань, Карла Маркса, 68, зал заседаний Ученого совета, А-330

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского национального исследовательского технологического университета

Автореферат разослан «______» сентября 2012г.

Ученый секретарь Степанова

диссертационного совета Светлана Владимировна

Актуальность темы. Загрязнение природной среды нефтью и продуктами её переработки – одна из наиболее сложных проблем, угрожающих безопасности среды обитания живых существ [Квасников Е.И., Клюшникова Т.М., 1981; Зобов В.В. и др., 1997; Ильинский В.В., 2000; Барышникова Л.М., 2001; Морозов Н.В., 2001; Fergusson S., 2003; Алексеева Т.П., Бурмистрова Т.И. и др., 2010; Ягафарова Г.Г. и др., 2011]. Ни один другой загрязнитель, как бы опасен он не был, не может сравниться с нефтепродуктами по качественному составу, широте распространения, числу источников загрязнения, единовременной нагрузке на все компоненты природной среды [Аренс В.Ж. и др., 1997; Морозов Н.В., 2001, 2003; Мочалова О.С., Антонова М.Н. и др., 2002; Надеин А.Ф., 2010].  По мере накопления опыта восстановления естественных свойств нефтезагрязненных объектов становится очевидным, что для их обезвреживания наиболее приемлемы способы, основанные на применении разнообразных гетеротрофных микроорганизмов, в том числе нефтеокисляющих [Bos R.,1999; Данянь Ч., Ботвинко И.В., 2001;Van Hamme, 2003; Хасанов И.Ю., Габитов Г.Х. и др., 2003; Куликова А.К., 2008, 2010; Музипов Х.Н., Ерка Б.А. и др., 2009; Хохлова А.Р. и др., 2009; Мишанина О.Е. с соавт., 2012]. Выделение и идентификация штаммов нефтеокисляющих микроорганизмов на основе изучения их морфологических, физиолого-биохимических свойств, выявление  основных типов взаимоотношений между ними в искусственно сформированных  ассоциациях и создание на этой базе исследований отселектированного консорциума со спектром окисления различных фракций нефти, его широкое применение  для биологической деструкции аварийных и локальных  нефтяных загрязнений,  биоремедиации углеводородсодержащих природных и сточных  вод представляет особую актуальность.

Настоящая разработка актуальна еще и тем, что решает глобальную экологическую задачу. Образующаяся в процессе очистки углеводородсодержащих сточных вод в струйно-отстойном аппарате биомасса микроорганизмов в количестве 3-5% от общего объема очищаемого стока, утилизируется повторно в технологическом цикле. Этим обеспечивается рекуперация вторичных материалов, удешевляются технологические и эксплуатационные расходы, связанные с выращиванием биомассы для обеспечения непрерывной работы биотехнологической схемы очистки. В традиционных очистных сооружениях с биохимическим окислением нефтезагрязнений биоценозом прирост активного ила доходит до 25% на единицу очищенной воды. Утилизация его связана с большими экономическими затратами и экологически не решена.

Цель исследования – раскрытие основных параметров нефтеокисления отселектированными штаммами углеводородокисляющих микроорганизмов, выбор условий для  создания высокоэффективного консорциума промышленного образца, обеспечивающего быструю ликвидацию нефтяных загрязнений при аварийном или ином поступлении, и в управляемом снятии  углеводородов в природных и производственных сточных водах.

Задачи исследования:

1. Выделить и идентифицировать из производственных технологических сточных вод ОАО «Казаньоргсинтез» углеводородокисляющие микроорганизмы, исследовать эффективность способов их стимуляции и характерные особенности развития в различных условиях функционирования: в модельных экосистемах и очистных сооружениях, применяемых для очистки и доочистки углеводородсодержащих сточных вод с последующим отводом их в открытые водные объекты без ущерба их экологическому состоянию.

2. Исследовать  основные типы  взаимоотношений между углеводородокисляющими микроорганизмами с учетом их дальнейшей совместимости в консорциуме.

3. Определить эффективность окисления нефти, нефтепродуктов в воде монокультурой и сообществом углеводородокисляющих микроорганизмов и создать на этой базе высокоэффективный в окислении нефти и нефтепродуктов отселектированный консорциум углеводородокисляющих микроорганизмов.

4. Выяснить пути интенсификации деструктивных процессов очистки и разработать усовершенствованные технологии использования культур штаммов для управляемого снятия нефтяных загрязнений в условиях модельного эксперимента.

5. Апробировать консорциум в  биотехнологической схеме очистки смешанных нефтесодержащих сточных вод ОАО «Казаньоргсинтез» с использованием специально созданного для этой цели струйно-отстойного аппарата (СОА) и выведение всей технологии на режим очистки и доочистки технологических производственных вод.

Научная новизна работы:

1.Впервые сформирован новый консорциум углеводородокисляющих микроорганизмов, обладающий широким спектром окисления различных классов углеводородов нефти, применяемый  в управляемом режиме очистки углеводородсодержащих сточных вод  в специально созданном для этой цели струйно-отстойном аппарате (СОА), а на его базе технологической схемы очистки и глубокой доочистки нефтесодержащих производственных сточных вод.

2.Изучены основные типы взаимоотношений в ассоциативной культуре для благоприятной совместимости выбранных штаммов и достижения высокой активности в окислении нефти и нефтепродуктов (новый подход). Консорциум может быть применен как на стадии основной очистки, так и доочистки для  наиболее полной биодеструкции нефти и её производных в технологических стоках.

3.Показано, что комплексный подход использования углеводородокисляющих микроорганизмов с биогенными элементами и индуцирующими веществами способствует интенсификации процессов очистки и является основой управления качеством нефтезагрязненных природных и сточных вод нефтедобывающих, нефтеперерабатывающих, нефтехимических производств и др.

Практическая значимость результатов

Получены девять штаммов углеводородокисляющих микроорганизмов из многочисленных аборигенных видов (35 культур), объединенные в ассоциацию с высокой деструктивной активностью.  В результате научных исследований сформирован консорциум углеводородокисляющих микроорганизмов для биодеградации нефти и нефтепродуктов в разнообразных углеводородсодержащих производственных стоках.

Изучены основные типы взаимоотношений между микроорганизмами данной группы, подобраны оптимальные соотношения при совместном использовании их в консорциуме. Выявлены условия развития углеводородокисляющих микроорганизмов, составляющих основу консорциума, при которых достигается максимальная их численность и высокая эффективность деструкции нефти и нефтепродуктов.

Разработана и испытана в полупроизводственных условиях технологическая схема очистки производственных сточных вод ОАО «Казаньоргсинтез», позволяющая в управляемом режиме достигнуть увеличения скорости и эффективности окисления смешанных  углеводородсодержащих сточных вод до норм оборотного водоснабжения. 

Результаты исследований могут быть использованы для мониторинга уровня загрязнения природной среды нефтяными поллютантами, а также проведения профилактических мероприятий по ликвидации нефтяных загрязнений при их локальном или аварийном поступлении в водоемы и почвы.

Внедрены в промышленных условиях:

1) Способ очистки технологических производственных сточных вод от нефти и нефтепродуктов, включающий в себя применение бактериального консорциума, структуирующие и питательные добавки (биогенное питание и индуцирующие соединения).

2)Консорциум углеводородокисляющих микроорганизмов (УОМ), состоящий из девяти штаммов: Alcaligenes sp. Г0401ВТ (№17),  Micrococcus nishinomiyaensis Г0402ВТ (№16), Brevibacterium iodinum  Г0403ВТ (№15), Pseudomonas aeruginosa  Г0404ВТ (№14),  Pseudomonas  facillis Г0405ВТ (№13), Brevibacterium linens Г0406ВТ (№12), Bacillus subtilis Г0407ВТ(№11), Flavobacterium aquatile Г0408ВТ(№10), Clostridium butyricum Г0409ВТ (№9) для предварительной подготовки смешанных углеводородсодержащих производственных сточных вод с проведением полупроизводственных испытаний обезвреживания стоков в цехе нейтрализации и очистки производственных сточных вод ОАО «Казаньоргсинтез». Акт полупроизводственных испытаний утвержден техническим директором, главным инженером ОАО «Казаньоргсинтез».

Результаты исследований использованы для чтения лекционного материала в Казанском (Приволжском) федеральном университете по курсам «Микробиология», «Биотехнология», «Экология» и «Социальная экология и природопользование».

Личное участие автора. Автором проведен аналитический обзор литературы, спланированы и выполнены лабораторные опыты, полупроизводственные испытания, в результате которых получена экспериментальная база данных и проведена их интерпретация,  написаны статьи и тезисы докладов, подготовлены две заявки на изобретения к патентам РФ.

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертационной работы были представлены на международных конференциях «Глобальные проблемы экологизации в европейском сообществе» (Казань, 2006), «Международная молодежная научная конференция. XV Туполевские чтения» (Казань, 2007), «Фундаментальные и прикладные исследования в системе образования» (Тамбов, 2008), «Фундаментальные науки и практика» (Томск, 2010), на Конгрессе «Чистая вода. Казань» (Казань, 2010),  «Фундаментальные  исследования» (Москва, 2011), «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2011), на Всероссийских конференциях и съездах Поволжская научно-практическая конференция «Эколого-географические исследования в среднем Поволжье» (Казань, 2008), «Инновационные подходы к естественно-научным исследованиям и образованию» (Казань, 2009), «Окружающая среда и устойчивое развитие регионов: новые методы и технологии исследований» (Казань, 2009), «Известия Казанского государственного архитектурно-строительного университета» (Казань, 2009), на Межвузовских конференциях «Вестник Татарского государственного гуманитарно-педагогического университета» (Казань, 2007,2010,2011), «Современные проблемы органической и биологической химии, молекулярной биологии, экологии и биотехнологии», (Москва, 2009), 17th International Environmental Bioindicators Conference: Global Indicators (Moscow, 2009), «Современный мир, природа и человек» (Томск, 2009), «Актуальные вопросы естествознания начала 21 века» (Казань, 2011).

Публикации. По материалам  диссертации опубликовано 20 печатных работ, из них 4 – в изданиях рекомендованных ВАК РФ.

Аналитические работы проводились на кафедре ботаники и зоологии К(П)ФУ, научно – исследовательской лаборатории «Биотехнология с основами микробиологии» Управления научной работой и послевузовского образования ТГГПУ, в лаборатории цеха  нейтрализации и очистки сточных вод завода ОАО «Казаньоргсинтез» и в лаборатории «Бионанотехнология с основами микробиологии» ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 173 страницах машинописного текста и состоит из введения, 7 глав, заключения, выводов, списка используемых источников литературы. Работа иллюстрирована 17 рисунками, содержит 11 таблиц, 3 приложения. Список используемой литературы включает 210 отечественных и 110 иностранных наименования.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1. Современное состояние загрязнения водных ресурсов нефтью и нефтепродуктами и восстановление их естественных качеств (обзор литературы). Рассмотрены вопросы загрязнения природных и сточных вод нефтью и нефтепродуктами, влияния  их на состояние среды и организмы водных экосистем, пути биодеградации нефтяных загрязнений разнообразными гетеротрофными микроорганизмами; выделение, выбор и селекция высокоактивных видов углеводородокисляющих микроорганизмов и на их базе создание новых консорциумов, бактериальных препаратов и составов, обладающих широким спектром окисления различных классов углеводородов в изменяющихся условиях среды.

Глава 2. Объекты и методы исследования

Объектами исследований выбраны углеводородокисляющие микроорганизмы (УОМ), выделенные и идентифицированные из смешанных производственных углеводородсодержащих сточных вод ОАО «Казаньоргсинтез». Основные исследования включали изучение состава гетеротрофной микрофлоры, участвующей в биоокислении нефтепродуктов в аэробных и факультативно анаэробных условиях, выявление и идентификация активных нефтеокисляющих микроорганизмов из разнообразных гетеротрофных видов.

Идентификацию выделенных штаммов-нефтедеструкторов проводили  после многократных исследований на чистоту,  изучения их морфологических, культуральных и физиолого-биохимических свойств в соответствии с требованиями определителя Берги  [Bergey, 1997] и с  привлечением дополнительной литературы [Нестеренко О.А. и др., 1985; Аристархова В.И., 1989; Теппер Е.З. и др., 2004].

В дальнейших исследованиях использовали девять штаммов углеводородокисляющих микроорганизмов (из 35 ранее выявленных), объединенные в новый консорциум по принципу их совместимости между собой. Депонированы штаммы в музее штаммов в Федеральном центре токсикологической, радиационной и биологической безопасности (ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»), где им присвоены следующие обозначения и номера: Alcaligenes sp. Г0401ВТ (№17),  Micrococcus nishinomiyaensis Г0402ВТ (№16), Brevibacterium iodinum  Г0403ВТ (№15), Pseudomonas aeruginosa  Г0404ВТ (№14),  Pseudomonas  facillis Г0405ВТ (№13), Brevibacterium linens Г0406ВТ (№12),  Bacillus subtilis Г0407ВТ(№11), Flavobacterium aquatile Г0408ВТ(№10), Clostridium butyricum Г0409ВТ (№9).

Изучение основных типов взаимоотношений между комбинациями ассоциаций (смеси из 2-х, 3-х и 9-ти штаммов), а также явления антагонизма между ними проводили на МПА с высевом бактериальной суспензии и с  использованием тест-культур [Балашова Н.В., 1974; Егоров Н.С., 1986; Леонов А.В., Чичерина О.В., 2011].

Культивирование бактерий проводили в статических условиях при температуре 28-33°С на агаровой питательной среде, колбах объемом 1000 см3, либо в аппарате непрерывного культивирования микроорганизмов (АНКУМ-2М).

Критериями суждения о биологическом окислении нефти и нефтепродуктов (бензина, керосина, солярового, веретеного и вазелинового масел, нигрола, фенола,  бензола, нитробензола, толуола, мазута) в воде служили следующие параметры: изменение динамики общего количества УОМ прямым счетом [Герхард Ф., 1983], оптической плотностью на фотоэлектрокалориметре (КФК-3), БПК5 и БПК полное, растворенный кислород [Лурье Ю.Ю., Рыбникова А.И., 1984, Теппер Е.З. и др., 2004], ХПК, общее количество неорганических форм азота (NO2-, NO3-, NH4+) [Методика…,2004; Унифицированные…,1977; Чернокальский Б.Д., 1980]. Количественный состав остаточных углеводородов определяли гравиметрическим (весовым) методом [Лурье Ю.Ю., Рыбникова А.И., 1984], а качественный хроматографически на ГХ модели «Кристалл-5000.2» .

При разработке технологии использования консорциума микроорганизмов для интенсификации биодеградации нефти  использовали торф, золу, древесные опилки, речной песок, а также суспензии 2-х суточных культур УОМ в разных видовых соотношениях ассоциативных культур. Опыты проводили в модельных микроэкосистемах, которыми являлись аквариумы объемом 50 дм3.

С целью интенсификации процессов биологической очистки сточных вод в очистных сооружениях ОАО «Казаньоргсинтез» от смешанного потока углеводородов (с начальным содержанием до 186 мг/дм3 и нагрузке загрязнений по ХПК до 1860 мг/л) применяли вновь разработанную биотехнологическую схему с использованием струйно-отстойного аппарата (СОА) с заданным числом клеток микроорганизмов консорциума (4-х часовая суспензия, выращенная в хемостатных условиях в АНКУМ-2М) и необходимых биогенных и индуцирующих веществ [Морозов Н.В., 2001, 2003; Жукова О.В., Морозов Н.В., 2009].

Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета компьютерных программ STATISTICA V  4.5 Microsoft Office 2003 для Windous xp, в стандартной компьютерной программе «Microsoft Excel». При оценке статистической достоверности средних полученных данных использовали парный и непарный  t-критерий Стьюдента. Группу данных считали однородной, если среднее квадратичное отклонение Q в группе не превышало 13%. Различие между группами считали достоверным при критерии вероятности р<0,05.

Глава 3. Выделение и идентификация углеводородокисляющих  микроорганизмов

Выделение углеводородокисляющих штаммов микроорганизмов из сточных вод ОАО «Казаньоргсинтез» осуществляли двумя методами: методом накопительных культур и прямым высевом на агаризованные среды (МПА и др.). Доминирующие формы бактерий, использующие нефть и нефтепродукты в качестве единственного источника углерода и энергии  были подвергнуты более глубокому изучению их морфологических, культуральных, физиолого-биохимических свойств в соответствии с требованиями определителя Берги  (Bergey, 1997].

Углеводородокисляющие микроорганизмы объединены в новый консорциум по принципу их совместимости между собой и включают девять штаммов-деструкторов нефти и нефтепродуктов. Штаммы представлены как грамположительными, так и грамотрицательными подвижными и неподвижными, аэробными и факультативно анаэробными формами. Физиологическая активность (температурный диапазон, рН среды) штаммов вариабельна, высока их ферментативная активность. Установлено, что интенсивность биодеструктивных процессов нефти и её персистентных соединений протекает в диапазоне от +5°С до +35°С, рН 2,5-10, оптимальными являются  интервал температур 25°С-30°С и рН среды 5,8-7,1, что подтверждается динамикой роста бактериальной популяции и эффективностью деструкции нефти и нефтепродуктов.

Штаммы непатогенны и невирулентны, не обладают способностью к транслокации и диссеминации во внутренние органы и кровь животных после 30-дневного испытания. Наблюдения за животными (белые мыши) в течение 30-ти суток не выявило каких-либо клинических признаков заболевания, а изучение внутренних органов не выявило патологических изменений, регистрируемых морфологически.

Глава 4.  Исследование взаимоотношений углеводородокисляющих микроорганизмов в ассоциациях для создания консорциума промышленного образца

Опытами выявлено, что основными видами взаимоотношений между изученными микроорганизмами в ассоциации являются: конкуренция, изоляция и кооперация.

Культуры Clostridium butyricum и Flavobacterium aguatile в вариантах, объединенных в искусственно созданные сообщества взаимодействуют друг с другом по типу  «конкуренция», что говорит об их несовместимости в данной бинарной комбинации. Один из  микроорганизмов в комбинации входящий в данный тип взаимодействия полностью перекрывает при росте и подавляет развитие конкурирующей колонии микроорганизмов. Остальные изученные  культуры взаимодействуют друг с другом по типу «изоляция» и «кооперация». Процент окисления нефти при росте штаммов по типу «конкуренция» составляет 33%, «изоляция» в пределах 43-54%, кооперация – 55-59%. На примере замкнутой модельной экосистемы  созданной искусственно, показано, что ассоциация углеводородокисляющих бактерий способна противостоять отрицательному воздействию нефтяного загрязнения, но в определенных комбинациях бактерий.

Путем целенаправленной селекции нами  создан консорциум штаммов нефтеокисляющих микроорганизмов, «работающих» во взаимосвязи направленного действия, конечная цель которого - достижение полноты биодеструкции нефти и разнообразных углеводородов. Консорциум  представляет собой, сформированные в ассоциацию углеводородокисляющие микроорганизмы со следующими свойствами: окислительная активность консорциума по конечному продукту окисления составляет 2041 мг СО2 за 20 суток; способен расти на обедненной питательной среде, а также с высокой скоростью окислять нефть, включая ароматические углеводороды, содержащиеся в парафинах широкой фракции и тяжелой нефти, при 5-35°С; устойчив в длительном непрерывном процессе очистки от нефти, растет в широком диапазоне рН от 2,5 до 10 единиц. Простота технологии изготовления, широкая вариабельность температурного режима и рН среды  позволяет использовать его в разных климатических зонах, окислять широкий класс углеводородов в короткие сроки.

На производственной сточной воде продуктивность биомассы составляет 2-3·1010 кл/мл. Максимальная биодеградация нефти на среде Раймонда на 5-е сутки отмечается с разведением 101-1010. Степень  разложения по сырой нефти под воздействием консорциума в течение 7-10 дней  составляет 90-95%.

Глава 5.  Исследование активности консорциума углеводородокисляющих микроорганизмов в окислении нефти и  нефтепродуктов в модельных экосистемах

Биодеструкции подвергали товарную нефть Елховского месторождения Республики Татарстан, включающую до 42% легких углеводородов, 27-31%  ароматики и в пределах 1,4-7% тяжелые фракции; из нефтепродуктов - бензин, керосин, вазелиновое, соляровое, веретенное масла, нигрол, бензол, нитробензол, фенол, толуол, мазут в концентрации 0,5% по объему.

Исследованиями установлено, что все штаммы углеводородокисляющих микроорганизмов в качестве единственного источника углерода и энергии используют нефть и нефтепродукты. 

По мере микробиального окисления нефти и нефтепродуктов содержание кислорода в воде уменьшается, а углекислого газа возрастает в 1,5-2 раза, что является результатом видимой минерализации нефтяных загрязнений до конечных продуктов окисления - СО2 и Н2О. В контрольных вариантах без внесения углеводородокисляющих микроорганизмов процесс очищения воды от нефти не наблюдался. В вариантах с внесением монокультуры и ассоциации из трех культур, процесс очищения среды от нефтяных  загрязнений происходил  медленнее по сравнению с ассоциацией из девяти штаммов (табл.1).

Таблица 1. Эффективность деструкции углеводородных загрязнений сообществами углеводородокисляющих микроорганизмов в стационарных условиях, %

Нефть, нефтепродукты

Варианты опытов

контроль

Монокультура

Alcaligenes sp.

Три культуры

Alcaligenes sp.,

Clostridium byturicum,

Pseudomonas facilis

Ассоциация

из 9-ти штаммов

Товарная нефть

1,7±0,08

59 ±0,05

77±0,02

97±0,04

Бензин

1,9±0,09

52±0,06

90±0,03

94±0,06

Соляровое масло

1,2±0,07

39±0,05

51±0,04

83±0,04

Вазелиновое масло

1,0±0,06

37±0,03

47±0,05

78±0,07

Веретенное масло

1,1±0,06

31±0,04

34±0,04

56±0,04

Нигрол

1,2±0,06

37±0,03

47±0,05

78±0,07

Керосин

1,4±0,06

47±0,03

47±0,05

76±0,05

Мазут

1,0±0,06

23±0,03

27±0,05

38±0,04

Бензол

1,9±00,6

27±0,04

47±0,05

68±0,07

Нитробензол

1,4±0,06

25±0,03

37±0,04

49±0,07

Фенол

1,3±0,05

29±0,03

35±0,04

52±0,07

Толуол

2,4±0,06

26±0,04

47±0,05

58±0,06

Примечание: исходное количество нефти и нефтепродуктов 0, 138 г/дм3

Увеличение степени окисления товарной нефти наблюдалось при внесении консорциума, состоящего из 9 штаммов УОМ  до 97%, солярового масла до 83%, вазелинового масла до 78%.  Максимум БПК20 и численность бактерий совпадают в период интенсивного разложения нефтяной пленки в опытных сосудах. Наибольшую активность в окислении углеводородов обнаружили  ассоциации из девяти культур до 97%, в комбинациях из трех культур  в пределах 47-90%, монокультуре  до 59 %, а в контроле  не превышала 3 %.

Таким образом, показано, что разрушение углеводородов нефти протекает за счет биологического окисления и активности, участвующих в окислении  нефти штаммов консорциума.

Глава 6. Разработка технологии применения консорциума углеводородокисляющих микроорганизмов в очистке природных вод от  локального нефтяного загрязнения

В качестве сорбентов для закрепления клеток УОМ применяли: золу, опилки древесные, речной песок, торф. Видовое соотношение суспензии УОМ варьировали в разном соотношении: монокультура, три вида, четыре вида, девять видов УОМ и контроль (без внесения УОМ).

При культивировании исследуемых штаммов микроорганизмов, в ассоциациях в свободном и адгезированном состояниях с использованием сорбентов в течение двух недель выяснено, что скорость разложения нефти находится в прямой зависимости от количества видового состава УОМ, численности микроорганизмов и вида сорбента. В процессе культивирования монокультур и смешанных видов в водной среде с внесением товарной нефти происходило постепенное возрастание плотности бактериальной массы. Численность микроорганизмов при этом увеличилась в 1,5- 3 раза на 2-3-сутки культивирования, что связано с адаптацией их к исходному субстрату и началом его разложения. В дальнейшем на 8-12 сутки, число бактерий постепенно снижалось. В контроле наблюдалась низкая эффективность биодеструкции нефтяной пленки.

В ходе эксперимента было показано, что наибольшая эффективность деструкции нефти наблюдается в варианте  со смесью  9-ти адгезированных культур УОМ на торфе  и составляет 86,4%, с тремя штаммами – 56,8%, четырьмя – 64,2%, с монокультурой Аlcaligenes sp. 44,5%; на древесных опилках при тех же соотношениях - 76,4, 46,6, 54,3 и 34,2% соответственно; на золе – 66,6, 46,9, 54,2 и 34,3%; на речном песке - 46,1, 41,2, 34,5, и 32,4% соответственно. Во всех контрольных вариантах степень окисления не превышала 3%. При этом максимальное значение показателя углекислого газа и количества микроорганизмов  во всех вариантах наблюдается на 4 день эксперимента (0,2 опт. ед. по оптической плотности, что соответствует 100 тыс.-130 тыс. кл/мл). Численность УОМ при вводе в опытные варианты с нефтяной пленкой  сорбентов торфа и угля поддерживается на высоком уровне в течение 5-8 дней. Максимальное возрастание количества микроорганизмов во всех вариантах наблюдается на 6-8 дни эксперимента (рис.1).

Показатель растворенного кислорода О2 после некоторого возрастания медленно убывает ввиду вовлечения его в окислительные процессы,  что говорит об эффективности процесса дыхания микроорганизмов в данных условиях культивирования соответственно вариантам опыта.

 

Рис. 1 - Окисление нефти адгезированными  клетками УОМ

В вариантах с монокультурой, тремя, четырьмя и ассоциацией из девяти штаммов биодеструктивная активность в окислении нефти свободных клеток, внесенных в виде суспензии путем распыления её на поверхность нефтяной пленки  – 33,6, 43,9, 58,2, 61,2% соответственно (рис. 2).

Рис. 2 - Окисление нефти суспензионными клетками УОМ  (распыление)

Таким образом, в процессе окисления нефти применение адсорбированных клеток УОМ более эффективно, по сравнению с распылением бактериальной массы на поверхности среды, т.к. прикрепленные к твердому носителю клетки – это возможность достижения высокой концентрации биомассы микроорганизмов на единицу поверхности системы. Наилучшая биодеструкция нефти была достигнута клетками микроорганизмов, адгезированными на торфе и древесных опилках. Присутствующие в составе консорциума нефтеокисляющие микроорганизмы начинают усиленно расти в данной среде за счет использования органических и минеральных солей, содержащихся в применяемых сорбентах и, следовательно, разлагать нефтяные загрязнения, используя их в качестве углеводородного питания [Шарапова И.Э. и др., 2011]. На основании проведенных экспериментальных данных можно считать целесообразной возможность создания управляемой по составу видов смешанную культуру УОМ  с разнообразными технологиями их применения, которые позволяют полно и экономично решать ликвидацию любых проявлений загрязнения нефтью и нефтепродуктами в окружающей среде.

Глава 7.  Применение бактериального консорциума для интенсификации процессов  биологической очистки и доочистки углеводородсодержащих производственных сточных вод ОАО «Казаньоргсинтез» в управляемом режиме

Наиболее перспективными в области очистки технологических углеводородсодержащих сточных вод является применение чистых, отселектированных штаммов микроорганизмов, способов и установок с вселением микроорганизмов, обеспечивающих высокие показатели очистки воды. Нами была проверена способность комплекса вновь созданного бактериального консорциума окислять различные фракции углеводородов нефти с применением биотехнологической схемы очистки, включающей в себя созданный струйно-отстойный аппарат (СОА), позволяющий провести глубокую очистку и доочистку углеводородсодержащих сточных вод ОАО «Казаньоргсинтез» в управляемом режиме.

Предварительными опытами установлено, что в интенсификации процессов биологической деструкции  нефти гетеротрофной микрофлорой  существенная роль отводится соотношению штаммов в консорциуме, их биологической активности и наличию в среде биогенных элементов (азота, фосфора и калия), индуцирующих соединений. Последние играют роль биостимуляторов жизнедеятельности УОМ, а, следовательно, участвуют в интенсивности биоокисления углеводородов в сточных водах. В результате проделанных серий экспериментов определено соотношение штаммов бактерий в консорциуме, которое соответствует  следующему количеству (%): Alcaligenes sp. Г0401ВТ (№17) - 14%,  Micrococcus nishinomiyaensis Г0402ВТ (№16) - 6%, Brevibacterium iodinum  Г0403ВТ (№15) - 6%, Pseudomonas aeruginosa  Г0404ВТ (№14) - 25%,  Pseudomonas  facilis Г0405ВТ (№13) - 25%, Brevibacterium linens Г0406ВТ (№12) - 6%,  Bacillus subtilis Г0407ВТ(№11) - 6%, Flavobacterium aquatile Г0408ВТ(№10) - 6%, Clostridium butyricum Г0409ВТ (№9) - 6%,  что составляет титр жизнеспособных клеток 51010-71010 кл/мл в жидкой среде или в твердом субстрате с наполнителем.

Испытана новая биотехнологическая схема очистки нефтесодержащих сточных вод с консорциумом УОМ с заданными параметрами по видовому составу, которая включала (рис. 3): 1 - приемник сточных вод с выделением грубых примесей; 2 - насосная станция для подачи сточной воды со сборника в нефтеловушку; 3 - нефтеловушка; 4 - усреднитель; 5 - первичный отстойник; 6- нефтесборник; 7 струйно-отстойный аппарат (СОА); 8 - струйные элементы; 9- блок – дозатор биогенных элементов; 9.1 - блок – дозатор индуцирующих соединений; 9.2 - блок – дозатор нефтеокисляющих микроорганизмов; 10- накопитель очищенной воды с насосной станцией (12) оборотного водоснабжения и подачи образованного УОМ в 9.2; 11- шламонакопитель.

Рис. 3 - Технологическая схема блочной установки очистки и доочистки сочных вод

Процесс очистки углеводородсодержащих сточных вод осуществляется в пилотном струйно-отстойном аппарате (рис.3) (поз.7), выполненным в виде колонны цилиндрической формы диаметром 500мм и высотой 2800мм. В верхней части колонны расположен струйный элемент (поз.8), служащий для подачи смеси воды с микроорганизмами и соединениями, обеспечивающими биодеструкцию углеводородов. Струйный элемент представляет собой заглушенный  с обоих торцов цилиндр высотой 800 мм, диаметром 150 мм с перфорированной боковой поверхностью. В верхнем торце цилиндра установлен приточный патрубок  (рис.4).

Рис. 4 - Струйно-отстойный аппарат (СОА): V- объем аппарата (м3); D-диаметр аппарата (м); F-площадь поперечного сечения (м2); H=h1+h2+h3-высота аппарата (м); V1-объем зоны смещения (м3); V2-объем зоны оседания частиц потока (м3); V3-объем зоны отстоя (м3).

Технологический режим очистки стоков предварительно подготовленной сточной жидкости на опытной установке осуществляли следующим образом: сточная вода центробежным насосом через приемный патрубок подается в струйный элемент СОА. В момент подачи стока в струйно-отстойный аппарат туда же одновременно из дозатора направляются биогенные элементы (азот в виде сульфат аммония, фосфор в виде суперфосфата), индуцирующие соединения (глутаминовая, янтарная кислоты, валин, аланин, глюкоза, мальтоза) в различных соотношениях и расчетное количество суспензии консорциума углеводородокисляющих  бактерий из расчета в среднем 130 млн. кл/мл или по биомассе в пределах 0,3-0,5 г/л.

В струйном элементе (рис.4) сточная жидкость со всеми добавленными компонентами смешивается и образует в нем прямой и обратный поток и из-за значительных градиентов скорости и сдвиговых напряжений разбрызгивается, разрывает капли эмульгированных нефтепродуктов на мелкие диспергированные частицы, насыщенные пузырьками воздуха. В результате образуется значительная площадь поверхности, где микроорганизмы и углеводороды контактируют на границе фаз (среда-воздух). Благодаря этому создаются оптимальные условия для атаки и деструкции микроорганизмами рассеянных нефтяных загрязнений.

Окисление углеводородов нефти идет максимально в зоне струйного элемента и внешнего рецикла и продолжается далее по всей длине СОА, ослабевая  по мере снижения концентрации нефтепродуктов к зоне отстоя. Образующаяся при этом биомасса микроорганизмов в пределах 3-5% по мере уплотнения откачивается насосом во вторую ступень СОА и используется во второй ступени очистки для обеспечения деструкции остаточных концентраций углеводородов в сточной жидкости до норм оборотного водоснабжения или отвода в природные  водоемы без ущерба их экологическому состоянию. Сбор  биомассы искомой численности осуществляется на выходе из СОА, а далее насосом (поз. 12) подается в дозатор для восполнения бактерий, используемых для очистки и доочистки сточных вод (рис.3). При отсутствии в схеме второй ступени СОА, очищенная сточная вода поступает в накопитель очищенной воды. После 1,5 – 2 часового осветления она может быть отведена в биологические очистные сооружения для доочистки от остаточных углеводородов. В серии испытаний технологическая схема очистки применена для обезвреживания сточных вод смешанного потока ОАО «Казаньоргсинтез» со следующими показателями (среднее из 9-ти штаммов): ХПК 780,4-1048 мг/дм3, О2 в пределах 1,0-5,6 мг/дм3, сумма неорганических форм азота (NH4+, NO2-, NO3-) - 15-35, фосфор (Р2О5) – 1,4-15,3, нефтепродукты от 34 до 186 мг/дм3, фенол в пределах 10-20 мг/дм3, гликоли до 250 мг/дм3, СПАВ 10-20 мг/дм3. Общая численность УОМ на входе в СОА от 104 млн. кл/см3 до 150 млн. кл/см3.

Длительность биоокисления углеводородов нефти в сточной жидкости, подаваемой в СОА, в непрерывном режиме принималась: 1) при концентрации нефтепродуктов 20 - 186 мг/дм3, скорость потока 0,015-0,03 м/сек, время пребывания от 1,0 до 1,5 часа; 2) при концентрации, превышающей 200 мг/дм3 или нагрузке по ХПК 1000 мг/л и более, скорость сточной жидкости в пилотной установке при этом приближалась 0,031-0,045 м/сек, время пребывания 1,3-3,0 часа.

Интенсификация процесса очистки обеспечивалась добавлением в поток биогенных элементов – азота и фосфора (азот в виде нитрата аммония, фосфор в виде суперфосфата кальция), соотношение которых к основной нагрузке загрязнений принято БПКполное:N:Р: 100:5:1 (установлено опытным путем из следующих вариаций – 2,5;0,5;5;10;20;40). Принятое соотношение биогенов в сточной жидкости стимулировало рост популяции УОМ консорциума в 2 раза (325·106 против 150·106 кл/мл), а эффективность деструкции углеводородов нефти за время контакта 1,2 часа до 75%. В варианте без добавления биогенов степень очистки воды от загрязнения не превысила 25-36%.

Корректировка биогенных элементов (N,Р) в сточной жидкости в работе СОА позволяет повысить нагрузку по ХПК до 1000 мг/л и выше. Последний факт является положительным в процессе подготовки первичных углеводородсодержащих сточных вод до норм отвода для дальнейшей глубокой очистки и доочистки. С целью достижения более высокой эффективности интенсификации процесса биоокисления в последующих сериях испытаний в очищаемую воду добавляли комплекс индуцирующих веществ. В их составе: глутаминовая кислота, янтарная кислоты, аланин, валин, глюкоза и мальтоза при равных количествах (1:1:1:1:1:1) с общей дозой 35·10–6М. Внесение индуцирующих соединений в поток очищаемой воды в СОА при тех же условиях и режимах очистки увеличивает количество углеводородокисляющих микроорганизмов более чем в два раза (от 150·106 кл/мл до 325·106 кл/мл), что повышает эффективность процесса биоокисления  до 75-78%, а в контроле степень окисления остается на уровне и 32-40%. С целью стабилизации остаточного углеводородного загрязнения предварительно очищенная сточная жидкость подается дополнительно во вторую ступень СОА и подвергается доочистке длительностью  от 30 минут до 1,0 часа. При этом эффективность очистки достигает  92-96%, т.е. концентрация углеводородов снижается до 0,12-0,17 мг/дм3.

Динамика изменения БПК, ХПК, численность УОМ, а также азота и фосфора  свидетельствуют о том, что в процессе очистки сточных вод производства органического синтеза в технологической схеме двух ступеней очистки достигается микробиальная деструкция углеводородов нефти до конечных продуктов окисления - СО2 и Н2О. На выходе из II ступени СОА количество нефтепродуктов в сточной воде укладывается в санитарные нормы отвода в открытые водные источники или использования в оборотном водоснабжении (рис. 5).

Рис. 5 - Окисление нефтепродуктов в СОА (1 и 2 ступень)

Для решения практических задач в достижении более весомого эффекта в очистке и доочистке углеводородсодержащих сточных вод производств органического синтеза целесообразнее применение биотехнологической схемы с включением двух последовательно расположенных струйно-отстойных аппаратов (СОА). Это позволяет обезвреживать сточные воды с исходной концентрацией углеводородов в пределах 20-300мг/л до норм отвода в открытые водные источники без ущерба их экологическому состоянию. В условиях дефицита пресной воды, используемой в производственном процессе, разработанная биотехнологическая схема обеспечивает полноту рекуперации отработанных вод в промышленном хозяйстве.

Таким образом, в результате лабораторных исследований и полупроизводственных испытаний выявлено, что бактериальный консорциум включающий: Alcaligenes sp.,  Micrococcus nishinomiyaensis, Brevibacterium iodinum, Pseudomonas aeruginosa,  Pseudomonas  facillis, Brevibacterium linens,  Bacillus subtilis, Flavobacterium aquatile, Clostridium butyricum обладает всеми необходимыми качествами для биореагента, способствует деструкции нефти и её производных в изменяющихся условиях среды. В традиционных очистных  сооружениях  биологическим  окислением нефтезагрязнений 80-85%-ый эффект достигается от 16 до 20 часов, а с применением консорциума УОМ в схеме СОА и вторичного отстойника  за 1,2 – 1,5 часа, с применением двух ступеней очистки в СОА  92-96% за 2,0-2,5 часа. Этим открывается путь использования очищенных вод до норм оборотного водоснабжения.

Основные результаты и выводы по работе

1.Внесение выделенных и идентифицированных из высококонцентрированных сточных вод производства Органического синтеза многочисленных нефтеокисляющих  микроорганизмов с широким спектром биодеструкции в очищаемом стоке ускорило разложение углеводородов и способствовало снижению токсичности продуктов переработки нефти до норм оборотного водоснабжения или отвода очищенных вод в природные водоемы без ущерба их экологическому состоянию.

2.Отселектирован и сформирован на базе изученных гетеротрофных микроорганизмов высокоэффективный в окислении нефти и нефтепродуктов консорциум промышленного образца, включающий девять штаммов: Alcaligenes sp. Г0401ВТ (№17),  Micrococcus nishinomiyaensis Г0402ВТ (№16), Brevibacterium iodinum  Г0403ВТ (№15), Pseudomonas aeruginosa  Г0404ВТ (№14),  Pseudomonas  facillis Г0405ВТ (№13), Brevibacterium linens Г0406ВТ (№12),  Bacillus subtilis Г0407ВТ(№11), Flavobacterium aquatile Г0408ВТ(№10), Clostridium butyricum Г0409ВТ (№9) и характеризуется следующими параметрами жизнедеятельности: рН среды от 2,5 до 10,0 в температурном интервале 5-35°С, нагрузка загрязнений по ХПК до 1800 мг/л при аэробной фазе окисления.

3.Изучены основные типы взаимоотношений нефтеокисляющих микроорганизмов в процессе совместного их развития в среде с углеводородами, которые представлены изоляцией, конкуренцией и кооперацией.

4.В натурных опытах произведена оценка эффективности биодеструкции углеводородов нормального строения, ароматических и изопреноидных фракций монокультурой и сообществом консорциума углеводородокисляющих микроорганизмов. Использование консорциума для биоремедиации ведет к снижению БПКполное, (до 3,2 мг/л) и  ХПК (в пределах 40-85 мг/л), усиливает окислительно-восстановительные процессы и, тем самым, интенсифицирует очищение воды от нефти и нефтепродуктов.

5. В условиях модельного эксперимента предложены технологии применения консорциума на адгезированной поверхности для клеток углеводородокисляющих микроорганизмов – древесные опилки, торф и др. являющихся дополнительными источниками питания в виде легкоокисляемых органических веществ, одновременно и сорбентами для клеток микроорганизмов, способствующих детоксикации  и биодеструкции нефтяных поллютантов до 87%. Показана целесообразность использования данных сорбентов совместно с консорциумом в управляемом режиме для снятия нефтяных загрязнений в природных, производственных сточных водах, а также при локальном или технологическом поступлении.

6. Разработаны биотехнологии использования консорциума штаммов УОМ для очистки и доочистки: 1)смешанных высококонцентрированных технологических нефтесодержащих стоков до норм поступления в биологические очистные сооружения для дальнейшей их доочистки; 2) нефте- и углеводородсодержащие сточные воды с нагрузками от 20 до 200 мг/л до норм оборотного водоснабжения или отвода очищенных вод в водоемы без ущерба их экологическому состоянию. Биотехнологическая схема очистки, с включением  основного  струйно – отстойного аппарата (СОА) позволяет очистить углеводородсодержащие сточные воды с исходной нагрузкой нефтяного загрязнения до 180 мг/л, соотношением БПК: N:Р 100:5:1, количеством индуцирующих соединений 35·10-6 и с численностью УОМ до 162·106 млн. кл/см3 -325·106 млн. кл/см3 за 1,2 часа контакта до 78%, а при вводе в схему двух ступеней СОА с увеличением времени контакта  0,5 -1 час в пределах 92-96%.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

в изданиях, рекомендованных ВАК:

1. Жукова О.В., Морозов Н.В., Хузаянов Р.Х., Кудряшов В.Н. Технологическая схема биоочистки нефтесодержащих производственных стоков, основанная на применении отселектированных углеводородокисляющих микроорганизмов// Известия КазГАСУ.-2009.- №1 (11). - С.214-220.

2. Жукова О.В., Морозов Н.В. Взаимодействие микроорганизмов с твердыми поверхностями - сорбентами при снятии локального нефтяного загрязнения//Вестник Татарского государственного гуманитарно-педагогического университета.- 2010.-№ 3 (21).- С. 99-106.

3.  Жукова О.В., Морозов Н.В. Выявление и идентификация антибиотических веществ при росте углеводородокисляющих микроорганизмов в ассоциативных культурах// Вестник Татарского государственного гуманитарно-педагогического университета.-2011.-№ 1(23). - С.61-67.

4. Морозов Н.В., Хуснетдинова Л.З., Жукова О.В. Использование иммобилизованных на органическом сорбенте нефтеокисляющих микроорганизмов для очистки воды от нефти//Фундаментальные исследования.-2011.- №12. - С.  576-579с.

В других изданиях

1. Морозов Н.В., Жукова О.В. Бактериальные препараты-деструкторы углеводородов, их разработка и использование для биоремедиации водоемов и почв от нефтяных загрязнений//Глобальные проблемы экологизации  в Европейском сообществе.- Казань:МИЭП РТ, 2006.- С. 209-210.

2. Жукова О.В., Лыкова Е.В., Сидоров А.В. Консорциум углеводородокисляющих микроорганизмов для очистки земель и вод, загрязненных нефтью//Материалы международ. науч.-практ.конф. «XV Туполевские чтения».- Казань: Казан. гос. техн. ун-т, 2007.-Т.1.- С.384-385.

3. Жукова О.В., Морозов Н.В. Исследование взаимоотношений углеводородокисляющих микроорганизмов в ассоциациях, используемых для управляемой очистки природных и сточных вод от нефтяных загрязнений //Вестник Татарского государственного гуманитарно-педагогического университета. –2007. -№ 2-3 (9-10). - С.100-107.

4. Морозов Н.В., Жукова О.В. Экологическая защита окружающей среды от нефтяных загрязнений, технологическая схема биоочистки нефтесодержащих стоков// Фундаментальные и прикладные исследования в системе образования. – Тамбов: изд-во Першина Р.В, 2008.-Т.3.-С.58 -60.

5.Жукова О.В., Морозов Н.В. Антибиотические вещества в антагонистических взаимоотношениях углеводородокисляющих микроорганизмов в ассоциативных культурах//Эколого-географические исследования в Среднем Поволжье.- Казань: ЗАО «Новое знание», 2008.- С. 123-132.

6. Zhukova O.V., Khusnetdinova L.Z. The group of sour carbon hydrogen microorganisms participating in biopreparatus for soil and water manage cleaning from oil pollution//17th International Environmental Bioindicators Conference.-Mосква: «Всероссийское масс-спектрометрическое общество», 2009. - С. 97.

7. Жукова  О.В. Биоремедиация нефтяных загрязнений в природных водоемах, технологических сточных водах и почвах отселектированными штаммами нефтеокисляющих микроорганизмов//Современные проблемы органической и биологической химии, молекулярной биологии, экологии и биотехнологии. - 2009.- №2.- С.111-113.

8. Хуснетдинова Л.З., Жукова О.В., Морозов Н.В. Создание бактериальных препаратов-деструкторов углеводородов и их использование в восстановлении качества поверхностных вод//Материалы Всеросс. науч.-практ. конф. «Инновационные подходы к естественнонаучным исследованиям и образованию».- Казань: ТГГПУ, 2009.- С. 295-297.

9. Жукова О.В., Морозов Н.В.. Биопленка – микробный консорциум, участвующий в биохимических процессах превращения веществ// Природоохранные биотехнологии в 21 веке.- Казань: ТГГПУ, 2010.- С. 96-106.

10. Хуснетдинова Л.З., Жукова О.В., Морозов Н.В. Использование иммобилизованных клеток углеводородокисляющих микроорганизмов для биодеградации нефтяных загрязнений//Актуальные вопросы естествознания начала XXI века.- Казань: «Печать-Сервис-XXI век», 2010.- C.133-136. 

11. Хуснетдинова Л.З., Жукова О.В., Морозов Н.В. Применение органических субстратов для иммобилизации гетеротрофных микроорганизмов, участвующих в очистке природных и сточных вод от нефти//Сборник материалов Конгресса «Чистая вода. Казань».- Казань: Министерство строительства, архитектуры и жилищно-коммунального хозяйства РТ, 2010.-С.110-113.

12.Жукова О.В., Меркушин О.С., Морозов Н.В. Влияние активной ассоциации углеводородокисляющих микроорганизмов и биогенных элементов на деградацию нефтепродуктов в почве//Фундаментальные науки и практика.-2010.- Т. 1, №2.- С.74-77.

13. Жукова О.В., Морозов Н.В. Биодеструкция нефти и нефтепродуктов в управляемом режиме// Фундаментальные науки и практика.--2010.- Т. 1, №3. -С.19-22.

14. Жукова О.В., Хуснетдинова Л.З. К вопросу о биодеградации и биодеструкции (биоремедиации) нефтяных загрязнений в окружающей среде, как фактор чистой экологии// Актуальные вопросы естествознания начала 21 века: - Казань: Печать-Сервис-XXI век, 2011.- С.110-112.

15. Морозов Н.В., Иванов А.А., Жукова О.В., Чернов А.Н., Степанов В.И. Биопрепараты промышленного образца и их использование для управляемой очистки поверхностных вод от нефтяных загрязнений (при аварийном или локальном поступлении)//Материалы 5-го Московского международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития». -2011.Ч.2.- С.20-22. 

16.  Морозов Н.В., Жукова О.В., Иванов А.В. Биотехнология ликвидации нефтезагрязнений аборигенными штаммами углеводородокисляющих микроорганизмов, иммобилизованными на сорбентах разной природы//Материалы Московского международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития». -2011.-Ч2.- С.302- 304. 

 






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.