WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 7 | 8 || 10 | 11 |   ...   | 13 |

«РУКОВОДСТВО ПО СУДЕБНОЙ МЕДИЦИНЕ Под редакцией профессора В.В. Томилина профессора Г.А. Пашиняна Ав т о р с к и й к о л л е к т и в : ...»

-- [ Страница 9 ] --

Когда для членовредительства применяют острые предметы хозяйственно-бытового назна чения, фигурирует версия о случайном ранении (например, отсечение пальцев кисти при рубке дров). Колющими предметами повреждают глаза, барабанные перепонки. Наблюдаются коло то-резаные повреждения туловища и конечностей, которые могут быть как поверхностными, так и глубокими, проникающими в плевральную или брюшную полость. При этом выдвигает ся версия попытки самоубийства.

Членовредитель готовится к членовредительству предварительно, поэтому могут остаться следы подготовительного этапа в виде насечек, надрубов, надрезов, наколов, ориентирующих трасс и рисунков маркировок на одежде. В отдельных случаях предварительно делают разруб перчаток, обуви, а затем уже повреждают кисть или стопу. В результате повреждения на одеж де и теле не совпадают по локализации, направлению, размерам. Насечки и разрубы могут ос таваться на предметах, на которых, например, отсекали пальцы кистей или стоп.

Повреждения кистей и стоп обычно имеют характер полной или частичной ампутации 1— 3 и более пальцев.

Исследованию подвергают поврежденные части тела (если имеется возможность осмотра в перевязочной или операционной). Характер, локализацию и другие особенности повреждений описывают по общепринятой в судебной медицине методике. В случаях травматической ам путации нужно Рис. 108. Полотно рубанка, которым было произведено отсе чение пальцев кисти К.

тщательно исследовать ампутированную часть. При иссле довании ампутированных пальцев описывают характер по вреждения мягких тканей, поверхность кости в месте отруба (гладкая, неровная), дополнительные насечки, совпадение или несовпадение (лестничный вид) линии отруба пальцев.

Определению направления отруба способствует изучение рентгенограмм поврежденного органа.

Доказано, что полный отруб пальцев можно произвести ударом лезвия топора или лезвием ножа с большой массой только в случае фиксации их на твердой подкладке: на весу это сделать невозможно.

Случайный характер отруба пальцев исключают сле дующие объективные признаки: наличие на поврежденных пальцах (чаще на отсеченной части пальца) нескольких над рубов мягких тканей, на подкладке — нескольких надрубов и насечек;

поперечная или косопоперечная поверхность от руба по отношению к длиннику пальца (при несчастных случаях — обычно продольная или косопродольная);

сту пенчатость плоскостей отрубов пальцев;

наличие неповреж денных пальцев справа и слева от ампутированного пальца или неповрежденного — между поврежденными;

несоответ ствие повреждений на предметах одежды повреждениям конечностей.

При ударе лезвием клина топора по фаланге кость рассекается, образуя сначала гладкую поверхность. Затем происходит размятие с образованием шероховатой поверхности, что по зволяет эксперту определить, с какой стороны был нанесен удар. На сколе ампутированной кости может образоваться след (шлиф) от ударяющей поверхности лезвия топора, пригод ный для идентификации орудия травмы.

Важная информация об истинных обстоятельствах происшествия может быть получена при осмотре места происшествия и в ходе следственного эксперимента, в которых необходимо участие судебно-медицинского эксперта. Комплексное исследование предполагаемого ору дия травмы, повреждений на одежде и теле, отчлененных частей тела, материалов дела с со поставлением полученных результатов во время следственного эксперимента позволяет ус тановить орудие травмы, условия и механизм происхождения повреждений, исключить или подтвердить версию обвиняемого. Приведем пример.

Гр-н К., 19 лет, для уклонения от военной службы отсек на левой кисте III— V пальцы полотном от рубанка (рис. 108—110). В момент отчленения кисть ладонной поверхностью на ходилась на торце деревянного чурбака, что затем было воспроизведено в следственном экс перименте (рис. 111). Вначале подозреваемый выдвинул версию о несчастном случае. Ком плексное исследование поврежденной кисти (в том числе рентгенографическое), ампутиро ванных пальцев (в частности,было I III I Ю tl XIU I i\ i Рис. 109.

Общий вид отсеченных паль- Рис. 110.

Вид отсе ченных пальцев цев кисти К. кисти К. с торцевой поверхнос особенностей повреждения мягких тканей, торца разруба фаланги), орудия травмы, торца чурбака, на котором имелись следы дополнительных надру бов и кровь (рис. 112), позволило исключить версию о случайном ранении.

На допросе следователем подозреваемый признался в совершенном престу плении и воспроизвел обстоятельства причинения травмы, которые не про тиворечили результатам судебно-медицинской экспертизы.

Рис. 111. Воспроизведение обстоятельств отсечения пальцев кисти К. во время следственного эксперимента.

24- Рис. 112. Поверхность торца чурбака, на котором произведено отсечение пальцев кисти К.

Членовредительство тупыми предметами. Это сравнительно редкий вид членовредительства, чаще это умышленное причинение открытых и закры тых переломов костей конечностей (преимущественно костей предплечья и голени), ссадины, кровоподтеки, ушибленные раны головы и других частей тела. Умышленные переломы костей конечностей нередко делают с помо щью других лиц. Например, наносят удар тупым предметом по конечности, фиксированной между двумя опорами (удар ломом по голени, фиксирован ной на двух табуретах, один из которых расположен в области голеностоп ного, а другой — в области коленного суставов). Подобным образом в од ном из исправительно-трудовых учреждений в течение некоторого времени были причинены переломы костей предплечья нескольким гражданам.

Предплечье обматывали курткой, затем помещали на два стоявших торцом кверху кирпича. После этого сообщник преступления ломом наносил один удар по средней части предплечья. В результате возникал закрытый пере лом обеих костей предплечья.

Ранний осмотр пострадавшего и исследование одежды позволяют полу чить необходимые данные для определения механизма травмы, истинных обстоятельств происшествия. При установлении механизма перелома кос тей скелета необходимо ориентироваться на результаты рентгенологическо го исследования.

Членовредительство с помощью транспортных средств, частей механиз мов и оборудования. В качестве орудия для членовредительства могут ис пользоваться разнообразные механизмы, оборудование с движущимися частями, транспортные средства. Типичная версия, видвигаемая подозрева емым, — несчастный случай, реже — попытка самоубийства.

Повреждения транспортом обычно причиняются путем подкладывания конечностей под движущиеся колеса. Чаще для этого используют рельсо вый транспорт, в результате травмы образуются отрывы пальцев или кис тей, стоп с размозжением мягких тканей и раздроблением костей. Плос кость отделения мягких тканей и костей неодинакова. Ампутация конеч- ностей может происходить на уровне нижней, средней и верхней трети предплечий и голеней. При рельсовой травме образуются характерные по вреждения: полосы осаднения на коже от действия колеса и рельса, полоса обтирания, клиновидный дефект в области полосы давления, кожная пере мычка со стороны действия головки рельса при неполной ампутации ко нечностей, параллельные ссадины в месте первичного контакта колеса с телом («первичный щипок») и др. Учет этих повреждений позволяет уста навливать положение конечности относительно рельса и колеса в момент переезда, направление переезда. Иногда перед актом самоповреждения принимают определенные меры предосторожности: надевают на кисти ва режки, на конечности — обмотки, грубую обувь и т.д. Такие меры могут в известной степени изменить характер повреждений.

При использовании для членовредительства различных механизмов верхние и нижние конечности вкладывают между движущимися частями машин и механизмов. Возникают отрывы частей конечностей, их размя тие.

Во всех случаях необходимо исследовать одежду и дополнительно ис пользованные приспособления. На них могут отображаться характерные особенности частей и деталей механизмов и транспортных средств, могут быть загрязнения маслами и другими веществами, что позволяет устанав ливать вид повреждающего фактора, взаимное расположение освиде тельст-вуемого и транспорта (или механизма) в момент травмы.

При осмотре транспортного средства или механизма, а также места происшествия могут быть обнаружены на колесах, рельсах и других предметах следы крови, обрывки тканей и одежды. Приведем примеры из экспертной практики.

1. Гр-н Т. с целью уклонения от военной службы положил под колесо движущегося поезда левую кисть, в результате чего были повреждены II и III пальцы. В процессе следствия с производством судебно-медицинской экс пертизы первоначально выдвинутая обвиняемым версия о несчастном слу чае была отвергнута. Г-н Т. сознался в членовредительстве, рассказал об ис тинных обстоятельствах происшествия и воспроизвел их в ходе следствен ного эксперимента. Было установлено следующее. Т. на железнодорожной станции подождал, когда поезд тронется с места. Лег на живот и в момент прохода мимо него третьего вагона протянул левую руку и положил ладон ные поверхности пальцев на головку рельса. После того как колесо прока тилось через пальцы, рука, как он показал, сама выскочила из-под колеса.

Т. перевязал кисть носовым платком и сразу обратился в больницу, где ему ампутировали раздробленные ногтевые и средние фаланги II, III пальцев левой кисти.

2. Гр-ну Д. проходящим поездом ампутировало левую нижнюю конеч ность на уровне нижней трети голени. Д. сообщил, что он, увидя прибли жающийся поезд, поспешил перейти через железнодорожное полотно, но споткнулся левой ногой и попал под поезд. Следствием было установлено, что Д. сделал все преднамеренно. Он договорился с сослуживцем, который предварительно перевязал ему ногу выше колена брючным ремнем («нало жил жгут») и пообещал после получения травмы донести до ближайшего дома. Затем Д. лег с левой стороны железнодорожного пути по ходу поезда на снег животом вниз. Левую ногу положил на левый рельс так, чтобы стопа находилась внутри колеи. При осмотре ампутированной части конеч ности было установлено, что кирзовый сапог раздавлен на уровне нижней трети голенища. Края отделения неровные, рваные и смятые. По линии от деления имелся вдавленный след от сдавления сапога между колесом и го ловкой рельса. В отделенной части сапога находились ампутированная часть нижней трети голени и стопа. Ткани в месте отделения размяты, с рскольчатыми переломами костей.

Инородные тела в желудочно-кишечном тракте. Различные инородные тела проглатывают с целью уклонения от служебных обязанностей. Кли ническая и экспертная практика показывает, что перечень проглатывае мых 24* Рис. 113. Гвозди, извлеченные из кишечника С. при лапаротомии.

предметов достаточно велик (рис. 113, 114). Проглатывают от одного до не скольких сотен различных предметов. Чаще это швейные иглы (49,8 % слу чаев) и гвозди (7,8 % случаев). В 29,5 % случаев наблюдается проглатыва ние смешанных предметов (до 16 различных предметов одним членовреди телем — иглы, гвозди, шурупы, черенки ложек, пуговицы, монеты, гайки, зубная щетка, расческа, лезвия безопасной бритвы и др.).

Среди предъявляемых версий чаще фигурируют несчастный случай и попытка самоубийства. Иногда с целью избежания тяжелых последствий применяют различные меры предосторожности. У игл затупляют или отла мывают острые концы, лезвия безопасной бритвы ломают на отдельные фрагменты, загибают острые концы гвоздей. Иглы проглатывают в хлебном мякише, кусочке мыла, огурца, в конфете. У ложек и вилок отламывают че ренки.

По способу проглатывания инородных тел и поведению ©свидетельству емых можно судить об умысле и преследуемых целях. В случаях членовре дительства заранее принимают меры для предотвращения опасных послед ствий, в этот же день обращаются за медицинской помощью, сообщают другим лицам о своем поступке, дают советы своим сослуживцам о спосо бах уклонения от военной службы и т.д.

Последствия проглатывания инородных тел различны. Иногда эти пред меты в течение нескольких дней выходят естественным путем. Динамику выхода инородных тел прослеживают рентгенологически. Некоторые пред меты по своим свойствам не могут выйти самостоятельно. Другие же внед ряются в стенку желудка или кишечника, перфорируют ее, выходят в брюшную полость и проникают в другие органы (печень, поджелудочную железу), вызывая опасное для жизни состояние. Не случайно в 38,5 % слу чаев инородные тела из желудочно-кишечного тракта удаляются оператив ным путем (в основном при лапаротомии).

Результаты клинического обследования пострадавшего, у которого имеются инородные тела в пищеварительном тракте (прежде всего рентге нография), характер оказанной медицинской помощи важны для решения вопросов, которые ставятся перед судебно-медицинским экспертом. Не редко медицинские документы являются единственным источником объ ективной информации, потому что к моменту производства экспертизы инородные тела выходят из организма или удаляются во время операции.

На разрешение экспертизы ставятся различные вопросы. Следствие ин тересуют, предпринимал ли обвиняемый перед проглатыванием инородных Рис. 114. Тени гвоздей на рентгенограмме.

тел меры по предотвращению максимально воз можного вреда от этих действий, время проглаты вания инородного тела, какими объективными данными подтверждено нахождение инородного тела в желудочно-кишечном тракте, длительность нахождения инородного тела в пищеварительном тракте, обоснованность пребывания пострадавше го на стационарном лечении, обоснованность хи рургического лечения (нанесло ли оно вред здо ровью и его тяжесть). Ставятся также вопросы, ко торые не входят в компетенцию судебно-меди цинского эксперта (имело ли место членовре дительство и др.).

Экспертная оценка инородных тел желудочно кишечного тракта в судебной медицине неодно значна: не все их относят к повреждениям;

неоди наков к ним подход в случаях членовредительства.

Имеются разногласия и при определении тяжести вреда здоровью.

Инородные тела пищеварительного тракта, безусловно, являются повреждениями, так как полностью отвечают определению «по вреждения», которое дано в «Правилах судебно медицинской экспертизы тяжести вреда здоро вью» (М., 1997). Они влекут за собой нарушение анатомической целостности или физиологической функции органов и тканей. Инородные тела яв ляются фактором внешней среды. Даже в случаях самостоятельного выхода инородных тел они по мере своего продвижения по пищеварительному тракту в течение нескольких дней нарушают есте ственные физиологические процессы в желудке и кишечнике. Их выход сопровождается утыка нием концами в слизистую оболочку, что ме ханически раздражает и повреждает ее, вызывает повышенную секрецию, изменяет моторную функцию желудочно кишечного тракта, обусловливает общий дискомфорт.

Обязательным требованием является госпитализация для динамическо го наблюдения и оказания в случае необходимости экстренной медицин ской помощи. В связи с этим нахождение инородных тел в желудочно-ки шечном тракте требует пребывания в стационаре, приводит к временной нетрудоспособности разной продолжительности. Повреждения инородны ми телами относятся к патологии и имеют свои клинические проявления, нередко они вызывают опасные для жизни состояния. Тяжесть вреда здоро вью определяется на основании квалифицирующих признаков, приведен ных в «Правилах», — от легкого до тяжкого вреда. Что же касается установ ления членовредительства, то это прерогатива органов следствия, дознания и суда.

34.2, Судебно-медицинская экспертиза при искусственно вызванных болезненных состояниях Искусственно вызванные болезни (далее искусственные заболевания) являются следствием воздействия на организм различных повреждающих факторов. Классификация таких болезней дана М.И.Авдеевым (1968). К ним относятся искусственные заболевания кожи и подкожной клетчатки, органов дыхания, суставов, пищеварительного тракта, хирургические бо лезни, болезни органов зрения, слуха, мочеполовой системы, гинеколо гические заболевания, прочие болезни.

Искусственные заболевания кожи и подкожной клетчатки. К ним отно сится довольно широкий перечень заболеваний: язвы, флегмоны, абсцес сы, дерматиты, отеки, подкожная эмфизема, опухоли, свищи и др. Обычно они вызываются введением в кожу и подкожную клетчатку с помощью шприца, швейной иглы с ниткой различных биологических (зубной налет, слюна, гной, кал) или химических веществ (кислоты, основания, бензин и другие нефтепродукты и агрессивные жидкости). В результате образуются флегмоны, абсцессы, язвы, ожоги. В этих случаях на раннем этапе в месте введения через иглу агрессивного агента можно обнаружить точечную ра ну. Важную информацию можно получить при исследовании отделяемого из раны, имеющего специфический запах.

Искусственные дерматиты вызывают путем втирания в кожу раздра жающих веществ (нефтепродуктов, скипидара), прибинтовывания едкого лютика и некоторых других ядовитых растений (табака, борца и др.). От воздействия сока лютика образуются повреждения типа ожогов I и II сте пени. Вначале отмечается покраснение, а затем пузыри с серозным содер жимым (диаметром до нескольких сантиметров) и ярко-красной каемкой кожи вокруг. Потом пузыри лопаются, на их месте образуется длительно не заживающая влажная поверхность.

Искусственные дерматиты также вызывают прикладыванием к коже золы, металлических (медных) пластин. Иногда пораженная область мо жет повторять форму контактной поверхности повреждающего агента.

Искусственные опухоли кожи и подкожной клетчатки чаще вызывают введением под кожу парафина (парафиномы), воска, вазелина, машинного масла и других труднорастворимых веществ. Парафин, воск и шприц пе ред введением под кожу подогревают. Такие опухоли могут существовать длительное время (в течение нескольких лет), с воспалением окружающих тканей и без него, имитируют самые различные опухолевые заболевания (фибромы, остеомы, туберкулез, доброкачественные и злокачественные опухоли).

Обычная локализация искусственных болезней кожи и подкожной клетчатки — на доступных для самоповреждения местах конечностей.

Путем тугого перетягивания конечностей бечевкой, шнурком, бинтом, систематического поколачивания тупым предметом по мягким тканям тех или иных частей тела достигается образование отеков и припухлости. Эти повреждения могут быть приняты за симптом какого-либо заболевания.

Вместе с тем грубая травматизация мягких тканей в течение длительного времени может привести и к серьезным последствиям, например к тром бозу подкожных вен.

Введением воздуха под кожу вызывают подкожную эмфизему.

Искусственные заболевания суставов. К этим заболеваниям относятся искусственно вызванные воспалительные процессы, контрактуры, вывихи, ограничение подвижности. Они вызываются введением в полость сустава раздражающих химических веществ: бензина, скипидара, керосина и др.

Вводятся также продукты биологического происхождения (гной, соскобы зубного налета и т.п.), в результате чего развивается воспалительный про цесс. Могут возникнуть свищи, язвы в области суставов, контрактуры. При искусственном обеспечении длительного бездействия сустава в определен ном положении развиваются его контрактура и атрофия конечности. Воз никающие симптомы могут создать видимость таких болезней, как туберку лез, ревматизм и др. Дифференциальная диагностика в этих случаях не вы зывает особых затруднений благодаря атипичности симптоматики, одно стороннему характеру поражения сустава. При малой давности заболевания можно получить пунктат из сустава, обладающий специфическим запахом введенного вещества. Существенное значение имеют анамнез, вниматель ное и целенаправленное обследование освидетельствуемого.

Искусственные заболевания органов дыхания. Эти заболевания при ис кусственном воздействии на организм вредных для здоровья факторов про текают в виде острых бронхитов, пневмонии, плевритов, пневмоторакса и др. Используют самые различные способы и средства. Вдыханием сахарной пудры добиваются развития симптомов, которые рентгенологически созда ют картину, сходную с таковой при туберкулезе. Для исключения туберку леза необходимо нахождение освидетельствуемого в специализированном лечебном учреждении. Искусственно вызванное заболевание органов дыха ния было описано Л.М-Бедриным, который провел эксперименты на жи вотных.

При введении в вену воздуха и жира (например, рыбьего) возникает га зовая или жировая эмболия легких, что чревато весьма грозными последст виями для жизни. Такие больные теряют сознание, у них повышаются тем пература тела и артериальное давление.

К редкой искусственно вызываемой патологии относится пневмото ракс, вызванный введением через иглу воздуха в плевральную полость. Чле новредители прибегали к помощи врачей. При осмотре в межреберьях об наруживали точечные ранки от медицинской иглы. При динамическом на блюдении отмечалось постепенное разрешение пневмоторакса.

Отдельные симптомы заболеваний органов дыхания вызывались вдыха нием паров различных раздражающих веществ (брома, хлора, кислот, йода, нашатырного спирта).

Встречаются и довольно редкие случаи искусственных заболеваний лег ких. Приведем один из них.

Гр-ну 3., 19 лет, по его просьбе сослуживец шприцем ввел в правое легкое хлеб ный клейстер. Цель — имитация туберкулеза. Через некоторое время появились озноб, кашель, боль в груди, стало трудно дышать. Поступил в стационар. При ос мотре обнаружена точечная колотая инфицированная рана грудной клетки. Диа гностирован постинъекционный пульмонит средней доли правого легкого. Больной сообщил, что ему через иглу ввели около 2 мл разведенного хлебного мякиша. На рентгенограмме легкого на границе IV и V сегментов выявлялось нечетко очерчен ное очаговое тенеобразование размером около 2x1,5 см. На последующей рентгено грамме отмечалось увеличение очага до 4x7,5 см. Наблюдались лейкоцитоз, увели чение СОЭ. После проведенного консервативного лечения больной был выписан из стационара. Были проведены судебно-медицинская и судебно-психиатрическая экспертизы.

Искусственные заболевания органов пищеварения. К ним относятся раз личные заболевания органов желудочно-кишечного тракта: гастриты, коли ты, энтериты, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, бо- лезни печени по типу токсических гепатитов, выпадения прямой кишки.

Обычно они вызываются путем применения химических веществ, различ ных раздражающих средств. Для образования искусственных язв желудка и двенадцатиперстной кишки применяют такие едкие вещества, как карбид кальция, ляпис, кислоты и основания, кристаллический йод. Для «достав ки» в желудок эти вещества помещают в специальные облатки (бумажные обертки, конфеты «Подушечки», из которых удаляется начинка, хлебные шарики и т.п.). После проглатывания «облатки» членовредитель лежит 2— 3 ч на правом боку для обеспечения соприкосновения едкого вещества со слизистой оболочкой желудка или двенадцатиперстной кишки. Здесь и об разуется язва, выявляемая рентгенологически. Более грубые повреждения слизистой оболочки возникают от действия кислот и оснований, «достав ляемых» в желудок с помощью резиновой трубки или зонда.

Судебно-медицинская диагностика в этих случаях весьма затруднитель на, особенно в поздний период, когда появляются рубцовые изменения на месте бывших язвенных поражений. Доказать, что язва вызвана искусст венно, практически можно лишь в остром периоде заболевания при усло вии своевременного проведения судебно-химического исследования желу дочного сока. При этом в нем можно обнаружить серебро, при применении ляписа (нитрат серебра может быть также выявлен в кале и моче) — кисло ту, не входящую в состав желудочного сока. В некоторых случаях попытка искусственного вызывания язв желудка с помощью едких веществ приво дит к ожогам кожи лица и слизистой оболочки полости рта и пищевода (при приеме их без вспомогательных средств доставки в желудок).

Гр-н И. был доставлен в стационар с жалобами на остро возникшую боль по ходу пищевода и в эпигастральной области, рвоту с кровью. Было заподозрено, что И. принял какое-то едкое вещество. Рвотные массы направили на судебно-хими ческое исследование;

обнаружена «едкая натронная щелочь 0,18 %». Клиницисты диагностировали «свежую язву антрального отдела желудка, осложнившуюся желу дочным кровотечением».

Симптомы заболеваний печени, в частности болезни Боткина, искусст венно вызываются приемом внутрь большого количества акрихина с атофа ном: появляется желтушная окраска кожных покровов, обусловленная дей ствием акрихина, и обнаруживаются желчные пигменты в крови и моче (в результате влияния атофана на печень). Доказательством искусственно вы званного заболевания печени служит обнаружение акрихина и атофана в моче и кале при судебно-химическом анализе. Поскольку акрихин длитель ное время не выводится из организма, даже в отдаленных периодах болезни при исследовании ногтей и мочи в ультрафиолетовых лучах определяется яркое изумрудно-зеленое свечение.

Болезненные изменения в тонкой и толстой кишке появляются при приеме в течение длительного времени больших доз слабительных ле карств, а также поваренной соли, мыла, уксусной эссенции и других едких веществ. Таким способом могут имитироваться клинические симптомы ди зентерии. Например, при приеме фенолфталеина кал имеет сероватый цвет, со слизью и прожилками крови;

в крови — тенденция к лейкопении.

При ректороманоскопии отмечаются выраженные катаральные явления.

Поносы упорные, не поддающиеся лечению. В кале выявляется фенолфта леин.

Прием солевых слабительных (английская соль, глауберова соль) при водит к поносам (частый водянистый стул). Слизистая оболочка кишечни ка набухшая.

Особенностью поноса, вызываемого мылом (при приеме внутрь или с помощью клизмы), является частый жидкий желеобразный стул. Отмеча ются боль по ходу кишки, эрозии слизистой оболочки кишечника.

Для искусственного выпадения прямой кишки в нее вводят инородные тела (мешочек с горохом, который там разбухает, губку, тампоны и т.д.), а затем кишку выворачивают наружу. При этом выворачивается и слизистая оболочка кишки, возникают мелкие повреждения ткани вокруг заднепро ходного отверстия (ссадины, кровоподтеки).

Искусственные заболевания органов зрения. К ним относятся конъюнк тивиты, блефариты, кератиты, катаракты. Эти болезни вызываются хими ческими веществами, механическим раздражением. За веки закладывают различные вещества, раздражающие конъюнктиву: известь, золу, песок, опилки, порох, настриженные волосы, мыло, анилиновый карандаш и др.

Конъюнктиву натирают шерстяной тканью, применяют термические сред ства. Механически повреждается роговица.

Важно установить природу вещества, которое обусловило патологию глаз. Требуется динамическое наблюдение за больным, иногда накладыва ние на глаза герметических повязок. В случаях искусственно вызванных конъюнктивитов и других повреждений глаз отсутствует типичное для ис тинного конъюнктивита гнойное отделяемое, чаще поражаются нижнее веко и внутренний угол глазной шели прижигающим или раздражающим веществом, выявляется участок омертвения конъюнктивы с образованием струпа или пленки в месте воздействия повреждающего фактора. Травмати ческие катаракты чаще односторонние. Укол обычно делают в центре рого вицы.

Искусственные заболевания ЛОР-органов. С помощью механических и химических средств повреждают слизистую оболочку полости рта, зубы.

Острыми предметами, ногтями травмируют слизистую оболочку носа с целью вызвать повторные кровотечения.

Механической травме и химическим ожогам умышленно подвергаются слуховой проход, барабанные перепонки. В ухо вливают серную или карбо ловую кислоту, скипидар и другие едкие вещества. Показателем такого дей ствия являются ожоги не только слухового прохода и более глубоких зон уха, но и кожи вокруг наружного отверстия органа. Выявляется обширный дефект барабанной перепонки.

Существенное значение для раскрытия искусственного происхождения заболеваний полости рта, носа и органов слуха имеют систематическое на блюдение за больным, внимательный осмотр пораженных тканей, наложе ние специальных повязок на глаза и ухо.

Искусственные заболевания органов мочеполовой системы. Отдельные симптомы циститов, уретритов и нефрита могут быть вызваны при приеме ряда веществ внутрь и раздражении мочеполовых путей. Прием небольших доз скипидара, ягод можжевельника и некоторых других средств может привести к альбуминурии, гематурии и появлению иных симптомов токси ческого нефрита.

К развитию искусственного цистита приводит введение в мочевой пу зырь раздражающих веществ, инородных тел, воздуха. Неспецифический уретрит вызывается введением в мочеиспускательный канал мыла, инород ных предметов. Клиническое, бактериологическое и судебно-химическое исследование позволяет решить вопрос об истинном характере заболева ния.

Искусственные заболевания сердечно-сосудистой системы и крови. В экспертной практике чаще встречаются случаи искусственного вызыва- ния симптомов неироциркуляторнои дистонии по гипертоническому типу и гипертонической болезни. Для этого употребляют лекарственные средст ва, обладающие способностью повышать артериальное давление (эфедрин, теофедрин, мезатон и др.).

Эфедрин в дозах, значительно превышающих терапевтические, вызыва ет практически весь симптомокомплекс, типичный для неироциркулятор нои дистонии. «Искусственный» характер заболевания может быть под твержден внезапным повышением артериального давления, которое до этого было в пределах нормы, резким увеличением давления при утреннем врачебном обходе (при пребывании больного в стационаре) и нормальным его уровнем при внезапном измерении в другое время суток, отсутствием эффекта от назначенного лечения, несоответствием жалоб данным объек тивного обследования. При судебно-химическом исследовании в моче об наруживаются кристаллы эфедрина. Эфедрин выводится из организма с мочой в течение 10—16 ч.

Среди прочих искусственно вызываемых заболеваний следует отметить болезни центральной нервной системы, симптомы которых могут быть вы званы приемом препаратов, содержащих атропин (обнаруживается в выде лениях).

Редко наблюдаются искусственно вызванные заболевания крови. При нимают внутрь метгемоглобинобразующие вещества (например, гидрокси ламин солянокислый). Лихорадочные состояния вызываются путем под кожного или внутримышечного введения молока.

К искусственному похуданию приводит умышленное воздержание от приема пищи.

Показателем искусственной природы заболеваний могут быть следую щие общие признаки:

о появление однородного заболевания у нескольких членов одного кол лектива;

• необычность течения заболевания с острым началом и бурным разви тием болезненного расстройства;

• отсутствие должного эффекта от проводимого лечения;

• внезапное обострение заболевания или быстрое выздоровление (в случаях специального контроля за больным, обнаружение средств, с помощью которых вызывается заболевание).

34.3. Судебно-медицинская экспертиза при симу ляции и аггравации Цель симуляции и аггравации — уклонение от исполнения служебных обязанностей без причинения вреда здоровью. Это так называемые при творные заболевания. К этой группе относится и подлог медицинских до кументов.

Симуляция и аггравация могут осуществляться как без применения, так и с применением каких-либо индифферентных для организма средств (под мешивание крови к мокроте или моче, заглатывание непроницаемых для рентгеновских лучей предметов и т.д.).

В случае болезней сердечно-сосудистой системы могут симулироваться отдельные симптомы гипертонической болезни и неироциркуляторнои дистонии. Предъявляются соответствующие жалобы и воспроизводятся от дельные объективные симптомы — тахикардия, повышение артериального давления, учащение пульса (этого можно достичь после специальной тре нировки напряжением мышц, задержкой дыхания).

Болезни органов дыхания симулируются редко из-за трудности воспроиз водства их симптомов. Чаще это туберкулез, когда симулянт предъявляет жалобы, соответствующие симптоматике этой болезни, подмешивает кровь в мокроту, предъявляет мокроту, рентгенограммы легких больных туберку лезом. Для правильной клинической диагностики подобные случаи не представляют особого труда.

Симулируются и аггравируются гастриты, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, аппендицит. В основном предъявляются жало бы на боль в эпигастральной области или в левом подреберье, изжогу, на прочие диспепсические расстройства. Отмечаются и попытки объективизи ровать данную патологию путем подмешивания кислоты во взятый на ис следование желудочный сок, крови — в кал. Для симуляции язвы желудка или двенадцатиперстной кишки симулянт перед рентгенографическим ис следованием проглатывает инородное тело на нитке, закрепленной зубами, а после обследования извлекает его из желудка.

Симуляция болезней почек и мочевыводящих путей осуществляется предъявлением соответствующих жалоб и анамнеза, а также грубым вос произведением некоторых объективных признаков. Например, лейкоплас тырем на поясничной области в проекции почки перед рентгенографией укрепляют металлический предмет.

Симулируют также заболевания органов слуха и зрения. В основном это симуляция глухоты или снижения слуха, потери либо снижения остроты зрения. Для установления истинного состояния слуха и зрения необходимо тщательное обследование подозреваемых. Разработаны специальные при емы, опыты для опровержения ложных заявлений (опыт с условными реф лексами, опыт с щеткой, опыт Ломбара, опыт с трещоткой, с двумя камер тонами и т.д.), используют специальную аппаратуру.

При симуляции слепоты или пониженного зрения симулянт пытается воспроизвести характерные особенности поведения слепого. При обследо вании учитывают общий вид, состояние зрачков, результаты диагностичес ких опытов. Существуют специальные способы обследования в случае сле поты на один глаз. Для установления факта симуляции заикания разработа на специальная схема исследования симптомов заикания, которые у симу лянта и истинно заикающегося неодинаковы.

В период боевых действий возможна симуляция или аггравация конту зионных расстройств слуха и речи. При исследовании слуха у таких лиц, кроме обычных акуметрических приемов, проводят опыты (см. перечис ленные выше) по объективному определению потери слуха. При этом обя зательна дифференциальная диагностика снижения слуха при контузии и расстройств истерического происхождения. Эта диагностика затруд нительна. Необходимо систематическое и динамическое наблюдение за больным. Учитывают совпадение или различие результатов повторных ис следований слуха при помощи разных приемов акуметрии. При этом за прещаются такие приемы, как дача наркоза, внезапное нарушение сна у обследуемого, громкий оклик, воздействие электротоком, угроза судом и т.п.

Судебно-медицинская экспертиза при подозрении на симуляцию или аггравацию сложная, нередко требуется стационарное обследование. Про водят всестороннее клиническое обследование освидетельствуемого с ди намическим наблюдением. Следует иметь в виду возможность симуляции заболеваний психически неустойчивыми лицами.

Экспертиза должна проводиться комиссионно, с участием врачей-спе циалистов. В заключении экспертов не должны употребляться термины «симуляция», «аггравант» и другие им подобные, которые не относятся к медицинским понятиям. В выводах заключения указывают на наличие или отсутствие у ©свидетельствуемого заболеваний, степень их выраженности, соответствие жалобам. Недопустимо обращение к обследуемому как к си мулянту.

Подлог медицинских документов может заключаться в представлении подлинного документа, выданного медицинским учреждением с подлин ными печатями и подписями, или фиктивного (подложного) документа. Те и другие по своему содержанию не соответствуют истинному состоянию здоровья человека, на чье имя выдан документ. В случае сомнения в досто верности медицинских документов назначаются судебно-медицинская и криминалистическая экспертизы. Судебно-медицинскую экспертизу про водят по той же методике, что и в отношении лиц, подозреваемых в симу ляции или аггравации заболевания. Во время экспертизы устанавливают возможность принадлежности обследуемому представленных им (или орга нами следствия) рентгенограмм, электрокардиограмм, результатов лабора торных исследований и т.п.

Глава Судебно-медицинская экспертиза рубцов ш бывших ранений Исследование рубцов. Такое исследование расширяет возможности су дебно-медицинской диагностики повреждений в поздний период травмы.

Исходя из морфологических особенностей рубцов, решаются вопросы об их происхождении, времени образования, тяжести вреда здоровью, соот ветствии показаний освидетельствуемого об обстоятельствах причинения травмы полученным экспертом объективным данным.

Рубцы возникают в результате заживления повреждений от действия различных механических, физических и химических факторов (тупой трав мы, термических и химических ожогов, электротравмы, лучевых пораже ний). Повреждения кожи, слизистой оболочки и органов в процессе зажив ления замещаются соединительной тканью, в результате чего образуется рубец.

Рубцеванию тканей предшествуют травматический отек, воспалитель ный процесс с последующим очищением повреждения от погибших тка ней. Одновременно по периферии формируется грануляционная ткань.

Она состоит из нескольких слоев — лейкоцитарно-некротического, сосу дистых петель, собственно грануляционной ткани, созревающего слоя (фибробласты). На основе созревающего слоя образуется фиброзная ткань.

При созревании рубцовой ткани сосудистая сеть и клеточные элементы уменьшаются, а коллагеновые волокна разрастаются.

В уже сформировавшемся рубце в течение 10—12 мес продолжают про исходить определенные изменения.

Свежий рубец красноватого или розового цвета, гладкий, блестящий, умеренно возвышающийся над окружающей кожей, с несколько ограни- ченной подвижностью, умеренной плотности. Постепенно он бледнеет, объем его уменьшается, рубец становится более подвижным (если не спаян с подлежащими краями), менее заметным в результате атрофии. Иногда рубец гипертрофируется и значительно выступает над кожей, длительное время сохраняясь в таком виде. В последующем возможно обратное разви тие гипертрофированного рубца.

При нарушении нормального рубцевания образуются келоиды — грубые опухолевидные, плотные рубцы, содержащие большое количество фиброз ной ткани с гиалиновым перерождением. Они дают ответвления в окру жающие ткани, выходя за пределы бывшего повреждения. При формирова нии келоида в рубце длительное время находятся сосуды, а фибробласты образуют атипичные коллагеновые волокна. Гипертрофированные келоид ные рубцы могут изъязвляться.

Свойства рубцов определяются характером внешнего фактора, вызвав шего повреждение, локализацией и объемом травмы, условиями ее причи нения, индивидуальными особенностями организма и т.д.

Рубцы после заживления резаных ран имеют линейную или дуговую (из вилистую) форму, подвижные. Края их ровные, концы острые. К концам рубец суживается. Один из концов может быть более узким. Форма и дру гие особенности рубцов на месте колото-резаных повреждений при зажив лении ран первичным натяжением во многом зависят от свойств клинка колющего или колюще-режущего орудия травмы.

Рубцы после рубленых ран, которые обычно имеют большие размеры и глубину, более грубые, спаяны с подлежащими тканями, подвижность их ограничена, края ровные.

Заживление ушибленных и рвано-ушибленных ран, не подвергавшихся первичной хирургической обработке, завершается образованием рубцов с неровными поверхностью и краями. Рубцы плотные, выступают над окру жающей кожей, малоподвижны. В определенной степени они могут отра жать размеры и форму ран. При заживлении ран с нагноением рубцы не со храняют морфологических особенностей ран.

После термической травмы рубцы остаются лишь на месте ожогов и от морожений III и IV степени. Чем тяжелее степень ожога и отморожения, тем грубее рубцы с деформацией тканей. Рубцы неправильной формы, буг ристые, с дефектами тканей, плотные, края ландкартообразные с пигмента цией, стягивают ткани. При локализации ожогов на шее с переходом их на грудную клетку и верхние конечности или в других аналогичных местах рубцы могут иметь перепончатую, веерообразную форму. В области суста вов рубцы приводят к развитию контрактур.

Растекающиеся на теле горячая жидкость и кислота оставляют повреж дения, после заживления которых остаются рубцы в виде потеков.

Рубцы на месте электроожогов тонкие, гладкие, белого цвета, с неров ными краями, плотноватые на ощупь, подвижные, без признаков келоид ного превращения. В результате механического и термического действия электрического тока возникают характерные и специфические изменения в костной ткани. Рентгенологически в костях определяются очаговые ще левидной формы просветления как следствие растрескивания и расщепле ния компактного и губчатого вещества кости от механического действия проходящего электрического тока. Выявляются также деформация кост ной ткани, остеопороз. Под действием высокой температуры, сопровож дающей прохождение электрического тока через тело, расплавляется ко стная ткань, что приводит к утолщению или очаговому вздутию кости, иногда к образованию «жемчужин» — шаровидных образований из фос- форнокислой извести. Возможно образование дырчатых переломов, вы глядящих на рентгенограммах в виде округлых просветлений с ровными контурами.

Рубцы в области полых органов, естественных отверстий приводят к не проходимости.

Внешний вид рубцов после огнестрельных ранений зависит от вида по вреждения, дистанции выстрела. На месте входной раны, причиненной вы стрелом с близкой дистанции и не подвергавшейся хирургической обработ ке, рубцы овальной, лучистой, звездчатой или неправильной формы, уме ренно втянуты, малоподвижны. Их размер может быть больше размера рубца на месте выходного огнестрельного отверстия (особенно при выстреле в упор). Вокруг них могут быть видны внедрившиеся порошинки, их фраг менты, частицы, которые можно извлечь и исследовать. Иногда в рубце отмечается импрегнация копоти. Входные огнестрельные отверстия от вы стрела с неблизкой дистанции заживают с образованием округлых рубцов небольших размеров. Рубцы на месте выходной раны в этих случаях имеют больший размер, форма их неправильная с втянутыми к центру краями. По сле ранения дробью остаются множественные небольшие рубцы округлой формы. В известной степени по ним можно судить о свойствах повреж дающего фактора.

Рубцы формируются на месте гнойных и воспалительных процессов кожи, кожных и инфекционных болезней (туберкулеза, сифилиса, лепры). Они имеют свои специфические особенности, что позволяет дифференцировать их и рубцы от травматических повреждений.

Оценить происхождение и давность образования повреждений по руб цам у живых лиц помогают результаты лабораторных исследований.

Люминесцентный анализ позволяет определять по люминесценции (от фиолетовой до сине-белой) время образования рубцов, форму бывших ожогов по снижению интенсивности свечения по сравнению с окружаю щей кожей, пигментацию кожи, место ранее производившейся инъекции (сроком до 6 мес).

С помощью капилляроскопии выявляются контуры малозаметных рубцов, особенности краев и поверхности, инородные включения, опре деляется состояние сосудов в рубцах (осмотр под МБС-2 после нанесения на кожу кедрового масла) в различные сроки после травмы. По мере ста рения рубца количество сосудов в них резко уменьшается, они рас полагаются неравномерно, преимущественно в периферических участках.

Ценную информацию дают рентгенологические методы. В мягких рент геновских лучах в глубоких слоях рубцов выявляются инородные включе ния. В случаях ранения безоболочечными свинцовыми деформированны ми, прошедшими через преграду пулями и пулями специального назначе ния вокруг входного огнестрельного отверстия на рентгенограммах отобра жается поясок металлизации.

Среди основных вопросов, решаемых судебно-медицинской эксперти зой при исследовании рубцов, — определение давности образования по вреждения. Последнее устанавливают по внешнему виду рубца, его консис тенции и другим свойствам рубцовой ткани. Внешний вид зависит от про исхождения рубца, его локализации, размера, возраста и состояния здоро вья пострадавшего. Поэтому вопрос о давности рубцов решается ориенти ровочно в определенном интервале времени. Наиболее полные сведения о свойствах рубцов различных сроков давности представлены в табл. 19 [Се ребренников И.М., 1962].

Таблица 19. Особенности изменений внешнего вида рубца в различные сроки давности Исследование бывших ранений. Судебно-медицинские знания требуются для установления бывшего ранения, контузии или увечья, в частности у лиц, получивших травму при исполнении иных обязанностей военной службы в случаях отсутствия у них медицинских документов, подтверждаю щих факт травмы.

Заключение о бывшем ранении дается на основании изучения предо ставленных медицинских документов и результатов обследования освиде тельствуемого. Проводятся опрос обследуемого о времени и обстоятельст вах получения травмы. Сообщенные сведения фиксируют в экспертном документе. Затем обследуемого внимательно осматривают. Выявляют имеющиеся на теле рубцы и другие повреждения. Осмотр проводят при хо рошем дневном освещении, что позволяет определить естественный цвет рубца и его оттенки. В акте судебно-медицинской экспертизы указывают точную локализацию, размеры, форму, цвет, плотность, подвижность, ха рактер поверхности и краев и пигментацию рубца, наличие инородных включений, состояние окружающей кожи и подлежащих тканей. Отмеча ют характер и степень выраженности функциональных нарушений, вызван ных рубцом.

Пальпаторно исследуют состояние подлежащих костей, мышц, сухожи лий и по возможности выявляют изменения, указывающие на их поврежде ния. При исследовании используют лупу, что позволяет более детально изучить особенности рубцов. При необходимости применяют капилляро скопию.

В случаях наличия данных об огнестрельном происхождении рубцов обя зательно рентгенографическое обследование. На рентгенограммах костей в месте зажившего огнестрельного перелома отображается избыточная кост ная мозоль, представленная хорошо выраженной тенью веретенообразной формы и выступами. В области диафизов длинных трубчатых костей с об ширным дефектом костной ткани, обусловленным огнестрельным ранени ем, на рентгенограммах определяются соединяющие отломки кости параос тальные мосты или боковые скобки. Характерные признаки огнестрельного остеомиелита: множество костных отломков и инородных тел, обладающих плотностью металлов, смещение отломков поврежденной кости с централь ными и краевыми дефектами, окруженными костной мозолью неопреде ленной формы. Видны участки просветлений и остеосклероза как проявле ние одновременно протекающих некротических, деструктивно-воспали тельных и реактивно-восстановительных процессов. Показателем огне стрельной травмы нервных стволов служат остеопороз, асептический осте олиз, остеонекроз.

При установлении следов бывших ранений, полученных во время боевых действий, прохождения военной службы или пребывания в плену, судебно медицинский эксперт руководствуется «Методикой судебно-медицинской экспертизы по установлению следов бывших ранений» (приложение к «Указаниям о порядке определения причинной связи заболеваний, ране ний, травм, контузий и увечий у бывших военнослужащих», 1980).

раздел VIII Судебно-медицинское исследование вещественных доказательств Глава Процессуальные и организационно-методические аспекты судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств Вещественные доказательства обладают большим объемом розыскной и доказательственной информации, что обусловливает их значимость и отво дит особое место в судебной медицине. Многие авторы именуют судебную медицину медициной в праве или правовой медициной, подчеркивая тем самым, что она выполняет правовые заказы и служит интересам правосу дия. Судебная медицина вообще и экспертиза вещественных доказательств в частности обусловлены потребностями права.

В соответствии со ст.83 УПК РФ «вещественными доказательствами яв ляются предметы, которые служили орудиями преступления, сохранили на себе следы преступления или были объектами преступных действий обви няемого, а также все иные предметы, которые могут служить средствами к обнаружению преступления и выявлению виновных либо к опровержению обвинения или смягчения вины обвиняемого».

Перечисленные в ст.83 УПК РФ положения влекут за собой необходи мость решения процессуальных и организационно-методических вопросов, возникающих при изучении вещественных доказательств, так как результа ты исследования, к сожалению, зависят не только от правильно исполнен ной работы, но и качества изъятия биологического материала, осмотра места происшествия, времени между изъятием и направлением материала в лабораторию, предоставления сравнительных образцов и др. Отсюда — не обходимость четкого решения перечисленных выше вопросов.

Следы биологического происхождения обнаруживаются при осмотре места происшествия, обысках, освидетельствовании подозреваемых и потерпев ших, вскрытии трупов. Вещественными доказательствами все эти следы становятся лишь после изъятия, оформления соответствующего документа об этом изъятии и направлении на экспертизу.

Судебно-биологические экспертизы проводятся лишь на основании по становлений следователей и определений, вынесенных судами. Проведение таких экспертиз регламентируется правилами, инструкциями, ведомствен ными приказами. Вместе с постановлением (определением) в отделение должен быть направлен протокол изъятия вещественных доказательств и образцов.

На основании документов, свидетельствующих о назначении эксперти зы, эксперт оформляет документ — «Заключение эксперта», имеющее унифи цированную структуру построения. Заключение состоит из титульного стан дартного листа, изложения вопросов постановления и обстоятельств дела, исследовательской части и выводов. Этот документ существует в двух экзем плярах, один из которых направляется в учреждение, назначившее эксперти зу, а второй хранится в отделении. Следует иметь в виду, что титульный лист, введение и описание вещественных доказательств по сути одноплановы для всех видов экспертиз, а исследовательская часть находится в прямой зависи мости от вида исполняемой работы и поэтому отличается друг от друга.

В судебно-биологических отделениях исполняются виды экспертиз сле дующих биологических объектов:

• • • • • • • • • • • • • • • • • • • крови;

• выделений;

• волос;

• костных останков и ногтевых фрагментов, зубов;

• тканей и органов.

Как отмечено выше, некоторые разделы заключения эксперта одинако вы для всех видов экспертиз. В первую очередь это касается описания ве щественных доказательств.

После изучения поступивших в отделение документов эксперт осматри вает свертки с вещественными доказательствами и прежде всего внимание должно быть обращено на упаковку — ее целостность. Это обязательное ус ловие при приеме экспертизы. Любые нарушения упаковки должны быть зафиксированы, оформлены соответствующим актом, о выявленных недо четах сообщают следователю или судье. Подобный акт подписывают 3 со трудника отделения, присутствующие при приеме вещественных доказа тельств.

Осмотрев и описав упаковку, эксперт приступает к осмотру и описанию содержимого свертков, ящиков, пакетов. При описании вещественных до казательств должен соблюдаться следующий принцип: изучаемая вещь должна быть опознана на любом этапе следствия и суда. Для достижения этой цели существует целый ряд признаков, которые обязательно учитыва ются при описании вещественных доказательств. К подобным признакам относятся фактура ткани, ее цвет, оттенок;

степень загрязненности вещи, наличие и характер дефектов;

размеры предмета по основным параметрам, индивидуальные особенности.

Если на экспертизу поступили орудия преступления, то при их описа нии необходимо использовать криминалистическую терминологию во из бежание возможных последующих расхождений с описанием этих же ору дий, исследованных в медико-криминалистических отделениях.

Довольно часто экспертиза вещественных доказательств назначается комплексно —в судебно-биологическое и медико-криминалистическое от деления. При таких условиях целесообразно, чтобы одежда, орудия убийст ва и др. вначале описывались экспертами медико-криминалистического от деления, а эксперты-биологи в своих заключениях делали бы ссылки на это описание.

Абсолютно четкие обязательные требования предъявляются к описанию обнаруженных на вещественных доказательствах следов, которые в даль нейшем подвергаются изучению. В характеристику биологических объектов входят локализация пятен, их цвет и оттенок, основные размеры, степень пропитывания ткани и уплотнение материала, форма следов. Для того чтобы правильно описать локализацию пятна, необходимо сначала выбрать какую-то «отправную точку» на изучаемом предмете и далее описывать следы, отталкиваясь от этого ориентира. В тех случаях, когда на предмете обнаружено большое количество пятен одинакового характера, возможен несколько иной вариант описания: не требуется многократно повторять ха рактеристику следов, достаточно охарактеризовать их только один раз, а затем лишь указывать локализацию.

При описании соскобов, смывов, подногтевого содержимого необходи мо указывать количество соскоба, дисперсное состояние вещества, цвет, число ногтевых фрагментов, их загрязненность. Образцы для сравнения также нужно кратко описывать, отмечая при этом количество жидкой крови или размеры пятна крови на марле.

25* Для объективизации данных рекомендуется фотографировать изучае мые предметы или отображать их состояние на специальных схемах с ука занием локализации, формы и размеров следов.

Исследование различных следов на вещественных доказательствах всег да сопровождается изучением различных образцов (кровь, слюна, сперма, волосы), взятых от проходящих по делу лиц. В противном случае без образ цов невозможно делать экспертные выводы.

Получение образцов — это отдельное следственное действие, которое может осуществляться следователем. Забор образцов регламентируется ст.

186 УПК РФ, в которой указано, что для этого должно быть вынесено по становление или определение, если вопрос решается в суде.

Образцы крови, слюны и волос, безусловно, лучше всего брать в судеб но-биологическом отделении, но это можно сделать и в поликлиниках, ам булаториях, больницах и доставить в отделение вместе с соответствующим протоколом. Образцы крови берут из пальца (в некоторых случаях из ве ны);

количество крови 2 мл. Если доставка крови осуществляется в тот же день или на следующий, кровь можно сохранить в жидком виде во фла кончике или пробирке в холодильнике, если же время доставки превышает указанные сроки, то необходимо параллельно с жидкой кровью из части ее готовить пятно на сложенной в несколько раз марле. Это пятно после вы сушивания при комнатной температуре упаковывают в конверт, последний подробно надписывают (с подписями следователя и лица, бравшего кровь) и направляют вместе с жидкой кровью в судебно-биологическое отделение.

Если речь идет об образце крови из трупа, то вскрывающий труп эксперт должен делать забор крови из полостей сердца или крупных сосудов. Обра зец крови, взятой из полостей тела, чаще всего оказывается непригодным для сравнительного изучения.

Глава Экспертиза крови 37Л. Методы обнаружения следов крови на вещественных доказательствах Следы крови можно обнаружить на месте преступления;

орудиях убий ства;

одежде и теле потерпевших, подозреваемых и обвиняемых;

при до рожно-транспортных происшествиях на транспортных средствах, а иногда и на самых неожиданных предметах. Для выявления подобных следов в случаях, когда осмотр производят непосредственно после совершения того или иного преступления, не требуется применения каких-либо специаль ных средств — изымают все те предметы, на которых имеются пятна, по марки и следы иного характера, красного, бурого, коричневатого цвета.

Если промежуток времени между происшествием и осмотром предметов велик, то следы крови могут претерпеть изменения, что зависит и от време ни, и от места хранения вещественных доказательств. В таких случаях на исследование следует направлять и те предметы, на которых пятна имеют нетипичный для крови цвет (вплоть до зеленоватого). Если видимые следы отсутствуют, то для поисков крови можно использовать осмотр вещей в ультрафиолетовых лучах, поскольку кровь в этих лучах приобретает барха- тисто-коричневатый цвет. Осмотр является предварительным и не исклю чается, что впоследствии в лаборатории кровь найдена не будет.

К предварительной пробе на месте происшествия относится проба с люминолом, однако ею можно пользоваться только в исключительных слу чаях: она неспецифична и чрезвычайно высокочувствительна, что иногда приводит к положительному результату при отсутствии крови, но при нали чии некоторых веществ, обладающих пероксидазной активностью. Кроме того, имеются данные об отрицательном влиянии подобной обработки на результаты последующих лабораторных исследований.

В тех случаях, когда имеются сведения о том, что преступник предпри нимал различные меры для уничтожения следов, предметы одежды особен но тщательно осматривают в местах возможного затекания крови — это швы, лацканы, места соединения в орудиях убийства. Для этого одежду подпарывают, орудия разбирают на составные части.

Кровь может быть обнаружена на теле подозреваемого, обвиняемого.

При осмотре таких лиц необходимо брать подногтевое содержимое, где может достаточно долго, если не предпринимались никакие меры для ее уничтожения, сохраняться кровь. Рекомендуется брать подногтевое содер жимое вместе с фрагментами ногтевых пластинок и помещать изъятый ма териал левой и правой рук по отдельности.

Подозрительные на кровь следы, обнаруженные на крупногабаритных предметах, стенах, предметах, представляющих ценность (картины, зерка ла), смывают смоченной в изотоническом растворе хлорида натрия (если раствора нет, то его можно приготовить в квартире, где проводится осмотр — к обычной воде добавляют щепотку соли, смешивают и пользуются этим подсоленным раствором). Делая смыв из подозрительного на кровь следа, обязательно готовят и контрольный смыв из предмета-носителя, на кото ром обнаружено пятно: смывают незапятнанный участок. Если можно вы резать или выпилить часть предмета со следами, напоминающими кро вяные, это следует делать без смывания пятен. Одновременно выпиливают часть материала без следов для контроля.

Пятна на снегу изымают по возможности с минимальным количеством снега и помещают в какую-нибудь посуду, на дно которой кладут кусок сложенного в несколько раз бинта. В некоторых случаях рекомендуется предварительно выпарить растаявший снег. Если подозрительное пропиты вание жидкостью обнаружено на грунте, то изъятию подвергают весь учас ток пропитывания и расположенный поблизости грунт для контрольного изучения.

Обязательные требования к изъятию и направлению следов на экспертизу следующие:

о нельзя упаковывать влажные предметы, предварительно такие объек ты высушивают при комнатной температуре и только затем вкладыва ют их в пакеты, свертки, конверты;

* каждый предмет упаковывают по отдельности;

* делают подробные надписи о содержимом пакета;

* помимо подписи лица, обнаружившего и изъявшего вещественное до казательство, на свертке должны быть подписи понятых и эксперта, если последний присутствовал при изъятии.

Вопросы, разрешаемые при проведении экспертизы крови, следующие:

о являются ли кровью следы, обнаруженные на представленных веще ственных доказательствах;

© если присутствие крови будет установлено, то определить ее видовую при надлежность (человеку или животному);

о определение групповой принадлежности крови. В случае совпадения групп крови проходящих по делу лиц по системе АВО провести ее исследование по иным системам с целью последующей конкретизации выводов;

© определение половой принадлежности крови;

• определение регионального происхождения крови;

о решение вопроса, кому из проходящих по делу лиц может принадлежать кровь, обнаруженная на вещественных доказательствах.

Определение наличия крови. Первым и обязательным этапом работы над сле дами, выявленными при осмотре места происшествия, различных предметов и др., является установление их природы — действительно ли это следы крови? Без решения этого вопроса никакие дальнейшие экспертные действия невозможны.

Для установления наличия крови было предложено большое количество раз личных методов. Часть из них относится к предварительным, а часть — к доказа тельным. Предварительными в основном пользуются на местах происшествий для получения ориентировочной информации, а доказательными — в лаборатор ных условиях.

Пред ва рит ель ные методы являются таковыми в силу своей недоста точной специфичности — не «улавливают» чрезвычайно малого количества кро ви и иногда дают положительный результат со следами, не являющимися кровя ными. Перечислим эти методы.

А Осмотр вещественных доказательств в ультрафиолетовых лучах, если об наруженные пятна или помарки кровяные, то при ультрафиолетовом свече нии они приобретают бархатисто-коричневый цвет, иногда очень старые пятна могут дать яркое оранжевое свечение. Это исследование может ока зать неоценимую помощь при работе с замытыми следами крови. В то же время свечению могут препятствовать различные примеси, присутствую щие на вещественном доказательстве — это мыло, стиральные порошки, посторонние наложения.

А Исследование с применением перекиси водорода: в присутствии крови пе рекись водорода расщепляется, что объясняется воздействием ката-лазы, входящей в состав стромы форменных элементов крови. Если на обнару женное подозрительное пятно капнуть перекисью водорода и после этого появится белая пена, то это предполагает наличие крови и позволяет экс перту продолжить работу, применив уже доказательные методы исследова ния. Такая проба оправдана при работе с большими площадями, на которых предполагается присутствие замытой крови.

Реакция на пероксидазу: в состав крови входит пероксидаза, которая под влиянием некоторых реагентов меняет цвет — изучаемый след, если в нем присутствует кровь, приобретает синеватое окрашивание. Реакция не явля ется строго специфичной, так как пероксидазной активностью обладает много веществ и принятый за кровь след может впоследствии оказаться не кровью, а соком.

Помимо перечисленных предварительных проб, существуют некоторые иные, которые используются чрезвычайно редко (особенно в экспертной практике).

К д ок а з а т е ль ным мет одам относятся микроспектроскопия, тонкослойная хроматография, микролюминесценция, применение специ альных полосок. Методы основаны на обнаружении гемоглобина и его про изводных и на определении пероксидазной активности гемоглобина. Пере числим эти методы.

А Микроспектроскопия: гемоглобин и его производные обладают спо собностью давать спектры поглощения определенного характера, причем эти спектры отличаются постоянством. Именно это свойство поглощать волны света определенной длины и лежит в основе мето да — исследование проводят с помощью специальной микроспект ральной насадки.

Для получения спектра гемохромогеиа необходимо перевести красящее вещество крови с помощью обработки вырезки из изучаемого пятна (33 % едкая щелочь, восстановитель — раствор гидросульфита аммония). Обрабо танную на предметном стекле вырезку накрывают покровным стеклом, по мещают под микроскоп, отыскивают при микроскопии наиболее прозрач ный розовато-красноватый участок и исследуют его с помощью микро спектроскопа. Выбранный участок должен занять всю щель спектроскопа.

Далее определяют, присутствует или отсутствует спектр гемохромогеиа (две полосы поглощения в желто-зеленой части спектра). Выявление этого спектра дает право на однозначное решение вопроса о наличии крови. От рицательный результат поиска требует, несмотря на высокую чувствитель ность метода, использовать какой-либо иной, более чувствительный, спо соб обнаружения крови.

В старых следах крови гемоглобин находится чаще всего в состоянии ге матопорфирина. Для получения этого спектра требуется иная обработка материала: вырезки обрабатывают концентрированной серной кислотой, материал помещают под покровное стекло, затем отыскивают спектр гема топорфирина в его красно-оранжевой части. Это также две полосы погло щения. Для микроскопии в препарате выбирают участки с ярко-оранжевы ми глыбками.

А Тонкослойная хроматография: в судебной биологии используется рас пределительная хроматография, цель которой — разделить сходные вещества, находящиеся в смеси. Реакция происходит в тонком слое сорбента (в основном пользуются пластинками силуфоля), который представляет собой неподвижную водную фазу, необходимую для осуществления реакции. Подвижной фазой служит растворитель — смесь бутанола, ледяной уксусной кислоты и воды. При продвижении растворителя по используемой подложке происходит распределение составных частей растворителя между неподвижной и подвижной фа зами. По окончании времени продвижения жидкости все компоненты распределяются неодинаково по отношению к линии страта и, таким образом, на разных уровнях силуфолевой пластинки образуются зо ны, свойственные тому или иному веществу. При выявлении инте ресующей эксперта зоны учитывают ее расположение и окраску. По этому в реакцию обязательно вводят контроль — заведомую кровь.

Известно, что интересующая эксперта-биолога зона гемоглобина, по выявле нию которой судят о присутствии крови, располагается вблизи финиша (окончание разгонки) и имеет синеватое окрашивание (пероксидазная активность гемоглоби на). Поэтому в качестве проявителя для выявления гемоглобина необходимо ис- пользовать спиртовый раствор основного бензидина и перекись водорода. В при сутствии гемоглобина крови перекись водорода разлагается, выделяется кислород.

Последний окисляет бензидин и это вызывает изменение цвета;

этим обусловлено появление окрашенной в синий цвет зоны. Это свойственно только гемоглобину крови.

Метод высокочувствителен, очень прост в исполнении, не требует дли тельной предварительной подготовки, а самое главное — специфичен. Ис следовать можно как вытяжки из изучаемых неизвестных следов на вещест венных доказательствах, так и непосредственно кусочки самих следов, ко торые как бы врезаются в пластинки силуфоля. Использование тонкослой ной хроматографии доступно для любой лаборатории (при отсутствии силу фоля в качестве неподвижного слоя можно применять хроматографичес кую бумагу марки «М», ватман, селикогель). Кроме того, метод позволяет одновременно исследовать большое количество объектов — при необходи мости до 75 в день.

В применении метода имеются некоторые тонкости, которые касаются подготовки пластинок: при работе с замытыми следами, старыми пятнами вытяжки следует наносить на силуфоль послойно многократно, каждый раз подсушивая нанесенную каплю. Кроме того, можно менять продолжитель ность реакции: 15—20 мин при горизонтальном варианте и около 1 ч — при вертикальном.

В связи с тем что пероксидазной активностью могут обладать некото рые растительные вещества (соки, хрен и др.), для повышения специфич ности необходимо прогревать пластинки силуфоля после нанесения на них исследуемых и контрольных вытяжек. В том случае, если на образцах не кровь, пероксидаза разрушится и реакция будет отрицательной. Без прогре вания пластинок можно получить ложноположительный результат.

В последнее время появились новые возможности для определения на личия крови. В клинических лабораториях имеются специальные полоски для определения скрытой крови в кале, присутствия крови в моче. Эти спе циальные полоски оказались пригодными для судебно-биологических отде лений, с их помощью можно исследовать следы крови, подвергавшиеся уничтожению различными способами. На специальные полоски, которые уже при изготовлении были соответствующим образом обработаны и под готовлены, наносят вытяжки из подозрительных на кровь следов. В наборе с полосками имеется флакон со специальным реактивом, при его добавле нии к нанесенной вытяжке в случае наличия крови цвет полоски с каплей вытяжки изменяется. Реакция высокочувствительна, строго специфична.

Для определения наличия крови фирма «Лахема» выпускает диагности ческие полоски «ГемоФАН». Принцип их использования аналогичен тако вому при работе с клиническими диагностическими полосками. Метод ап робирован, подтверждены его строгая специфичность и высокая актив ность. Для судебно-медицинских целей выпускаются тест-полоски «Регох tesmo» (Германия).

Зксперт-биолог из перечисленного арсенала методов имеет право вы брать любой и использовать его в экспертизе. Однако следует всегда по мнить, что если изначально был применен менее чувствительный способ определения и он дал отрицательный результат, то прежде, чем дать ответ об отсутствии крови, эксперт обязан использовать дополнительно более чувствительный метод и только затем, по полученным результатам, делать конкретный экспертный вывод.

Определение видовой принадлежности крови. Вторым вопросом, разре шаемым при проведении экспертиз, связанных с исследованием крови, яв- ляется установление ее видовой принадлежности. Это имеет очень важное значе ние и в первую очередь связано с тем, что практически все животные дифферен цированы по системе АВО и поэтому без установления вида крови впоследствии можно сделать очень серьезную ошибку — будет установлена группа крови, ис ключен или «привязан» к делу тот или иной человек, а на самом деле кровь ока жется кровью животного, а выявленный антиген присущ именно этому животно му. Вот почему после определения наличия крови надо обязательно установить вид этой крови и ответить на вопрос, человеку или животному данная кровь при надлежит.

Р е а к ц и я пр е ци пи т а ци и. В судебно-биологической практике вид крови определяют реакцией преципитации в различных модификациях. В реак ции участвуют антитело (сыворотка) и антиген (альбумины и глобулины). Для проведения реакции нужны два компонента — сыворотка и кровь.

Требования, предъявляемые к сывороткам: специфичность, высокая ак тивность, прозрачность, цвет. Специфичность — способность давать пре ципитаты только с белками тех животных, которые были использованы для им мунизации. Активность — специфичная «работа» сывороток при большом их разведении. Прозрачность — мутные сыворотки могут замаскировать положи тельную реакцию и стать основой для ошибочного вывода. Цвет должен быть желтым или светло-желтым. Резко окрашенные сыворотки для работы непригод ны, как и мутные, поскольку при использовании таких сывороток не всегда мож но различить осадок. Титр сывороток равен 1:10 000.

Имеется и ряд требований к исследуемой крови, которая вводится в реакцию в виде вытяжки из следа крови: вытяжки должны быть прозрачными, светлыми (эти требования обусловлены тем же, что и требования к пре-ципитирующим сы вороткам).

Разновидности реакций преципитации следующие.

А Реакция преципитации в жидкой среде: при поступлении в лабораторию партии преципитирующих сывороток проверяют их специфичность и титр.

Для этого в лабораториях должен быть набор антигенов ко всем видам вы пускаемых сывороток. Как отмечено выше, титр сывороток должен быть в пределах 1:10 000. Именно такой титр обеспечивает специфичность и ак тивность реагента;

более низкий титр — 1:5000 — может привести к лож ноотрицательному результату: подобная сыворотка просто не «уловит» не большое количество белка крови. Сыворотки с очень высоким титром — более 1:10 000, наоборот, могут дать ложноположительный результат, вы явив даже самую незначительную примесь белка, связанную с загрязнени ем предмета какими-либо выделениями и т.п.

Следует иметь в виду, что изготавливаемые преципитирующие сыворотки дают реакцию только с сывороточными белками, а гемоглобин (около 80 % всех белков) остается как бы «в стороне», хотя, казалось бы, его выявление могло рез ко облегчить работу эксперта-биолога.

Еще в 1980 г. в НИИ СМ МЗ СССР Т.А.Куприна получила сыворотку анти-НЬ.

Внедрение такой сыворотки в практику могло бы значительно расширить эксперт ные возможности: выявление крови человека в смешанных следах, установление вида не только крови, но и отдельных органов, тканей, некоторых выделений. Од нако производство сыворотки анти-НЬ налажено не было и пока можно говорить только о теоретической возможности подобного исследования.

Преципитацию в жидкой среде проводят следующим образом. Из изуча емых следов и предметов-носителей, на которых расположены следы, с по мощью изотонического раствора хлорида натрия (а при труднорастворимых пятнах — с помощью 1 % раствора трипсина) готовят вытяжки. Усреднен ное время подготовки вытяжек 18—20 ч в условиях холодильника (6 °С).

Однако время может меняться, что зависит от исследуемого материала: его увеличивают при работе с плохо растворяющимися и старыми следами, со кращают при работе с хорошо растворимыми пятнами. Экстрагирование при сложных пятнах можно проводить в течение 1—2 ч в термостате при температуре 37 °С. Далее полученную вытяжку подвергают следующим ма нипуляциям. Если заметно помутнение раствора, то вытяжку центрифуги руют и фильтруют. В тех случаях, когда избавиться от мути не удается, пра вильнее всего отказаться от варианта реакции в жидкой среде и применить какой-либо иной метод исследования.

Большую роль играет концентрация белка в вытяжке: вытяжка должна быть разведена до бледно-желтого цвета, так как в противном случае нельзя исключить вероятности получения неспецифического результата. Присут ствие белка в вытяжке проверяют с помощью пробы Геллера (проба с азот ной кислотой). В капилляре приводят во взаимодействие концентрирован ную азотную кислоту и вытяжку — на границе их взаимодействия должно образоваться тонкое белое кольцо. Если кольцо широкое, вытяжку разво дят изотоническим раствором хлорида натрия до нужной концентрации.

Подготовив и проверив сыворотки и вытяжки, эксперт приступает к не посредственному проведению реакции преципитации. Помимо вытяжки из объекта, в реакцию вводят вытяжку из незапятнанного предмета-носителя и соответствующий антиген. Исследование всегда изначально проводят с 3 видоспецифическими сыворотками: одна из них — на белок человека, а вид двух других зависит от обстоятельств, чему следует уделять особое вни мание.

Наиболее рационально поступать следующим образом. Как минимум в 3 пробирки-уленгутки помещают вытяжку из следа крови и аккуратно вно сят сыворотки (соотношение 1:10);

аналогично поступают с вытяжкой из предмета-носителя. Наблюдение за выпадением осадков ведут в течение ч. Положительная реакция, позволяющая сделать вывод об отношении крови к определенному виду, — это выпадение кольца осадка на границе между вытяжкой и сывороткой. Осадок должен также образоваться при взаимодействии сывороток и соответствующего антигена. Отрицательный результат получают с вытяжкой из предмета-носителя. При работе с боль шим количеством объектов надо сделать следующее. Поместив в пробирки вытяжки из объектов и предметов-носителей, добавляют сыворотки. При этом надо помнить, что так как наиболее часто эксперт имеет дело с кро вью человека, то сыворотку для выявления белка человека одномоментно добавляют в объекты и предметы-носители. В отношении других сывороток подход иной: их надо добавить только к вытяжкам из объектов и временно оставить «в покое» вытяжки из предметов-носителей. Если результат при использовании этих сывороток окажется отрицательным, то и нет никакой нужды исследовать предметы-носители. При такой тактике значительно экономятся реагенты, что имеет немаловажное значение. В тех случаях, когда какая-либо сыворотка даст положительную реакцию с изучаемым объектом, необходимо исследовать предмет-носитель к этой вытяжке.

Если предметы-носители дают положительную реакцию преципитации, то эксперт обязан отказаться от дачи ответа о виде крови. Если с 3 введен ными в реакцию сыворотками реакция на присутствие конкретного белка оказывается отрицательной, то применяют дополнительный набор ранее неиспользованных сывороток, предполагая присутствие крови какого-либо животного. Встречаются случаи отрицательного результата реакции со всеми сыворотками, имеющимися в наборе эксперта-биолога. При этом следует предположить наличие крови рыбы или редкого животного, сыво ротка на выявление которого в наборе отсутствует или вообще не изготав ливается. Экспертный вывод при таком результате сделан быть не может.

Следует иметь в виду, что иногда решить вопрос о крови животного, на ко торую нет конкретной сыворотки, можно путем учета семиотики животно го мира. Например, если известно, что волк и собака относятся к одному семейству, то кровь волка должна дать положительную реакцию с сыворот кой, преципитирующей кровь собаки, но несколько позже, чем с кровью собаки. Такие результаты позволяют предположить присутствие крови волка.

А Хроматография не нашла широкого применения в практике, несмотря на свою очевидную доступность. Реакция осуществляется в градуиро ванных пипетках или пробирках (модификация В.П.Чернова), в кото рых соединяют от 0,1 до 0,3 мл вытяжки и соответственно 0,01 — 0,03 мл сыворотки. Смеси оставляют на 1 ч в термостате при 37 °С, затем их вносят в градуированные пипетки, которые устанавливают на хроматографическую бумагу с целью постепенного переноса смеси на эту бумагу. Во время взаимодействия в жидкой среде образуется прочный комплекс антиген—антитело, который при переносе на бу магу сохраняется в центре образовавшегося пятна. Этот комплекс можно выявить путем окрашивания бумаги специальным красителем, состоящим из 0,1 г бромфенолового синего, 500 мл этилового спирта и 5 мл ледяной уксусной кислоты. После 10—15-минутной окраски бумагу в течение 3—5 мин промывают проточной водой, таким обра зом удаляя несвязанные белки. Положительный результат — образо вание в центре пятна зоны синего цвета.

Методика проста, доступна и самое главное чрезвычайно высокочувст вительна — по чувствительности хроматография превышает преципитацию в жидкой среде в 5—10 раз.

А Реакция преципитации в твердой среде: в основе данного метода лежит специфическое взаимодействие антигена и антитела. Если в два от верстия в агаровом геле, расположенные на определенном расстоя нии, внести вытяжку из крови (антиген) и преципитирующую сыво ротку (антитело), то эти компоненты при соответствии устремятся навстречу друг другу и на месте их контакта выпадет осадок в виде по лосы (иногда полос). Реакция имеет ряд преимуществ перед таким же исследованием в жидкой среде: можно исследовать мутные вытяжки, гель можно приготовить на большом стекле и одновременно исследо вать весь необходимый материал, затрачивается меньшее количество сывороток и вытяжек, на время, пока происходит диффундирование, эксперт и лаборант свободны и могут вести иные работы.

Реакцию проводят следующим образом. Загодя впрок готовят 1 % агар, который достаточно долго хранится в холодильнике. При надобности агар подогревают и тонким слоем выливают на стекло. После застывания в агаре специальным пробойником делают отверстия, располагая их парал лельными рядами. В периферические лунки вносят вытяжки или нити ткани, взятые из объекта, а в центральные — соответствующие сыворотки;

для контроля вносят предметы-носители и антиген. Реакция протекает в течение 18—20 ч во влажных камерах. Учет результатов осуществляют нево оруженным глазом без предварительной обработки агара. Положительный результат — появление полос преципитатов на границе сывороток и вытя жек. Иногда, если вытяжки старые, время реакции можно увеличивать до нескольких суток.

А Встречный иммуноэлектрофорез: реакция преципитации в твердой среде при некоторых преимуществах имеет и отрицательную сторо ну — продолжительность исследования по времени, что в ряде экс пертиз недопустимо. Оказалось, что движение антигена и антитела навстречу друг другу можно ускорить, если использовать в реакции электрический ток. Под действием тока антитела сывороток движутся к катоду, а антигены вытяжек из крови — к аноду. Движение про исходит довольно быстро, и результаты реакции получают в течение 30 мин.

Постановка реакции на первых этапах практически не отличается от описанной выше. На стекло наносят тонкий слой агарового геля, который готовят на специальном агаровом буфере. В агаре после застывания делают параллельные ряды отверстий, которые заполняют вытяжками (левый ряд) и сыворотками (правый ряд). Стекло помещают между двумя специальны ми камерами-ванночками. Между камерами и стеклом прокладывают фильтровальную бумагу (проводник тока на стекло). В камеры вносят пере ходный буфер (именно он и попадает в агар через фильтровальную бумагу);

вкладывают электроды и подключают ток. Параметры опыта: сила тока мА, напряжение 200 В, время 30—40 мин. После отключения аппарата стек ла промывают дистиллированной водой и учитывают результаты: поло жительный — выпадение полос преципитатов на границе взаимодействия сывороток и вытяжек из пятен крови. При неясных результатах стекла можно еще на 1 сут оставлять во влажных камерах, а затем вновь учитывать полученные данные.

А Встречный иммуноэлектрофорез на мембранах из ацетата целлюлозы:

доказано, что наилучшими носителями являются ацетат-целлюлоз ные мембраны. Форез на этих мембранах имеет целый ряд преиму ществ по сравнению с агаровым гелем, бумагой, полиакриламидным гелем. Готовая к применению мембрана не нуждается в подготови тельных операциях, что сокращает время, затрачиваемое на исследо вания;

однородность структуры мембраны и стабильность ее физико химических свойств обеспечивают получение четких и воспроизводи мых фореграмм;

для работы на мембранах требуется чрезвычайно малое количество как вытяжек, так и сывороток — 1—2 мкл;

форе граммы могут длительное время храниться в качестве наглядного до казательства;

техника работы проста и доступна.

Реакцию проводят следующим образом. На смоченной мембране специ альным приспособлением формируют параллельные канавки, мембрану за крепляют в рамке между электродными отделениями, в которые заливают электродный буферный раствор. На 2—3 мин дают напряжение 200 В для снятия с пленки нежелательных примесей. В канавки по тому же принци пу, что и при работе с агаром, вносят слева вытяжки, справа — сыворотки;

подключают ток и в течение 15—25 мин проводят реакцию при комнатной температуре. Параметры опыта: сила тока 7 мА, напряжение 200 В. После отключения аппарата пленку помещают в изотонический раствор хлорида натрия для отмывания свободных белков, окрашивают в течение 3—5 мин амидо черным, промывают в дистиллированной воде, удаляя избыток кра сителя, и учитывают результаты (это можно делать как на мокрой, так и на высушенной пленке). Положительный результат — появление полос преци питатов между введенными в реакцию компонентами. Полосы окрашива ются в синий цвет. На 2—3 мин дают напряжение 200 В для удаления с пленки нежелательных посторонних примесей.

А Иммунофлюоресценция: реакция высокочувствительная, можно полу чить результат при использовании даже одной антигенсодержащей клетки, основана на люминесценции меченых антител, вступивших в контакт с антигенами, расположенными на поверхности изучаемых объектов. Метод позволяет устанавливать видовую принадлежность микроследов при наличии замытых пятен, т.е. в тех случаях, когда белка в следах ничтожно мало.

Реакцию можно проводить как с нитями из пятен, так и с высушенны ми на предметных стеклах вытяжками. Вытяжки предпочтительнее гото вить на дистиллированной воде. Содержание белка в вытяжке не должно превышать 1:10 000. Разведенную вытяжку в виде капли (1 мкл или практи чески одно прикосновение пипетки к стеклу) наносят на обезжиренные предметные стекла, высушивают, фиксируют этиловым или метиловым спиртом и добавляют по капле преципитирующие сыворотки 3 видов — че ловека, рогатого скота и птицы. Активность и специфичность всех реаген тов предварительно проверяют. Стекла оставляют на 30—60 мин во влаж ных камерах при комнатной температуре. В это время готовят флюоресци рующую сыворотку (эти сыворотки в сухом виде выпускаются НИИ эпиде миологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН). На этикетке ампулы с сывороткой указано количество дистиллированной воды, которой разво дится порошок. Проверяют титр флюоресцирующей (красящей) сыворотки по интенсивности свечения. Свечение оценивают в баллах, для работы нужно разведение, дающее самое яркое свечение — 3 или 4 креста (светит ся либо весь препарат, либо его часть, в обоих случаях наиболее яркое све чение по периферии препарата).

После отмывания объектов, приведенных во взаимодействие с преци питирующими сыворотками, и их подсушивания к препаратам добавляют соответствующую красящую сыворотку и вновь оставляют их на 30—60 мин при комнатной температуре во влажных камерах. Результаты учитывают под люминесцентным микроскопом после отмывания препаратов от флюо ресцирующих сывороток. Положительный результат — яркое свечение, со ответствующее 4 или 3 крестам.

Существует два способа разобранного выше метода — прямой и непря мой.

о Прямой: к объекту исследования добавляют флюоресцирующую сы воротку к белку человека (при надобности к белку какого-либо вида животного), отмывают и оценивают люминесценцию. Такая реакция иммунофлюоресценции неспецифична и поэтому практически не ис пользуется.

• Непрямой: исследуемый объект сначала соединяют с преципитирую щей сывороткой. Если в объекте присутствовал искомый белок, обра зуется специфический преципитат. Последующим отмыванием удаля ют несвязанные антитела, а специфический комплекс остается. К от мытому объекту добавляют красящую сыворотку анти-«кролик» (пре- ципитины имеют кроличью природу, так как сыворотки готовят пу тем иммунизации кроликов). Если преципитат имелся, то красящая сыворотка присоединится к белку и наблюдается свечение при люми несцентной микроскопии.

При проведении реакции следует изучить предмет-носитель для уточне ния вопроса о возможной аутофлюоресценции.

Использование пластинок OBTI-mecm: ОВТЛ-тест — это набор для им мунохроматографического одноэтапного определения скрытой крови в кале. Набор представляет собой продолговатую пластинку с двумя небольшими углублениями округлой и продолговатой форм. Плас тинка содержит нитроцеллюлозную мембрану, на которую нанесены мышиные моноклональные антитела к гемоглобину человека, антите ла мыши к гемоглобину человека и антигены козы к IgG мыши. В на боре имеются специальная таблетка-осушитель, препятствующая ув лажнению мембраны, флакон с трис-буфером и аппликатор для экс трагирования исследуемого материала. Набор пригоден в течение длительного времени при соблюдении условий хранения — его нельзя замораживать или перегревать.

Основное достоинство метода — он строго специфичен для гемоглоби на человека, так как получение положительного результата при постановке данного теста позволяет одномоментно решить вопрос о наличии крови и ее видовой принадлежности. В течение 2—3 мин эксперт с помощью опи санной методики решает одновременно два обязательных вопроса практи чески каждого постановления следователя — наличие и вид крови в следах на вещественных доказательствах.

37.2о Исследование ЖИДЕОДЙ крови Эритроцитарные изосерологические системы. Сис т е ма АВО. Ис следование жидкой крови можно провести по целому ряду изосерологичес ких систем, из которых система АВО занимает основное место. По данной системе кровь людей делится на 4 группы — О, А, В и АВ.

Антигены системы АВО выявляют в жидкой крови двойным пробироч ным способом (по Шиффу), используя либо изосыворотки, либо иммунные сыворотки анти-А, анти-В и анти-Н. Подготавливают 4 пробирки, в 2 из них помещают 2 капли известных сывороток и в 2 — сыворотку исследуе мой крови. К известным изосывороткам добавляют по 4 капли 1 % взвеси изучаемых эритроцитов, а к исследуемым сывороткам — 4 капли стандарт ной взвеси эритроцитов групп А и В. Пробирки центрифугируют в течение 4 мин, затем после встряхивания учитывают результаты невооруженным глазом и микроскопически. Появление агглютинации свидетельствует о выявлении соответствующего свойства.

При работе с иммунными сыворотками исследование проводят на плос кости, на которой смешивают в соотношении 1:15 отмытые эритроциты и сыворотки. После смешивания результаты учитывают невооруженным гла зом, а при необходимости — под лупой.

При определении групповой принадлежности крови по системе АВО не обходимо знать, что выраженность антигенов данной системы, особенно антигена А, у разных людей неодинакова. Различают подгруппы антигена А — Al, A2, A3 и др. Реже могут встречаться слабовыраженные антигены В и Н. Это имеет очень большое значение в практической деятельности экс перта-биолога, так как может привести к неправильному определению групповой принадлежности крови. В связи с этим любые сомнительные случаи требуют повторов реакций с использованием новых серий реагента, введения в реакцию архивных образцов крови с разной выраженностью антигена А. Кроме того, известно, что антиген А по своей природе имеет прямую связь с антигеном Н: при «сильном» антигене А1 сопутствующий антиген Н присутствует в небольшом количестве, он более слабо выражен, чем при наличии антигена А2, и т.д. При «слабых» антигенах A3 и А4 коли чество сопутствующего антигена Н часто превышает уровень основного ан тигена группы А. Такую взаимосвязь можно использовать при подозрении на слабовыраженный антиген А.

Антиген Н определяют с помощью иммунной сыворотки анти-Н, моно клональной сыворотки анти-Н и каких-либо лектинов. Принцип реакции постановки такой же, как и при работе с антигенами А и В.

Сист ема MNSs. По антигенам системы MNSs кровь людей можно разделить на 9 групп: MS, Ms, NS, Ns, MNS, MNs, MSs, NSs, MNSs. Такое деление позволяет более конкретно решать вопросы, связанные с диффе ренцированием крови, с кровным родством. Однако из-за того, что отече ственная промышленность не изготавливает сыворотки анти-S и анти-s, на практике производится только работа с сыворотками анти-М и анти-N, что, безусловно, ограничивает экспертные возможности.

Антигены М и N выявляют на плоскости, на которой смешивают 1 ка плю отмытых эритроцитов с сыворотками в соотношении около 1:10. За тем результаты реакции учитывают невооруженным глазом, в ряде случаев — с помощью лупы. Предварительно реагенты проверяют на активность и специфичность в такой же реакции: к сывороткам анти-М добавляют стандартные эритроциты группы N и, наоборот. Отсутствие агглютинации свидетельствует о специфичности реагентов. Активность сывороток прове ряют при их взаимодействии с одноименными образцами крови: появление выраженной агглютинации в течение первых секунд позволяет использо вать сыворотки в исследовании, так как они обладают высокой активнос тью.

Необходимо учитывать доказанную неоднородность антигенов М и N, их возможную различную выраженность, наличие редких форм антигенов.

Это обязывает экспертов при невыявлении какого-либо свойства использо вать несколько серий сыворотки прежде, чем дать вывод об отсутствии ан тигена.

Си с т е ма Pp. По антигену Pi кровь людей делится на 2 группы — Pi+ (до 80 %) и Pf (20 %). Как и в ранее описанных системах, антиген Pi раз личают по его выраженности, для этого используют такие обозначения, как Pi сильное свойство, средней выраженности и слабое. В связи с этим при выявлении антигена Pi всегда надо использовать несколько серий сы воротки анти-Pi с разным титром.

Реакцию ставят следующим образом. Агглютинацию проводят в про бирках. Сыворотки предварительно проверяют на специфичность и актив ность. Если сыворотка специфична, то не должно быть агглютинации сы воротки анти-Pi с образцом крови группы Pf. Важное значение имеет про верка активности сывороток, исходя из различной выраженности антигена в разных образцах крови. Поэтому в реакцию агглютинации необходимо вводить несколько образцов с заведомо известной выраженностью антиге на Р. Следует работать с сыворотками, открывающими слабовыраженный антиген.

В пробирки вносят 2 капли сыворотки, проверенной на активность и специфичность, добавляют 1 каплю 2 % взвеси испытуемых эритроцитов.

Последние следует 1 раз отмыть, а затем готовить взвесь. Если эритроциты свежевзятые, то их отмывание не является обязательным этапом работы.

Пробирки со смесью сыворотки и эритроцитов оставляют на 2 ч при ком натной температуре, после чего в течение 1 мин центрифугируют, встряхи вают и производят макро- и микроскопический учет. Положительная реак ция — образование агглютинатов разной степени выраженности.

Система Rh. Система Rh (резус) — одна из наиболее сложных изосе рологических систем, в которой открыты антигены С, D, Е, с, е, Cw;

предпо лагается наличие антигена d при отсутствии в крови антигена D, однако сы воротки анти-d пока нет. Каждый антиген может быть в различных вариан тах. Комбинации перечисленных антигенов могут образовывать до 78 гено типов. Факторы С, D и Е свойственны Rh-положительной крови (у 80—85 % населения), а с, е и d — Rh-отрицательной (у 15—20 % населения).

Сыворотки, изготавливаемые для обнаружения указанных антигенов, могут быть с полными и неполными антителами, что влечет за собой ис пользование различных вариантов методик в зависимости от реагента. Если речь идет о сыворотках с неполными антителами, то в этом случае следует знать, что такие сыворотки могут давать агглютинацию только в белковой среде и для этой цели используют 10 % раствор желатины, 20—30 % бычий или человеческий альбумин, биогель, сыворотку группы АВ, разведенную в 7 раз, и некоторые другие среды. Сыворотки с полными антителами «рабо тают» и в солевой, и в коллоидной среде.

К сожалению, лаборатории России не имеют полного набора сывороток против антигенов системы Rh и из-за этого способны открывать лишь два антигена — D и С.

Сыворотки, как обычно, сначала проверяются на специфичность и ак тивность, затем используют для работы с неизвестной в групповом отноше нии по данной системе кровью.

Существует несколько методик для выявления антигена D (практичес ки, всегда речь идет только об этом антигене). Наиболее часто в лаборато риях используют тест с желатиной. Исследование проводят в пробирках.

8 пробирки вносят по 1 капле сыворотки анти-D, по 1 капле подогретого 10 % раствора желатины и по 2 мл неразведенной крови. После встряхива ния пробирки помещают на 3 мин в водяную баню при 48 °С. Затем в про бирки до верха добавляют раствор хлорида натрия. Пробирки 2—3 раза переворачивают и при ярком освещении невооруженным глазом учитывают результаты. Положительная реакция — появление хлопьев агглютинатов различной величины. При отрицательной реакции жидкость в пробирке однородно окрашена, хлопья отсутствуют.

Очень информативна реакция Кумбса, однако, к сожалению, антигло булиновая сыворотка Кумбса недоступна многим лабораториям. Для про ведения пробы Кумбса готовят 5 % взвесь эритроцитов на альбумине. В пробирках смешивают по 1 капле этой взвеси и антисыворотки. Смеси вы держивают 15 мин в термостате при 37 °С, затем их 3 раза отмывают рас твором хлорида натрия при центрифугировании. К отмытому осадку добав ляют 1 каплю антиглобулиновой сыворотки Кумбса, содержимое пробирок центрифугируют в течение 2 мин. Учет результатов производят невоору женным глазом после легкого встряхивания пробирок. Положительный ре зультат — появление крупных агглютинатов в виде хлопьев. При наличии слабовыраженного антигена конгломераты могут быть достаточно мелки ми. Следует иметь в виду, что взвесь эритроцитов можно готовить и на изо- тоническом растворе хлорида натрия, но при таком варианте экспозиция материала в термостате составляет 1 ч. Все остальные этапы совпадают.

Во все опыты обязательно вводят контроли — кровь заведомо известных групп по системе Rh.

Си с т е ма Le. Система Le (Льюис) несколько отличается от других, так как. находится в прямой зависимости от категорий вътделитепъства. +Т\о системе Le люди делятся на группы Le(a+b"), Le(a"b+), Le(a~b") и Le(a b+).

М.И.Потапов в 1970 г. открыл антиген D системы Le и гипотетически пред положил наличие антигена С, который был найден в 1972 г. Доказано, что люди с наборами антигенов Le(a~b+d~c~) и Le(a~b"d+c) являются выделителями антигенов по системе АВО, а с группами Le(a+b"d"c") и Le(a~d"d~c+) — невыде лители по системе АВО.

Антигены Le(a) и Le(b) в жидкой крови выявляют следующим образом.

В пробирки помещают по 2 капли антисывороток a-Le(a) и a-Le(b), добав ляют по 1 капле 3 % взвеси исследуемых эритроцитов, перемешивают и ос тавляют на 1 ч при комнатной температуре. По истечении указанного вре мени центрифугируют и макро- и микроскопически учитывают результаты.

Положительный результат — агглютинация соответствующих введенной сыворотке эритроцитов. Параллельно изучают все необходимые контроли, а сыворотки перед употреблением проверяют на специфичность и актив ность по тому же принципу, что и все остальные.

Сывороточные системы. Сис т е ма Gm. В этой системе насчитыва ется более 25 антигенов, которые по мировой классификации обозначают ся цифрами от 1 до 26. В данном разделе речь пойдет только об одном ан тигене — Glm(l). Это связано с тем, что все судебно-биологические от деления России располагают сывороткой лишь к этому антигену — сыво роткой aHTH-Glm(l).

Антиген выявляют с помощью реакции торможения агглютинации. Ее проведение требует подготовки стандартных эритроцитов, служащих как бы индикаторами — по их реакции судят о наличии или отсутствии антиге на Glm(l). Поэтому вначале стандартные эритроциты 0D+ приводят в кон такт с сывороткой aHTH-DGlm(l) и после этого проверяют, произошла ли сенсибилизация этих эритроцитов. Если этап сенсибилизации прошел хо рошо, то в течение первых 2—5 мин появится яркая агглютинация эритро цитов. Если она не наступает, то сенсибилизацию повторяют. Помимо опи санного контроля, необходимо провести еще два: проверить «работу» сен сибилизированных эритроцитов с разведенной сывороткой изучаемой крови, пропустив этап контакта с сывороткой aHra-Glm(l). Это так назы ваемый отрицательный контроль. Возможны и иные контрольные опыты.

При получении правильных результатов контрольных опытов проводят реакцию с изучаемой кровью. На плоскости смешивают по 1 капле крови, сыворотки и сенсибилизированных эритроцитов;

жидкости перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30 мин для экспозиции. Если в изучаемом пятне присутствовал антиген, то он свяжет сыворотку и агглю тинация эритроцитов будет отсутствовать — задержка или торможение аг глютинации. Если же в исследуемой крови искомый антиген отсутствовал, то наблюдается ярко выраженная агглютинация сенсибилизированных эритроцитов. В реакцию для контроля обязательно вводят образцы крови из архива лаборатории, содержащие и не содержащие выявляемый антиген.

Сис т е ма Нр. Гаптоглобин (Нр) — это белок сыворотки крови, от носящийся к аг-глобулинам и обладающий в зависимости от своей формы (типа) разной электрофоретической подвижностью. По этому признаку различают 3 типа Нр: Нр 1-1, Нр 2-1 и Нр 2-2. Наибольшей подвижностью 26 - обладает фракция 1, а более медленно движется фракция 2. Встречаются случаи агаптоглобинемии — отсутствие всех фракций Нр: фенотип таких людей обозначается как Нр 0, если это не учитывать, можно прийти к оши бочным выводам.

Для определения групп Нр используют электрофорез в крахмальном геле, полиакриламидном геле, на бумаге. Сравнение предложенных сред для проведения реакции свидетельствует о том, что наиболее стойкие и четкие результаты получают при электрофорезе в крахмальном геле. Одна ко следует отметить, что в большинстве лабораторий предпочитают исполь зовать полиакриламидный гель.

Важное значение в выявлении фракций Нр имеют буферные растворы.

По данным А.С.Гладких, наилучшие результаты можно получить с помо щью трис-цитратной буферной системы. Имеются достоинства и у других систем, в частности фосфатной и боратной. Любая из буферных систем яв ляется системой выбора, и эксперт вправе использовать любую.

Подготовив рабочий блок выбранным способом, эксперт «прививает» исследуемые и контрольные сыворотки. Предварительно в блоке делают прививочные канавки с помощью специального трафарета. Ток подключа ют через выпрямитель, так как он должен быть постоянным. Сила тока прямо зависит от объема блока. Для окраски геля обязательно применяют такие компоненты, как перекись водорода и бензидин, поскольку в реак ции участвует гемоглобин и окраска связана с его пероксидазной активнос тью. Результаты учитывают в сравнении с введенными в реакцию заведомо известными в групповом отношении по системе Нр образцами крови.

С и с т е м а Gc (группоспецифический компонент). В той же зоне белков, что и гаптоглобин, был обнаружен новый белок, получивший на звание «группоспецифический компонент». В системе Gc различают 3 фе нотипа: Gc 1-1, Gc 2-1 и Gc 2-2. Эти различия обусловлены разной мигра цией фракций системы Gc.

Для определения фенотипов системы Gc было предложено несколько методик: иммуноэлектрофорез в агаровом геле, полиакриламидном геле, изоэлектрофокусирование и др. Безусловно, получение хороших результа тов в значительной мере зависит от качества очистки сывороток анти-Gc.

В противном случае независимо от состава избранного блока можно полу чить чрезвычайно большое число дуг, что препятствует объективной оцен ке результатов.

Блок окрашивают кумасси голубым и амидо черным 10В. В реакцию не обходимо вводить образцы крови лиц с известной групповой принадлеж ностью по системе Gc.

Ферментные системы. К настоящему моменту известно очень большое количество ферментных систем. Все они обладают значительным полимор физмом, что очень важно для индивидуализации крови. Чаще применяют системы фосфоглюкомутазы, кислой фосфатазы эритроцитов, эстеразы D, аденилаткиназы и некоторые другие.

Методы по определению групп перечисленных систем достаточно слож ны, основаны на электрофоретической подвижности фракций;

каждая из систем требует индивидуального подхода.

Лейкоцитарная система (HLA). Система представлена множеством ан тигенов, группирующихся на 5 определенных локусах — А, В, С, D, DR.

Эти антигены называются антигенами гистосовместимости, их насчитыва ется около 80. Антигены находятся на поверхности клеточных мембран и поэтому легко выявляются. Систему HLA анализируют на станциях пере ливания крови и институтах гематологии и переливания крови — туда и следует обращаться при необходимости проведения подобного исследова ния. Данные, получаемые по системе HLA, приближают к решению вопро са о конкретном источнике происхождения крови.

А Судебно-медицинская экспертиза установления кровного родства. Анти гены перечисленных выше систем наследуются — передаются от роди телей детям. Следует отметить, что результаты исследования крови ре бенка и его заявленных родителей по всем указанным ранее системам, включая и систему HLA, не позволяют утверждать отцовство — только в ряде случаев они исключают отцовство (если речь идет и об исследо вании по системе гистосовместимости, то исключение ложноуказанного в качестве отца мужчины эта система выявляет в пределах 98 %).

Принципиально экспертизу по определению кровного родства (отцов ства, материнства) можно проводить в самом раннем возрасте ребенка. Ис ключение в этом случае составляет исследование по сывороточным систе мам, так как последние окончательно формируются к 8—10 мес внеутроб ной жизни. Именно поэтому биологическое исследование крови по подоб ным делам следует проводить по достижении ребенком возраста 1 года. Это требование не относится к генетическому исследованию, когда изучение крови возможно практически в момент рождения ребенка.

Правила проведения экспертизы следующие. У матери, ребенка и заяв ленного отца кровь желательно брать одновременно в соответствующей ла боратории. Однако имеют место случаи, когда такое взятие в силу объек тивных причин невозможно (проживание в разных отдаленных городах, один из участников в больнице), тогда кровь можно взять в разных местах, лучше в медицинском учреждении или с приглашением медицинских ра ботников к больному. В этом случае обязательно составляется и подписы вается участниками процесса акт, который вместе с кровью передается в лабораторию, проводящую экспертизу. Иногда кровь кого-либо из пере численных лиц может поступить из морга, в этом случае судебно-медицин ский эксперт передает кровь со своим направлением в лабораторию.

Кровь берут из пальца и далее исследуют по всем тем системам, для от крытия которых имеются сыворотки (см. выше). Все данные по каждой сис теме тщательно регистрируют в специальных рабочих таблицах, далее прово дят анализ результатов, на основании чего делают вывод о возможности про исхождения ребенка от данной пары или отцовство исключается. Если дан ные для исключения отцовства не получены, то эксперт в своих выводах обя зан сделать оговорку о том, что судебно-биологическое исследование крови не позволило решить вопрос об отцовстве и тем самым рекомендовать судам продолжить исследование с применением генетических методов, результаты которых позволяют однозначно решать вопрос об отцовстве и материнстве.

37.3. Исследование пятен крови Экспертизы, связанные с исследованием крови, составляют значитель ный удельный вес среди всех проводимых в судебно-биологических отделе ниях экспертиз (60—80 %). Установление групповой принадлежности крови в следах на вещественных доказательствах — одно из основных действий, предпринимаемых экспертом-биологом при проведении этих экспертиз.

С целью решения вопроса о конкретном человеке, от которого произо шла кровь, определяют групповую принадлежность крови по целому ряду систем — ABO, MNSs, Pp, Rh (антиген D), Le, Gm, Hp и некоторым дру- 26* гим. Тактически наиболее целесообразно вначале исследовать образцы крови проходящих по делу лиц по нескольким системам и в случае выявле ния различия по какой-либо из них изучить пятно крови (особенно при его незначительных размерах) именно по этой различающей образцы системе.

Такой подход значительно экономит время, затрачиваемое на экспертизу, а также позволяет сделать выводы при наличии ничтожно малых следов крови. Если размер пятна позволяет, то исследовать пятно можно последо вательно, не проводя предварительную работу с образцами по многим сис темам. И в этом случае принято начинать исследование с системы АВО.

Выявление антигенов А, В и Н. Антигены системы АВО наиболее устой чивы к воздействиям факторов внешней среды и сохраняются в следах крови достаточно долго — при определенных условиях в течение десятиле тий. Отрицательными факторами являются влага, яркие солнечные лучи, бурное развитие микрофлоры.

Обнаружение антигенов А, В и Н обеспечивается тремя основными ре акциями, каждая из которых является реакцией выбора, и эксперт вправе использовать любую из них. К этим реакциям относятся абсорбция агглю тининов в классическом варианте, абсорбция-элюция и смешанная агглю тинация.

Колич е с т в е н на я а бс орбция аг г лют ининов. Иссле дуемый материал заливают известными диагностическими реагентами в оп ределенном титре, последние в течение конкретного времени контактиру ют с изучаемыми объектами. Во время контакта происходит связывание антигенов пятна крови с соответствующими антителами сыворотки и в ре зультате этого исходный титр реагентов снижается. По разнице титра ис ходного и абсорбированного реагента решается вопрос о наличии или от сутствии в изучаемом материале того или иного антигена.

Для выявления антигенов А и В используют стандартные изосыворотки и иммунные сыворотки анти-А и анти-В. Титр этих сывороток в классичес ком варианте составляет 1:32, поскольку при средней выраженности анти генов крови именно при таком титре достигается наиболее полная абсорб ция антител.

В классическом варианте приняты следующие соотношения: 50 мг пятна крови и 0,3 мл сыворотки или соответственно 25 мг и 0,15 мл. В це лях экономии материала лучше брать навески по 25 мг. При исследовании соскобов (корочек) крови берут навески по 15 мг и заливают их 0,2 мл реа гентов. Следует иметь в виду, что предмет-носитель, на котором распо лагается пятно, может влиять на реагенты из-за как специфического (пот, моча и др.), так и неспецифического (обсеменение микроорганизмами, по сторонние наложения и др.) загрязнения. Поэтому в реакции по выявле нию антигенов необходимо вводить не только пятна, но и контрольные участки предметов-носителей в тех же количественных соотношениях, что и пятна. Измельченные навески помещают в отдельные пробирки и залива ют избранными реагентами;

материал тщательно перемешивают с сыворот кой и оставляют на 18—20 ч для абсорбции в холодильнике при 3—6 °С.

Продолжительность абсорбции можно менять в зависимости от состояния пятна (давность образования, выраженность антигенов в образцах и т.д.):

2—4 ч при комнатной температуре, 1 ч в термостате при 37 °С.

П о окончании абсорбции производят учет результатов, что заключается в титровании исходных и абсорбированных сывороток и в сравнении их титра. Титрование производят в пробирках с помощью 1 % взвеси эритро цитов групп А и В;

центрифугируют в течение 4 мин при 1500 об/мин, встряхивают и производят макро- и микроскопический учет результатов.

При титровании не должен изменяться титр исходной и абсорбирован ной предметом-носителем (это в идеале) сывороток — в этом случае оче видна «работа» сыворотки, абсорбированной пятном крови. Если снижение титра составляет 3 и более ступеней, то можно уверенно говорить о присут ствии в пятне крови того или иного антигена;

если титр не изменился, то, следовательно, антиген, соответствующий антителу сыворотки, в пятне от сутствует.

В том случае, когда при титровании предмет-носитель снизил титр сы воротки на 4 и более ступеней, то нет никакого смысла исследовать кровь в данной реакции — наиболее рационально избрать иную реакцию, предна значенную для выявления антигенов. Именно по этой же причине реко мендуется предварительно исследовать в количественной реакции предме ты-носители и только при отсутствии их влияния на реагенты начинать ра ботать с кровью (это экономит материал пятен, время эксперта, реагенты).

Существует способ уменьшения влияния предмета-носителя — «нагруз ка» агглютининами: предметы-носители и пятна после первой реакции вновь заливают теми же сыворотками в тех же количественных соотноше ниях, проводят абсорбцию и учитывают результаты. Предполагается, что в том случае, если влияние было обусловлено неспецифическими загрязне ниями, последние не смогут выдержать «нагрузку» и по мере ее примене ния перестанут снижать титр реагентов, а истинные антигены крови будут продолжать реагировать с ними. Специфические загрязнения могут «вы держать» и такие этапы исследования, и «нагрузка» ни к чему не приведет.

Поэтому при обнаружении влияния предмета-носителя рекомендуется пе ред «нагрузками» выяснить природу влияния и только после этого решать вопрос, продолжать количественную абсорбцию агглютининов или перейти к иной реакции по выявлению антигена системы АВО.

Для повторных заливок материала можно использовать сыворотки с более высоким титром, который не способен «выдержать» предмет-носи тель. Для этого предварительно проверяют титр антигена в образце крови, поскольку при слабом антигене такая методика неприемлема.

При хорошей выраженности антигена в образце крови, присутствие ко торой подозревают в пятне на вещественном доказательстве, можно приме нить укороченную фазу абсорбции — до 2—3 ч. При этом воздействие пред мета-носителя (особенно неспецифическое) обычно не проявляется.

Частичная водонерастворимость антигенов системы АВО позволяет из бавляться от влияния предмета-носителя своеобразной «стиркой». Навески пятна и предмета-носителя в пробирках с избытком заливают дистиллиро ванной водой и оставляют на 1 сут, после чего материал извлекают, высу шивают и проводят реакцию в обычном варианте. Следует иметь в виду, что иммунные сыворотки менее подвержены влиянию предметов-носите лей, чем изогемагглютинирующие.

Для выявления антигена Н используют иммунную сыворотку анти-Н, моноклональную сыворотку анти-Н, растительные лектины (бузина травя нистая, ракитник сидячелистный, бобовник Ватерера). Исходный титр со ставляет 1:14 или 1:16, так как именно такой титр обеспечивает выявление антигена Н. Титрование — развернутое в смежных разведениях;

количест венные соотношения — 50 мг пятна и 0,3 мл реагента (при меньших соот ношениях трудно осуществить развернутое титрование). Условия абсорб ции и учет ее результатов аналогичны таковым при выявлении антигенов А и В.

При малом количестве материала для обнаружения антигена Н можно использовать навески после выявления в них антигенов А и В;

навеску сле- дует тщательно очистить от прежних реагентов, объединить и залить подо бранным реагентом анти-Н.

Несмотря на наличие большого количества способов избавления от влияния предмета-носителя в количественной реакции абсорбции агглюти нинов, наиболее целесообразно не тратить время на использование этих способов, а сразу же переходить на применение иных методов выявления антигенов системы АВО.

Аб с ор б ц и я—э л ю ц и я. Исследуемый материал приводят в кон такт с диагностическими реагентами, и с этого момента начинается фаза абсорбции: соответствующие антитела сыворотки абсорбируются антигена ми пятна крови. Непрореагировавший избыток сыворотки после абсорбции удаляют отмыванием. Затем извлекают (элюируют) абсорбированные анти тела, что достигается температурным воздействием на образовавшийся комплекс антиген—антитело. Открытие извлеченных антител производят с помощью соответствующих тест-эритроцитов;

результаты реакции свиде тельствуют о наличии либо отсутствии того или иного антигена. Если анти ген в пятне присутствовал, то стандартные тест-эритроциты дадут агглюти нацию с теми или иными извлеченными антителами сыворотки.

Метод абсорбции—элюции обладает многими преимуществами перед количественной абсорбцией агглютининов: он гораздо более чувствителен (иногда это создает опасность открыть что-то «лишнее» за счет антигенопо добных образований и поэтому необходимо исследовать по нескольку участков материала из образца и пятна крови);

чрезвычайно экономичен в отношении исследуемого материала и сывороток (можно исследовать пятна ничтожно малой величины);

позволяет «охватывать» большие площади при обширных следах крови на вещественных доказательствах.

Реакцию проводят следующим образом.

А I этап — фиксация материала. С помощью фиксации антигены пере водятся в водонерастворимую форму (фиксация удерживает антигены на поверхности пятна крови);

фиксация изолирует агглютинины пятна, несколько ослабляет антиген, что делает образующийся впос ледствии комплекс поддающимся разрушению под действием повы шенной температуры.

Иногда при сильно выраженных агглютининах, способных дать ложно положительный результат, продолжительность фиксации можно увеличить до 1—2 ч. Для контроля проводят реакцию без фазы абсорбции.

Нити (кусочки) пятна и предмета-носителя в течение 20 мин фиксиру ют метиловым или этиловым спиртом, высушивают и раскладывают в про бирки.

А II этап — непосредственно абсорбция. Зафиксированный материал заливают сыворотками в титре 1:128 или 1:256, для антигена Н титр сывороток или лектинов составляет 1:64 (моноклональная сыворотка — 1:128). Время абсорбции 18—20 ч в условиях холодильника;

при влиянии предмета-носителя продолжительность абсорбции может быть сокращена до 2—3 ч. А III этап — отмывание несвязанных анти тел. Последние 5 раз отмывают в специальных планшетах охлажденным изотоническим раствором хлорида натрия, промокая на фильтроваль ной бумаге после каждого, отмывания. А IV этап — элюирование. Для разрушения комплекса антиген—антитело, если он образовался, приме няют температурное воздействие: реакцию проводят в термостате при 45—50 °С в течение 25 мин. Элюи- ровать можно в разные среды: изотонический раствор хлорида на трия, взвесь эритроцитов на различных средах. Если элюирование производилось в изотонический раствор хлорида натрия, то затем к элюатам добавляют по 1 капле соответствующих эритроцитов в 1 % взвеси и после центрифугирования учитывают результаты невоору женным глазом и под микроскопом.

При элюировании во взвесь эритроцитов материал центрифугируют сразу после проведения реакции в термостате, если реакция протекала в пробирках;

если же она осуществлялась на предметных стеклах, то эти стекла во влажных камерах после пребывания их в термостате выдержива ют 1 Vl—2 ч при комнатной температуре, накрывают покровными стеклами и микроскопируют.

Наличие агглютинации в элюате из пятна при отсутствии ее в элюате из предмета-носителя свидетельствует о присутствии в изучаемом материале соответствующего антигена.

Элюирование в изотонический раствор хлорида натрия предпочтитель нее из-за своей несколько меньшей чувствительности, что позволяет избе гать влияния предмета-носителя;

элюирование во взвесь эритроцитов — реакция высокочувствительная.

Наиболее целесообразно исследовать наслоенные на марли вытяжки из пятен и контролей или смывы с пятен и предметов-носителей, сделанные смоченной изотоническим раствором хлорида натрия марлей. Подобные меры помогают избежать проявления воздействия загрязненных предметов носителей и, следовательно, получить соответствующие результаты.

«Смешанная» а г г лют ина ция. Для агглютинации тест-эрит роцитов соответствующих групп используют свободные активные центры антител, абсорбированных антигеном. Если при проведении абсорбции— элюции надо разрушить комплекс антиген—антитело, то при смешанной агглютинации диссоциации этих комплексов не должно быть.

В реакции используют изосыворотки анти-А, анти-В и реагент анти-Н.

Все реагенты должны быть в титре не ниже 1:64 (лучше 1:128). Первые этапы реакции совпадают с описанными выше (абсорбция—элюция): фиксация материала пятен спиртом, подсушивание и абсорбция в пробирках в условиях холодильника в течение 18—20 ч (возможно укорочение сроков абсорбции).

После фазы абсорбции следует отмывание несвязанных антител. К отмытым нитям из пятна добавляют взвесь стандартных тест-эритроцитов: 0,5 % взвесь для выявления антигенов АиВи1, 5% — антигена Н. Взвесь можно готовить на изотоническом растворе хлорида натрия и 1,5 % растворе альбу мина или на сыворотке крови группы АВ. После добавления тест-эрит роцитов препараты помещают во влажные камеры и инкубируют в холодиль нике в течение 1—1V2 ч при 3—5 °С. Затем микроскопически учитывают ре зультаты реакции, покровные стекла используют лишь на последней стадии учета. О присутствии того или иного антигена свидетельствуют появление «бус» эритроцитов на нитях из следов крови и их отсутствие в контрольном материале. Свободные агглютинаты учету не подлежат. При неясных резуль татах можно изменить параметры опыта: увеличение или сокращение про должительности абсорбции и экспозиции, смена реагентов.

Реакция смешанной агглютинации высокочувствительна, при работе с насыщенными следами крови используется редко.

Выя в л е н и е а г г лют и ни н о в. При определении групповой принадлежности крови по системе АВО, помимо выявления антигенов, об наруживают и агглютинины. Это исследование проводят в двух вариантах:

в реакции на покровном стекле (реакция Латтеса) и выявление агглютини нов в вытяжках из следов крови в пробирках.

Для проведения реакции на покровном стекле из разных мест пятен крови вырезают небольшие участки, помещают их на предметные стекла] накрывают покровными стеклами, все пространство под которыми запол няют 0,05 % взвесью тест-эритроцитов групп А, В и 0. Препараты помеща ют во влажные камеры и ведут за ними систематическое микроскопическое наблюдение. Появление агглютинации свидетельствует о наличии в пятне соответствующего агглютинина. Для проведения реакции в пробирках] каплю вытяжки смешивают в пробирке с 1 каплей 0,1 % взвеси соответст вующих тест-эритроцитов на изотоническом растворе хлорида натрия илио 1 % растворе альбумина. Смеси на 1 ч помещают в термостат при 37 °С, затем в течение 4 мин центрифугируют и после встряхивания производят микроскопический учет результатов. Для контроля 1 каплю вытяжки сме шивают с 1 каплей эритроцитов группы 0: склеивания эритроцитов не должно быть, его появление свидетельствует о загнивании крови, наличии микроорганизмов. При таких результатах контроля все остальные результа-!

ты реакции учету не подлежат.

Одновременное обнаружение антигена и соответствующего агглютинина позволяет ставить однозначный диагноз о группе крови. Отсутствие аг глютинина не меняет вывода о группе крови при четком выявлении антиге на (в очень старых следах, в следах, подвергавшихся уничтожению и т.д.

агглютинины могут не обнаруживаться). Получение данных, не соответст вующих ни одной из классических групп крови (например, А, альфа и бе та), позволяет предположить смешение крови двух или более лиц. Недо статочно убедительные результаты требуют повторения реакций, в против ном случае от однозначного диагноза группы крови следует отказаться.

Выявление антигенов систем MNSs, Pp, Le, Rh, Gm и Нр. Довольно часто в экспертной практике встречаются случаи совпадения по системе AB0 груп повой принадлежности крови проходящих по делу лиц. В подобных случаях, ограничившись исследованием лишь по этой системе, эксперт делает вывод о происхождении крови как от потерпевшего, так и подозреваемого. Досто верность подобных выводов чрезвычайно низка, поэтому необходимо пред принять все меры для дифференцирования крови по иным системам и по возможности конкретизировать выводы. В настоящее время для дифферен цирования доступны эритроцитарные системы MNSs, Pp, Rh (антиген D), Le;

сывороточные системы Gm и Нр;

некоторые ферментные системы.

Эритроцитарные системы — это антигены перечисленных выше систем, используемых с целью дифференцирования одногруппной по системе AB крови. Их выявляют с помощью абсорбции—элюции, модификации кото рой в зависимости от системы имеют некоторые отличия.

Сист е ма MNSs. При определении групп М и N часто возникают трудности, особенно в выявлении антигена N. Многие авторы считают, что антиген N является антигеном—предшественником антигена М и поэтому сыворотка анти-М очень часто дает перекрестные реакции, что приводит к ложным результатам. Сыворотка анти-N несколько реже, но также способна вызывать перекрестные реакции. Этим обусловлены сложности в выяв лении данных антигенов. Антигены относительно устойчивы, но под влия нием неблагоприятных внешних воздействий резко ослабевают, особенно антиген N. Через 1 год с момента образования следа крови антиген N, из начально присутствовавший в пятне, довольно часто не открывается.

При проведении абсорбции—элюции следы крови и контроли к ним можно вводить в реакцию и нефиксированными, и фиксированными спир- том. Продолжительность абсорбции, предлагаемая разными авторами, раз лична. Наиболее оптимально проводить абсорбцию в течение 18 ч в усло виях холодильника. Затем следуют 5-кратное отмывание от несвязанных антител и элюция в термостате при 45—50 °С в течение 30 мин. Элюирова ние проводят в 0,5 % взвеси эритроцитов групп ОМ и ON на 1 % растворе человеческого или бычьего альбумина. Экспозиция при комнатной темпе ратуре длится 11/2 ч. Пробирки центрифугируют, результаты учитывают под микроскопом. В реакцию обязательно вводят контрольные образцы крови, содержащие и не содержащие выявляемые антигены.

Антиген S можно обнаружить с помощью абсорбции—элюции при ис пользовании сыворотки анти-S с полными антителами. Исследуемый мате риал с небольшим избытком заливают этой сывороткой (параллельно вво дят контроли S+ и S") и в течение 18 ч проводят абсорбцию либо при ком натной температуре, либо в термостате при 37 °С в течение 18—24 ч. Несвя занные антитела отмывают изотоническим раствором хлорида натрия.

Элюирование проводят в термостате при 50 °С в течение 25—30 мин. Элюи рование можно осуществлять как в изотонический раствор хлорида натрия, так и во взвесь соответствующих эритроцитов на 1 % растворе человеческо го или бычьего альбумина. Если элюция проводилась в изотонический рас твор хлорида натрия, то затем к элюатам добавляют взвесь эритроцитов на 1 % растворе альбумина и после этого центрифугируют. При элюировании взвесь эритроцитов центрифугируют после некоторой экспозиции при ком натной температуре. Наша практика показала, что выявить антиген S мож но при давности пятен до 6—8 мес.

При экспертной оценке результатов следует иметь в виду, что отрица тельные данные в отношении того или иного антигена системы MNSs не дают права однозначно говорить об исходном отсутствии этого антигена:

возможно он не открыт из-за его очень слабой выраженности или ослабле нии под влиянием внешних воздействий. При подобных результатах выво ды должны носить предположительный характер.

Си с т е ма Pp. Антиген Р1 системы Рр выявляют следующим обра зом. Кусочки из следа крови и контрольного участка предмета-носителя без предварительной фиксации приводят в контакт с сывороткой анти-Р с наиболее возможным высоким титром. Инкубация длится 4—18 ч при 3— °С. Отмывание от несвязанных антител — 5-кратное. Элюция в пробирках осуществляется в изотонический раствор хлорида натрия в течение 50 мин при 48 °С (термостат). Элюат переносят в чистые пробирки, добавляют по капле 2 % взвеси эритроцитов группы 0Р+ и в течение 2 ч инкубируют в ус ловиях холодильника. Затем пробирки в течение 1 мин центрифугируют при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют, к осадку добавляют каплю 1 % раствора альбумина. Пробирки в течение 10 мин выдерживают при комнатной температуре, после чего центрифугируют;

результаты учи тывают макро- и микроскопически.

В реакцию обязательно вводят контрольные образцы крови с разной сте пенью выраженности антигена Р и образец, не содержащий этого антигена.

Экспертное отношение к отрицательному результату реакции аналогич но таковому при исследовании по системе MNSs — учитывают давность об разования следа, условия хранения, «работу» образцов.

Си с т е м а Rh. Для выявления антигена D используют сыворотки анти-D с неполными антителами. Работе с пятнами крови всегда предшест вует подбор сыворотки, которая должна обладать строгой специфичностью и достаточной активностью. Сыворотки подбирают следующим образом.

Из архива лаборатории выбирают несколько образцов различной давности, особо желательно иметь образец, по давности несколько «больший», чем тот, который предстоит исследовать на вещественных доказательствах. Па раллельно исследуют образцы крови проходящих по делу лиц (предпочти тельно сначала исследовать эти образцы в жидком виде).

Если контрольные образцы и образцы крови «работают» соответственно своему предназначению, то приступают к работе над пятнами крови. Мате риал в реакцию вводится нефиксированным. Из разных участков образцов, пятен и предметов-носителей вырезают по нескольку нитей, помещают их в пробирки и с небольшим избытком заливают сывороткой анти-D. Аб сорбцию проводят в течение 18 ч при комнатной температуре (возможны отклонения — 3—5 ч в термостате при 37 °С). Во избежание подсыхания и испарения пробирки должны быть закрыты очень плотно. Отмывание про водят в 5 порциях охлажденного изотонического раствора хлорида натрия, образцы промокают на фильтровальной бумаге после каждого отмывания.

Элюирование осуществляют в пробирках или на плоскости (предметные стекла во влажных камерах) в 0,5 % +взвеси предварительно трипсинизиро ванных тест-эритроцитов группы 0D в 1 % растворе бычьего или челове ческого альбумина. Условия элюирования: 45 мин в термостате при 45 °С.

Экспозиция при комнатной температуре длится 1—I1/? ч. При элюирова нии в пробирки после экспозиции производят центрифугирование (2 мин при 1000 об./мин). После легкого встряхивания пробирок результаты учи тывают под микроскопом. Вывод о наличии в пятне антигена D делают на основании положительного результата реакции (наличие агглютинации) с пятном при отрицательной «работе» предмета-носителя. В связи с тем что антигены системы Rh очень нестойки и легко разрушаются даже из-за своей изначальной слабой выраженности, отрицательный результат не дол жен расцениваться однозначно, так как он может быть обусловлен именно такой выраженностью, давностью происхождения пятна и т.п.

Pages:     | 1 |   ...   | 7 | 8 || 10 | 11 |   ...   | 13 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.