WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 8 |

«USH-Titul.qxd 21.11.2006 16:54 Page 1 Российская академия медицинских наук ГУ Институт ревматологии РАМН Е. Л. НАСОНОВ АНТИФОСФОЛИПИДНЫЙ СИНДРОМ Москва Издательство “Литтерра” 2004 USH-Titul.qxd ...»

-- [ Страница 2 ] --

На первом этапе происходит адгезия тромбоцитов, параллельно с которой под воздействием внешних стимулов (коллаген, тромбин, ад реналин) начинается агрегация тромбоцитов. Другими активаторами тромбоцитов являются АДФ, тромбоксан А (ТхА ) и серотонин, кото 2 рые высвобождаются из самих тромбоцитов. Эти тромбоцитарные фак торы не только усиливают агрегацию, но и вызывают активацию других клеток. Действие всех активаторов тромбоцитов опосредуется через ио ны Са+2. Активация тромбоцитов проявляется изменением их формы, секрецией содержимого гранул, синтезом ТхА, активацией IIb/IIIa, выполняющего роль рецепторов для фибриногена и других адгезивных гликопротеинов (фибронектина, фактора Виллебранда, витронектина).

Тканевой Повреждение эндотелия сосудистой стенки тромбопластин Обнажение компонентов субэндотелиального матрикса Коллаген Фактор фон Виллебранда 1. Адгезия тромбоцитов 2. Изменение формы тромбоцитов, перемещение фосфолипидов с внутренней поверхности мембраны на наружную, активация рецепторов для фибриногена Активация свертывающей 3. Первичная агрегация тромбоцитов системы крови 4. “Реакция высвобождения” Тромбоксан А2 АДФ Тромбин 5. Вторичная (необратимая) агрегация тромбоцитов Рис. 4.2. Схема образования тромбоцитарного тромба SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром Наибольшей прокоагулянтной активностью обладают фосфатидилсе рин и фосфатидилэтаноламин, которые в интактных клетках расположе ны на внутренней поверхности клеточной мембраны. Наружный молеку лярный слой представлен холинсодержащими фосфолипидами (сфинго миелином и фосфатидилхолином). Подобная асимметрия ограничивает поперечную подвижность (flip flop) мембранных фосфолипидов в поко ящейся клетке. При активации тромбоцитов одновременно с изменени ем их формы изменяются и физико химические свойства клеточных мембран. На внешней стороне мембраны повышается концентрация фо сфолипидов, которые способствуют абсорбции плазменных факторов свертывания крови на активированных тромбоцитах. При этом мемб ранные фосфолипиды активированных тромбоцитов выступают в каче стве основных кофакторов активации свертывающей системы крови.

Фосфолипиды активированных тромбоцитов обеспечивают взаимодей ствие между факторами IX и VIII, а также между X и V и в целом стиму лируют активацию свертывающей системы крови и ускоряют образова ние тромбина. Тромбин стимулирует превращение фибриногена в фиб рин, кроме того, он является индуктором тромбоцитов.

Тромбоцитарный тромб — это соединенные с помощью молекулы фибриногена, активированные тромбоциты, прикрепленные с помощью фактора Виллебранда к субэндотелиальным структурам в месте повреж дения эндотелия сосудистой стенки. Тромбоцитарный тромб, образую щийся в месте повреждения эндотелия или субэндотелиального слоя, способен остановить кровотечение в мелких капиллярах и венулах.

Прочность этого тромба недостаточна, чтобы противостоять внутрисосу дистому давлению, и он нуждается в укреплении фибрином, который об разуется в процессе свертывания крови. Таким образом, конечным эта пом свертывания крови является образование фибрина в результате се рии последовательных протеазных реакций. Этому предшествует актива ция Х фактора и протромбина. Фактор Х является кардинальным в ме ханизме свертывания крови1, 2.

В зависимости от механизма активации фактора X условно различают два пути — внутренний и внешний (рисунок 4.3). Все необходимые факто ры внутреннего пути свертывания присутствуют в циркулирующей крови, SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 4. Современные представления о системе гемостаза Внутренний путь Внешний путь Контактная Тканевой активация фактор + ВМК, ПК + XII XIIа VIIа VII XI XIа IXа, ФЛ, VIII IX VIIIа Са+ Vа, Xа, V X ФЛ, Са+ (протромбин) II IIa (тромбин) Фибриноген Фибрин XIII XIIIa Рис. 4.3. Схема свертывания крови внутренний путь свертывания крови внешний путь свертывания общий для обоих ВМК — высокомолекулярный кининоген;



ПК — прекалликреин и активация свертывающей системы начинается при контакте с отрица тельно заряженной поверхностью. Подобными поверхностями могут быть, например, стекло или пластик, обеспечивающие взаимодействие не которых белков, которым необходимы негативно заряженные поверхнос ти для их конформационных изменений и активации. Отрицательно заря женными биологическими поверхностями также могут служить коллаген и компоненты клеточных мембран, такие как сульфатиды. Последние от носятся к кислым фосфолипидам, у которых в составе олигосахаридных цепей содержатся молекулы эфиров сульфатов. Они появляются в крови при повреждении клеток. В определенных ситуациях в этот процесс могут вовлекаться эндотелиальные клетки, содержащие цистеиновые протеазы.

Внутренний путь также называют "контактной фазой" свертывания крови.

Процесс свертывания крови по внутреннему пути инициируется за счет SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром формирования комплекса, состоящего из 2 факторов свертывания (XII и XI), высокомолекулярного кининогена (ВМК) и прекалликреина (ПК)4 и ведет к активации фактора XII и превращения его в активированный фак тор XIIа. Контактная фаза протекает по механизму положительной обрат ной связи: в присутствии ВМК прекалликреин превращается в активиро ванный калликреин, стимулирующий переход фактора XII в XIIа, кото рый в свою очередь активирует ВМК. Полагают, что в большинстве случа ев внутренний путь менее важен, чем внешний путь свертывания крови, а контактная активация свертывания крови выполняет другие важные функции, участвуя в фибринолизе, регуляции артериального давления че рез систему ренин ангиотензиноген и кинины и др.2.

После активации фактора Х внутренний и внешний путь соединяют ся в один общий. На этом этапе происходит переход протромбина в тромбин и катализируемое тромбином превращение фибриногена в фи брин. Тромбин играет ключевую роль в процессе свертывания крови.

Как только концентрация его достигает уровня, достаточного для пре одоления действия антитромбинов, он быстро превращает растворимый фибриноген в фибрин мономер. Длинные нерастворимые мономеры фибрина спонтанно связываются в зигзагообразные структуры, конеч ным этапом этого процесса является образование нерастворимого поли мерного фибринового сгустка. На ранней стадии этот сгусток представ ляет собой рыхлое образование, целостность которого поддерживается за счет нековалентных связей между молекулами нерастворимых фиб риновых мономеров.

Тромбин также активирует фактор XIII, под действием которого про исходит полимеризация фибрина. Он как бы "сшивает" мономеры фиб рина, образуя специфические изопептидные связи между карбокса мидной группой глутамина и аминогруппой лизина. Кроме того, как уже отмечалось, тромбин индуцирует агрегацию тромбоцитов и стимули рует секрецию ЭК эндотелиального фактора релаксации. Тромбин игра ет важную роль в саморегуляции свертывающей системы крови по меха низму положительной и отрицательной обратной связи. Существует не сколько механизмов регуляции образования и разрушения тромбина в крови. Тромбин, активируя факторы V и VIII, усиливает свертывание SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 4. Современные представления о системе гемостаза крови, а связываясь с тромбомодулином на мембранах ЭК и активируя белок С, способствует инактивации факторов Va и VIIIa и усилению фи бринолиза. Основным естественным ингибитором тромбина является АТ III. Инактивация тромбина антитромбином III ускоряется в присут ствии эндогенного и экзогенного гепарина. Действие антитромбина III и активация белка С направлены на ограничение роста фибринового тром ба. Такую же функцию выполняет фибринолитическая система, которая не только ограничивает рост фибринового тромба, но и обеспечивает удаление тромботических масс из тока крови.

Второй механизм регуляции образования тромбина состоит в том, что в организме синтезируется и циркулирует каталитически неактивный зи моген тромбина — протромбин. Активация протромбина (фактора II), синтезируемого в печени, происходит на тромбоцитах. В этом процессе участвуют анионные тромбоцитарные фосфолипиды, ионы Са2+ факто ры Va и Xa. В результате дегрануляции тромбоцитов под действием ка ких либо агонистов (чаще всего коллагена) анионные фосфолипиды тромбоцитарных мембран переходят на наружную сторону и связывают ионы Са2+ и протромбин. Тромбоциты содержат фактор V, который в ак тивированной форме соединяется со специфическими рецепторами на мембране тромбоцитов. В свою очередь фактор V является рецептором для фактора Xa, который связывает протромбин и каталитически рас щепляет неактивную молекулу протромбина с образованием полипепти да тромбина.

Внешний путь активации фактора Х запускается под действием фак тора VIIа и тканевого фактора (ТФ) после повреждения ткани5. Предше ственник фактора VIIа — фактор VII — синтезируется в печени и может активироваться тромбином или фактором Ха. Фактор VII обладает до вольно высокой эндогенной активностью. Небольшое его количество (около 1% от общего количества VII фактора) постоянно находится в плазме в активированном состоянии. Только в присутствии ТФ фактор VII активирует факторы Х и IХ. Существует два пути активации Х факто ра комплексом ТФ:VIIа. Первый (его еще называют альтернативным) включает превращение связанного с эндотелием фактора IХ в IХа, кото рый в присутствии фактора VIIIa и Са2+ превращает фактор Х в Ха. Этот SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром путь свертывания, в котором участвуют компоненты внешнего и внут реннего пути свертывания, менее эффективен, чем классический быст рый внешний путь, при котором комплекс ТФ:VIIа непосредственно ги дролизует фактор Х в Ха2, 5. Таким образом, эти два пути активации фак тора X связаны взаимной активацией факторов XII и VII, VII и IX. Необ ходимо помнить, что важную роль в гемостазе играет положительная и отрицательная обратная связь. Многие реакции каскада свертывания крови регулируются с помощью механизма положительной обратной связи. Например, при активации VII фактора свертывания крови воз можна реакция аутоактивации.

Ингибиторы свертывания крови Естественные механизмы ограничения тромбообразования включают две системы ингибиторов, контролирующих активацию свертывания крови1, 2 (таблица 4.1.):

• ингибиторы сериновых протеаз — ингибируют активированные фак торы свертывания крови;

• система белка С — инактивирует активированные кофакторы.

Таблица 4.1. Наиболее важные белковые ингибиторы протеаз крови Ингибиторы Специфичность Антитромбин III Факторы IIa, Xa, IXa макроглобулин Неспецифический Ингибитор тканевого фактора (TFPI) Фактор Xa, VIIa/ТФ комплекс Кофактор гепарина II Фактор IIa, xимотрипсинподобные энзимы ингибитор протеаз Эластаза, факто IXa С1 ингибитор Фактор XIIa, фактор IXa, калликреин, C1s (система комплемента) Кроме того, в плазме присутствуют фосфолипидсвязывающие бел ки, участвующие в регуляции свертывания, такие как аннексин V или 2 ГП I (см. ниже), которые нейтрализуют активированные фосфоли пиды.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 4. Современные представления о системе гемостаза Одним из наиболее важных антикоагулянтов плазмы крови является АТ III, который ингибирует тромбин, факторы Ха и IХа, а также, веро ятно, фактор VIIа. АТ III, связывая гепариноподобные протеогликаны на поверхности ЭК, способствует инактивации тромбина. Взаимодейст вие АТ III с гепариноподобными протеогликанами стимулирует образо вание PGI2. Ингибирующая активность АТ III усиливается в присутст вии отрицательно заряженных гликозаминогликанов (гепаран сульфат).

Ингибитор ТФ (TFPI — Tissue Factor Pathway Inhibitor) — уникальный ингибитор, имеющий два активных центра2. TFPI ингибирует фактор Ха и комплекс ТФ: VIIа, но не свободный VIIа. Основная часть этого инги битора находится в комплексе с липопротеидами низкой и высокой плотности и только 10% циркулирует в свободной форме. Большая часть TFPI (примерно от 50 до 90%) связывается с гликозаминогликанами стенки сосудов. Эта фракция TFPI высвобождается в плазму при поступ лении гепарина в кровь. Наибольшей антикоагулянтной активностью обладает свободная форма TFPI. Небольшое количество TFPI хранится в тромбоцитах и выделяется при их активации.

Механизм ингибирования свертывания крови TFPI достаточно сло жен и до конца не изучен. Установлено, что TFPI ингибирует Ха и ком плекс ТФ:VIIа, в присутствии ионов Са+2 формируя четырехкомпонент ный комплекс (ТФ:VIIа:ТФ:Ха).

Наряду с АТ III и TFPI важным компонентом противосвертывающей системы является белок С — витамин К зависимый белок протромби назного комплекса.

Механизм антикоагулянтного действия системы БС представлен на рисунке 4.4. Тромбин, вымываемый током крови из мест повреждения эндотелия, контактирует с неповрежденным эндотелием, где он может инактивироваться АТ III либо связаться с тромбомодулином. На по верхности ЭК некоторых сосудов экспрессируются рецепторы белка С, которые, связывая активированный белок С, в комплексе с тромбин тромбомодулином ускоряют его активацию. Образованный активиро ванный белок С (АБС) короткое время остается связанным с эндотели альными рецепторами БС. При диссоциации комплекса активирован ный белок С рецептор, активированный белок С связывает белок S.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром Эндотелий рПС АПС ТМ nS Va Тромбин фибрин ПС V С4b СП Тромбин фибриноген nS Тромбин VIII AT III ПС Тромбин V Агрегация VIIIa тромбоцитов рПС ТМ АПС nS Эндотелий Рис. 4.4. Антикоагулянтный механизм системы протеина С Примечание: Тромбин связывает тромбомодулин (ТМ) и быстро активирует протеин С (ПС). Этот процесс усиливается рецепторами протеина С (рПС), которые удержи вают способность активированного ПС (АПС) связывать, но связанный АПС, по види мому, не способен выполнять антикоагулянтную функцию. После отделения АПС от рПС, АПС связывает протеин S (пS), и этот комплекс активирует активированный Va фактор свертывания крови серией ограниченных протеолитических реакций. В слу чае инактивации фактора VIIIa фактор V служит как дополнительный кофактор. C4b СП — система протеина, связывающая компонент комплемента C4b Образующийся комплекс инактивирует факторы Vа и VIIIа на поверх ности активированных тромбоцитов, ЭК и других клетках крови. Изве стно, что белок S циркулирует в двух формах: свободной и в составе би молекулярного комплекса с компонентом комплемента С4b. При этом только свободный белок S может выполнять роль кофактора активиро ванного белка С.

Резистентность к активированному белку С (АБС) означает устой чивость фактора Vа к инактивации под действием активированного белка С. При этом состоянии не происходит удлинения времени свер тывания плазмы после добавления к плазме активированного белка С.

Наследственная форма резистентности АБС может быть связана с му тацией гена V фактора свертывания крови (т.н. лейденская мутация).

Эта мутация характеризуется заменой аргинина на глицин в полипеп SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 4. Современные представления о системе гемостаза тидной цепи нуклеотида 1691 в положении 506, что приводит к разви тию нечувствительности фактора V к активированному белку С и со провождается повышением уровня этого фактора в плазме и, соответст венно, усилением образования тромбина. Более того, мутантный фак тор V уменьшает кофакторную активность в системе нейтрализации VIIIа фактора активированным белком С. Обе эти аномалии приводят к феномену резистентности Va фактора к АБС и патологии свертывания крови6. В таблице 4.2 приведены состояния, при которых встречается резистентность к АБС.

Tаблица 4.2. Состояния, при которых возможна резистентность к активированному белку С Состояния Механизм Воспаление любой локализации Увеличение уровня C4b связывающего и/или беременность белка, который приводит к функциональному дефициту пS Повышение фактора VII Острофазовый белок, иногда может повышаться спонтанно АФС Аутоантитела к различным компонентам системы белка С Мутация протромбина G20210A Повышенное образование тромбина ведет к высокому потреблению БС Дефицит компонентов системы Наследственный и/или приобретенный системы АТ III, белков С и S Как видно из таблицы 4.2, причины резистентности к АБС могут быть генетическими и приобретенными. Приобретенная резистентность к АБС возможна при беременности или любом воспалении, что, возмож но, отчасти связано с увеличением уровня С4b связывающего белка и функциональным дефицитом протеина S. Повышение уровня VIII фак тора свертывания крови — спонтанное или при воспалении — также мо жет быть причиной резистентности к АБС.

Система фибринолиза В норме восстановление нормального кровотока после повреждения ткани зависит от функции системы фибринолиза (таблица 4.3).

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром Таблица 4.3. Наиболее важные компоненты системы фибринолиза Белки Основная функция Дефицит повышение 2 антиплазмин Ингибитор плазмина, ТАП, ИАП 1 кровотечение тромбоз?

Плазминоген Лизис сгустка фибрина;

кровотечение расщепление фибриногена ПДФ тромбоз ТАП Активация плазминогена кровотечение тромбоз УАП Активация плазминогена кровотечение тромбоз ИАП 1 Ингибирование ТАП и УАП тромбоз кровотечение ИАП 2 Ингибирование ТАП и УАП ?

?

TAFI Ингибирование взаимодействия тромбоз плазминогена с фибрином ?

Действие АТ III и активация белка С направлены на ограничение рос та фибринового тромба. Такую же функцию выполняет система фибри нолиза, которая не только ограничивает рост, но и обеспечивает раство рение фибринового тромба. Система фибринолиза имеет некоторое сходство с системой свертывания крови. Факторы и ингибиторы систе мы гомологичны их аналогам в системе свертывания и являются резуль татом трансформации общих предшественников в процессе молекуляр ной эволюции. Так же как и в свертывающей системе, кофакторы играют важную роль в процессе фибринолиза2. Подобно свертыванию крови ус ловно выделяют два пути фибринолиза: плазминзависимый и плазмин независимый.

Основным ферментом, ответственным за протеолитическую деграда цию фибрина до растворимых фрагментов, является плазмин (рисунок 4.5). Плазмин образуется из плазминогена под действием активаторов плазминогена тканевого и урокиназного типов, которые синтезируются ЭК. Образование плазмина начинается тогда, когда синтезируемый в пе чени плазминоген и активатор плазминогена присоединятся к фибрину.

Благодаря своему более высокому сродству к фибрину, активатор плаз SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 4. Современные представления о системе гемостаза миногена тканевого типа играет более важную роль в формировании плазмина, чем активатор урокиназного типа. Оба активатора плазмино гена находятся в токе крови в комплексе со специфическими и неспеци фическими ингибиторами, среди которых наибольшее значение имеет ингибитор активатора плазминогена 1 (ИАП 1). Предполагают, что ак тиватор плазминогена тканевого типа и ИАП 1 высвобождаются непо врежденным эндотелием, но при этом ИАП 1 инактивируется активиро ванным белком С.

Как и свертывание крови, процесс фибринолиза происходит по двум основным путям (рисунок 4.5). Первый, фибринзависимый, начинается XII ф XIIa ф { + фибриноген ПДФ ВМК CI И альфа2 альфа МБ АП Калликреин Плазмин ПКал Про Ур УАП ПГ ИАП ТАП ПГ фибрин эндотелий Рис. 4.5. Основные реакции системы фибринолиза Примечание: В овальном круге изображены ингибиторы фибринолиза, ингибиция указана штриховой линией;

более жирной стрелкой обозначены основные реакции;

ВМК — высокомолекулярные кининогены;

С1 И — ингибитор системы комплемента;

Пкал — прекалликреин, Про Ур — проурокиназа;

УАП — урокиназный активатор плаз миногена, который может активировать как свободный, так и связанный с фибрином плазминоген (ПГ);

ТАП — тканевой активатор ПГ, активирует ПГ только связанный с фибрином;

ИАП 1 — инактиватор плазминогена 1;

альфа2 МБ — альфа2 макрогло булин;

альфа2 АП — альфа2 антиплазмин фибрин SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром с момента формирования фибринового сгустка. Контактная активация фибринолиза урокиназным активатором плазминогена запускается по сле начала контактной фазы свертывания крови. Активация предшест венника УАП, проурокиназы (циркулирует в плазме в низких концент рациях как одноцепочечная молекула), и его переход в высокоактивную двухцепочечную молекулу УАП опосредуется фактором XIIа, калликре ином и плазмином по механизму положительной обратной связи. В ре гуляции фибринолиза важную роль играет ИАП, синтезируемый ЭК.

Второй путь — это плазминнезависимый фибринолиз. Образование фибрина сопровождается активацией тромбоцитов, которые экспресси руют селектин, СD154 и различные рецепторы для лейкоцитов. Связыва ние лейкоцитов с рецепторами приводит к высвобождению различных протеаз. В растворении фибрина участвуют гранулоцитарная эластаза и, возможно, катепсин G и моноцитарный катепсин D. Некоторые продук ты такого растворения (расщепления) фибрина определяются обычными лабораторными методами (например D димеры). Эластазы также могут расщеплять плазминоген до миниплазминогена, который намного легче активируется активаторами плазминогена. Снижение активности фиб ринолиза связано с развитием тромбоэмболических осложнений.

ЛИТЕРАТУРА 1. Leung LLK. Overview of hemostasis. 4. Sumpio BE, Roley JT, Dardik A. Molecules in UpToDate 2004;

11.3. focus. Cells in focus: endothelial cell. Intern.J.

2. Kolde H J. Haemostasis. Physiology. Biochem. Cell Biology 2002;

34: 1508—1512.

Pathology. Diagnostics. Pentapharm Ltd., Basel. 5. Morrissey JH. Tissue factor: An enzyme Switzerland 2001;

135 р. cofactor and true receptor. Thromb Haemost 3. Панченко ЕП, Добровольский АБ. 2001;

86: 66—74.

Тромбозы в кардиологии. Механизмы раз 6. Патрушев ЛИ. Генетические механизмы вития и возможности терапии. Москва: нарушения гемостаза (обзор). Биохимия.

1999;

458 с. 2002;

67: 40—56.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page глава П А Т О Г Е Н Е Т И Ч Е С К И Е М Е Х А Н И З М Ы П А Т О Г Е Н Е Т И Ч Е С К И Е М Е Х А Н И З М Ы А Н Т И Ф О С Ф О Л И П И Д Н О Г О А Н Т И Ф О С Ф О Л И П И Д Н О Г О С И Н Д Р О М А С И Н Д Р О М А По современным представлениям, аФЛ не только серологический маркер, но и важный "патогенетический" медиатор, вызывающий разви тие основных клинических проявлений АФС — тромбозов, акушерской патологии и цитопений и др. 1 7. Обсуждается участие аФЛ в атерогенезе как при АФС (глава 12), так и при сердечно сосудистых заболеваниях (глава 6). В целом аФЛ обладают способностью воздействовать на боль шинство процессов, составляющих основу регуляции гемостаза, наруше ние которых приводит к гиперкоагуляции.

Об участии аФЛ в патогенезе АФС свидетельствуют следующие факты1:

• у лабораторных животных с индуцированным или спонтанным синте зом аФЛ развиваются некоторые проявления АФС, включая акушер скую патологию и тромбоцитопению;

• введение моноклональных аФЛ, полученных при гибридизации лим фоцитов больных АФС, лабораторным животным in vivo приводит к развитию венозных тромбозов;

• молекулы, с которыми реагируют аФЛ, принимают участие в регуля ции свертывания крови;

• уровень аФЛ коррелирует с частотой (или риском) развития тромбозов.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром Тем не менее, по мнению многих исследователей, один только синтез аФЛ у человека не может спровоцировать клинически значимые наруше ния гемостаза. Это послужило основанием для гипотезы "двойного уда ра" (two hit hypothesis), согласно которой аФЛ ("первый удар") создают условия для гиперкоагуляции, а формирование тромба индуцируется до полнительными медиаторами ("второй удар"), усиливающими актива цию каскада свертывания крови, уже вызванную аФЛ2. Действительно, имеются данные о том, что частота тромбозов у пациентов с аФЛ в кро ви существенно нарастает при наличии других факторов риска гиперко агуляции, например, беременности, курения, хирургических операций и особенно врожденных тромбофилий (глава 13). Кроме того, аФЛ — это чрезвычайно гетерогенная популяция аутоантител, каждый вид которых обладает своим уникальным патогенным потенциалом8. Поэтому неуди вительно, что клиническая картина АФС чрезвычайно разнообразна, то есть у пациентов могут преобладать отдельные проявления АФС, напри мер, венозные или артериальные тромбозы (редко сочетаются у одного больного), акушерская патология (также включающая широкий спектр нарушений) или цитопения. Кроме того, у некоторых больных АФС по вышен риск атеросклероза, что также может отражать наличие "атеро генного" подтипа аФЛ (глава 12). Таким образом, развитие АФС реализу ется за счет нескольких взаимодополняющих аФЛ зависимых и аФЛ не зависимых механизмов.

Взаимодействие аФЛ с ФЛ — сложный феномен, в реализации кото рого ключевую роль играют так называемые кофакторы. В 1990 году три группы авторов независимо друг от друга установили, что необходимым условием для связывания аКЛ, выделенных из сыворотки пациентов с АФС, с кардиолипином является наличие так называемого "аКЛ кофакто ра", который был идентифицирован как 2 гликопротеин I (2 ГП I)9 11.

Вскоре было показано, что при АФС наряду с 2 ГП I в качестве "кофак торов" (или аутоантигенов?) могут выступать другие белки, многие из ко торых принимают непосредственное участие в свертывании крови. К ним относят протромбин (фактор II), белок С, белок S, аннексин V, тромбомо дулин, факторы V, VII/VIIa и XII, высокомолекулярный и низкомолеку лярный кининоген, гепарин и многие другие6, 7.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома Как уже отмечалось, аФЛ, синтезирующиеся при АФС, распознают не сами ФЛ, а антигенные детерминанты ФЛ связывающих белков, в первую очередь 2 ГП I. Напротив, при инфекционных заболеваниях аФЛ взаимодействуют непосредственно с отрицательно заряженными (анионными) ФЛ12, 13. Это послужило основой для разделения аФЛ на основные подтипа: "аутоиммунные" (или патогенные) и "инфекцион ные" (таблица 5.1;

рисунок 5.1).

Таблица 5.1. Сравнительная характеристика "аутоиммунных" и "инфекционных" аФЛ Признак "Аутоиммунные" аФЛ "Инфекционные" аФЛ Титр Высокий Низкий Изотип IgG>IgM IgM>IgG Авидность Низкая Очень низкая Подкласс IgG IgG2, IgG4 IgG1, IgG Легкие цепи, тип Связывание с ФЛ в Усиление Подавление присутствии 2 ГП I “Аутоимунные” антифосфолипидные антитела Анти 2 ГП I антитела 2 ГП I Кардиолипин Твердая фаза (пластиковая лунка) “Инфекционные” антифосфолипидные антитела Антифосфолипидные антитела Кардиолипин Твердая фаза (пластиковая лунка) Рис.5.1 Характеристика антифосфолипидных антител SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром 2 гликопротеин I (2 ГП I) 2 ГП I — одноцепочечный гликопротеин с молекулярной массой кДа. Он состоит из 326 аминокислот, его концентрация в плазме у здоро вых людей составляет примерно 200 мкг/мл. 2 ГП I циркулирует в кро ви в комплексе с ЛП: он входит в состав хиломикронов, ЛВП, а также, ве роятно, Лп(а). Поэтому он также обозначается, как аполипопротеин Н14.

2 ГП I относится к суперсемейству белков, контролирующих компле мент (complement control proteins), состоит из 5 характерных повторяющихся ("sushi") доменов, включающих примерно 60 аминокислотных остатков15 18.

Структура 2 ГП I изучена достаточно подробно, в том числе и путем рент геноструктурного анализа17, 18 (рисунок 5.2). Установлено, что пятый домен характеризуется аберрантной структурой, со вставкой 5 аминокислот и С концевым "расширением" (19 аминокислот), связанным с областью встав А Б IV V COOH V VI III N N III N N II II I I NH Рис. 5.2. Структура 2 гликопротеина А. Модель 2 ГП I, основанная на кристаллографической структуре: белок состоит из 5 SCR доменов, имеющих "fishhook" вид. Структура SCR домена V формирует фосфолипидсвязывающий участок.

Б. Анализ структуры позволяет предположить наличие простого мембрансвязывающего меха низма, посредством которого катионный участок домена V обладает высокой афинностью к ани онным фосфолипидам. Участок Ser311 Lys317 формирует гидрофобную петлю, погруженную в ли пидный бислой, а участок Trp316 расположен во внутренней зоне между ациловыми цепями и фо сфатной "головой" липидов. Это позволяет 2 ГП I связываться с клеточной мембраной.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома ки дополнительной С концевой дисульфидной связи. Эксперименты по ин гибированию взаимодействия 2 ГП I и ФЛ с помощью синтетических пеп тидов, а также исследование "мутантных" вариантов 2 ГП I свидетельству ют о том, что именно катионный (богатый лизином) участок пятого домена (Cys281 Lys Asn Lys Glu Lys Lys Cys288) принимает участие в связывании 2 ГП 1 с анионными ФЛ19.

Наряду с ЛП, 2 ГП I связывается (по крайней мере in vitro) с различ ными белками плазмы или поверхностными мембранными молекулами и может влиять на их функциональную активность (таблица 5.2.).

Таблица 5.2. Свойства 2 ГП I20 Связывание с: Функциональная активность — анионными ФЛ — ингибирует протромбиназу (особенно фосфатидилсерином и фосфатидилинозитолом) — С4 связывающим белком — ингибирует контактную активацию (физиологический "переносчик" свертывания крови белка S).

— кальмодулином — ингибирует АДФ индуцированную агрегацию тромбоцитов — аннексином II — ингибирует образование фактора Xа тромбоцитами — модулирует антикоагулянтный эффект белков C и S — участвует в клиренсе оЛНП — участвует в клиренсе апоптозных клеток.

— сульфатидами — взаимодействуют с молекулами адгезии, участвующими в гемостазе (фактор фон Виллебранда, тромбоспондин, селектины, ламинин) — активирует фактор свертывания XII — адгезия и агрегация тромбоцитов (рецептор для Р селектина) Тем не менее физиологическое значение 2 ГП I остается неясным.

Гетерозиготный и гомозиготный дефицит 2 ГП I не приводят к увеличе нию риска тромбозов31, 32. Описан только один пациент с гомозиготным SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром дефицитом 2 ГП I и тромботическими осложнениями. Однако у его так же гомозиготного брата и у нескольких гетерозиготных кровных родст венников не было отмечено склонности к развитию тромбозов33. Данные о связи между развитием тромбозов и мутациями гена 2 ГП I суммиро ваны в главе 2. У мышей без гена 2 ГП I (knock out) отмечена тенденция к нарушению образования тромбина, а также снижение фертильности.

Это дало основание предположить, что 2 ГП I может принимать участие в ранних стадиях процесса репродукции34.

Очевидно, что развитие тромбозов при АФС нельзя объяснить только врожденным или приобретенным дефицитом 2 ГП I. Кроме того, мно гие биологические эффекты 2 ГП I проявляются только in vitro, при ис пользовании 2 ГП I в "супраффизиологических" концентрациях и/или в присутствии буферов с высокими (нефизиологическими) значениями рН.

Существует предположение, что связывание 2 ГП I с фосфолипидной биомембраной in vivo значительно слабее, чем связывание с ней "класси ческих" факторов свертывания и других ФЛ связывающих белков, участ вующих в регуляции гемостаза. Поэтому 2 ГП I не может конкурировать с этими белками за мембранное связывание с ФЛ.

В то же время имеются многочисленные доказательства важной роли 2 ГП I в индукции синтеза аФЛ. Об этом, в частности, свидетельствуют аФЛ — с комплексом ФЛ 2 ГП I;

А “Нативный” 2 ГП I “Скрытый” фосфолипид эпитоп 2 ГП I — со "скрытым" (конформационным) эпи Б аФЛ топом, формирующимся в процессе взаи модействия 2 ГП I и отрицательно заря женных молекул (анионные ФЛ) или поверх ностей ( облученный полистирол);

аФЛ “Нативный” — бивалентное связывание с нативным В 2 ГП I 2 ГП I, иммобилизованным с высокой плотностью на поверхности анионных ФЛ фосфолипид или облученном полистироле.

Рис 5.3. Типы взаимодействия аФЛ с 2 ГП I SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома данные экспериментальных исследований о синтезе аКЛ у лабораторных животных при их иммунизации "чистым" 2 ГП I35, 36. Полагают, что in vivo 2 ГП I может образовывать "иммуногенный" комплекс с ФЛ, спо собный индуцировать синтез аФЛ.





Всего рассматривают три принципиально возможных типа 2 ГП I зависимого взаимодействия "антиген—антитело" (рисунок 5.3)15.

В настоящее время преобладает точка зрения, что основные антиген ные детерминанты 2 ГП I расположены в первом домене молекулы37, 38.

Действительно, исходя из кристаллографической структуры 2 ГП I, именно первый и второй домены наиболее доступны для взаимодейст вия с антителами, в то время как пятый домен, благодаря высокому по ложительному заряду, обеспечивает связывание 2 ГП I с анионными ФЛ. Однако, по данным спектроскопии, установлено, что в процессе взаимодействия 2 ГП I и КЛ наблюдаются конформационные измене ния структуры обеих молекул. Моноклональные антитела, полученные путем гибридизации лимфоцитов больных АФС, взаимодействуют с участками четвертого домена 2 ГП I. Это дает основание предполо жить, что антигенными детерминантами 2 ГП I могут быть "конфор мационные" или линейные эпитопы, локализующиеся в четвертом до мене молекулы 2 ГП I15.

Такие предположения согласуются с нашими результатами изучения ингибирующей активности пептидных фрагментов 2 ГП I39. Мы обна ружили, что пептид (FCKNKEKKCS), соответствующий последователь ности 274—288 в четвертом домене молекулы 2 ГП I, обладает способ ностью ингибировать связывание IgG фракции, выделенной из сыворот ки больных АФС с КЛ.

Следует подчеркнуть, что циркулирующие антитела к 2 ГП I (а ГП I) в большинстве случаев характеризуются низкой аффинностью (Kd — 10 5)40, 41. Поэтому в кровяном русле они не образуют комплексов с 2 ГП I и, следовательно, не вызывают "потребления" 2 ГП I за счет кли ренса комплексов 2 ГП I а2 ГП I. Однако при иммобилизации 2 ГП I на твердой фазе а2 ГП I приобретают способность к высокоавидному мультивалентному связыванию с 2 ГП I. Такое характер взаимодейст вия "антиген антитело" может приводить к неблагоприятным последст SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром виям, что и определяет важное патогенетическое значение 2 ГП I зави симых аФЛ для развития АФС.

Протромбин Другим фосфолипидсвязывающим кофакторным белком является протромбин (ПТ) 42. Напомним, что ПТ (фактор II) — это витамин K зависимый гликопротеин, который образуется в печени и в норме цир кулирует в крови в концентрации около 100 мкг/мл. У человека ПТ представляет собой одноцепочечный гликопротеин с молекулярной массой 79 кДа, состоящий из 579 аминокислотных остатков и включа ющий 3 углеводородные цепи и 10 остатков карбоглутаминовой кис лоты. ПТ подвергается карбоксилированию в процессе биосинтеза в печени. карбоксиглутаминовые остатки образуют так называемый GLA домен, который и принимает участие в связывании ПТ с ФЛ.

В процессе этого взаимодействия происходит конверсия ПТ в биологи чески активный ПТ. За GLA доменом следует "kringle" домен, содер жащий 2 "kringle" структуры (последовательность, для которой харак терны 3 внутренние дисульфидные связи) и С концевую сериновую протеазу. Эта структура, характерная для многих белков плазмы, обыч но определяет взаимодействие белков с различными кофакторными ре цепторами, а в молекуле ПТ принимает участие в связывании тромби на с фибриногеном. Механизмы, определяющие участие ПТ в регуля ции свертывания крови, подробно рассмотрены выше. Отметим лишь, что комплекс ПТ тромбин in vivo фактически проявляет активность не прямого антикоагулянта.

Описано два типа аПТ: функциональные аПТ (обладающие актив ностью ВА) и нефункциональные. Вероятно, эти различия зависят от эпитопной специфичности аПТ. Скорее всего, механизмы ВА актив ности аПТ сходны с таковыми у а2 ГП I. Комплекс, состоящий из аПТ и ПТ, связывается с анионными ФЛ с высокой авидностью, вы тесняя другие факторы свертывания. Кроме того, аПТ могут нару шать сборку протромбиназного комплекса или напрямую замедлять активацию ПТ фактором Xa. Иногда можно обнаружить синтез высо коавидных аПТ, которые вызывают гипопротромбинемию за счет об SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома разования и последующего клиренса комплексов аПТ ПТ. У таких пациентов выявляют повышенную кровоточивость, а не тромбозы.

Более подробно механизмы, определяющие участие аПТ в развитии АФС, рассмотрены в обзоре O. Amengual и соавт.42 и будут обсуждены в общем контексте патогенетического значения аФЛ.

Патогенетическое значение аФЛ Патогенный потенциал аФЛ может реализовываться на гуморальном и клеточном уровнях (таблица 5.3).

Таблица 5.3. Возможные механизмы патогенетической активности аФЛ Гуморальные Клеточные • Белок С • Эндотелий сосудов — угнетение активации белка С — апоптоз ЭК — приобретенная резистентность — высвобождение связанных к активированному белку С с мембраной микрочастиц — экспрессия КМА — экспрессия ТФ • Экспозиция анионных ФЛ в результате • Тромбоциты разрушения анексина V — активация тромбоцитов • Ослабление ФЛ зависимой активации фактора XII и угнетение фибринолиза • Ингибирование комплекса гепарин АТ III • Другие • Моноциты — нарушение синтеза простагландинов — индукция экспрессии ТФ — увеличение синтеза эндотелина — перекрестная реактивность с оЛНП (и другими ЛП) — увеличение синтеза ингибитора активатора плазминогена — активация системы комплемента Следует еще раз подчеркнуть, что, хотя определенная популяция вы сокоаффинных нейтрализующих аФЛ может непосредственно угнетать функциональную активность белков, участвующих в свертывании крови (или снижать их уровень за счет клиренса образующихся комплексов "антиген антитело"), в целом аФЛ редко вызывают клинически значимое снижение концентрации этих белков в кровяном русле.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром Более вероятный патогенетический механизм связан со способностью кофактор зависимых аФЛ к образованию высокоаффинных мультивалент ных комплексов с соответствующими белками каскада свертывания на фо сфолипидных мембранах клеток. В результате возможно нарушение функ ции этих белков, что в свою очередь приводит к нарушению регуляции всей ФЛ зависимой коагуляции. Кроме того, поскольку многие мембранные молекулы, взаимодействующие с аФЛ, связаны с рецепторными "сигналь ными" белками, аФЛ могут вызывать внутриклеточный сигнал, приводя щий к изменению функциональной активности клеток мишеней.

Взаимодействие с белками системы свертывания и другими факторами гемостаза Полагают, что аФЛ могут влиять на свертывание крови за счет следу ющих механизмов43 55:

• подавление образования тромбина;

• угнетение активности АТ III;

• снижение активности белка С;

• блокада сборки комплекса белка С;

• напрямую или опосредовано (через кофакторный белок S) угнетение активности белка С;

• связывание с факторами свертывания Va и VIIIa и защита их от рас щепления активированным белком С;

• индукция дефицита белка S;

• подавление аутоактивации фактора XII.

Особое значение имеет способность аФЛ угнетать белок С зависимую ан тикоагуляцию, поскольку именно дефицит белка С (или белка S)43, а также резистентность к активированному белку С рассматривается в качестве одно го из фундаментальных механизмов развития тромбоза44 (см. выше).

Совсем недавно было показано, что аФЛ обладают способностью вза имодействовать с комплексом, состоящим из 2 ГП I и сульфатидов30.

Напомним, что сульфатиды (галактозил 3` сульфат церамиды) представ ляют собой кислые фосфолипиды, содержащие в составе олигосахарид ных цепей молекулы эфиров сульфатов. У млекопитающих сульфатиды SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома присутствуют в нервной ткани, почках, эритроцитах, тромбоцитах и гра нулоцитах, а также в сыворотке. Взамодействуя с клеточными молекула ми адгезии (таблица 5.2), сульфатиды играют важную роль в регуляции гемостаза. Предполагают, что взаимодействие аФЛ с комплексом 2 ГП I сульфатиды может иметь патогенетическое значение при АФС — не только в связи с развитием гемостатических нарушений, но и за счет пря мого взаимодействия аФЛ с сульфатидами, локализующимися в нервной ткани и мочеполовой системе у женщин.

Взаимодействие с эндотелиальными и другими клетками АФЛ обладают способностью перекрестно реагировать с ЭК, вызывая их активацию или повреждение56 60. Наши результаты59 и данные других авторов56, 57 свидетельствуют о том, что аФЛ взаимодействуют с ЭК при участии 2 ГП I. Недавно установлено, что 2 ГП I связывается с ЭК по средством домена V61 и аннексина II (рецептор ЭК для тканевого актива тора плазминогена)61.

В опытах in vitro и in vivo показано, что 2 ГП I зависимое связыва ние аФЛ с ЭК вызывает разнообразные изменения фенотипа ЭК, кото рые можно охарактеризовать как "проадгезивные", "провоспалитель ные" и "прокоагулянтные". Кроме того, аФЛ нарушают в ЭК синтез эй козаноидов и ряда медиаторов, принимающих участие в регуляции сосу дистого тонуса.

Инкубация аффинноочищенных аФЛ с ЭК in vitro вызывает экспрес сию КМА (Е селектин, VCAL 1, ICAM 1) и синтез провоспалительных цитокинов (ИЛ 1 и ИЛ 6)60. Увеличение экспрессии КМА также было об наружено у пациентов с АФС на пораженных клапанах сердца62.

По данным экспериментальных исследований, введение аФЛ, выде ленных из сывороток пациентов с АФС, лабораторным животным при водит к образованию тромба и увеличению адгезии лейкоцитов к меха нически поврежденной вене63. Тромбоз не развивался у мышей с дефици том ICAM 1 и ICAM 1/P селектина, а также при введении мышам моно клональных антител к VCAM 164. Важно, что активация ЭК развивается и у мышей с дефицитом Fc рецепторов, у которых она вызывается моно клональными аФЛ класса IgM64,65 и, следовательно, зависит от специфи SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром ческого распознавания 2 ГП I (или другого антигена мишени) на ЭК, а не от неспецифического перекрестного связывания FcР, экспрессирую щихся на ЭК. В недавних исследованиях было показано, что индуциро ванная а2 ГП I гиперэкспрессия Е селектина на мембране ЭК связана с транслокацией NF kB66. Аналогичный механизм активации ЭК харак терен для провоспалительных цитокинов (ФНО, ИЛ 1) и ЛПС (глава 6). Установлено также, что антиген, с которым взаимодействуют а2 ГП I, индуцируя активацию ЭК, тесно связан с семейством рецепторов Toll/ИЛ 167.

Таким образом, в целом по характеру действия на сосудистый эндоте лий аФЛ как бы имитируют действие "провоспалительных" цитокинов (ИЛ 1, ФНО ), обладающих выраженной "прокоагулянтной" активнос тью (глава 6).

Наши результаты68 и данные других авторов69 свидетельствуют об уве личении уровня растворимых КМА (особенно рVCAM 1) у пациентов со вторичным и первичным АФС.

Нами обследовано 108 больных (40 мужчин и 68 женщин). Из них пациентов страдали первичным АФС, 52 пациента — СКВ с АФС. Кон центрацию растворимых (р) КМА (рЕ селектин, рР селектин, рICAM и рVCAM 1) определяли ИФМ с использованием коммерческих набо ров (R&D Systems, США) Верхняя граница нормы для рVCAM 1 соста вила 658,0 нг/мл, для рР селектина — 160,0 нг/мл, для рЕ селектина — 51,0 нг/мл, pICAM 1 — 369 нг/мл.

Результаты определения концентрации рКМА в сыворотке обследо ванных больных и доноров представлены в таблице 5.4.

Таблица 5.4. Средние уровни рКМА в группах больных и здоровых доноров Показатели Первичный АФС СКВ с АФС Доноры (n=26) (n=52) (n=30) рVCAM 1, нг/мл 1055±681* 1043±577* 589± рР селектин, нг/мл 130±68 144±72* 100± рЕ селектин, нг/мл 55,1±16,3* 49,2±19,6 37,3±12, pICAM 1, нг/мл 278±96 289±120 288± * p<0,05 по сравнению с донорами SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома Как видно из таблицы 5.4, средний уровень рVCAM 1 у пациентов с АФС был достоверно выше, чем у доноров. Концентрация рР селектина у пациентов СКВ с АФС была достоверно выше этого показателя у доно ров, а у пациентов с первичным АФС не отличалась от нормы. Напротив, уровень Е селектина был наиболее высоким у пациентов с первичным АФС. Концентрация pICAM 1 при АФС не отличалась от нормы. Не бы ло выявлено достоверных различий в уровне рКМА между больными первичным АФС и больными СКВ с АФС (p>0,05 во всех случаях).

У больных первичным АФС при наличии тромботических осложне ний уровень рVCAM 1 был достоверно выше (1071±684 нг/мл) по срав нению с больными без тромбозов (601±106 нг/мл) (таблица 5.5). Кон центрации рЕ селектина и pICAM 1 не различались, а уровень рР селек тина у больных с тромбозами был недостоверно выше, чем у больных без тромбозов (p>0,05).

Таблица 5.5. Уровни рКМА сыворотки крови у больных первичным АФС при наличии или отсутствии тромботических осложнений Показатели С тромбозами Без тромбозов р рVCAM 1, нг/мл 1124±709 (18)* 601±106 (13)* <0, рР селектин, нг/мл 140±66 (21)* 96±29 (34)* нд рЕ селектин, нг/мл 52±17 (13)* 44±16 (11)* нд pICAM 1, нг/мл 282±105 (9)* 285±65 (20)* нд * В скобках — число больных, у которых определяли уровень рКМА Уровень рVCAM 1 был связан с локализацией тромботических ос ложнений. Концентрация рVCAM 1 была наиболее высокой у больных с сочетанием артериальных и венозных тромбозов (1651±840 нг/мл) и с ве нозными тромбозами (1192±540 нг/мл). У больных с артериальными тромбозами концентрация рVCAM 1 была сопоставима с таковой у боль ных без тромбозов (754±580 нг/мл и 601±106 нг/мл соответственно).

В зависимости от длительности посттромботического периода боль ные с тромботическими осложнениями были разделены на две группы.

Была выявлена зависимость уровня рVCAM 1 от длительности пост тромботического периода. У больных с коротким посттромботическим SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром периодом (<6 месяцев) уровень рVCAM 1 составил 1430±755 нг/мл и был достоверно выше, чем у больных с длительным посттромботическим пе риодом (>6 месяцев), у которых концентрация рVCAM 1 составила 671±284 нг/мл, р<0,05 (рисунок 5.4).

ТФ — трансмембранный гликопротеин с молекулярным весом кДа, выполняющий роль рецептора для факторов VII и VIIa на анион ной фосфолипидной мембране клеток. Полагают, что ТФ играет важ ную роль в "патологической" гиперкоагуляции при сепсисе, злокачест венных новообразованиях, атеросклерозе70, а также АФС71, 72. Имеются данные о том, что аФЛ обладают способностью индуцировать экспрес сию ТФ в культуре ЭК73 75, а также усиливают синтез ТФ лейкоцитами76.

2 ГП I стимулирует синтез ТФ моноцитами, выделенными из крови пациентов с АФС, причем этот эффект зависит от присутствия CD4+Т лимфоцитов и требует экспрессии антигенов класса II ГКГ77. Примеча тельно, что аФЛ стимулированный синтез ТФ моноцитами ассоцииру ется со снижением уровня свободного белка S и увеличением концент < 6 месяцев > 6 месяцев Рисунок 5.4. Концентрация рVCAM 1 в сыворотке крови больных первич ным АФС в зависимости от длительности посттромботического периода SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома рации сывороточных маркеров гиперкоагуляции 78. В недавних иссле дованиях было показано, что а2 ГП I индуцированная экспрессия ТФ ЭК опосредуется NF kB75, 79. Кроме того, повышение активности ТФ при АФС может быть обусловлено тем, что аФЛ подавляют активность ингибитора ТФ80, 81.

Один из возможных механизмов "прокоагулянтной" активности аФЛ, возможно, имеющей особое значение для акушерской патологии, связан с аннексином V. Напомним, что аннексины — семейство белков, имеющих 4 повторяющихся гомологичных домена, каждый из которых состоит примерно из 70 аминокислотных остатков. Аннексин V — мощный антикоагулянт, активность которого обусловлена его высокой аффинностью к анионным ФЛ и способностью вытеснять факторы свертывания крови с поверхности фосфолипидных мембран82. Уста новлено, что аннексин V экспрессируется на трофобластах плаценты и ЭК, а антитела к аннексину V индуцируют прокоагулянтную актив ность ЭК. аФЛ обладают способностью снижать экспрессию аннекси на V на поверхности мембран, причем этот эффект зависит от присут ствия 2 ГП I83 86.

Другой важный механизм патогенеза АФС связан с нарушением ба ланса между синтезом простациклина (PGI ) и тромбоксана (TхA )87 89 в 2 сторону избыточного образования TхA2, обладающего "прокоагулянт ной" и "сосудосуживающей" активностью.

Наряду с увеличением TxA, в сыворотке пациентов с АФС с артери альными тромбозами наблюдается увеличение концентрации другого мощного вазоконстриктора и прокоагулянта — эндотелина 190. При этом моноклональные аФЛ индуцируют экспрессию иРНК препроэндотели на 1 в большей степени, чем контрольные антитела.

Взаимодействие моноцитов и ЭК играет ключевую роль в развитии тромбоза, воспаления и атеросклероза. Важный этап этого взаимодейст вия — локальное образование хемоаттрактантов, стимулирующих адге зию моноцитов к ЭК в зоне повреждения. Наиболее важный из них — моноцитарный хемоаттрактантный белок 1 (МХБ 1). Оказалось, что по ликлональные и моноклональные аФЛ индуцируют in vitro локальную продукцию МБХ 1 эндотелиоацитами, причем этот эффект зависит от SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром присутстия 2 ГП I91. У пациентов с СКВ отмечена корреляция между увеличением концентрации IgG аКЛ и МХБ 1, уровень которого сущест венно выше у пациентов с тромбозами, чем без тромбозов. Это свиде тельствует о том, что аФЛ индуцированный синтез МБХ 1 — важный механизм развития тромбозов при АФС.

Оксид азота (NO) регулирует многие физиологические процессы и принимает участие в развитии многих патологических состояний92, (глава 6). Поскольку NO является короткоживущей молекулой с пе риодом полураспада от 3 до 50 секунд93, его продукцию косвенно оце нивают по концентрации стабильных метаболитов (нитраты), уро вень которых отражает синтез и клиренс оксида азота. Мы обследова ли 27 пациентов с СКВ (в том числе 9 пациентов со вторичным АФС) и 14 больных с первичным АФС. Концентрация нитратов в сыворот ке крови определялась методом высокоэффективной жидкостной хроматограффии.

Средняя концентрация нитратов при СКВ составила 49,8±27, µмоль/л и была выше, чем при первичном АФС (33,7±14,7 µмоль/л), од нако различия были статистически не достоверны (p>0,05) (рисунок 5.5).

Примечательно, что у пациентов с тромбозом на момент обследования или более чем с двумя тромботическими осложнениями в анамнезе (п=7) уровень нитратов (41,2±15,8 µмоль/л) был достоверно выше, чем у паци ентов с двумя и менее тромбозами в анамнезе и/или с другими клиниче скими проявлениями АФС (25,4±7,5 µмоль/л, p<0,05). По нашему мне нию, увеличение концентрации нитратов у пациентов с АФС и тяжелы ми рецидивирующими тромбозами может отражать нарушение функции эндотелия (в первую очередь эндотелийзависимой вазодилатации), ха рактерное для этой патологии и, вероятно, связанное с окислительным стрессом (глава 6).

По данным Y.J. Shin и соавт.94, у больных СКВ с АФС концентрация нитратов была достоверно выше, чем у лиц без АФС (p<0,001), и корре лировала с концентрацией IgG аКЛ (p<0,001). Примечательно, что обра ботка культивированных ЭК моноклональными аКЛ ассоциировалась с дозозависимым увеличением синтеза NO, гиперэкспрессией иРНК iNOS и выработкой нитротирозина. Эти данные свидетельствуют о патогене SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома Первичный АФС СКВ Рисунок 5.5. Концентрация нитратов в плазме крови больных СКВ и первичным АФС тическом значении индуцированной аФЛ индукции синтеза NO в нару шении функции эндотелия при АФС.

Влияние на тромбоциты и эритроциты Тромбоцитопения является одним из частых проявлений АФС и раз вивается при моделировании АФС на лабораторных животных. При АФС наблюдается активация тромбоцитов95, аФЛ стимулируют агрега цию (при субоптимальной стимуляции агонистами)96, 97 и агглютина цию98 тромбоцитов. Косвенным подтверждением активации тромбоци тов при АФС является увеличение экскреции ТхА299, что соответствует полученным нами данным89. В других исследованиях было показано, что у пациентов с АФС возрастает экскреция TxB2, которая коррелирует с по вышением уровня фрагмента F1 2 протромбина и антигена фактора Вил лебранда100. Это может свидетельствовать о взаимосвязи между синтезом аФЛ, активацией тромбоцитов и ЭК при АФС. Кроме того, у пациентов NO SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром с первичным АФС наблюдается увеличение экспрессии CD36 на мембра не тромбоцитов и концентрации Р селектина в сыворотке крови101. In vitrо было показано, что активацию нормальных тромбоцитов102, 103 и уси ление синтеза TxA2104 вызывают только 2 ГП I зависимые аФЛ. Нако нец, имеются данные, что при АФС развитие тромбоцитопении связано с увеличением концентрации иммунных комплексов, состоящих из ГП I и а2 ГП I105.

В то же время нельзя исключить, что активация тромбоцитов связана не с аФЛ, а с действием антитромбоцитарных антител (реагируют с GP IIb IIIa или GP Ib IX V), которые часто обнаруживают при СКВ с тром боцитопенией, независимо от наличия или отсутствия в крови аФЛ100.

Однако, по данным экспериментальных исследований, аФЛ в опреде ленной степени имитируют активность тромбоцитарных агонистов (АДФ, тромбин), индуцируя экспрессию GPIIa/III на мембране тромбо цитов. Недавно был идентифицирован молекулярный механизм тромбо цитарной активации аФЛ, связанный с индукцией фосфорилирования митоген активированной протеинкиназы (р38 MAPK)106. В других иссле дованиях было показано, что у пациентов с АФС наблюдается увеличе ние концентрации в сыворотке антител к CD36107, 108. Напомним, что СD36 (гликопротеин IV) — мембранный антиген, экспрессирующийся на тромбоцитах и других клетках109, а антитела к CD36 вызывают актива цию тромбоцитов.

Развитие одного из гематологических проявлений АФС — "идиопати ческой" гемолитической анемии — связывают с синтезом 2 ГП I неза висимых аФЛ класса IgM, распознающих нейтральный фосфолипид — фосфатидилхолин.

Механизмы развития акушерской патологии Патогенетические механизмы акушерской патологии при АФС до конца не ясны и могут быть связаны не только с тромбогенной актив ностью аФЛ. Морфологические изменения, выявляемые в плаценте при АФС, не являются специфичными для этой патологии110. Одной из причин внутриутробной гибели плода может быть гипоксия, обус ловленная недостаточным утероплацентарным кровотоком вследст SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома вие тромбоза сосудов плаценты, а также нарушением имплатации эм бриона111.

Инфаркт плаценты может быть связан с аФЛ зависимым снижением экспрессии анексина V на поверхности плацентарных ворсинок85, 112, способностью аФЛ перекрестно реагировать с клетками трофобласта 113.

IgG фракция, выделенная из сыворотки, содержащей ВА, увеличивает синтез плацентарного TxA2, без компенсаторного увеличения продукции PGI. Этот механизм может иметь значение при развитии акушерской патологии во втором триместре беременности при АФС.

Полагают, что аФЛ обладают особым тропизмом к ткани плаценты — сильно связываются с микроворсинчатой поверхностью трофобласта и периваскулярными участками115. Одним из антигенов мишеней может быть отрицательно заряженный ФЛ фосфатидилсерин, который экс прессируется на поверхности клеток трофобласта в период дифферен цировки и инвазии116. В недавних исследованиях было показано, что in vitro аФЛ обладают способностью подавлять пролиферацию и диффе ренцировку трофобласта и стромальную децидуализацию117. При этом 2 ГП I, связываясь с фосфатидилсерином, может формировать эпитоп, с которым взаимодействуют аФЛ118. В других исследованиях было пока зано, что поликлональные аКЛ ингибируют синтез хорионического го надотропина119.

Недавно получены данные о важной роли аФЛ зависимой активации системы комплемента в развитии акушерской патологии при АФС120. На помним, что система комплемента, состоящая из более чем 30 белков, иг рает важную роль в развитии воспаления, иммунного ответа и аутоимму нитета121, а также фетальной толерантности. Хотя активированные ком поненты комплемента обнаруживают в нормальной плаценте, полагают, что при нормальной беременности активация комплемента находится под контролем регуляторных белков (DAF, MCP, CD59) на мембране тро фобласта. По данным экспериментальных исследований, у мышей с де фицитом белка Crry (аналога ингибитора классического и альтернативно го пути активации комплемента у человека) отмечается тяжелая акушер ская патология, приводящая к гибели эмбриона. J.E. Salmon и соавт.120 по казали, что у мышей с дефицитом Crry блокада активации комплемента с SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром помощью рекомбинантного Сrry Ig предотвращает гибель эмбриона. У мышей с дефицитом компонента комплемента С3 не удается индуциро вать акушерскую патологию при введении аФЛ. Более того, введение Crry Ig предотвращает развитие воспалительных изменений в плаценте, вызываемых аФЛ. В последующих исследованиях, выполненных той же группой авторов122, было установлено, что С5а и нейтрофилы являются основными медиаторами, вызывающими патологию плода при экспери ментальном АФС, индуцированном введением IgG аФЛ человека. При этом мАТ к С5а и пептиды, блокирующие взаимодействие С5а с С5а ре цепторами, предотвращали развитие акушерской патологии. По мнению авторов, индуцированное аФЛ поражение плода протекает в несколько этапов. Вначале аФЛ реагируют с клетками плаценты и вызывают актива цию комплемента по классическому пути, что в свою очередь приводит к образованию анафилотоксинов, в первую очередь С5а. С5а индуцирует активацию нейтрофилов, моноцитов и тромбоцитов, их накопление в зо не повреждения, высвобождение медиаторов воспаления, включая окис ленные формы кислорода, протеолитические ферменты, хемокины, ци токины, С3 компонент комплемента и пропердин. Секреция С3 и про пердина нейтрофилами, а также присутствие апоптозных и некротизиро ванных децидуальных клеток вызывают активацию альтернативного пу ти, тем самым усиливая реакции воспалительного каскада, в частности лейкоцитарную инфильтрацию и дополнительную активацию С3 и С5а.

При этом исходы индуцированного аФЛ повреждения плаценты — внут риутробная гибель или задержка роста плода — зависят от выраженности воспалительной реакции.

Совсем недавно было установлено, что провоспалительный цитокин ФНО является ведущим медиатором аФЛ зависимой активации ком племента. Оказалось, что у трансгенных С5+/С5+ мышей (в отличие от С5 /С5 мышей) на фоне введения аФЛ человека наблюдается выражен ное увеличение концентрации ФНО в плазме, ассоциирующееся с вы раженной экспрессией ФНО в зоне поражения плаценты. О роли ФНО свидетельствует и тот факт, что у трансгенных ФНО—/— мышей введение аФЛ не приводило к столь выраженной резорбции плода, как у ФНО+/+ мышей123.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома Механизмы поражения ЦНС Многие, хотя и далеко не все, типы поражения ЦНС (глава 6) можно объяснить "тромбогенным" действием аФЛ. Полагают, что аФЛ могут оказывать прямое повреждающее действие на нейрональные или глиаль ные клетки, приводя к нарушению их функции. Например, по данным K.H. Sun и соавт.124, аФЛ способны подавлять пролиферацию астроцитов в культуре клеток мозга мышей. В других исследованиях было показано, что при СКВ аКЛ сильно реагируют с миелином125. АФЛ, изолированные из сыворотки больных с АФС с судорожным синдромом, угнетают ток хлора в нейронах, действуя на рецепторы гамма аминобутириловой кис лоты126. Это позволяет предположить, что аФЛ обладают способностью напрямую снижать судорожный порог. Кроме того, аФЛ могут связы ваться с эпендимой и миелином фиксированных клеток головного мозга у кошек и крыс127, 128.

Антиэндотелиальные клеточные антитела Антиэндотелиальные клеточные антитела (АЭКА) — гетерогенная группа аутоантител, реагирующих с различными антигенами мембра ны ЭК 129, 130. Они реагируют с эндотелием за счет F(a)2 фрагмента и могут представлять собой иммуноглобулины классов IgG, IgM и IgA.

Предполагают, что АЭКА способны распознавать разные типы эндо телиальных антигенов131. АЭКА обнаруживают при очень многих за болеваниях, включая системные васкулиты, системные ревматичес кие заболевания, различные заболевания воспалительной природы и инфекциях131.

C высокой частотой АЭКА обнаруживаются при СКВ. При этом час тота выявления и уровень АЭКА коррелирует с активностью СКВ и раз витием волчаночного нефрита132 137.

Особенно большой интерес представляет тот факт, что антиэндотели альной активностью обладают а2 ГП I и характерный для СКВ сероло гический маркер — антитела к ДНК. Считают, что это обусловлено спо собностью соответствующих антител распознавать антигены, которые связываются с мембраной ЭК за счет своих адгезивных свойств или спе цифических рецепторных взаимодействий59, 138.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром Таким образом, аФЛ фактически представляют собой разновид ность АЭКА. Как уже отмечалось, поликлональные и моноклональные аФЛ и а ГП I могут не только связываться с ЭК, но и вызывать изме нения, характерные для "проадгезивного" фенотипа (экспрессия КМА), а также индуцировать секрецию "провоспалительных" цитоки нов (ИЛ 1b и ИЛ 6). В то же время следует подчеркнуть, что в сыворот ке больных СКВ и АФС присутствуют АЭКА, которые обладают спо собностью активировать ЭК, но не проявляют активность анти ДНК или аФЛ139 142.

Наши результаты143 146 и данные других авторов147 149 свидетельству ют о тесной связи между обнаружением аФЛ и АЭКА при АФС.

Мы обследовали 38 мужчин, страдающих СКВ, из них у 13 был диагностирован АФС143. Уровень АЭКА определяли иммунофер ментным методом с использованием эндотелиальной гибридомной клеточной линии Eahy 926. Результаты выражали в индексе связыва ния (и.с.) АЭКА были обнаружены у 24 (63,2%) из 38 больных. У больных с АЭКА отмечено достоверное увеличение среднего значения индекса активности SLAM (16,2±5,9) по сравнению с больными без АЭКА (12,2±5,9) (р<0,05). Отмечена корреляция между увеличением концен трации АЭКА и IgG аКЛ. Средний уровень АЭКА в группе больных, положительных по IgG аКЛ (более 19 ед. GPL), был достоверно выше, чем у больных, отрицательных по IgG аКЛ (менее 19 ед. GPL) (86,4 ± 68,5 и 39,0 ± 35,8, соответственно;

р<0,05). При анализе связи между гиперпродукцией АЭКА и клиническими проявлениями СКВ установ лено, что в группе больных с АЭКА достоверно чаше наблюдается по ражение почек, также отмечена тенденция к увеличению числа боль ных с АФС и поражением эндокарда. Наиболее высокий уровень АЭ КА был зарегистрирован у тех пациентов, у которых поражение почек сочеталось с АФС, а наиболее низкий — у больных без почечной пато логии и АФС (таблица 5.6). Средний уровень АЭКА во всех группах больных с поражением почек и/или АФС был достоверно выше, чем в группах больных без этих клинических проявлений (р<0,05 во всех случаях).

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома Таблица 5.6. Частота обнаружения и уровень АЭКА в зависимости от наличия нефрита и АФС Подгруппы больных n Число больных с АЭКА N%М± Нефрит+/АФС+ 4 4 100 142,6±96, Нефрит+/АФС— 10 9 90 61,3±31, Нефрит—/АФС+ 9 6 67 67,6±46, Нефрит—/АФС— 15 5 33 23,6±25, В другом исследовании уровень АЭКА определяли у 39 пациентов с синдромом Снеддона145. АЭКА обнаружили у 12 (31%) из 39 больных.

При сравнении клинических и некоторых лабораторных данных уста новлено, что у АЭКА положительных больных чаще, чем у АЭКА отри цательных, имелись признаки поражения почек (протеинурия, умерен ное повышение уровня креатинина) (у 50 и 8% больных соответственно, р<0,01), а также выявлялись ВА (у 67 и 30% больных соответственно, р<0,05) и аФЛ (аКЛ + ВА) (92 и 30% соответственно, р<0,01).

Особенно большой интерес представляют наши данные, касающиеся связи между АЭКА и поражением клапанов сердца, которое, как отмеча ется в главе 7, наряду с тромботическими нарушениями, является одним из наиболее характерных клинических признаков АФС. Нами обследо ван 31 больной с АФС (15 женщин и 16 мужчин), из них у 24 был вторич ный АФС на фоне СКВ и у 7 больных — первичный АФС146.

В целом увеличение уровня АЭКА (индекс связывания более 22%) было выявлено у 18 больных АФС (58,1%) из 31, в том числе у 17 (70,8%) из больных с вторичным АФС и у 5 (71,4%) из 7 больных с первичным АФС.

Как видно из таблицы 5.7, поражение клапанов сердца было обнаружено у 17 из 21 больного с АЭКА и только у 1 из 10 больных без АЭКА (р=0,0003).

Таблица 5.7. Поражение клапанов сердца у больных АФС с АЭКА в крови и без АЭКА Поражение клапанов АЭКА положительные АЭКА отрицательные (n=21) (n=10) Всего с поражением 1 7 клапанов SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром Поражение клапанов АЭКА положительные АЭКА отрицательные (n=21) (n=10) Митральный клапан Утолщение 5 Регургитация 13 Стеноз 1 Нет Вегетации 2 Нет Аортальный клапан Утолщение 4 Нет Регургитация 4 Нет Стеноз 2 Нет Вегетации 2 Нет Трехстворчатый клапан Утолщение 1 Нет Регургитация 3 Нет Стеноз 1 Нет Вегетации Нет Нет Всего без поражения клапанов 4 Среднее значение индексов связы вания АЭКА у больных с поражением клапанов было достоверно выше, чем у больных без поражения клапанов (р=0,03 по Mann—Witney) (рисунок 5.6).

Рисунок 5.6. Уровни АЭКА у больных АФС с поражением и без поражения клапанов сердца и у доноров По оси абсцисс — группы больных:

1 — больные АФС с поражением клапанов (n=18);

2 — больные АФС без поражения клапанов (n=13);

3 — доноры.

По оси ординат — уровень АЭКА (индекс связыва ния, в %).

Черные кружки — уровень АЭКА у отдельных боль 1 2 ных.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что синтез АЭ КА является одним из вероятных патогенетических факторов клапанной патологии при АФС. Гипотетическая схема патогенеза поражения клапа нов сердца при АФС представлена на рисунке 5.7.

Антифосфолипидные/антиэндотелиальные + 2 ГП Повреждение эндотелия внутри Поверхностное повреждение клапанных капилляров эндокарда клапанов Ламинарный и (или) веррукозный Внутрикапиллярный тромбоз поверхностный тромбоз Гистиоцитарно фибропластическая инфильтрация клапанов Очаговый фиброз и кальцификация клапанов Деформация клапанов (стеноз, недостаточность) Гемодинамические нарушения Системное повреждение эндотелия сосудов Рецидивирование системного сосудистого тромбоза Рисунок 5.7. Возможные патогенетические механизмы поражения клапа нов сердца при АФС (по R. Garcia Torress и соавт.149, в собственной модифи кации) SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром Роль антител к ламину В По данным ряда авторов, выявление ВА, тромбоцитопении, аКЛ Кумбс положительной гемолитической анемии и нейтропении ассоции руется с увеличением концентрации антител к ламину В1150, 151. В то же время, по данным J.L. Senecal и соавт.152, у ВА положительных пациентов с высокими титрами антител к ламину В1 в крови риск развития тромбо тических осложнений ниже, чем у пациентов без этих антител. Эти дан ные свидетельствуют об определенном протективном значении антител к ламину В1 у пациентов с АФС.

Роль С реактивного белка В настоящее время СРБ рассматривается не только как наиболее чув ствительный маркер субклинического воспаления сосудистой стенки, но и как возможный медиатор атеротромбоза (глава 6). Поэтому изучение связи между уровнем СРБ и клиническими проявлениями АФС пред ставляет особый интерес. Мы определяли уровень СРБ с помощью высо кочувствительного ИФМ у 44 пациентов мужского пола с СКВ153. При этом из анализа были исключены 6 пациентов, имевшие признаки ин теркуррентной инфекции. Как видно из таблицы 5.8, при СКВ увеличе ние концентрации СРБ коррелирует с развитием тромботических ослож нений (в первую очередь артериальных тромбозов) в рамках АФС, а так же с увеличением концентрации IgG аКЛ.

Таблица 5.8. Тромботические осложнения и уровень аФЛ у 38 больных СКВ без инфекционных осложнений в зависимости от уровня СРБ Показатели СРБ>15 мкг/мл СРБ<15 мкг/мл Р (п=9) (п=29) Тромбозы • Венозные 4 (44,4%) 4 (13,8%) <0, • Артериальные 4 (44,4%) 0 <0, • Всего 7 (77,8%) 4(13,8%) <0, IgG аКЛ • Высокопозитивный 5 (55,5%) 0 <0, • Умеренно /низкопозитивный 2 (22,2%) 10 нд АФС 7 (77,8%) 9 (31,0%) <0, SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома Эти данные позволяют рассматривать СРБ как маркер, а возможно, и медиатор развития тромбозов при АФС.

Клеточный иммунный ответ Анализ результатов, полученных в процессе изучения Т лимфо цитов154, антигенов HLA155, распределения IgG субклассов аФЛ156, V генов аКЛ157, свидетельствует о том, что синтез аФЛ контролируется Т лимфоцитами. Кроме того, по данным экспериментальных иссле дований, Т лимфоциты определяют возможность переноса АФС ре ципиентам при пересадке костного мозга от мышей с АФС158. Уста новлено также, что 2 ГП I индуцирует клеточный иммунный ответ лимфоцитов, выделенных из крови пациентов с АФС159 161. Иммун ный ответ является антигенспецифичным, СD4+ Т зависимым и связан с экспрессией HLA класса II на антигенпрезентирующих клетках. Это свидетельствует о том, что развитие АФС (как и атеро склероза) ассоциируется с Th1 типом иммунного ответа (2 ГП I за висимый синтез интерферона CD4+ Т лимфоцитами)159, в то вре мя как при СКВ без АФС преобладает Th2 тип иммунного ответа. По данным N. Hattori и соавт.160, CD4+ Т лимфоциты больных АФС специфически распознают антигенный пептид, локализующийся в IV/V доменах молекулы 2 ГП I. In vitro 2 ГП I стимулируют синтез а2 ГП I в культуре лимфоцитов, выделенных из крови 2 ГП I по ложительных пациентов.

Кроме того, было установлено, что у пациентов с АФС 2 ГП I сти мулирует секрецию ТФ моноцитами177. Ранее было показано, что имен но Th1 лимфоциты индуцируют секрецию ТФ моноцитами162, что час тично связано с синтезом интерферона. Предполагается, что синтез интерферона специфическими Т лимфоцитами, активированными 2 ГП I, может играть определенную роль в развитии акушерской пато логии при АФС. Известно, что при нормальной беременности преобла дает синтез Th2 цитокинов фетоплацентарной тканью (ИЛ 4, ИЛ 5 и ИЛ 10)163. Напротив, цитокины Тh1 типа (в первую очередь интерфе рон ) оказывают неблагоприятное влияние на развитие нормальной беременности164.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром Таким образом, аФЛ обладают мощной прокоагулянтной активнос тью, которая опосредуется их способностью воздействовать на ряд клю чевых механизмов, принимающих участие в регуляции свертывания кро ви. Однако конкретные точки приложения действия аФЛ при различных вариантах АФС и на разных этапах развития патологии изучены далеко не полностью. Дальнейшее изучение этой проблемы имеет важное значе ние для расшифровки патогенетических механизмов нарушений сверты вания крови и разработки новых подходов к профилактике и лечению тромботических нарушений при заболеваниях человека.

ЛИТЕРАТУРА 1. Насонов ЕЛ, Кобылянский АГ, Кузнецова 10. Matsuura E, Igarashi M, Fujimoto K, et al.

ТВ. и др. Современные представления о пато Anticardiolipin cofactor(s) and differential diag генезе антифосфолипидного синдрома. Клин. nosis of autoimmune disease. Lancet 1990;

336:

медицина,1998;

9: 9—14. 177—178.

2. Meroni PL, Riboldi P. Pathogenetic mecha 11. McNeil HP, Simpson RJ, Chesterman CN, nism mediating antiphospholipid syndrome. Curr Kliris SA. Anti phospholipid antibodies are direct Opin Rheumatology 2001;

13: 377—382. ed against a complex antigen that induces a lipid 3. Bermas BL, Schur PH. Pathogenesis of the binding inhibitor of coagulation: beta 2 glycopro antiphospholipid syndrome. UpToDay 2003;

tein I (apolipoprotein H). Proc Natl Acad Sci USA 11.2. 1990;

87: 4120—4124.

4. Rand JH. Molecular pathogenesis of the 12. Hunt JE, McNeil HP, Morgan GJ, Crameri antiphospholipid syndrome. Circ Res 2002;

90: RM, Krilis SA. A phospholipid beta 2 glycopro 29—37. tein I complex is an antigen for anticardiolipin 5. Sherer V, Shoenfeld Y. Antiphospholipid syn antibodies occurring in autoimmune disease but drome: insight from animal models. Curr Opin not with infection. Lupus 1992;

1: 75—81.

Haematol 2000;

7: 321—324. 13. Кузнецова ТВ, Тищенко ВА, Кобылян 6. Roubey RA. Immunology of the antiphospho ский АГ, Палькекева МЕ, Новиков АА, Ре lipid antibody syndrome. Arthritis Rheum 1996;

шетняк ТМ, Клюквина НГ, Насонов ЕЛ. За 39: 1444—1454. висимые от 2 гликопротеина I антитела к 7. Roubey RAS. Antiphosphilipid antibodies. In. кардиолиину при антифосфолипидном синд Vascular manifestations of systemic autoimmune роме. Терапевт. архив, 1999;

12: 41—44.

diseases. Ed. RA Asherson, R, Cervera, XRC 14. Polz E, Wurm H, Kostner GM. Inves Press 2001;

33—46. tigations on beta2 glycoprotein 1 in the rat: isi 8. Lieby P, Soley A, Levallois H, Hugel B, lation from serum and demonstration in lipopro Freyssinet JM, Cerutti M, Pasquali JL, Martin T. tein density fractions. J.Biochem. 1980;

11:

The clonal analysis of anticardiolipin antibodies 265—270.

in a single patient with primary antiphospholipid 15. Giles IP, Isenberg DA, Latchman DS, syndrome reveals an extreme antibody hetero Rahman A. How do antiphospholipid antibodies geneity. Blood 2001;

97: 3820—3828. bind to 2 glycoprotein I. Arthritis Rheum 2003;

9. Galli M, Comfurius H, Hemker M, et al. 48: 2111—2121.

Anticardiolipin antibodies directed not to cardi 16. Bouma B, de Groot PG, van den Elsen JM, olipin but to plasma protein cofactor. Lancet 1990;

Ravelli RB, Schouten A, Simmelink MJ, Derksen 335: 952—953. RH, Kroon J, Gros P. Adhesion mechanism of SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома human 2 glycoprotein I to phospholipids based 27. Borchman D, Harris EN, Pierangelli SS, on its crystal structure. EMBO J 1999;

18: 5166— Lamba OP. Interactions and molecular structure 5174. of cardiolipin and beta2 glycoprotein 1 (beta 17. Schwarzenbacher R, Zeth K, Diederichs K, GP1). Clin Exp. Immunol 1995;

102:37.

Gries A, Kostner GM, Laggner P, Prassl R. 28. Chonn A, Semple SC, Cullis PR. Crystal structure of human 2 glycoprotein I: Glycoprotein I is a major protein associated with implications for phospholipid binding and the very rapidly cleared liposomes in vivo, suggesting antiphospholipid syndrome. EMBO J 1999;

18: a significant role in the immune clearance of 6228—6239. "non self" particles. J Biol Chem 1995;

270:

18. Lutters BCH, de Droot P, Derksen RHWM. 25845—25849.

2 glycoprotein 1 — a key player in the antiphos 29. Manfredi AA, Rovere P, Galati G, Heltai S, pholipid syndrome. JMAJ 2002;

4 (Suppl): 958— Bozzolo E, Soldini L, Davoust J, Balestrieri G, 962. Tincani A, Sabbadini MG. Apoptotic cell clear 19. Hunt J, Krilis S. The fifth domain of beta2 ance in systemic lupus erythematosus, I: opsoniza glycoprotein I containes a phosphilipid binding tion by antiphospholipid antibodies. Arthritis site (cys281 cys288), and region recognised by anti Rheum 1998;

41: 205—214.

cardiolipin antibodies. J Immunol 1994;

152: 30. Merten M, Motamedy S, Ramamuthy S, et 653—659. al. Sulfatides. Targets for antiphospholipid anti 20. Kertesz Z, Yu B, Steinkasserer A, et al. bodies. Circulation 2003;

108: 2082—2087.

Characterization of binding of human beta2 gly 31. Cleve H. Genetic studies on the deficiency of coprotein I to cardiolipin. Biochem J 1995;

b2glycoprotein I of human serum. Humangenetik 310:315—321. 1968;

5: 294—304.

21. Wurm H. Beta2 glycoprotein I (apol 32. Yasuda S, Tsutsumi A, Chiba H, Yanai H, ipoprotein H) interactions with phospholipid vesi Miyoshi Y, Takeuchi R, Horita T, Atsumi T, cles. Int J Biochem 1984;

16: 511—515. Ichikawa K, Matsuura E, Koike T. 2 Glycopro 22. Kochl S, Fresser F, Lobentanz E, et al. tein I deficiency: prevalence, genetic background Novel interaction of apolipoprotein (a) with 2 and effects on plasma lipoprotein metabolism and glycoprotein I mediated by the kringle IV domain. hemostasis. Atherosclerosis 2000;

152: 337—346.

Blood 1997;

90: 1482—1489. 33. Bancsi LF, van der Linden IK, Bertina RM.

23. Rojkjaer R, Klaerke DA, Schousboe I. 2 Glycoprotein I deficiency and the risk of Characterisation of the interaction between 2 thrombosis. Thromb Haemost 1992;

67: 649— glycoprotein I and calmodulin, and identification 653.

of the binding sequence in 2 glycoprotein I. 34. Sheng Y, Reddel SW, Herzog H, Wang YX, Biochem Biophys, Acta Protein Struct Mol Brighton T, France MP, Robertson SA, Krilis SA.

Enzymol 1997;

1339: 217—225. Impaired thrombin generation in 2 glycoprotein 24. Ma K, Zhang J C. Wan K, et al. The bind I null mice. J Biol Chem 2001;

276: 13817— ing of 2 glycoprotein I (2 GPI) to endothelial 13821.

cells mediated through a high affinity interaction 35. Gharavi AE, Sammaritano LR, Wen J, with annexin II. Blood 1998;

92L;

172A. Elkon KB. Induction of antiphospholipid antibod 25. Chonn A, Semple SC, Cullis PR. 2 glyco ies by immunization with 2 glycoprotein I protein I is a major protein associated with very (apolipoprotein H). J Clin Invest 1992;

90:

rapidly cleared liposomes in vitro, suggesting a sig 1105—1109.

nificant role in the immune clerance of "non self" 36. Gharavi AE, Sammaritano LR, Bovastro particles J Biol Chem 1995;

270: 25845 25849. JL, Wilson WA. Specificities and characteristics 26. Balasubramanian K, Chandra J, Schroit of 2 glycoprotein I induced antiphpspholipid AJ. Immune clearance of phosphatidylserine antibodies. J Lab Clin Med 1995;

125: 775— expressing cells by phagocytes. The role of 2 gly 778.

coprotein I is macrophage recognition. J Biol 37. Reddel SW, Wang YX, Sheng YH, Krilis SA.

Chem 1997;

272: 31113—31117. Epitope studies with anti 2 glycoprotein I anti SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром bodies from autoantibody and immunized activated protein C. Blood 1998, 91: 1999— sources. J Autoimmun 2000;

15: 91—96. 2004.

38. McNeeley PA, Dlott JS, Furie RA, Jack 47. Male C, Mitchell L, Julian J, et al.

RM, Ortel TL, Triplett DA, Victoria EJ, Linnik Acquired activated protein C resistance is asso MD. 2 Glycoprotein I dependent anticardi ciated with lupus anticoagulants and thrombotic olipin antibodies preferentially bind the amino events in pediatric patients with systemic lupus terminal domain of 2 glycoprotein I. Thromb erythematosus. Blood 2001;

97: 844— 849.

Haemost 2001;

86: 590—595. 48. Ieko M, Sawada KI, Koike T, et al. The 39. Палькеева МЕ, Сидорова МВ, Кузнецо putative mechanism of thrombosis in antiphos ва ТВ, Кобылянский АГ, Тищенко ВА, Насо pholipid syndrome: impairment of the protein C нов ЕЛ, Беспалова ЖД, Евстигнеева РП. and the fibrinolytic systems by monoclonal anti Синтез и исследование антигенных свойств cardiolipin antibodies. Semin Thromb Hemost пептидных фрагментов бета2 гликопротеи 1999;

25: 503— 507.

на I. Биоорганическая химия, 1996;

9: 678— 49. Esmon CT. The anticoagulant and anti 685. inflammatory roles of the protein C anticoagulant 40. Roubey RAS, Eisenberg RA, Harper MF, pathway. J Autoimmun 2000;

15: 113—116.

Winfield JB. "Anticardiolipin" antibodies recog 50. Ames PR, Tommasino C, Iannaccone L, nize 2 glycoprotein I in the absence of phospho Brillante M, Cimino R, Brancaccio V. Coagu lipid. Importance of antigen density and bivalent lation activation and fibrinolytic imbalance in binding. J Immunol 1995;

154: 954—960. subjects with idiopathic antiphospholipid antibod 41. Tincani A, Spatola L, Pratt E, et al. The ies a crucial role for acquired free protein S defi anti 2 glycoprotein I activity in human anti ciency. Thromb Haemost 1996;

76: 190—194.

phospholipid syndrome sera is due to monoreac 51. Crowther MA, Johnston M, Weitz J, tive low affinity autoantibodies directed to epitope Ginsberg JS. Free protein S deficiency may be located on native 2 glycoprotein I and preserved found in patients with antiphospholipid antibodies during species evolution. J Immunol 1996;

157: who do not have systemic lupus erythematosus.

5732—5738. Thromb Haemost 1996;

76: 689—691.

42. Amengual O, Atsumi T, Koike T. Specifici 52. Shibata S, Harpel PC, Gharavi A, Rand J, ties, properties, and clinical significance of anti Fillit H. Autoantibodies to heparin from patients prothrombin antibodies. Arthritis Rheum 2003;

with antiphospholipid antibody syndrome inhibit 48: 886—895. formation of antithrombin III thrombin complex 43. de Groot PG, Derksen RHWM. The influ es. Blood 1994;

83: 2532—2540.

ence of antiphospholipid antibodies on the protein 53. Schousboe I, Rasmussen MS. Synchro C pathway. In Hughes Syndrome, Antiphospho nized inhibition of the phospholipid mediated lipid Syndrome. Edited by Khamashta MA. autoactivation of factor XII in plasma by London: Springer—Verlag;

2000;

307—316. beta2 glycoprotein I and anti beta2 glycopro 44. Dahlback B. Physiological anticoagulation: tein I. Thromb Haemost 1995;

73: 798—804.

resistance to activated protein C and venous 54. Jones DW, Gallimor MJ, MacKie IJ, et al.

thromboembolism. J Clin Invest 1994;

94: 923— Reduced factor XII levels in patients with the 927. antiphospholipid syndrome are associated with 45. Koike T, Hughes GRV. Binding of anticar antibodies to factor XII. Br J Haematol 2000;

diolipin antibodies to protein C via beta 2 glyco 110: 721— 726.

protein I: a possible mechanism in inhibitory 55. Sugi T, Makino T: Plasma contact system, effect of antiphospholipid antibodies on the pro kallikrein/kinin system and antiphospholipid tein C system. Clin Exp Immunol 1998, 112: protein antibodies in thrombosis and pregnancy. J 325—333. Reprod Immunol 2000;

47: 169— 184.

46. Galli M, Ruggeri L, Barbui T. Differential 56. Dueymes M, Levy Y, Ziporen L, Jamin C, effects of anti beta 2 glycoprotein I and anti pro Piette JC, Shoenfeld Y, Youinou P. Do some thrombin antibody on the anticoagulant activity of antiphospholipid antibodies target endothelial SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома cells? Ann Med Interne (Paris). 1996;

147 66. Meroni PL, Raschi E, Testoni C, et al.

(Suppl 1): 22—23. Statins prevent endothelial cell activation induced 57. Matsuda J, Gotoh M, Gohchi K, Kawasugi by anti phospholipid (anti 2 glycoprotein I) K, Tsukamoto M, Saitoh N. Anti endothelial cell antibodies: effect on the pro adhesive and proin antibodies to the endothelial hybridoma cell line flammatory phenotype. Arthritis Rheum 2001;

44:

(EAhy926) in systemic lupus erythematosus 2870—2878.

patients with antiphospholipid antibodies. Br J 67. Raschi E, Testoni C, Bosisio D, et al. Role Haematol 1997;

97: 227—232. of the MyD88 transduction signaling pathway in 58. Navarro M, Cervera R, Teixido M, Reverter endothelial activation by antiphospholipid anti JC, Font J, Lopez Soto A, Monteagudo J, Escolar bodies. Blood 2003;

101: 3495—3500.

G, Ingelmo M. Antibodies to endothelial cells and 68. Александрова ЕН, Новиков АА., Решет to 2 glycoprotein I in the antiphospholipid syn няк ТМ, Клюквина НГ, Решетняк ДВ, Самсо drome: prevalence and isotype distribution. Br J нов МЮ, Насонов ЕЛ. Растворимые молеку Rheumatol 1996;

35: 523—528. лы адгезии при антифосфолипидном синдро 59. Le Tonqueze M, Salozhin K, Dueyems M, ме, связанном с системной красной волчан Nasonov E, Piette J C, Youinou P. Role of 2 gly кой, и первичном антифосфолипидном синд coprote in the antiphospholipid antibody binding to роме. Терапевт. архив, 2002;

5;

23—27.

endothelial cells. Lupus, 1995;

7: 179—186. 69. Kaplanski G, Cacoub P, Farnarier C, et al.

60. Meroni PL, Raschi E, Camera M, Testoni Increased soluble vascular cell adhesion molecule C, Nicoletti F, Tincani A, Khamashta MA, 1 concentrations in patients with primary or sys Balestrieri G, Tremoli E, Hess DC. Endothelial temic lupus erythematosus related antiphospho activation by aPL: a potential pathogenetic mech lipid syndrome: correlations with the severity of anism for the clinical manifestations of the syn thrombosis. Arthritis Rheum 2000;

43: 55— 64.

drome. J Autoimmun. 2000;

15: 237—240. 70. Penn MS, Topol EJ. Tissue factor, the 61. Keying M, Simantov R, Jing Chuan Z, et emerging link between inflammation, thrombo al. High affinity binding of 2 glycoprotein I to sis, and vascular remodeling. Circ Res 2001;

human endothelial cells is mediated by Annexin 89:1—2.

II. J Biol Chem 2000;

20: 15541— 15548. 71. Dobado Berrios F M, Lopez Pedrera C, 62. Afek A, Shoenfeld Y, Manor R, et al. Velasco F, Cuadrado M J. The role of tissue fac Increased endothelial cell expression of tor in the antiphospholipid syndrome. Arthritis alpha3beta1 integrin in cardiac valvulopathy in Rheum 2001;

44: 2467—2476.

primary (Hughes) and secondary antiphospho 72. Amengual O, Atsumi T, Khamashta MA.

lipid syndrome. Lupus 1999;

8: 502— 507. Tissue factor in the antiphospholipid syndrome:

63. Pierangeli SS, Colden Stanfield M, Liu X, shifting the focus from coagulation to endotheli et al. Antiphospholipid antibodies from antiphos um. Rheumatology 2003;

43: 1—3.

pholipid syndrome patients activate endothelial 73. Branch DW, Rodgers GM. Induction of cells in vitro and in vivo. Circulation 1999;

99: endothelial cell tissue factor activity by sera from 1997— 2002. patients with antiphospholipid syndrome: a possi 64. Pierangeli SS, Espinola RG, Liu X, et al. ble mechanism of thrombosis. Am J Obstet Thrombogenic effects of antiphospholipid anti Gynecol 1993;

168: 206—210.

bodies are mediated by intercellular cell adhesion 74. Kornberg A, Renaudineau Y, Blank M, molecule 1, vascular cell adhesion molecule 1, Youinou P, Shoenfeld Y. Anti 2 glycoprotein I and P selectin. Circ Res 2001;

88: 245— 250. antibodies and anti endothelial cell antibodies 65. Del Papa N, Sheng YH, Raschi E, et al. induce tissue factor in endothelial cells. Isr Med Human 2 glycoprotein I binds to endothelial Assoc J 2000;

2 (Suppl 1): 27—31.

cells through a cluster of lysine residues that are 75. Cuadrado MJ, Buendia P, Lopez Pedrera critical for anionic phospholipid binding and C, et al. Increased tissue factor expression in offers epitopes for anti 2glycoprotein I antibod monocytes from patients with antiphospholipid ies. J Immunol 1998;

160: 5572— 5578. syndrome depens on NFkB activation.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром ACR/ARHP Annual Acientific Meeting 2003;

84. Rand JH, Wu XX, Guller S, Scher J, Andree October 24—28, 322 (abst). HAM, Lockwood CJ. Antiphospholipid immuno 76. Martini F, Farsi A, Gori AM, Boddi M, Fedi globulin G antibodies reduce annexin V levels on S, Domeneghetti MP, Passaleva A, Prisco D, syncytiotrophoblast apical membranes and in cul Abbate R. Antiphospholipid antibodies (aPL) ture media of placental villi. Am J Obstet Gynecol increase the potential monocyte procoagulant 1997;

177: 918—923.

activity in patients with systemic lupus erythe 85. Vogt E, Ng AK, Rote NS. Antiphos matosus. Lupus 1996;

5: 206—211. phatidylserine antibody removes annexin V and 77. Visvanathan S, Geczy CL, Harmer JA, facilitates the binding of prothrombin at the sur McNeil HP. Monocyte tissue factor induction by face of a choriocarcinoma model of trophoblast activation of 2 glycoprotein I specific T lym differentiation. Am J Obstet Gynecol 1997;

177:

phocytes is associated with thrombosis and fetal 964—972.

loss in patients with antiphospholipid antibodies. J 86. Rand JH, Wu XX, Andree HAM, Alexander Immunol. 2000;

165: 2258—2262. Ross JB, Rosinova E, Gascon Lema MG, 78. Reverter JC, Tassies D, Font J, Monteagudo Calandri C, Harpel PC. Antiphospholipid anti J, Escolar G, Ingelmo M, Ordinas A. Hypercoa bodies accelerate plasma coagulation by inhibit gulable state in patients with antiphospholipid ing annexin V binding to phospholipids: a "lupus syndrome is related to high induced tissue factor procoagulant" phenomenon. Blood. 1998;

92:

expression on monocytes and to low free protein s. 1652—1660.

Arterioscler Thromb Vasc Biol 1996;

16: 1319— 87. Carreras L, Forastiero R, Martinuzzo M:

1326. Interaction between antiphospholipid antibodies 79. Dunoyer Geindre S, De Moerloose P, Galve and eicosanoids. In Hughes Syndrome, Antiphos De Rochemonteix B, et al. NF kB is an essential pholipid Syndrome. Edited by Khamashta MA.

intermediate in the activation of endothelial cells by London: Springer—Verlag;

2000: 337—347.

anti beta2 glycoprotein I antibodies. Thromb 88. Lellouche F, Martinuzzo M, Said P, Maclouf Haemost 2002;

88: 851—857. J, Carreras LO. Imbalance of thromboxane/ 80. Salemink I, Blezer R, Willems GM, Galli prostacyclin biosynthesis in patients with lupus anti M, Bevers E, Lindhout T. Antibodies to 2 glyco coagulant. Blood 1991;

78: 2894—2899.

protein I associated with antiphospholipid syn 89. Алекберова ЗС, Решетняк ТМ, Насонов drome suppress the inhibitory activity of tissue ЕЛ и др. Уровни тромбоксана и простацикли factor pathway inhibitor. Thromb Haemost 2000;

на у больных системной красной волчанкой с 84: 653—656. антифосфолипидным синдромом. Клин. меди 81. Adams MJ, Donohoe S, Mackie IJ, цина, 1994;

6: 31—35.

Machin SJ. Anti tissue factor pathway inhibitor 90. Atsumi T, Khamashta MA, Haworth RS, activity in patients with primary antiphospho Brooks G, Amengual O, Ichikawa K, Koike T, lipid syndrome. Br J Haematol 2001;

114: 375— Hughes GR. Arterial disease and thrombosis in 379. the antiphospholipid syndrome: a pathogenic role 82. Andree HAM, Hermens WT, Hemker HC, for endothelin 1. Arthritis Rheum 1998;

41: 800— Willems GM. Displacement of factor Va by 807.

annexin V. In: Andree HAM, ed. Phospholipid 91. Cho C S, Cho M L, Chen PP, et al.

Binding and Anticoagulant Action of Annexin V. Antiphospholipid antibodies induce monocyte Maastricht, The Netherlands: Universitaire Pers chemoattractant protein 1 in endothelial cells. J Maastricht 1992: 73—85. Immunol 2002;

168: 4209—4215.

83. Rand JH, Wu XX, Guller S, Gil J, Guha A, 92. Clancy RM, Amin AR, Abramson SB. The Scher J, Lockwood CJ. Reduction of annexin V role of nitric oxide in inflammation and immuni (placental anticoagulant protein I) on placental ty. Arthritis Rheum 1998;

41: 1141—1151.

villi of women with antiphospholipid antibodies 93. Кобылянский АГ, Кузнецова ТВ, Соболе and recurrent spontaneous abortion. Am J Obstet ва ГН и др. Определение оксида азота в сыво Gynecol 1994;

171: 1566—1572. ротке и плазме крови человека. Метод высо SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома коэффективной жидкостной хроматограф expression on monocytes. Arthritis Rheum 1998;

фии. Биомедицинская химия, 2003;

6 с. 41: 1420—1427.

94. Shin Y J, Min S Y, Cho M L, et al. 103. Lackner KJ, von Landenberg C, Barlage Enhanced nitric oxide production in endothelial S, et al. Analysis of prothrombotic effects of two cells by antiphospholipid antibodies. ACR/ARHP human monoclonal IgG antiphospholipid anti Annual Acientific Meeting, 2003, October 24— bodies of apparently similar specificity. Thromb 28;

320 (abst). Haemost 2000;

83: 583— 588.

95. Emmi L, Bergamini C, Spinelli A, Liotta F, 104. Robbins DL, Leung S, Miller Blair DJ, et Marchione T, Caldini A, Fanelli A, De Cristo al. Effect of anticardiolipin/beta2 glycoprotein I faro MT, Dal Pozzo G. Possible pathogenetic role complexes on production of thromboxane A2 by of activated platelets in the primary antiphospho platelets from patients with the antiphospholipid lipid syndrome involving the central nervous sys syndrome. J Rheumatol 1998;

25: 51—56.

tem. Ann N Y Acad Sci 1997;

823: 188—200. 105. George J, Gilburd B, Langevitz P, et al.

96. Campbell AL, Pierangeli SS, Wellhausen S, Beta 2 glycoprotein I containing immune com Harris EN. Comparison of the effects of anticar plexes in lupus patients: association with throm diolipin antibodies from patients with the bocytopenia and lipoprotein (a) levels. Lupus antiphospholipid syndrome and with syphilis on 1999;

8: 116—120.

platelet activation and aggregation. Thromb 106. Vega Ostertag M, Harris EN, Pierangeli Haemost 1995;

73: 529—534. SS, et al. Phosphorilation of P38MAPK is invol 97. Nojima J, Suehisa E, Kuratsune H, Machii ved in antiphospholipid antibody mediated T, Koike T, Kitani T, Kanakura Y, Amino N. platelet activation. ACR/ARHP Annual Acientific Platelet activation induced by combined effects of Meeting, October, 2003;

24—28;

318 (abst).

anticardiolipin and lupus anticoagulant IgG anti 107. Rock G, Chauhan K, Jamieson GA, et al.

bodies in patients with systemic lupus erythemato Anti CD36 antibodies in patients with lupus anti sus possible association with thrombotic and coagulant and thrombotic complications. Br J thrombocytopenic complications. Thromb Hae Haematol 1994;

88: 878—880.

most 1999;

81: 436—441. 108. Pelegri Y, Cerrato G, Martinuzzo LO, et 98. Wiener MH, Burke M, Fried M, Yust I. al. Link between anti CD36 antibodies and Thromboagglutination by anticardiolipin anti thrombosis in the antiphosphilipid syndrome. Clin body complex in the antiphospholipid syndrome. a Exp Rheumatol 2003;

21: 221—224.

possible mechanism of immune mediated throm 109. Daviet L, McGregor JL. Vascular biology bosis. Thromb Res 2001;

103: 193—199. of CD36: roles of this new adhesion molecule 99. Ferro D, Basili S, Roccaforte S, et al. Deter fanily in different disease states. Thromb Haemost minants of enhanced thromboxane biosynthesis in 1997;

78: 65—69.

patients with systemic lupus erythematosus, 110. Stone S, Khamashta MA, Poston L. Pla Arthritis Rheum 1999;

42: 2689—2697. centation, antiphospholipid syndrome and preg 100. Reverter JC, Tassies D. Mechanisms of nancy outcome. Lupus 2001;

10: 67—74.

thrombosis in the antiphospholipid syndrome: 111. Sthoeger ZM, Mozes E, Tartakovsky B.

binding to platelets. In Hughes Syndrome, Anti cardiolipin antibodies induce pregnancy Antiphospholipid Syndrome. Edited by Khamash failure by impairing embryonic implantation.

ta MA. London: Springer—Verlag;

2000: 290— Proc Natl Acad Sci USA 1993;

90: 6464—6467.

298. 112. Rand JH, Wu X X, Andree HAM, et al.

101. Joseph JE, Harrison P, Mackie IJ, et al. Pregnancy loss in the antiphospholipid antibody Platelet activation markers and the primary syndrome a possible thrombogenic mechanism.

antiphospholipid syndrome (PAPS). Lupus 1998;

New Engl J Med 1997;

337:154—160.

7 (Suppl 2): S48— S51. 113. McCrae KR, DeMichele AM, Pandhi P, et 102. Reverter JC, Tassies D, Font J, et al.: Ef al. Detection of antitrophoblast antibodies in the fects of human monoclonal anticardiolipin anti sera of patients with anticardiolipin antibodies bodies on platelet function and on tissue factor and fetal loss. Blood 1993;

82: 2730—2741.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром 114. Peacemn AM, Rehnberg KA. The effect of 125. Khalili A, Cooper RC. A study of immune immunoglobulin G fraction from patients with responses to myelin and cardiolipin in patients lupus anticoagulant on placental prostacyclin and with systemic lupus erythematosus (SLE). Clin thromboxane production. Am J Obstet Gynecol Exp Immunol 1991;

85: 365—72.

1995;

199: 1403—1406. 126. Liou HH, Wang CR, Chou HC et al.

115. Donohoe S, Kingdom JCP, Mackie IJ: Anticardiolipin antisera from lupus patients with Affinity purified human antiphospholipid anti seizures reduce a GABA receptor—mediated chlo bodies bind normal term placenta. Lupus 1999;

8: ride current in snail neurons. Life Sci 1994;

54:

525—531. 1119—25.

116. Rote NS, Vogt E, DeVere G, et al. The role 127. Kent M, Alvarez F, Vogt E, Fyffe R, Ng of placental trophoblast in the pathophysiology of AK, Rote N. Monoclonal antiphosphatidylserine the antiphospholipid antibody syndrome. Am J antibodies react directly with feline and murine Reprod Immunol 1998, 39: 125—136. central nervous system. J Rheumatol 1997;

24:

117. Chamley LW, Duncalf AM, Mitchell MD, 1725—33.

et al. Action of anticardiolipin and antibodies to 128. Kent MN, Alvarez FJ, Ng AK, Rote NS.

beta 2 glycoprotein I on trophoblast proliferation Ultrastructural localization of monoclonal as a mechanism for fetal death. Lancet 1998;

antiphospholipid antibody binding to rat brain.

352: 1037—1038. Exp Neurol 2000;

163: 173—9.

118. Di Simone N, Meroni PL, Del Papa N, et 129. D`Cruz D, Hughes G. Antiendothelial cell al. Antiphospholipid antibodies affect trophoblast antibodies, antiphospholipid antibodies and vas gonadotrophin secretion and invasiveness by cular disease. Vasculitis Science and practice. B binding directly and through adhered beta 2 gly Ansell, P Bacon, J Lie, H Yazici (eds). Chapmam coprotein I. Arthritis Rheum 2000;

43: 140—153. & Hall Medical 1996;

65—82.

119. Shurtz SR, et al. In vitro effects of anticar 130. Насонов ЕЛ, Баранов АА, Шилкина diolipin autoantibodies upon total and pulsatile НП. Васкулиты и васкулопатии. Яро placental hCG secretion during early pregnancy. славль: Издательство "Верхняя Волга", Am J Reptoduct Immunol 1993;

29: 206—210. 1999;

613 с.

120. Salmon JE, Girardi G, Holers VM. 131. Praprotnic S, Blank M, Meroni PL, et al.

Complement activation as a mediator of antiphos Classification of anti endothelial cell antibodies pholipid antibody induced pregnancy loss and into antibodies against microvascular and thrombosis. Ann Rheum Dis 2002;

61: (Suppl II): macrovascular endothelial cells. Arthritis Rheum ii46—ii50. 2001;

44: 1483—1494.

121. Atkinson JP. Complement system on the 132. D`Cruz D, Houssiau FA., Ramirez G, et al.

attack in autoimmunity. J Clin Invest 2003;

112: Antibodies to endothelial cells in systemic lupus 1639—1641. erythematosus: a potential marker for nephritis 122. Girardi G, Berman J, Redecha P, et al. and vasculitis. Clin Exp Immunol 1991;

85:

Complement C5a receptors and neutrophil medi 254—261.

ated fetal injury in the antiphospholipid syn 133. Navarro M, Cervera R, Font J, et al. Anti drome. J Clin Invest 2003;

112: 1644—1654. endothelial antibodies in systemic autoimmune 123. Berman J, Girardi G, Salmon JE, et al. diseases: prevalence and clinical significance.

Tumor necrosis factor is an important effector Lupus 1997;

6: 521—526.

in antiphospholipid induced pregnancy loss in 134. Nylander Lundqvist E, Back O, Nillsson mice. ACR/ARHP Annual Acientific Meeting, TK, Rantapaa Dahlqvist S. Prevalence of anti October, 2003, 24—28;

1115 (abst). endothelial antibodies in patients with autoimmune 124. Sun KH, Liu WT, Tsai CY, Liao TS, Lin disease. Clin Rheumatol 1992;

11: 248—263.

WM, Yu CL. Inhibition of astrocyte proliferation 135. Van der Zee JM, Siegert CE, de Vreede and binding to brain tissue of anticardiolipin anti TA, et al. Characterisation of anti endothelial bodies purified from lupus serum. Ann Rheum Dis cell antibodies in systemic lupus erythematosus 1992;

51: 707—12. (SLE). Clin Exp Immunol 1991;

84:238—244.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 5. Патогенетические механизмы антифосфолипидного синдрома 136. Perry GJ, Elston T, Khouri NA, et al. Anti янович ЛЗ. Антитела к эндотелию при синд endothelial cell antibodies in lupus: correlation роме Снеддона. Терапевт. архив, 1996;

1:

with renal injury anf circulating marker of 54—57.

endothelial damage. Q J Med 1993;

86: 727—734. 145. Frances G, Le Tonqueze M, Salozhin K, 137. Chan TM, Yu PM, Tsang LC, Cheng IKP. Kalasdhnikova L, Piette J C, Nasonov EL, Endothelial cell binding by human polyclonal Godeau P, Youinou P. Prevalence of anti anti DNA antibodies: relationship to disease endothelial cell antibodies in patients with activity and endothelial function alteration. Clin Sneddon`s syndrome. J Amer Acad Dermatol Exp Immunol 1995;

100: 506—513. 1995;

33: 64—68.

138. Del Papa N, Guidali L, Spatola L, et al. 146. Насонов ЕЛ, Саложин КВ, Фомичева Relationship between anti phospholipid and ОА, Клюквина НГ, Карпов ЮА, Вильчинская antiendothelial vell antibodies III: beta 2 glyco МЮ, Александрова ЕН, Алекберова ЗС, Ба protein I mediates the antibody binding to ранов АА, Сергакова ЛМ. Антиэндотелиаль endothelial membranes and induce the expression ные антитела и поражение клапанов сердца of adhesion molecules. Clin Exp Rheumatol 1995;

при антифосфолипидном синдроме: анализ 13: 179—185. патогенетических механизмов. Клин. меди 139. Garvalho D, Savage COS, Isenberg D, цина, 1997;

2: 17—21.

Pearson JD. IgG anti endothelial cell autoanti 147. Cervera R, Khamashta MA, Font J, et al.

bodies from patients with systemic lupus erythe Antiendothelial cell antibodies in patients with the matosus or systemic vasculitis stimulate the antiphospholipid syndrome. Autoimmunity 1991;

release of two endothelial cell derived mediators, 11: 1—6.

which enhance adhesion molecule expression and 148. Walker TS, Triplett DA, Javed N, et al.

leukocyte adhesion in an autocrine manner. Evaluation of lupus anticoagulants: antiphospho Arthritis Rheum 1999;

42: 631—640. lipid antibodies, endothelium associated im 140. McGrae KR, de Michele A, Samuels P, et munoglobulin in patients with anti phospholipid al. Detection of endothelial cell reactive antibodies Thromb Res 1988;

51: 595—605.

immunoglobulin in patients with anti phospholipid 149. Garcia Torress R, Amogo M C, de la antibodies. Br J Heamatol 1991;

79: 595—605. Rossa A, Reyes PA. Valvular heart disease in 141. Del Papa N, Raschini E, Moroni G, et al. primary antiphospholipid syndrome (PAPS):

Anti endothelial cell IgG fraction from sysyemic clinical and morphological findings. Lupus lupus erythematosus patients bind to human 1996;

5: 56—61.

endothelial cell and induce a pro adhesive and 150. Guilly MN, Danon F, Brouet JC, et al.

pro inflammatory phenotype in vitro. Lupus Autoantibodies to nuclear lamin B in patients with 1999;

8: 423—429. thrombocytopenia. Eur J Cell Biol 1987;

43:

142. Hill MB, Philips JL, Hughes P, Greaves 266—272.

M. Anti endothelial cell antibodies in primary 151. Lassoued K, Guilly MN, Danon F, et al.

antiphospholipid syndrome and SLE: pattern of Antinuclear autoantibodies specific for lamins:

reactivity with membrane antigens on microvas characterization and clinical significance. Ann cular and umbilical venous cell membranes. Br J Intern Med 1988;

108: 829—833.

Haematol. 1998;

103: 416—421. 152. Senecal J L, Rauch J, Grodzicky T, et al.

143. Насонов ЕЛ, Алекберова ЗС, Саложин Strong association of autoantibodies to human КВ, Клюквина НГ, Александрова ЕН, Баранов nuclear lamin B1 with lupus anticoagulant anti АА, Ле Тонкез М, Юну П. Антиэндотелиаль bodies in systemic lupus erythematosus Arthritis ные антитела при системной красной вол Rheum 1999;

42: 1347—1353.

чанке у мужчин: связь с поражением почек и 153. Клюквина НГ, Баранов ЕЛ, Александ антифосфолипидным синдромом. Терапевт. рова ЕН, Насонов ЕЛ. С реактивный белок архив, 1996;

6: 46—49. при системной красной волчанке у мужчин:

144. Калашникова ЛА, Саложин КВ, Насо связь с тромботическими осложнениями.

нов ЕЛ, Кошелева НМ, Решетняк ТМ, Сто Клин. медицина, 1997;

8: 24—26.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром 154. Papo T, Piette J C, Legao E, et al. T lym antiphospholipid syndrome. J Immunol 1999;

phocytes subsets in primary antiphospholipid syn 162: 6919—6925.

drome. J Rheumatol 1994;

21: 2242—2245. 160. Hattori N, Kuwana M, Kabukai J, et al. T 155. Arnett FC, Olsen ML, Anderson KL, cell that are autoreactive to 2 glycoprotein I in Reveille JD. Molecular analysis of major histo patients with antiphospholipid syndrome and compatibility complex alleles associated with the healthy individuals. Arthritis Rheum 2000;

43:

lupus anticoagulant. J Clin Invest 191;

87: 65—75.

1490—1495. 161. Davies ML, Young SP, Welsh K, et al.

156. Loizou S, Cofiner C., Weetman AP, Immune responses to native 2 glycoproteim I in Walport MJ. Immunoglobulin class and IgG sub patients with systemic lupus erythematosus and class distribution of anticardiolipin antibodies in the antiphospholipid syndrome. Rheumatology patients with systemic lupus erythematosus and 2002;

41: 395—400.

associated disorders. Clin Exp Immunol 1992;

162. Del Prete G, De Carli M, Lammel RM, et 90: 434—439. al. Th1 and Th2 T helper cells exert opposite reg 157. Kita Y, Sumida T, Iwamoto I, et al. V gene ulatory effects on procoagulant activity and tissue analysis of anti cardiolipin antibodies from factor production by monocytes. Blood 1995;

(NZWXBXSB) F1 mice. Immunology 1994;

82: (abst).

494—501. 163. Wegmann TG, Lin H, Guilbert L, Mos 158. Blank M, Krause I., Lanir N, et al. mann TR. Bidirectional cytokine interactions in Transfer of experimental antiphоspholipid syn the maternal fetal relationship: is successful preg drome by bone marrow cell transplantation: the nancy a TH2 phenomenon? Immunol Today importance of the T cell. Arthritis Rheum 1995;

1993;

13: 353.

38: 115—122. 164. Raghupathy R. Th1 type immunity is 159. Visvanathan S, McNeil HP. Cellular incompatible with successful pregnancy. Immunol immunity to 2 glycoprotein I in patients with Today 1997;

18: 478.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page глава И М М У Н Н Ы Е М Е Х А Н И З М Ы И М М У Н Н Ы Е М Е Х А Н И З М Ы А Т Е Р О С К Л Е Р О З А А Т Е Р О С К Л Е Р О З А В последние годы благодаря успехам фундаментальной биологии и ме дицины созданы реальные предпосылки для расшифровки механизмов иммунопатологических процессов, запускающих и поддерживающих хроническое воспаление. Результаты этих исследований позволили уста новить, что хроническое воспаление играет роль при значительно боль шем числе заболеваний, чем это считалось ранее1. К таким воспалитель ным заболеваниям относится и атеросклеротическое поражение сосудов2, в основе патогенеза которого лежат два взаимосвязанных процесса: дис липидемия и хроническое воспаление3 5, которое может быть индуциро вано и поддерживается разнообразными инфекционными агентами6 8.

По современным представлениям, локальное (в атеросклеротической бляшке) и системное воспаление играет фундаментальную роль в разви тии атеросклероза и его осложнений. Хотя истинные этиологические факторы (а точнее, триггерные механизмы) атерогенного воспалительно го ответа до конца не ясны, обсуждается роль очень большого числа ме диаторов, многие из которых являются хорошо известными факторами риска возникновения атеросклероза (таблица 6.1).

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром Таблица 6.1. Медиаторы и факторы риска атеросклеротического поражения сосудов Фактор Возможный патогенетический механизм Инфекционные • Бактериальные: Chlamydia pneuminiae, Индукция синтеза медиаторов воспаления Helicobacter pylori, возбудители заболеваний пародонта (Porphyromonas gingivi, Streptococcus sanguis, Streptococcus viridans), Mycoplasma pneumoniae, Haemophilus influenzae, возбудители респираторных и урогенитальных инфекций • Вирусные агенты: Cytomegalovirus, вирусы простого герпеса (HSV 1, HSV 2), вирус Эпштейна Барр, вирусы гепатитов A и C, вирус гриппа, ВИЧ Липопротеины • оЛНП Воспаление • Лп(а) Пролиферация ГМК, блокада активации плазминогена • Маленькие плотные частицы ЛНП Чувствительны к окислению, обладают сильным сродством к протеогликану сосудистой стенки Воспалительные • СРБ Дисфункция эндотелия Протромботический и провоспалительный эффекты • КМА Активация эндотелия, воспаление • ЛП ассоциированная ФЛА2 Образование лизолицитина (молекула воспаления) и гидролиз окисленных ФЛ с образованием атерогенных фрагментов • ИЛ 1, ИЛ 6, ИЛ 18, ФНО Провоспалительные и атерогенные цитокины • Эндотелиальная NO синтаза Дисфункция эндотелия Нейроэндокринные • РАС Провоспалительный эффект;

окислительный стресс Факторы свертывания крови • ТФ Активация свертывания крови SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 6. Иммунные механизмы атеросклероза Фактор Возможный патогенетический механизм • Фибриноген Увеличение вязкости крови, агрегации тромбоцитов, стимуляция пролиферации ГМК • тИАП 1 Ослабление фибринолиза Гомоцистеин Дисфункция эндотелия, митогенный эффект в отношении ГМК, гиперкоагуляция Аутоантитела к: Активация эндотелия, воспаление, • 2 ГП I гиперкоагуляция • оЛНП и другим фосфолипидам • HSP 60/ Факторы риска:

• артериальная гипертония • диабет • резистентность к инсулину • метаболический синдром • курение • алкоголь • активация симпатоадреналовой системы • почечная недостаточность • хронические воспалительные заболевания (РА и др.) • аутоиммунные заболевания (СКВ и др.) • депрессия оЛНП — окисленный липопротеин низкой плотности;

Лп(а) — липопротеин (а);

CРБ — C реактивный белок;

ГМК — гладкомышечные клетки;

КМА— клеточные молекулы адгезии;

ЛП—ассоциированная ФЛА2 — ассо циированная с липопротеином фосфолипаза А2;

ИЛ — интерлейкин;

NO — оксид азота;

РАС — ренин анги отензиновая система;

ТФ — тканевой фактор;

тИАП 1 — тканевой ингибитор активатора плазминогена 1;

2 ГП I — 2 гликопротеин I;

HSP — "стрессорные" белки теплового шока В нашу задачу не входит систематический анализ всех широко изуча емых в настоящее время проблем иммунопатологии атеросклероза. Ко ротко будут рассмотрены лишь механизмы, потенциально участвующие в развитии атеросклероза СКВ и АФС.

Патогенез атеросклероза (и его осложнений) включает несколько по следовательных этапов, в развитии каждого из которых принимают уча стие медиаторы воспаления2 4:

1. Дисфункция эндотелия.

2. Формирование жировых пятен в стенке сосуда.

3. Формирование атеросклеротической бляшки.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром 4. Нестабильность атеросклеротической бляшки.

5. Тромботическая окклюзия сосудов.

Эндотелий сосудов Эндотелий — высокоспециализированный и метаболически актив ный монослой клеток, выстилающих внутреннюю поверхность сосудов, клапаны сердца и некоторые полости организма. Уникальная локализа ция позволяет эндотелиальным клеткам (ЭК) воспринимать "сигналы", поступающие из кровяного русла и отвечать на них синтезом вазоактив ных медиаторов, цитокинов и факторов роста9 11. ЭК являются одной из важных мишеней действия цитокинов, при этом сами ЭК вырабатывают ряд цитокинов и факторов роста (таблица 6.2).

Таблица 6.2. Аутокринные и паракринные медиаторы, регулирующие функцию ЭК Свойства Медиаторы Сосудистый тонус • Вазоконстрикция Эндотелин АТ II ТхА PGН Кислородные радикалы • Вазодилатация NO Брадикинин Эндотелиальный фактор гиперполяризации PGI Адреномедуллин Натрийуретический пептид типа С Тромборезистентность • Антитромботические/ PGI антикоагулянтные NO Экто АДФаза (CD39) Активатор плазминогена Белок С Фактор Виллебранда Гепариноподобный протеогликан Тромбомодулин • Протромботические/ Эндотелин прокоагулянтные Кислородные радикалы Ингибитор активатора плазминогена ТхА Фибриноген ТФ SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 6. Иммунные механизмы атеросклероза Свойства Медиаторы Модуляция сосудистого тонуса PGI NO Эндотелиальный фактор гиперполяризации АПФ (катализирует превращение АТ I в АТ II, который вызывает вазоконстрикцию) Эндотелин Пролиферация сосудистых гладкомышечных клеток • Стимуляция Эндотелин Тромбоцитарный фактор роста А/В Фактор роста фибробластов Инсулиноподобный фактор роста АТ II Цитокины • Угнетение NO Гепарин сульфат PGI ТФР Ангиогенез Сосудистый эндотелиальный фактор роста (СЭФР) Селективная проницаемость "Junction" белки Рецепторы эндоцитоза Поверхностный клеточный гликокаликс Рецептор для конечных продуктов гликирования Воспаление • Усиление КМА (Е селектин, ICAM 1, VCAM 1), Хемоаттрактанты/активаторы (ИЛ 8, МХБ 1, ФАТ) • Подавление Противовоспалительные цитокины (таблица 6.3) Эндотелий, тонко реагируя как на провоспалительные, так и противо воспалительные сигналы, принимает активное участие в регуляции свер тывания крови, сосудистого тонуса, интенсивности воспалительных ре акций и предотвращении повреждения тканей9 13 (таблица 6.3).

Таблица 6.3. Провоспалительные и противовоспалительные факторы, вырабатываемые и/или воспринимаемые сосудистым эндотелием Типы факторов Провоспалительные Противовоспалительные сигналы сигналы Цитокины ФНО, ИЛ 1, ИЛ 8, ИФН, ТФР, ИЛ 10, онкостатин, ИЛ 4, ИЛ 13, раИЛ 1, ИЛ SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром Типы факторов Провоспалительные Противовоспалительные сигналы сигналы Ангиогенные факторы СЭФР СЭФР, ангиопоэтин Факторы роста ТФР ФРФ 1, ФРВ Вазоактивные агенты АТ II, эндотелин 1 NO Нейропептиды Субстанция Р Ядерные рецепторы РАПП Факторы NF kB Bcl 2, Bcl xl, A20, транскрипции/гены сериновый ингибитор протеиназ 9, HO 1, Fas лиганд Механические факторы Растяжение Сдвиг Другие ЛПС, тромбин, оЛНП ЛВП, n3 жирные кислоты При хронической активации системы иммунитета и у генетичес ки предрасположенных лиц создаются условия для преобладания провоспалительных факторов над противовоспалительными. Ре зультатом этого дисбаланса и является развитие тех сосудистых на рушений, которые составляют основу атеросклероза: дисфункция эндотелия, вазоконстрикция, перекисное окисление ЛП, гиперкоа гуляция и т.д.

Молекулы адгезии Поступление и накопление лейкоцитов в зоне воспаления опосреду ются серией специфических взаимодействий по типу лиганд рецептор между клеточными молекулами адгезии (КМА), представленными как на мембране ЭК, так и на мембране лейкоцитов. В тонкой регуляции этих реакций участвуют цитокины12, 14, 15. По биохимическим свойствам КМА относятся к белкам, гликопротеинам или лектинам. Их функция заключается в регуляции межклеточных взаимодействий, приводящих к активации клеток.

В настоящее время описано более 30 КМА, которые разделяются на основные семейства: селектины, интегрины и суперсемейство иммуног лобулинов (таблица 6.4).

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 6. Иммунные механизмы атеросклероза Таблица 6.4. Характеристика КМА12, Эндотелиальные КМА Лейкоцитарные Функция Индуктор КМА Семейство селектинов • L селектин Р и Е селектины Перекатывание Тромбин, (CD62L) L селектин, (rolling) гистамин, • Р селектин гликопротеиновый Перекатывание форболовый • лиганд Р селектина эфир • L селектин ФНО, • Е селектин Перекатывание ИЛ 1, ЛПС Суперсемейство интегринов • CD11a/CD18 ICAM 1, 2 Адгезия/миграция • CD11b/CD18 ICAM 1, iC3b Адгезия/миграция • CD11x/CD18, Fb, ic3b ?

CD49b/CD29 VCAM 1 Адгезия (VLA 4) MAdCAM 1 Адгезия • CD49/b Суперсемейство иммуноглобулинов • ICAM 1 CD11a/CD18 Адгезия/ ИЛ 1, ФНО, миграция ЛПС, • ICAM 2 CD11a/b/CD18 Адгезия/ кислородные миграция радикалы • VCAM 1 VLA 4 Адгезия/ ИЛ 1, перекатывание ФНО, • PECAM 1 PECAM 1 Адгезия/ ЛПС миграция ИЛ 1,ФНО, ЛПС Селектины — гликопротеины, экспрессирующиеся на лейкоци тах, тромбоцитах и ЭК. Они состоят из N терминального лектино подобного Са2+ зависимого домена, за которым идет последова тельность пептидов, подобная эпидермальному фактору роста, и ко роткий повтор, напоминающий последовательность в белках, регу лирующих активацию комплемента. Идентифицировано 3 типа се лектинов:

• L селектин (лейкоцитарная молекула адгезии) экспрессируется почти на всех лейкоцитах, рассматривается как основной "homing" рецептор, регулирующий процесс миграции лейкоцитов;

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром • Р селектин (гранулярный мембранный белок 140) хранится в грану лах тромбоцитов и секреторных гранулах (тельца Weibel Palade) ЭК, участвует в адгезии нейтрофилов и моноцитов к ЭК;

• Е селектин (эндотелиальная лейкоцитарная молекула адгезии 1;

ELAM 1) экспрессируется на поверхности эндотелиальных клеток (в течение нескольких часов после их активации) ИЛ 1/, ФНО, ИФ, ЛПС, C1q ИК и при взаимодействии CD40 CD40L. Участвует в начальном взаимодействии лейкоцитов и ЭК в зоне воспаления.

Интегрины — семейство родственных молекул адгезии, опосредую щих связывание клеток с матриксом и межклеточные взаимодействия.

Они присутствуют на лимфоцитах, моноцитах, тромбоцитах, эпители альных клетках и ЭК. Интегрины состоят примерно из 15 (молеку лярный вес 120—180 кДа) и субъединиц (90—110 кДа), образующих около 20 гетеродимеров. В зависимости от структуры цепи они под разделяются на 3 подкласса, каждый из которых имеет общую цепь, нековалентно связанную с цепью. Описано 3 подсемейства интегри нов (1, 2, 3). 1 интегрины (CD29 или VLA белки) имеют общую 1 цепь (130 кДа) и одну из 6 возможных цепей (150—200 kDа). 1 и 3 интегрины являются рецепторами для фибронектина, ламинина, ви тронектина, гликопротеина тромбоцитов IIb/IIIa. Они участвуют в ад гезии фактора Виллебранда. 2 интегрины (CD11a,b,c/CD18) находят ся на мембране лейкоцитов, где участвуют в адгезии к эндотелию и ми грации в ткани. 2 интегрины также связываются с компонентами ком племента и факторами свертывания. Представители этого подсемейст ва состоят из 3 различных цепей (CD11a,b,c) и общей 2 субъедини цы (CD18). Большинство интегринов связывается с общей аминокис лотной последовательностью аргинин глицин аспарагин, присутству ющей в составе различных белковых молекул.

Суперсемейство иммуноглобулинов экспрессируется на ЭК. Являясь лигандами для лейкоцитарных интегринов, эти молекулы участвуют в процессах взаимодействия ЭК и лейкоцитов. К ним относятся межкле точная молекула адгезии 1 [ICAM 1;

CD54], межклеточная молекула ад гезии 2, тромбоцитарно эндотелиальная молекула адгезии 1 [PECAM 1;

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 6. Иммунные механизмы атеросклероза CD31], сосудистая молекула адгезии 1 [VCAM 1], а также молекулы ГКС I и II классов. Экспрессия VCAM 1 и ICAM 1 индуцируется ИЛ 1, ФНО и ИФ.

КМА выполняют 3 основные функции: привлечение клеток в лимфо идную ткань, обеспечение их миграции в зону воспаления, а также кос тимуляцию при активации лимфоцитов. Взаимодействие лейкоцитов и ЭК лежит в основе физиологической рециркуляции и направленной ми грации лейкоцитов в лимфоидные ткани и зоны воспаления. Этот ком плексный процесс регулируется каскадом молекулярных взаимодейст вий, напоминающих реакции активации системы комплемента или свер тывания крови12.

В покое (при отсутствии воспаления) спонтанная адгезия лейкоцитов к эндотелию и их миграция через эндотелиальный барьер ограничены, но резко усиливаются под влиянием провоспалительных цитокинов и других стимулов. Для перехода из кровяного русла в ткани лейкоциты должны вначале прилипнуть к сосудистому эндотелию. Прилипание (ад гезия) и трансэндотелиальная миграция происходят в специализирован ных участках сосудистого русла, а именно в посткапиллярных венулах нелимфоидных тканей и высокоэндотелиальных венулах лимфатических узлов. Каскадные процессы взаимодействия эндотелия и лейкоцитов ус ловно подразделяются на несколько этапов.

• Фаза ограничения (tethering) заключается в замедлении скорости дви жения лейкоцитов в кровяном русле. Затем лейкоциты начинают пере катываться (rolling) вдоль стенки сосуда. В это время их адгезия к эн дотелию сравнительно слаба и обеспечивается только L селектинами.

В местах активации эндотелия наблюдается более тесная адгезия лей коцитов к ЭК, опосредуемая взаимодействием L и Р селектинов или Е селектина с соответствующими рецепторами лейкоцитов.

• Пусковая фаза (triggering) характеризуется активацией КМА лейкоци тов (интегринов) цитокинами, синтезирующимися непосредственно эндотелием.

• Фаза сильной адгезии клеток обусловлена интегринзависимым связы ванием лейкоцитов с КМА, представленными на ЭК. В результате этого процесса движение лейкоцитов замедляется, а затем останавливается.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром • Фаза миграции лейкоцитов в ткани происходит под влиянием хемо кинов.

Эндотелий быстро реагирует на некоторые вещества, например, гис тамин, тромбин и др. Однако только действие провоспалительных цито кинов вызывает выраженные изменения морфофункциональных харак теристик эндотелия (гиперэкспрессия генов и увеличение синтеза бел ков) в направлении к провоспалительному/протромботическому фено типу. Это состояние и определяют как активацию эндотелия.

Роль молекул адгезии в атерогенезе Один из ранних этапов атерогенеза — привлечение лейкоцитов (мо ноцитов и Т клеток) из кровяного русла в сосудистую стенку и накопле ние в ней. Этот процесс регулируется NF kB зависимой экспрессией КМА (ICAM 1, VCAM 1, Е селектин). Ее усиливают провоспалительные цитокины и другие провоспалительные макромолекулы (ЛПС, лизофос фатидилхолин и другие оЛП). Как уже отмечалось, адгезия лейкоцитов к сосудистой стенке начинается с "перекатывания" лейкоцитов по поверх ности эндотелиального слоя, которое обусловлено взаимодействием се лектинов, а затем других молекул адгезии (VCAM 1, ICAM 1 и др.) с ин тегринами, присутствующими на мембране лейкоцитов. Поскольку VLA 4 (very late activation antigen 4) — основной контррецептор VCAM — экспрессируется на лимфоцитах и моноцитах, но не на гранулоцитах, именно мононуклеарные клетки избирательно привлекаются в зону ате росклеротического повреждения сосудов. Экспрессия Р селектина и VCAM 1 предшествует накоплению макрофагов и лимфоцитов в стенке сосуда на фоне гиперхолестеринемии. У мышей с дефицитом Р селекти на замедляется развитие атеросклеротического поражения сосудов и ги перплазии интимы после механического повреждения. Важность селек тинов в развитии атеросклероза подчеркивается тем фактом, что у мы шей, дефицитных по Е селектину и Р селектину, при скрещивании с мы шами, лишенными гена (knockout — KO) апо Е КО, не наблюдается раз витие атеросклероза. Экспрессия ICAM 1 выявляется во всех типах ате росклеротических бляшек. Установлено, что гиперхолестеринемия при SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 6. Иммунные механизмы атеросклероза водит не только к отложению и окислению ЛП в интиме сосудов, но и стимулирует экспрессию ICAM 1. Полагают, что именно этот механизм определяет прямую связь между гиперхолестеринемией и воспалитель ной активацией клеток сосудистой стенки. Кроме того, ICAM 1 индуци руется на ЭК под действием гемодинамического стресса, в том числе свя занного с АГ. Все это вместе взятое позволяет объяснить, почему именно гиперхолестеринемия и АГ являются двумя основными факторами риска атеросклеротического поражения сосудов.

Особое значение в развитии атеросклероза сосудов придают VCAM 116.

Так, показано, что у ЛНП дефицитных мышей (обычно характеризую щихся тяжелым спонтанным атеросклеротическим поражением сосудов) при отсутствии одного лигандсвязывающего участка VCAM 1 (VCAM 1D4D/D4DLDRL—/—) атеросклероз не развивался. Кроме того, у этих мышей не наблюдалось замедления пролиферации неоинтимы сосудов после механического повреждения. При этом гипоморфные мутации ICAM 1 не предохраняли мышей от развития атеросклероза. Следует заме тить, что гиперэкспрессия VCAM 1 может также играть важную роль в тромбообразовании при АФС (глава 5).

Дисфункция эндотелия Оксид азота (NO) — ключевой медиатор, поддерживающий базаль ный тонус и реактивность сосудистой стенки и уравновешивающий дей ствие вазоконстрикторов (эндотелин 1, ангиотензин II и др.). NO обра зуется из L аргинина под влиянием фермента NO синтазы (NOS), кото рая существует в нескольких изоформах. NOS I и NOS III относят к кон ститутивным ферментам. Их образование регулируется комплексом Ca2+ кальмодулин с NADPH, флавинадениндинуклеотидом/ мононук леотидом и тетрагидробиоптерином в качестве кофакторов. Эндотели альная NOS (eNOS) III типа играет особенно важную роль в регуляции сосудистого тонуса и гемостаза (агрегация тромбоцитов и др.) в ответ на различные, в том числе провоспалительные и атерогенные стимулы.

NOS II и NOS IV (макрофагальные) относятся к индуцируемым фермен там, поскольку их экспрессию отмечают только при активации иммун ной системы.

SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром Не существует универсального определения термина "эндотелиальная дисфункция", которое бы охватывало весь спектр возможных нарушений нормальной функции ЭК. В узком смысле слова термин "дисфункция эн дотелия" определяется как потеря способности к вазодилатации (напри мер, в ответ на стимуляцию синтеза NO). Но в более широком смысле слова этот термин отражает генерализованный дефект всех механизмов, поддерживающих целостность сосудистого эндотелия, в том числе нару шение продукции (и биодоступности NО) в сочетании с нарушением ба ланса между синтезом сосудорасширяющих и сосудосуживающих медиа торов17. Дисфункция эндотелия наблюдается при очень многих воспали тельных заболеваниях18 и на всех стадиях прогрессирования атеросклеро за (рисунок 6.1)18 21. Данные длительного наблюдения за пациентами с не измененными коронарными артериями, но с выраженной эндотелиаль ной дисфункцией свидетельствуют о том, что этот фактор оказывает вли яние на прогноз сердечно сосудистых катастроф22.

Дислипидемия Гиподинамия Гипертензия Инфекция/воспаление Диабет Курение Гомоцистеин Возраст Менопауза Внешние и внутренние защитные механизмы Модификация факторов риска Дисфункция эндотелия Снижение NO Снижение тАП: тИАП Экспрессия молекул адгезии Вазоконстрикция Ослабление фибринолиза Адгезия моноцитов Образование пенистых клеток Адгезия/активация тромбоцитов Воспаление бляшки Пролиферация ГМК Адгезия моноцитов Рост бляшки Разрыв бляшки Уменьшение кровотока, связанное с тромбозом и вазоспазмом Коронарный тромбоз и инсульт Рисунок 6.1. Механизмы развития эндотелиальной дисфункции SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page ГЛАВА 6. Иммунные механизмы атеросклероза Фактор транскрипции NF kB Молекулярными посредниками медиаторов воспаления являются факторы транскрипции (NF kB, AP 1, NFAT, STAT и др.), которые по сле передачи внутриклеточного сигнала связываются с промоторными участками генов и индуцируют экспрессию иРНК. Полагают, что, по скольку гены многих медиаторов воспаления имеют сходные распоз нающие последовательности ("отвечающие элементы"), блокада не большого числа ключевых факторов транскрипции позволит контро лировать синтез многих медиаторов воспаления. Особое значение имеет ядерный фактор NF kB (nuclear factor kB), которому отводят универсальную роль в развитии воспаления при многих заболеваниях, в том числе ревматических, а также в атеросклеротическом поражении сосудов23 26.

NF kB относится к семейству молекул Rel, которые имеют 300 го мологичных аминокислот (т.н. Rel гомологичный домен). Этот до мен опосредует димеризацию молекулы NF kB, ядерную транслока цию, связывание с ДНК и взаимодействие с ингибиторами. Актива ция NF kB контролируется семейством ингибиторов (IkB), которые связываются с димерами NF kB и как бы маскируют ядерную локали зацию NF kB, благодаря чему комплекс NF kB — IkB задерживается в цитоплазме.

NF kB активирует широкий спектр генов, принимающих участие в регуляции воспаления (таблица 6.5).

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 8 |





© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.