WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 13 |

«СПРАВОЧНИК Лабораторные методы исследования в клинике Под редакцией профессора В.В.Меньшикова МОСКВА „МЕДИЦИНА" 1987 ББК 53.4 М51 УДК 61б-074/-078:061.6 В. В. МЕНЬШИКОВ, Л. Н. ДЕЛЕКТОРСКАЯ, Р. П. ...»

-- [ Страница 5 ] --

под влиянием различных внешних факторов: Подготавливают счетную камеру: протирают сезонных, климатических, метеорологических, насухо камеру с сеткой и покровное стекло, периодов солнечной активности, а также при затем притирают стекло к камере, слегка надав разных физиологических состояниях организма ливая его таким образом, чтобы по краям стекла (возрастные изменения, беременность, фазы появились радужные кольца или полосы (это менструального цикла и пр.) и разнообразной свидетельствует о высоте камеры — 0,1 мм). За патологии. полняют счетную камеру разведенной кровью:

Поэтому исследование числа лейкоцитов в предварительно встряхивают несколько раз со крови — одно из самых распространенных в ла- держимое пробирки, затем пастеровской пипет бораторной практике. Они проводятся не только кой или стеклянной палочкой отбирают каплю заболевшим (обязательно всем больным в ста- разведенной крови и подносят ее к краю покров ционаре и амбулаторным по показаниям), но и ного стекла, следя за тем, чтобы кровь без пу здоровым при профилактических осмотрах дет- зырьков воздуха равномерно заполнила всю ского населения, рабочих, и служащих некото- поверхность сетки, не затекая в бороздки. За рых производств, диспансеризации и других оз- полненную камеру оставляют в горизонтальном доровительных мероприятиях. положении на 1 мин (для оседания лейкоцитов).

Не меняя горизонтального положения камеры, помещают ее на столик микроскопа и подсчиты 3.4.1. Подсчет количества вают лейкоциты в 100 больших квадратах с ма лым увеличением (окуляр 10 X, объектив 8Х).

Подсчет количества лейкоцитов входит в со- Для большей точности счет лейкоцитов проводят став общего клинического анализа крови, а так- по всей сетке в больших квадратах (неразделен же «укороченного» анализа (содержание гемо- ных на малые квадраты и полосы), начиная с ле глобина, число лейкоцитов, СОЭ), иногда в экст- вого верхнего угла сетки. Для лучшего контрас ренных случаях исследуют только количество тирования затемняют поле зрения, опуская кон лейкоцитов (при подозрении на острый воспали- денсор и закрывая диафрагму. Считают клетки, тельный процесс и др.).

расположенные внутри квадрата и лежащие на Унифицированный метод подсчета в автома- любых двух линиях (чтобы дважды не подсчи тическом счетчике (1972). Пр и н ц и п. Боль- тать одну клетку).

шинство счетчиков основано на кондуктометри- Расчет числа лейкоцитов проводят, исходя из ческом методе. Клетки, находящиеся в растворе разведения крови (20), числа сосчитанных квад электролита, пропущенные через электрическое ратов (100) и объема одного большого квадрата поле, изменяют сопротивление электрической це пи. Возникший импульс регистрируется счетным ( мкл, так как сторона квадрата — мм, 250 о устройством с цифровой индикацией.

Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. Ав томатический счетчик.

Р е а к т и в ы и ход о п р е д е л е н и я соответствуют инструкции, приложенной к при бору.

Унифицированный метод подсчета в счетной где X — число лейкоцитов в 1 мкл крови;

а — камере (1972). Пр и н ц и п. Подсчет лейкоци- число лейкоцитов в 100 больших квадратах.

тов под микроскопом в определенном количестве Практически количество сосчитанных лейко квадратов счетной сетки и пересчет на 1 мкл цитов умножают на 50.

крови (или 1 л по системе СИ), исходя из объема Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. Количество квадратов и разведения крови.

лейкоцитов в крови колеблется в пределах Ре а к т и в ы. 3—5 % раствор уксусной кис- 4000—8800 в 1 мкл, или 4- 109—8,8- 109 в 1 л лоты, подкрашенный несколькими каплями раст- (по системе СИ). Число лейкоцитов в крови — вора метиленового синего (для окраски ядер наиболее вариабельный лабораторный показа лейкоцитов). Раствор голубого цвета, длительно тель. Оно может изменяться в течение дня, годен к употреблению.

в связи с приемом пищи, после физической на Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е.

грузки, под влиянием различных диагностичес 1. Микроскоп. 2. Счетная камера Горяева. ких процедур, медикаментозных воздействий.

Ход о п р е д е л е н и я. Разводят исследуе- Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Повыше мую кровь в 20 раз, для этого в сухую пробирку ние количества лейкоцитов — лейкоцитоз — наливают 0,4 мл уксусной кислоты. Набирают наблюдается при различных воспалительных из пальца 0,02 мл крови (можно использовать процессах, острых бактериальных инфекциях, стабилизированную антикоагулянтом венозную интоксикациях, шоке, острых кровопотерях, ко матозных состояниях, гемолитическом кризе, ном крае мазка, меняют положение стекла и дру почечной колике, аллергических реакциях, опу- гую половину клеток считают на противопо холях. Резкое увеличение количества лейкоци- ложном крае.

9 тов в крови (50- 10 /л — 100- 10 /л и более) При исследовании лейкоцитарной формулы характерно для развернутой стадии хроничес- необходимо дифференцировать неразрушенные кого миелолейкоза и хронического лимфолей- лейкоциты. Если при подсчете 100 лейкоцитов коза. отмечаются какие-либо отклонения от нормы Снижение количества лейкоцитов — лейко- (например, увеличение числа палочкоядерных пения — наблюдается при вирусных инфекциях, форм, эозинофилов, лимфоцитов или появление некоторых хронических инфекциях, сепсисе, лейкоцитов, не обнаруживаемых у здоровых циррозе печени, хроническом активном гепатите, людей), необходимо подсчитать еще 100 лей аутоиммунных заболеваниях, после приема ци- коцитов и вывести средний результат. В табл. тостатических препаратов, антибиотиков, суль- представлены основные морфологические осо фаниламидов и других медикаментов. Особенно бенности различных лейкоцитов.

резкая лейкопения (2- 10 /л и менее) наблюда- Исследование лейкоцитарной формулы с по ется при апластической анемии, агранулоцитозе, мощью автомата. Современные гематологи после лучевых воздействий. ческие автоматы для подсчета лейкоцитарной формулы основаны на двух принципах.

Ли т е р а т у р а. Грибова И. А. Гематоло П р и н ц и п 1. Дифференцировка лейкоци гическая норма.— В кн.: Руководство по гема тов с помощью микроскопа в окрашенных маз тологии/Под ред. А. И. -Воробьева, Ю. И. Ло ках крови путем сравнения морфологических рие. М.: Медицина, 1979, с. 53.

характеристик клеток крови со стандартными, хранящимися в памяти компьютера (автомат 3.4.2. Лейкоцитарная формула «Hematrak» фирмы «Opton», ФРГ, и др.).

Пр и н ц и п 2. Дифференцировка лейкоци Лейкоцитарную формулу (процентное соот- тов не в мазках, а в цельной крови в зависи ношение различных видов лейкоцитов) подсчи- мости от размера и цитохимических свойств тывают в окрашенных мазках крови. Методы клеток с применением селективных окрасок (ав фиксации и окраски мазков крови, а также томат «Hemalog D» фирмы «Technicon», США).

микроскопического исследования мазков унифи- Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. Ав цированы. томат для подсчета лейкоцитарной фбрмулы.

Унифицированный метод морфологического Ход и с с л е д о в а н и я соответствует ин исследования форменных элементов крови с струкции, приложенной к автомату.

дифференциальным подсчетом лейкоцитарной Существующие автоматы для подсчета формулы (1979). Пр и н ц и п. Микроскопия лейкоцитарной формулы отличаются не только сухих фиксированных и окрашенных мазков принципом работы, но и количеством дифферен крови с дифференцированием различных форм цируемых лейкоцитов в 1 пробе, по возможности лейкоцитов. Этапы исследования, включающие идентификации патологических форм, наличи приготовление мазков крови, подготовку пред- ем контрольного устройства, устройства для метных стекол, фиксацию мазков и их окраску, приготовления мазков и их окраски и пр.

изложены в разделе 3.3.2. Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. В табл. Р е а к т и в ы. 1. Иммерсионное масло. 2. Ди- представлены процентные и абсолютные значе этиловый эфир. ния различных лейкоцитов и их морфологичес С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е.

кие особенности у здоровых людей.

1. Микроскоп. 2. 11-Клавишный счетчик для Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Изменения подсчета лейкоцитарной формулы.

лейкоцитарной формулы сопутствуют многим Ход и с с л е д о в а н и я. С помощью заболеваниям и нередко являются неспецифиче объектива 10 X (малого увеличения) находят скими. Тем не менее диагностическое значение край мазка крови. Наносят каплю иммерсион- этого исследования велико, оно дает представле ного масла и, не меняя положения стекла, пере- ние о тяжести состояния, эффективности тера водят иммерсионный объектив (90 X) таким пии. При гемобластозах исследование лейкоци образом, чтобы он погрузился в каплю масла. тарной формулы особенно диагностически зна Подбирают с помощью микровинта соответству- чимо. Обнаружение в крови властных клеток ющее фокусное расстояние, устанавливая чет- (см. 3.6) является опорным пунктом для диагно кую видимость клеток. Приступают к дифферен- за острого лейкоза.

цированию лейкоцитов, отмечают клетки с помо- Повышение числа нейтрофилов — нейтрофи щью 1 1-клавишного счетчика;

необходимо про- лез, как правило, сочетается с увеличением об считать не менее 100 лейкоцитов. Подсчет лей- щего числа лейкоцитов в крови и наблюдается коцитов проводят, соблюдая следующее прави- при острых воспалительных процессах, интокси ло: отступив 2—3 поля зрения от края мазка, кациях, шоковых состояниях, при кровотече затем 3—5 полей зрения вдоль края мазка, за- ниях, инфаркте миокарда, гемолитическом кри тем 3—5 полей зрения под прямым углом по на- зе. Нередко этим состояниям сопутствует и повы правлению к середине мазка, снова 3—5 полей шение числа палочкоядерных нейтрофилов, и по зрения параллельно краю, затем под прямым явление незрелых гранулоцитов (миелоциты, ме углом по направлению к краю и т. д.;

таким об- тамиелоциты) в небольшом количестве (сдвиг разом, стекло двигают по зигзагу (линия «меан- формулы влево). Максимальной степени эти из дра»). Просчитав около половины клеток на од- менения достигают при миелопролиферативных ц а 25. Характеристика различных видов лейкоцитов здоровых людей Нейтрофилы Вид Эозинофилы Базофилы Лимфоциты Моноциты палочкоядерные сегментоядерные Количество 1—6 47—72 0,5—5 0—1 19—37 3— в % в 1 мкл 40—300 2000—5500 20—300 0—65 1200—3000 90— Размер 10—15 10—15 12—15 8—12 8—10 15— клетки, мкм Ядро: форма Узкое, вытяну- Узкое, состо- Несколько Неопреде- Округлое Полиморф или бобо- ное: округ тое в виде па- ит из 3 — 5 сег- шире, чем у ленное, лочки ментов нейтрофи- иногда в видное лое, бобо ла, состоит виде листа видное, с из 2—3 сег- растения вдавления ментов ми структура Неравномер- Неравномер- Неравно- Неравно- Неравно- Равно ная крупно- ная крупно- мерная мерная мерная мерная глыбчатая глыбчатая крупно- крупно- крупно- сетчатая глыбчатая глыбчатая глыбчатая окраска Темно-фиоле- Темно-фиоле- Фиолетовая Фиолетовая Темно- Светло товая товая фиолетовая фиолетовая Цитоплазма Розоватая Розоватая Бледно- Бледно-ро- В виде узко- Обильная розовая зоватая не- го ободка бледно-го редко с раз- иногда ши- лубая или мытыми рокая зона сероватая участками голубая (растворен ные грану лы) Зернистость, Обильная, мел- Обильная, мел- Обильная, Необиль- Изредка Непостоян ее окраска. кая, бледно - кая, бледно- занимает ная, нерав- единичные но, иногда характер фиолетовая фиолетовая всю цито- номерная, фиолетовые мелкая плазму, фиолетовая гранулы бледно крупная, фиолетовая розовая заболеваниях, особенно хроническом миелолей- вместе с эозинофилией может быть признаком козе. При этом резко увеличивается общее коли- миелопролиферативного заболевания.

чество лейкоцитов (50- 10;

9/л — 100 • 109/л и бо- Увеличение числа лимфоцитов — лимфоци лее) и в значительном проценте в лейкоцитарной тоз — наблюдается при инфекционном лимфо формуле обнаруживают промиелоциты (3— цитозе, коклюше, туберкулезе, после удаления 5%), миелоциты (до 10%), метамиелоциты селезенки. Наибольшей степени лимфоцитоз до (до 10—15 %) и единичные властные клетки, стигает при хроническом лимфолейкозе (70— при этом число зрелых нейтрофилов существен- 90 %) и сочетается с высоким лейкоцитозом но уменьшается. Такого типа изменения могут (50-109/л и выше). Относительный лимфоци быть и реактивными (лейкемоидные реакции), тоз — явление нередкое и наблюдается во всех и сопутствовать сепсису, туберкулезу, метаста- случаях лейкопении с нейтропенией. Увеличе зам злокачественных опухолей в костный мозг. ние числа моноцитов — моноцитоз — обнару Снижение числа нейтрофилов — нейтропе- живается при хронических инфекциях, опухо ния — обычно сочетается с лейкопенией и на- лях и особенно резкое — при хронических моно блюдается при вирусных инфекциях, некоторых цитарных лейкозах.

хронических инфекциях, после приема различ Ли т е р а т у р а. Золотницкая Р. П. Лаб.

ных медикаментов (особенно цитостатических), дело., 1983, № 5, с. 36—38.

после лучевой терапии. Максимальная степень нейтропении наблюдается при апластической 3.4.3. Лейкоконцентрат анемии, агранулоцитозе.

Увеличение числа эозинофилов — эозинофи- Приготовление и исследование лейкокон лия — сопутствует аллергическим реакциям, центрата проводят в случаях выраженных лей- глистной инвазии, некоторым детским инфек- копений, когда исследование лейкоцитарной циям, особенно скарлатине, иногда опухолям, формулы затруднено, а также для обнаружения лимфогранулематозу и др. Увеличение числа патологических элементов, не выявляемых в базофилов — базофилия — встречается редко и мазках крови (например, при алейкемической стадии острых лейкозов, при лимфогранулема- ±0,1 %, сегментоядерные 58,8 ±0,7 %, эози тозе, миеломной болезни и др.). Лейкоконцент- нофилы 1,8±0,05%, базофилы 0,7 + 0,08%, рацию можно проводить при неотчетливых ре- лимфоциты 31,2±1 %, моноциты 7,1 ±0,3%, зультатах стернальной пункции. Все существу- плазматические клетки 0,2 ±0,03 %. У одного ющие методы лейкоконцентрации основаны на человека обнаружено 0,2 % миелоцитов, у 2— следующем: 1) гемолиз, 2) центрифугирование 0,2 и 0,4 % метамиелоцитов, у 2— единичные и 3) седиментация. фрагменты ядер мегакариобластов.

Наиболее физиологичны методы, основанные Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Исследо на седиментации форменных элементов крови, вание мазков лейкоконцентрата имеет сущест они наиболее распространены. венные преимущества перед исследованием маз Метод с трилоном Б. Пр и н ц и п. В связи ков периферической крови при острых лейкозах, с различным удельным весом эритроцитов и лей- особенно при лейкопенических формах. Это ис коцитов и добавлением трилона Б, ускоряющего следование дает возможность выявить властные осаждение эритроцитов, получают плазму, со- клетки, оценить полноту ремиссии при остром держащую большое количество лейкоцитов. лейкозе, а также провести цитохимические ис Ре а к т и в ы. 1. 3% раствор трилона Б. следования, имеющие важное диагностическое 2. Краска Романовского — Гимзы или азур- значение при острых лейкозах (см. 3.6).

эозина. 3. Метанол для фиксации мазков. Выявление в мазках лейкоконцентрата ядер Специальное оборудование. мегакариоцитов наблюдается при миелопроли 1. Микроскоп. 2. Термостат на 37 °С. 3. Центри- феративных заболеваниях, особенно доброка фуга. чественном сублейкемическом миелозе, а также Ход о п р е д е л е н и я. В пробирку с 1 мл при опухолях различной локализации. Увеличе 3 % раствора трилона Б вносят 4 мл венозной ние плазматических клеток может быть при крови и осторожно перемешивают. Ставят смесь лимфогранулематозе, миеломной болезни и дру крови с трилоном в термостат (можно отстаи- гих опухолях. При лимфогранулематозе могут вать и при комнатной температуре) на 30— быть найдены предстадии клеток Березовско 45 мин (за это время над эритроцитами образу- го — Штернберга.

ется 2—3 мл прозрачной плазмы). С помощью Лит е р а т у р а. Поспелова Р. А. Лейко пастеровской пипетки отсасывают в центрифуж концентрация в клинической практике.— М., ную пробирку слой плазмы, стараясь не захва 1973, с. 22.

тывать эритроциты. Центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочную 3.4.4. Исследование жидкость удаляют, а из осадка готовят мазки волчаночных клеток (LE-клетки) (помещают каплю осадка пастеровской пипет кой на предметное стекло и готовят мазок). Волчаночные клетки служат морфологи Мазки высушивают на воздухе, фиксируют и ок- ческим проявлением иммунологического фено рашивают гематологическими красителями мена, характерного для системной красной вол (см. 3.3.2). чанки. Они образуются в результате фагоцитоза Метод с гепарином может быть использован нейтрофильными лейкоцитами (реже моноцита при необходимости удаления тромбоцитов. ми) ядер клеток, содержащих деполимеризован Пр и н ц и п. При центрифугировании плаз- ную ДНК. Предполагают, что фагоцитируемая мы, разведенной холодным изотоническим раст- субстанция представляет собой иммунный ком вором хлорида натрия, тромбоциты оседают плекс, состоящий из волчаночного фактора (ан в осадок, а лейкоциты остаются во взвешенном тинуклеарного фактора), остатков ядра лейко состоянии. цитов и комплемента. Морфологически LE-клет Р е а к т и в ы. 1. Гепарин (500 ЕД/мл). ки характеризуются наличием в цитоплазме 2. 0,85 % раствор хлорида натрия. нейтрофильных лейкоцитов округлого бесструк Об о р у д о в а н и е то же, что и в методе турного образования, напоминающего лизиро с трилоном Б. ванное ядро светло-фиолетового цвета, занима Ход о п р е д е л е н и я. В пробирку с 1 мл ющего центральную часть клетки с оттесненным гепарина добавляют 4 мл крови. Отстаивают к периферии ядром.

40—45 мин. С помощью пастеровской пипетки Реже такое же образование выявляют в мо отбирают плазму в центрифужную пробирку, ноцитах, иногда оно расположено внеклеточно, стараясь не захватить эритроциты. Центрифу- может образовывать фигуры «розеток» (образо гируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Над- вание, окруженное нейтрофилами). В отличие осадочную жидкость удаляют, а к осадку добав- от LE-клеток обнаруживают нейтрофилы с фа ляют 5 мл холодного 0,85 % раствора хлорида гоцитированной субстанцией не гомогенного ха натрия. Центрифугируют при 500—800 об/мин рактера, а с сохраненной структурой хроматина.

в течение 10—15 мин (если в осадке имеется Такие клетки относят к клеткам Тарта и рас примесь эритроцитов, то повторно центрифуги- сматривают их как предстадию LE-клеток.

руют с холодным раствором хлорида натрия). Специфичными для системной красной волчанки Из осадка готовят мазки и окрашивают их считают типичные LE-клетки.

гематологическими красителями. Для исследования LE-феномена предложены Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. При иссле- многочисленные методы, в основе которых лежит довании лейкоконцентрата у 50 здоровых людей инкубация клеток больного в собственной плаз Р. А. Поспелова получила следующую лейко- ме (метод, предложенный Hargraves, Zimmer, грамму: нейтрофилы палочкоядерные 1,2± 1948). Рекомендуется дополнительное механи ческое встряхивание для усиления травматиза- 3.4.5. Цитохимические исследования ции клеток и увеличение количества LE-клеток.

лейкоцитов Метод Харгревеса — Циммера. Пр и н цип. Механическое повреждение лейкоцитов Цитохимические исследования проводят в для усиления LE-феномена. мазках крови, лейкоконцентрата;

они основаны Р е а к т и в ы. 1. Метиловый спирт. 2. Краска на использовании специфических химических Романовского — Гимзы или другой гематологи- реакций для определения в клетках различных ческий краситель. веществ. Эти исследования позволяют изучать С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. 1. локализацию и ориентировочно оценивать коли Микроскоп. 2. Металлическое сито. 3. Фарфоро- чество определяемых веществ в различных кле вый пестик. 4. Центрифуга.

точных элементах. Цитохимические исследова Ход о п р е д е л е н и я. В пробирку наби- ния относительно несложны, дают возможность рают 10 мл венозной крови и оставляют для исследовать различные виды лейкоцитов, но ус свертывания на 2 ч. Свернувшуюся кровь выли- тупают в точности количественному анализу, вают на металлическое сито, поставленное на проводимому с помощью биохимических мето чашку Петри, и пестиком протирают сгусток дов.

в чашку. Содержимое чашки Петри выливают При цитохимическом исследовании чаще в центрифужную пробирку и центрифугируют пользуются полуколичественной оценкой резуль при 2000 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную татов, используя принцип Астальди, основан жидкость отсасывают и удаляют, а из осадка ный на выявлении различной степени интенсив (верхнего слоя) готовят мазки. Высохшие мазки ности специфической окраски. В зависимости фиксируют и окрашивают гематологическим от нее исследуемые элементы делят на 4 группы:

красителем. с отрицательной реакцией (—), слабоположи Метод Цинкхама — Конли в модификации тельной ( + ), положительной (+ +) и резко Е. Н. Новоселовой. Пр и н ц и п. Механическое положительной ( + + + ). Для количественного воздействие на кровь, облегчающее образование выражения результатов подсчитывают 100 кле LE-феномена. ток определенного вида, дифференцируя их по Ре а к т и в ы. 1. Оксалат натрия. 2. Метило- указанному принципу, затем число клеток с оди вый спирт. 3. Краска Романовского — Гимзы наковой интенсивностью окраски умножают на или азур-эозин. соответствующее данной группе число плюсов, Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а ни е. 1. сумма этих произведений составляет условные Микроскоп. 2. Центрифуга. 3. Стеклянные бу- единицы. Например, при исследовании активно синки диаметром 3—4 мм.

сти щелочной фосфатазы в нейтрофилах из Ход и с с л е д о в а н и я. В пробирку поме- просмотренных клеток в 60 клетках активность щают 10 мг оксалата натрия и 10 мл венозной фермента не выявлена (—), в 35—специфи крови. Тщательно перемешивают и оставляют ческая окраска была слабой ( + ) и в 5— более стоять на 1 —1'/2 ч. Вносят в пробирку 6—8 бу- интенсивной ( + + ). Результат определения ак синок, закрывают пробирку плотно пробкой и пе- тивности щелочной фосфатазы в нейтрофилах ремешивают в течение 30 мин (опрокидывая в таком случае составит (60 ХО)+(35 X 1) + пробирку пробкой вниз и вверх). Затем отстаи- +(5 X 2) = 0 + 35+ 10 = 45 ед. Можно выразить вают в течение 1 ч при комнатной температуре результат в виде среднего цитохимического по до разделения слоев. Плазму отсасывают пасте- казателя по L. Kaplow (1955) или среднего ровской пипеткой и переносят в центрифужную цитохимического коэффициента (СЦК). С этой пробирку. Центрифугируют при 1000 об/мин целью также дифференцируют 100 исследуемых в течение 5 мин. Надосадочную жидкость слива- клеток по указанной выше системе. Полученный ют, из осадка готовят мазки. Фиксируют высох- процент клеток в каждой группе умножают на шие мазки в метиловом спирте и окрашивают соответствующее данной группе число плюсов.

гематологическим красителем.

Сумма этих величин, деленная на 100, пред Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. У здоровых ставляет собой СЦК для одной клетки. В ука людей волчаночные клетки в крови отсутствуют. занном примере СЦК щелочной фосфатазы ней К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Обнаруже- трофилов равен 0,45. В тех случаях, когда изуча ние LE-клеток — специфичный симптом систем- емые вещества локализуются в клетках в виде ной красной волчанки. Исследование необходи- единичных гранул (например, активность не мо производить до начала кортикостероидной специфической эстеразы в лимфоцитах и др.), терапии. Отрицательный результат исследова- результат цитохимической реакции целесооб ния не исключает возможность данного заболе- разно выражать в процентах клеток, дающих вания, он бывает в раннем периоде болезни, положительную реакцию.

а также при выраженном нефротическом синд- Метод полуколичественйой оценки является роме и потере с мочой большого количества ориентировочным, но позволяет сравнивать рас белка. Большую диагностическую ценность име- пределение исследуемых веществ в разных кле ет иммунологическое исследование антинуклеи- точных элементах или в одних и тех же клетках арного фактора (см. раздел «Иммунология»). при различных патологических состояниях ор Ли т е р а т у р а. Коллагсновые болезни и ганизма, а также в зависимости от течения забо ревматизм/Под ред. Е. М. Тареева.— М.: Мед- левания, степени его тяжести и в связи с прово гиз, 1961;

Поспелова Р. А. Лейкоконцентрация димой терапией.

в клинической практике.— М.: Медицина, 1973, Наиболее распространены цитоэнзиматичес г. 771. кие исследования, дающие возможность выя вить в клетках активность различных ферментов. и фотопленок по методике Меркулова: удалить Для этого чаще используют методы азосочета- слой эмульсии после вымачивания в горячей во ния, в которых специфический субстрат, взаимо- де или щелочи, выдержать 5—10 дней в трех действуя с ферментом, образует продукт реак- сменах хлороформа, промыть спиртом, высу ции, который окрашивается солями диазония;

шить, мелко нарезать и растворить в смеси по окраске судят о локализации фермента и его абсолютного спирта с эфиром. 2. 0,5 М раствор активности. тетрабората рН 9,18 [19,1 г тетрабората натрия В настоящей главе приведены наиболее рас- (бура) растворить и довести дистиллированной пространенные в клинической практике цитохи- водой до 1 л]. Раствор стойкий. 3. 0,1 % рас мические методы исследования. твор а-нафтилфосфата в растворе тетрабората (готовят перед употреблением). 4. 0,2 % раствор Ли т е р а т у р а. Astaldi G., Verga L. Acta диазоля синего 0 в растворе тетрабората (гото haematol., 1957, vol. 17, p. 129—136;

Kaplow L.

вят перед употреблением и фильтруют в защи Blood, 1955, vol. 10, № 10, p. 1023—1029.

щенном от света месте). 5. Гематаль 8 Бейкера:

ЩЕЛОЧНАЯ ФОСФАТАЗА (К. Ф. 3.1.3.1.) один объем 0,1 % гематеина, приготовленного содержится преимущественно в зрелых нейтро- на 50 % водном растворе этиленгликоля, смеши фильных лейкоцитах;

активность фермента свя- вают с одним объемом 1,6 % водного раствора зывают со вторичными (специфическими) гра- сульфата алюминия. Вместо гематаля можно нулами цитоплазмы. Относится к группе гидро- использовать гематоксилин: 1 г краски раство литических ферментов с оптимумом действия ряют в 50 мл дистиллированной воды, доводят при рН 9,6, осуществляет гидролиз однозаме- до кипения, доливают 50 мл дистиллированной щенных эфиров ортофосфата. Наиболее распро- воды, добавляют 0,02 г йодата натрия и 5 г странено определение активности фермента ме- алюмокалиевых квасцов, встряхивают до раст тодами азосочетания. ворения и охлаждают. 6. Инкубационная среда Метод азосочетания по Кеплоу. Пр и н ц и п. (готовят перед употреблением);

равные коли Расщепление щелочной фосфатазой а-нафтил- чества реактивов 3 и 4.

фосфата с освобождением а-нафтола, образу- С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. Хо ющего с солями диазония нерастворимый окра- лодильник.

шенный в коричневый цвет осадок в местах Ход о п р е д е л е н и я. Мазки фиксируют локализации фермента.

в 0,5 % растворе целлоидина в течение 3—5 с.

Р е а к т и в ы. 1. 10% раствор формалина После фиксации целлоидин с обратной стороны в абсолютном метаноле. 2. 0,05 М раствор про- предметного стекла удаляют салфеткой, стекла пандиолового буфера (рН 9,75);

готовят основ- ставят в вертикальном положении на фильтро ной 0,2 М раствор (10,5 г 2-амино-2-метил-1,3- вальную бумагу и дают им высохнуть. Инкуби пропандиола растворяют в 500 мл дистиллиро- руют в инкубационной среде при комнатной ванной воды), хранят его в холодильнике. Из температуре в защищенном от света месте в те основного раствора готовят 0,05 М раствор чение 30 мин. Промывают в проточной воде в те (25 мл основного раствора буфера смешивают чение 5—10 мин и ополаскивают в дистиллиро с 5 мл 0,1 н. раствора НС1 и доводят дистиллиро- ванной воде. Докрашивают ядра красителем ванной водой до 100 мл), хранят в холодиль- (реактив 5). При использовании гематаля 8 маз нике. 3. а-Нафтилфосфат. Можно использовать ки окрашивают 18—24 ч, затем ополаскивают нафтол-АS-Фосфат, нафтол-АS-ТR-фосфат или в дистиллированной и проточной воде и высу нафтол-АS-В1-фосфат. 4. Прочный синий RR;

шивают. При использовании гематоксилина маз можно использовать отечественные красители ки окрашивают 30—60 мин, ополаскивают в тет диазоль синий 2С и диазоль синий 0. 5. 2 % раборатном буфере, разведенном водопроводной раствор метилового зеленого. 6. Инкубационная водой, промывают водой и высушивают.

среда (готовят перед употреблением): 35 мг Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. У здоровых а-нафтилфосфата, 35 мг прочного синего RR, людей большинство сегментоядерных нейтрофи 35 мл буферного раствора. лов являются фосфатазоотрицательными и толь Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е.

ко в 20—30 % клеток выявлена слабая актив Холодильник.

ность фермента ( + )• По данным М. Г. Шубича Ход и с с л е д о в а н и я. Высохшие на воз- и Б. С. Нагоева, активность фосфатазы для духе мазки фиксируют в 10 % растворе фор- здоровых обоего пола составляет 26±0,6 ед., малина в абсолютном метаноле при температуре или СЦК 0,26 + 0,006. Выявлено достоверное О—5 °С в течение 30 с. На высохшие мазки нано- различие между показателями энзиматической сят инкубационную среду после фильтрования активности у мужчин и женщин (соответственно и оставляют мазки при комнатной температуре 21 ±0,7 и 31 ±0,8 ед.).

на 8—10 мин. Ополаскивают в проточной воде Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Наиболь в течение 10 с. Докрашивают метиловым зеле- шее диагностическое значение имеет определе ным в течение 15 мин или гематоксилином Май- ние активности фермента при гемобластозах;

ера 3—4 мин. снижение активности характерно для хроничес Метод азосочетания (модификация М. Г. Шу- кого миелолейкоза, повышение — рассматри бича). П р и н ц и п см. метод азосочетания по вают как один из признаков эритремии. Повы Кеплоу. шение активности наблюдается также при вос Ре а к т и в ы. I. 0,5 % раствор целлоидина палительных процессах, интоксикациях, опухо в смеси равных количеств абсолютного спирта лях, коллагенозах, циррозах печени. Показатель и эфира. Целлоидин можно готовить из кино- может быть использован как дифференциально диагностический признак при лейкемоидных ре- всех указанных выше заболеваниях наблюда акциях (активность фермента повышена) и хро- ется повышение активности и щелочной фосфа ническом миелолейкозе. Снижение активности тазы, а при цитохимическом методе исследова фермента часто сопутствует вирусному гепатиту, ния обоих ферментов используют единый суб инфекционному мононуклеозу и другим вирус- страт, при получении высокой активности кис ным инфекциям, лучевой болезни. лой фосфатазы М. Г. Шубич и И. В. Нестерова предлагают проводить повторное исследование Ли т е р а т у р а. Буйкис И. М., Руденс Ю. Ф.

после ингибирования щелочной фосфатазы с по Гистохимическое определение активности ще мощью ЭДТА.

лочной фосфатазы методом одновременного Повышение активности кислой фосфатазы азосочетания.— Вопросы лейкозологии (Рига), в лимфоцитах отмечается при иммунизации, 1969, № 1,с. 369—376;

Шубин М. Г.— Лаб. дело, различных аллергических заболеваниях.

1965, № 1, с. 10—14;

Шубин М. Г., Нагоев Б. С.

В властных клетках при острых лейкозах Щелочная фосфатаза лейкоцитов в норме и па характер распределения продукта реакции раз тологии.— М.: Медицина, 1980, с. 41;

Kaplow L.

личен в зависимости от формы лейкоза. При Blood, 1955, vol. 10, № 10, p. 1023-1029.

острых лимфобластных формах активность вы является в гранулярной форме, при миелоб КИСЛАЯ ФОСФАТАЗА (К. Ф. 3.1.3.2). Об- ластных — в диффузной форме.

наруживают преимущественно в нейтрофилах Ли т е р а т у р а. Берстон М. Гистохимия и лимфоцитах крови;

локализацию связывают ферментов.— М.: Мир, 1965, с. 215;

Руденс Ю. Ф., с лизосомами цитоплазмы клеток. Кислая фос Буйкис И. М. Вопросы лейкозологии (Рига), фатаза является гидролитическим ферментом 1969, № 1, с. 377—383;

Шубич М. Г., Нестеро с оптимумом действия рН 5,2. Для цитохими ва И. В. Лаб. дело, 1980, № 3, с. 150—154.

ческого исследования чаще используют методы азосочетания. ПЕРОКСИДАЗА (МИЕЛОПЕРОКСИДА Метод азосочетания Берстона (модификация ЗА) (К. Ф. 1.11.1.7). Фермент, локализующий Ю. Ф. Руденса, И. М. Буйкиса). Пр и н ц и п см. ся преимущественно в специфической зернисто Метод азосочетания по Кеплоу. сти цитоплазмы гранулоцитов и являющийся Реактивы. 1. 0,1 М раствор цитратного буфе- маркером клеток миелоидной природы. Миелопе ра (рН 5,2). 2. 0,05 М раствор хлорида магния. роксидаза разрушает токсическую перекись во 3. Нафтол-АS-Фосфат (можно использовать дорода, образующуюся внутриклеточно в про нафтол-АS-ТR-фосфат или нафтол-АS-В1-фос- цессе жизнедеятельности клеток.

фат. 4. Диметилформамид. 5. Диазоль синий Метод Грэхема — Кнолля. Пр и н ц и п.

2С или прочный синий ВВ. 6. Краситель Рома- В присутствии пероксидазы бензидин окисляется новского — Гимзы. 7. Изотонический раствор перекисью водорода в коричневый оксибензидин.

хлорида натрия. 8. Инкубационная среда: 10 мг Р е а к т и в ы. 1. 4% формалиново-спирто нафтол-АS-Фосфата, растворенного в 5 мл диме- вой раствор (10 частей 40 % формалина и 90 ча тилформамида;

15 мл 0,1 М цитратного буфера стей 96 % спирта). 2. Реактив на пероксидазу:

рН 5,2, 45 мл дистиллированной воды, 5 мл бензидин (на кончике ножа) растворяют в 6 мл раствора хлорида магния, 50 мг диазоля синего. 96 % спирта, прибавляют 4 мл воды и 0,02 мл Готовят перед употреблением и используют по- 3 % перекиси водорода. Реактив годен к упот сле фильтрования. реблению в течение 5—6 дней. 3. Краситель Спе циа л ь но е обору дов а ние. Тер- Романовского — Гимзы.

мостат. Сп е ц и а л ь н о е обору дов а ние. Не Ход и с с л е д о в а н и я. Нефиксирован- требуется.

ные мазки инкубируют в инкубационной среде Ход о п р е д е л е н и я. Свежие мазки (1 — при 37 °С в течение 2 ч. Промывают изотони- 2-дневной давности) фиксируют 4 % формали ческим раствором хлорида натрия. Докрашива- ново-спиртовым раствором в течение 30 с. Обмы ют красителем Романовского — Гимзы. Промы- вают в проточной воде и высушивают. Заливают вают в проточной воде. Активность фермента реактивом на пероксидазу на 5 мин. Тщательно выявляется в виде синей окраски. промывают в проточной воде и высушивают.

Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. В сегмен- Докрашивают красителем Романовского — тоядерных нейтрофилах активность фермента Гимзы. Пероксидаза выявляется в цитоплазме равна 38,6±2,82 ед., или СЦК 0,386 + 0,028, в клеток в виде коричневых гранул.

лимфоцитах —26,9±1,94 ед., или СЦК 0,268± Модифицированный метод Нарциссова.

±0,019. У детей активность кислой фосфатазы Пр и н ц и п см метод Грэхема — Кнолля. Для в нейтрофилах выше, чем у взрослых. уменьшения инактивации фермента использова К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Повыше- ны соответствующий фиксатор и небольшое ко ние активности наблюдается в нейтрофилах при личество перекиси водорода.

воспалительных процессах, при туберкулезе, ин- Ре а к т и в ы. 1. 60 % водный раствор аце фаркте миокарда, острых хирургических заболе- тона. 2. 0,1 М раствор бората натрия (можно ваниях, злокачественных опухолях. При этом использовать фосфатный или мединаловый бу следует учитывать, что высокие цифры актив- ферный раствор рН 7.6). 3. 5 % водный раствор ности фермента могут быть результатом повы- трилона Б. 4. Насыщенный водный раствор шения активности щелочной фосфатазы в ней- бензидина. 5. 0,003 % раствор перекиси водо трофилах, так как активность последней может рода (разводят перед употреблением из 3 % рас выявляться и в кислой среде. Поскольку при твора в два этапа). 6. Инкубационная среда:

5 п/р В. В. Меньшикова мл 5 % водного раствора трилона Б, 10 мл активность фермента высокая при остром миело раствора бората натрия, 35 мл насыщенного бластном лейкозе, слабая — при остром моно раствора бензидина и 2 мл раствора перекиси бластном и отсутствует — при остром лимфо водорода. 7. 0,5 % раствор метилового зеленого бластном лейкозе.

на буферном растворе (рН 5,0) или 0,1 % вод Лит е р а т у р а. Нарциссов Р. П. Лаб. де ный раствор метиленового синего.

ло, 1964, № 3, с. 150—151;

Шафран М. Г., Пига Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е.

ревский В. Е., Блинова Э. И. Цитология, 1979, Термостат.

т. 21, № 10, с. 1206—1208;

Тодоров И. Клини Ход о пр е д е л е ния. Свежеприготовлен ческие лабораторные исследования в педиат ные мазки фиксируют в 60 % водном растворе рии.— София, 1963, с. 468.

ацетона в течение 30 с. Промывают дистиллиро ванной водой. Инкубируют в инкубационной НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ЭСТЕРАЗЫ. Труп среде в течение 1 ч в термостате при 37 °С. па ферментов, гидролизующих эфиры карбоно Промывают дистиллированной водой. Докраши- вых кислот;

отличаются небольшой специфич вают мазки метиловым зеленым или метиле- ностью. Локализуются в цитоплазме клеток, новым синим в течение 10 мин. Можно исследо- главным образом в лизосомах. Наибольшая вать недокрашенные мазки. активность обнаружена в моноцитах крови. Для Модифицированный метод [Шафран М. Г. определения активности ферментов используют и соавт., 1979). Пр и н ц и п см. Метод Грэ- различные субстраты (а-нафтилацетат, нафтол хема — Кнолля. Бензидин заменен О-дианизи- AS-ацетат, нафтол-АS-D-хлорацетат, b-нафтил дином. ацетат и др.).

Ре а к т ив ы. 1. 10% спиртовой раствор а-Нафтилацетат-эстераза (метод Леффле формалина (1 мл 10 % формалина и 9 мл этило- ра). Пр и н ц и п. Соединение а-нафтилацетата вого спирта). 2. Спиртовой раствор О-дианизи- при определенных рН и температуре под влия дина (можно использовать препарат Шосткин- нием неспецифических эстераз гидролизуется ского завода химреактивов;

белые или желтова- с образованием свободного нафтола, который тые кристаллы препарата быстро окисляются на с солями диазония дает цветное окрашивание.

воздухе, при изменении окраски он становится Ре а к т и в ы. 1. Формалин промышленного непригодным). 24 мг О-дианизидина растворяют производства (40%). 2. а-Нафтилацетат. 3.

в 5 мл метанола и доводят дистиллированной Ацетон х. ч. 4. 0,1 М раствор фосфатного буфера водой до 9,9 мл. 3. 3 % раствор перекиси водоро- (рН 7,8—8,0). 5. Прочный синий ВВ (или проч да. 4. Реакционная смесь: к спиртовому раст- ный красный ТР). 6. Ядерный краситель (гема вору О-дианизидина прибавляют перед употреб- лаун кислый, метиловый зеленый и пр.). 7. Ин лением 0,1 мл перекиси водорода. 5. 0,25 % кубационная среда: 10 мг а-нафтилацетата, рас водный раствор азура А или другой ядерный творенного в 0,2 мл ацетона;

40 мл буферного краситель. раствора (реактив № 4), встряхивают до раст С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. Не ворения;

50 мг соли диазония (реактив № 5), требуется. встряхивают до растворения и фильтруют.

Ход о п р е д е л е н и я. Мазки Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. 1.

фиксируют спиртовым раствором формалина Весы. 2. Эксикатор.

в течение 10—15 с. Споласкивают проточной Ход о пр е д е л е ния. Свежеприготовлен водой. На мазки наносят реакционную смесь ные и высушенные на воздухе мазки фиксируют на 2—3 мин при комнатной температуре. Спо- в парах формалина 4 мин (фиксированные ласкивают проточной водой. Докрашивают рас- препараты можно сохранять в холодильнике твором азура в течение 10—15 с. Споласкивают несколько недель или 2 сут при комнатной тем проточной водой и высушивают. пературе). Инкубируют в инкубационной среде Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. В крови при комнатной температуре 30 мин. Промывают здоровых людей активность пероксидазы выяв- в проточной воде (2—3 мин). Докрашивают ляется преимущественно в цитоплазме грануло- кислым гемалауном 8 мин. Промывают дистил цитов и в меньшей степени — моноцитов. Фер- лированной водой 15 мин. Активность фермента мент появляется в кровяных клетках на стадии выявляется в виде коричнево-черных (при упот промиелоцитов и у ряда миелобластов (более реблении прочного синего) или красно-коричне зрелых). Не содержат фермента недифференци- вых (при употреблении прочного красного) гра рованные бласты, часть миелобластов и лимфо- нул в цитоплазме клеток.

бласты;

3—16 % нейтрофилов окрашены резко Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. В моноци положительно (+ + +). 60—90 % — положи- тах периферической крови активность фермента тельно (++) и остальные—слабоположитель- содержится в виде мелкой обильной зернистости.

но ( + ). СЦК нейтрофилов здоровых людей СЦК в моноцитах составляет 0,95±0,01. Не равен 2,56 + 0,033. Эозинофилы характеризу- большое количество лимфоцитов (18,0±0,4 %) ются резко положительной реакцией на перок- содержит активность фермента в виде единич сидазу. ных гранул в цитоплазме;

в тромбоцитах пери Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Актив- ферической крови фермент выявляется в виде ность фермента в нейтрофилах снижена при мелких гранул, в сегментоядерных нейтрофилах инфаркте миокарда, ревматизме, туберкулезе, его активность ничтожна.

опухолях. У больных хроническим миелолейко- Среди костномозговых элементов наиболь зом, особенно в терминальной стадии, СЦК сни- шую активность имеют промиелоциты, миело жается до 1,63 ±0,19 ед. В бластных клетках циты, мегакариоциты, моноциты, ретикулярные клетки. В моноцитах периферической крови и Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Снижение костного мозга с помощью двойной инкубации активности фермента в лимфоцитах характерно и добавления фторида натрия (NaF) в коли- для хронического лимфолейкоза (В-клеточного честве 1,5 мг/мл показан NaF — чувствитель- варианта);

при Т-клеточных пролиферациях ак ный фермент. тивность неспецифической кислой эстеразы в лимфоцитах повышена.

Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Снижение активности фермента в моноцитах и увеличение Ли т е р а т у р а. Потапова С. Г., Шахба в лимфоцитах обнаружено при диффузных пора зян Г. П., Демидова Н. В., Козинец Г. И.

жениях печени. Значительная активность фер Лаб. дело, 1981, № 2, с/74—76;

Kullenkam.pl 1., мента выявлена в миеломных клетках при плаз Janassi G., Greaves H. Brit. J. Haemal., 1977, моцитоме, в властных клетках при остром мо vol. 36. p. 231—240.

нобластном (гистиомонобластном) лейкозе и при промиелоцитарном лейкозе, в то время как НАФТОЛ-AS АЦЕТАТ-ЭСТЕРАЗА. Метод при остальных формах острых лейкозов актив- Леффлера. Пр и н ц и п и о б о р у д о в а н и е ность фермента в бластных клетках ничтожна. такие же, как для определения а-нафтилаце При хроническом лимфолейкозе активность фер- тат-эстеразы.

мента в лимфоцитах резко снижена. Фермента- Ре а к т и в ы. 1. Формалин промышленного тивная активность нейтрофилов при острых лей- производства (40 %). 2. 0,1 М фосфатный буфер козах, особенно при остром миелобластном, (рН 6,8—7,0). 3. Ацетон х. ч. 4. Нафтол-AS снижена. ацетат (можно использовать нафтол-АS-D-аце тат). 5. Прочный синий ВВ. 6. Ядерный краси Ли т е р а т у р а. Lofjler H. Klin. Wschr., тель. 7. Инкубационная среда: 4 мг нафтол 1961, Bd 29, H. 23, S. 1220—1227. AS-ацетата, растворенного в 0,4 мл ацетона, 40 мл буферного раствора (реактив № 2);

встря КИСЛАЯ а-НАФТИЛАЦЕТАТ-ЭСТЕРАЗА. хивают и добавляют 80 мг прочного синего ВВ, Фермент локализуется главным образом в лизо- встряхивают и фильтруют.

сомах цитоплазмы клеток и участвует в гидро- Ход о пр е д е л е ния. Высушенные на лизе алифатических эфиров. воздухе (в течение 1—3 ч) мазки фиксируют Метод Кулленкампфа и соавт. Пр и н ц и п. в парах формалина несколько минут. Помеща Из соединения а-нафтилацетата при кислом рН ют в инкубационную среду на 60 мин при ком под влиянием фермента образуется свободный натной температуре. Промывают в проточной нафтол, дающий цветное окрашивание с фук- воде. Докрашивают ядерным красителем.

сином. Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. Так же, как Ре а к т и в ы. 1. 2,5% раствор глутараль- и а-нафтил-эстераза, фермент локализуется дегида (рН 7,2). 2. 4 % раствор солянокислого главным образом в моноцитах крови. По сравне фуксина. 3. 4 % раствор нитрата натрия. 4. 0,7 М нию с активностью а-нафтилацетат-эстеразы фосфатный буфер (рН 5,0). 5. сх-Нафтилацетат. активность нафтол-АS-ацетат-эстеразы в сег 6. 2 % раствор метилового зеленого. 7. Инкуба- ментоядерных нейтрофилах несколько выше, а в ционная среда: 2 мл реактива № 2, 2 мл реакти- лимфоцитах — слабее. В клетках костного моз ва № 3, 40 мл реактива № 4. 10 мг а-нафтила- га фермент обнаружен в мегакариоцитах, рети цетата, растворенного в 0,4 мл ацетона. Инку- кулярных и плазматических клетках, а также бационная среда должна иметь рН 5,8 и гото- незрелых гранулоцитах.

виться перед употреблением. Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Значитель Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а ни е. 1. ная активность фермента характерна для бласт Холодильник. 2. Весы. 3. Эксикатор. ных клеток при остром монобластном (гистио Ход о п р е д е л е н и я. Высушенные на монобластном) лейкозе, при остром промиело воздухе мазки фиксируют в глутаральдегиде цитарном лейкозе;

при других формах острых (реактив № 1) при температуре 4 °С в течение лейкозов активность фермента в бластных клет 10 мин (нефиксированные мазки можно хранить ках не выявляется.

в холодильнике 1—2 мес). Промывают дистил лированной водой. Инкубируют в инкубацион- Ли т е р а т у р а. Loffler H, Kl in. Wschr., ной среде в течение 1'/2—6 ч. Промывают дис- 1961, Bd 39, H. 23, S. 1220—1227.

тиллированной водой. Докрашивают метиловым зеленым. НАФТОЛ-AS D-ХЛОРАЦЕТАТ-ЭСТЕРА Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. В цито- ЗА. Метод Молони с соавт. П р и н ц и п и обо плазме лимфоцитов активность фермента выяв- р у д о в а н и е такие же, как для определения ляется в виде темно-красных гранул, в нейтро- а-нафтилацетат-эстеразы.

филах и моноцитах — в виде диффузной окрас- Ре а к т и в ы. 1. 10% раствор формалина ки. СЦК лимфоцитов равен 0,57 + 0,04. Актив- в метаноле (сохраняют в холодильнике). 2. Бу ность фермента увеличивается при увеличении ферный раствор Михаэлиса (рН 7,4). 3. Наф времени инкубации. Так, при инкубации в тече- тол-АS-D-хлорацетат. 4. Ацетон х. ч. 5. Грана ние 1'/2 ч активность фермента выявлена в товый прочный GBC или синий прочный ВВ.

49,83±2,75 % лимфоцитов, при удлинении сро- 6. Ядерный краситель. 7. Инкубационная среда:

ка инкубации до 6 ч эстеразоположительными 10 мг нафтол-АS-D-хлорацетата, растворенного становятся 79,7± 1,52% лимфоцитов. Исполь- в 0,5 мл ацетона, 10 мл буферного раствора зование в качестве фиксатора формалина дает (реактив № 2), разведенного пополам дистил более стабильные результаты. лированной водой (добавляют по каплям), 10 мг реактива № 5;

быстро встряхивают во избежа- Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а ние.

ние образования осадка, смесь фильтруют. Термостат.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. Не Ход о п р е д е л е н и я. Свежеприготовлен требуется. ные и высушенные на воздухе мазки фиксируют Ход о п р е д е л е н и я. Свежеприготовлен- в ацетоне при комнатной температуре 30—60 с.

ные и высушенные на воздухе мазки фиксируют Промывают в дистилированной воде и высуши в холодном 10 % растворе формалина в метано- вают на воздухе. Инкубируют в инкубационной ле в течение 30 с и затем высушивают. Фиксиро- среде в течение 1 ч при 37 °С. Промывают дис ванные препараты можно сохранять несколько тиллированной водой. Докрашивают 0,1 % раст месяцев. Помещают в инкубационную смесь при вором прочного красного 10 мин.

комнатной температуре на 30 мин. Промывают Метод Нахласа с соавт. (модификация в проточной воде. Докрашивают ядерным кра- Р. П. Нарциссова). Пр и н ц и п тот же.

сителем. Ре а к т и в ы. 1. 60 % раствор ацетона, на Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. Фермент сыщенный трилоном Б. 2, 1/15 M фосфатный выявляется в виде синих или фиолетовых гранул буфер (рН, 7,2). 3. Сукцинат натрия. 4. Пара в цитоплазме сегментоядерных нейтрофилов, нитротетразолий фиолетовый. 5. Трилон Б. 6.

лимфоциты и моноциты фермента не содержат. 0,5 % раствор метилового зеленого на ацетатном В мазках пунктата костного мозга здоровых буфере (рН 5,0). 7. Инкубационная среда:

людей наибольшую активность фермента обна- 540 мг сукцината натрия растворяют в 10 мл руживают в промиелоцитах. По мере созревания дистиллированной воды, добавляют 10 мл бу гранулоцитов активность нафтол-АS-D-хлор- ферного раствора (реактив № 2) и 10 мл раст ацетат-эстеразы несколько снижается, но оста- вора пара-нитротетразолия в дистиллированной ется довольно высокой. Наиболее высокая интен- воде (1 мг/мл), 13 мг трилона Б (рН довести до сивность реакции наблюдается при фиксации 7,2) и дистиллированной воды до 40 мл. Среда в парах формалина при комнатной температуре. может быть пригодна 1—2 нед при хранении Время фиксации до 10 мин не оказывает влияния в холодильнике.

на уровень активности фермента, лишь при Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е.

фиксации в течение 30 мин и дольше активность 1. Термостат или водяная баня. 2. Холодиль фермента снижается.

ник.

Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Высокая Ход о п р е д е л е н и я. Фиксируют мазки активность фермента обнаружена в властных ацетоном (реактив № 1) при комнатной темпе клетках при промиелоцитарном остром лейкозе, ратуре в течение 30 с. Ополаскивают дистил ничтожная — при остром монобластном;

при лированной водой 3—5 с и высушивают. Инку других формах острых лейкозов в властных бируют в инкубационной среде в течение 1 ч клетках активность не выявлена. при 37 °С. Промывают проточной водой в тече ние 1 мин. Ополаскивают дистиллированной Ли т е р а т у р а. Руденс Ю. Ф., Буй водой 3—5 с. Докрашивают метиловым зеленым кис И. М. Лаб. дело., 1971, № 10, с. 592;

5—10 мин. Промывают в проточной воде. Допол Moloney W. С. et al. J. Histochem. Cytochem., нительно фиксируют мазки парами формалина 1960, vol. 8, p. 200—207;

Schmalzl F.\ Braun в течение 30 мин (для предотвращения раст steiner H. Klin. Wschr., 1968, Bd 46, H. 12, ворения формазана нитротетразолия фиолето S. 642—650.

вого в иммерсионном масле).

ДЕГИДРОГЕНАЗЫ — группа окислитель а-ГЛИЦЕРОФОСФАТДЕГИДРОГЕНАЗА но-восстановительных ферментов, локализу (а-ГФДГ). Метод Нахласа с соавт. (модифика ющихся в митохондриях цитоплазмы клеток.

ция Р. П. Нарциссова). Пр и н ц и п см. Сук Для исследования различных дегидрогеназ ис цинатдегидрогеназа.

пользуют метод Нахласа с соавт. в модифика циях, основанный на реакции восстановления Ре а к т и в ы. 1. 60 % раствор ацетона, на солей тетразолия и выпадения осадка диформа- сыщенный трилоном Б. 2. 1/15 M фосфатный зана в местах активности ферментов. буфер (рН 7,2). 3. а-Глицерофосфат натрия.

СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗА (СДГ;

К 4. Пара-нитротетразолий фиолетовый. 5. Трилон Ф. 1.3.9.9.1). Метод Нахласа с соавт. (моди- Б. 6. 0,5 % раствор метилового зеленого на фикация Кваглино, Хейхо). Пр и н ц и п. Ак- ацетатном буфере (рН 5,0). 7. Инкубационная тивность фермента оценивается по реакции вос- среда: 630 мг ex-глицерофосфата натрия раство становления солей тетразолия в виде осадка ряют в 10 мл дистиллированной воды, добав диформазана синего цвета. ляют 10 мл буферного раствора (реактив № 2), Ре а к т и в ы. 1. 60 % водный раствор аце- 10 мл раствора пара-нитротетразолия в дистил тона. 2. 0,2 М фосфатный буфер (рН 7,4). лированной воде (1 мг/1 мл), 13 мг трилона Б 3. 0,2 М раствор сукцината натрия. 4. 0,6 М (рН доводят до 7,2) и дистиллированной воды до раствор бикарбоната натрия. 5. 0,03 М раствор 40 мл. Среда пригодна в течение 1—2 нед при хлорида алюминия. 6. 0,03 М раствор хлорида хранении в холодильнике.

кальция. 7. Тетразолий нитро ВТ. 8. 0,1 % рас- Об о р у д о в а н и е и ход опре д е л е твор прочного красного. 9. Инкубационная сре- н и я см. Сукцинатдегидрогеназа (модифика да: 10 мл реактива № 3, 2 мл реактива № 4, ция Р. П. Нарциссова).

0,2 мл реактива № 5, 0,2 мл реактива № 6, Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. У здоровых 10 мг тетразолия в 10 мл дистиллированной СДГ и а-ГФДГ выявляются в виде гранул в ней воды, дистиллированной воды до 40 мл.

трофилах, лимфоцитах, тромбоцитах перифери ческой крови и миелобластах, гранулоцитах, раствор периодата на 20 мин (в темноте). Про мегакариоцитах, эритро- и нормобластах кост- мывают в трех сменах дистиллированной воды.

ного мозга. Ополаскивают в сернистой воде (в течение 1 — СЦК СДГ лимфоцитов составляет 1,1 ±0,05;

2 мин). Окрашивают реактивом Шиффа в тече а-ГФДГ—0,8±0,08. У детей активность фер- ние 30—40 мин (в темноте). Промывают в трех мента СДГ обнаружена в 46 % лимфоцитов. сменах сернистой воды по 3 мин. Промывают У здоровых взрослых в пунктате костного мозга в трех сменах дистиллированной воды по 3 мин.

около 88 % недифференцированных клеток име- Окрашивают светло-зеленой краской в течение ют активность фермента ( + ), все ядерные эле- 10—20 с. Промывают в дистиллированной воде.

менты эритроидного ряда и гранулоциты прояв- Гликоген окрашивается в вишнево-фиолетовый ляют активность на ( + ) и ( + + ). цвет на зеленом фоне препарата. Кроме глико Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Снижение гена, положительную реакцию могут давать та активности ферментов в лимфоцитах отмечено кие ШИК-положительные вещества, как кислые в период приступа бронхиальной астмы, при и нейтральные мукополисахариды, мукопроте хроническом лимфолейкозе. Повышение актив- ины, гликопротеины и др. Гликоген легко отдиф ности ферментов обнаружено у больных злока- ференцировать от других веществ пробой со чественными опухолями в гранулоцитах, сниже- слюной или диастазой.

ние активности — при хроническом миелолей- Проба со слюной. Препарат помещают в све козе. жесобранную слюну и оставляют на 30 мин в термостате. Затем производят окраску на гли Ли т е р а т у р а. Нарциссов Р. П. Арх.

коген приведенным выше методом. Инкубация анат., 1969, № 5, с. 85—91;

Nachlas M. M. et al.

препаратов со слюной способствует расщепле j. Histochem., Cytochem., 1957, vol. 5, p. 420— нию гликогена, и при реакции с реактивом 436;

Quaglino D., Hayhoe F. Nature, 1960, vol.

Шиффа не получается розовой окраски.

187, № 4731, p. 85—86.

Идентифицировать гликоген можно также ГЛИКОГЕН локализуется в цитоплазме кле- путем предварительной инкубации мазков с диа ток и играет важную роль в энергетическом стазой (а-амилаза;

К. Ф. 3.2.1.1) (1 мл про метаболизме клеток. При цитохимическом иссле- фильтрованной диастазы растворить в 40 мл довании гликогена используют главным образом изотонического раствора хлорида натрия) в те PAS- или ШИК-реакцию (по названию реакти- чение 30 мин в термостате.

вов— шифф-йодная кислота). Но р м а л ь н ые в е л и ч и н ы. В мазках Метод Шабадаша. Пр и н ц и п. Под влия- периферической крови гликоген содержится в нием периодата калия гликоген окисляется с об- цитоплазме нейтрофилов (в виде обильной мел разованием альдегидных соединений, легко реа- кой зернистости), цитоплазме лимфоцитов (в гирующих с реактивом Шиффа (фуксин-сернис- виде небольшого количества крупных зерен).

тая кислота). В местах локализации гликогена В пунктате костного мозга гликоген выявля выявляется вишнево-фиолетовое окрашивание. ется в нейтрофилах разной степени зрелости, Ре а к т ив ы. 1. 0,03 М раствор периодата лимфоцитах и мегакариоцитах. У здоровых лю калия или натрия: 230 мг периодата растворяют дей количество интенсивно окрашенных нейтро в 100 мл дистиллированной воды. Готовят перед филов крови ( + + +) колеблется в пределах употреблением. 2. 1 н. НС1: 82,5 мл концентриро- 2—12 %, средней интенсивности окраски ванной НС1 отн. плотности 1,19 доливают дис- ( + +)—в пределах 72—90%, слабо окра тиллированной водой до 1 л. 3. Основной фуксин шенных ( + ) —от 4 до 18%. СЦК равен (для фуксин-сернистой кислоты). 4. Метаби- 1,71—2,04.

сульфит калия. 5. Реактив Шиффа;

1 г основного В лимфоцитах крови здоровых людей глико фуксина растворяют в 200 мл кипящей дистил- ген содержится в виде небольшого числа гранул лированной воды. По мере охлаждения в раст- в 10,4 ±2,3 % клеток. В мегакариоцитах кост вор добавляют 1 г метабисульфита калия и 20 мл ного мозга гликоген обнаруживается в виде 1 н. НС1. Оставляют на сутки. Для полного гранул (от единичных до 30—50), напоминая обесцвечивания добавляют растолченную таб- скопления кровяных пластинок. У здоровых лю летку карболена, оставляют на сутки, затем дей число гликогенположительных мегакариоци фильтруют. Реактив сохраняют в темноте (луч- тов составляет 62,0 ±3,55 %.

ше на холоде) в плотно закрытой посуде. Годен Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Увеличе к употреблению в течение нескольких месяцев ние содержания гликогена в нейтрофилах наб (легкая степень покраснения свидетельствует людается при различных воспалительных про о непригодности реактива). 6. Сернистая вода: цессах, эритремии, сахарном диабете, уменьше к 10 мл 10 % раствора метабисульфита калия ние — при агранулоцитозах, лучевой болезни, добавляют 200 мл дистиллированной воды и при хроническом миелолейкозе, особенно при 10 мл 1 н. HCI. Готовят перед употреблением. прогрессировании процесса. Повышение числа 7. 0,1 % спиртовой раствор светло-зеленой гликогенположительных лимфоцитов (до 70— краски (лихтгрюн). 80 %) характерно для лимфопролиферативных Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. заболеваний, особенно хронического лимфолей 1. Горелки. 2. Термостат. 3. Весы. коза. При тромбоцитопенической пурпуре и сим Ход о п р е д е л е н и я. Препараты фикси- птоматических тромбоцитопениях число глико руют (тотчас после приготовления) в абсолют- генположительных форм мегакариоцитов значи ном спирте в течение 30 мин. Промывают в двух тельно снижено, после спленэктомии оно повы сменах дистиллированной воды. Погружают в шается до нормальных величин.

При острых лейкозах гликоген можно обна- величин и 5,2 % для патологических (не превы ружить в властных клетках: при остром миело- шает допустимой величины).

бластном лейкозе — в виде мелкой зернистости Но р м а л ь н ые в е л и ч и н ы. У взрослых в цитоплазме или в виде диффузного ее окраши- в возрасте 20—30 лет СЦК равен для мужчин вания, при остром лимфобластном лейкозе — 1,58 + 0,01 и для женщин 1,58 + 0,03. Более вы в виде крупных гранул, расположенных в цито- сокие значения получены у детей в возрасте плазме вокруг ядра, при остром монобластном 1 — 12 мес (1,89±0,03) и 1—3 лет (1,96 + 0,03).

варианте бластные клетки содержат гликогена Метод с бромфеноловым синим (по М. Г. Шу немного в виде диффузной окраски, при эритро- бину). Пр и н ц и п. Избирательная окраска ка миелозе гликоген в виде гранул обнаружива- тионного белка бромфеноловым синим.

ется в эритробластах. Ре а к т и в ы. 1.5% раствор сульфосалици ловой кислоты (5 г сульфосалициловой кислоты Ли т е р а т у р а. Шабадаш А. Л. Изв.

растворяют в 95 мл дистиллированной воды).

АН СССР;

серия биол., 1947, № 6, с. 745— 2. 0,05 М раствор буры рН 9,55 (19,1 г буры 760;

Шабадаш А. Л. Докл. АН СССР, 1949, растворяют в 1 л дистиллированной воды).

т. 68, № 2, с. 389—392.

3. 0,1 М раствор однозамещенного фосфата КАТИОННЫЙ БЕЛОК. Неферментный ка- калия (13,6 г КН2РО4 растворяют в 1 л дистил тионный белок локализуется в лизосомах гра- лированной воды). 4. 0,05 М боратный буфер нулоцитов и играет важную роль в реализации рН 8,2 (6,13 мл реактива № 2 добавляют 3,87 мл фагоцитарной функции клеток. При цитохими- реактива № 3, а затем доводят реактивом 3 до ческом исследовании катионных белков исполь- рН 8,2). 5. 0,1 % раствор бромфенолового си зуют методы, основанные на применении диа- него в 0,05 М боратном буфере (100 мг сухого хромных анионных красителей. бромфенолового синего растворяют в 100 мл Метод Пигаревского (модифицированный). реактива № 4). 6. 1 % водный раствор сафра Пр и н ц и п. Избирательная окраска кат'ион- нина или 0,05 % раствор основного фуксина.

ного белка гранулоцитов прочным зеленым при Последний готовят перед употреблением: рас рН 8,1—8,2. творяют 50 мг основного фуксина в 100 мл кипя Р е а к т и в ы. 1. Спиртовой раствор форма- щей дистиллированной воды.

лина (1 мл формалина и 19 мл абсолютного Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а ние. 1.

этилового спирта). 2. 0,2 М раствор триса: 24,2 г рН-Метр. 2. Весы. 3. Газовая или электрическая триса (оксиметил) аминометана растворяют в плитка.

1 л дистиллированной воды. 3. 0,1 н. НС1. 4. Ме- Ход о пр е д е л е ния. Фиксируют мазки таноловый трис-буфер (25 мл реактива № 2 в 5 % растворе сульфосалициловой кислоты смешивают с 22,5 мл реактива № 3 и 52,5 мл в течение 60—90 с. Тщательно промывают дис метанола). 5. Забуференный спиртовой раствор тиллированной водой и высушивают. Окраши прочного зеленого (рН 8,1—8,2): 100 мг прочно- вают 0,1 % раствором бромфенолового синего го зеленого растворяют в 100 мл реактива № 4. в боратном буфере (реактив № 5) в течение Определяют рН через сутки после приготовле- 1—2 мин. Промывают в трех сменах 0,05 М бо ния реактива и выравнивают его добавлением ратного буфера (реактив № 4) по 1—3 мин.

в раствор порошка сухого триса (при рН ниже Высушивают и докрашивают 1 % раствором 8,1) или слабого раствора НС1 (рН выше 8,2). сафранина в течение 30—60с или 0,05 % раство Установленная величина рН стабильна при ра- ром основного фуксина в течение 1—2 с. Промы боте в течение 4 мес. Раствор хранить в стеклян- вают проточной водопроводной водой и высу ной посуде с притертой пробкой (можно при шивают. Катионный белок выявляется в цито комнатной температуре). 6. 0,25 % водный раст- плазме клеток в виде синих гранул.

вор азура А: 250 мг азура А растворяют в 100 мл Во с п р о и з в о д и мо с т ь мет ода. От дистиллированной воды. Краситель стойкий.

носительная стандартная ошибка для группы Специальное оборудование. 1. здоровых составила 5,2 %.

рН-Метр. 2. Весы.

Но р м а л ь н ые в е л и ч и н ы. У здоровых Ход о п р е д е л е н и я. Высушенные на в нейтрофилах обнаружено 123+1,5 ед. или воздухе мазки фиксируют в спиртовом растворе СЦК 1,23 + 0,015, при этом не отмечено разли формалина 10—15 с. Во избежание фоновой чий у здоровых обоего пола. Протеинположи окраски можно использовать свежеприготовлен- тельные нейтрофилы составляют у мужчин ные нефиксированные мазки (не позже чем через 83+1,4 %, у женщин 86 + 0,6 %.

48 ч после приготовления, препараты более дли- Кл и н и ч е с к о е з на ч е ни е. Снижение тельного срока необходимо фиксировать). Маз- катионного белка в нейтрофилах характерно ки окрашивают забуференным спиртовым раст- для острого воспалительного процесса;

наблю вором прочного зеленого (реактива № 5) в те- дается в разгаре различных инфекционных за чение 20 мин. Быстро ополаскивают дистиллиро- болеваний бактериальной и вирусной этиоло ванной водой. Окрашивают водным раствором гии. Период выздоровления сопровождается азура А в течение 15—20 с. Смывают мазки нормализацией показателя. Изменения содер дистиллированной водой и высушивают. При жания лизосомального катионного белка кор микроскопии с желтым или оранжевым свето- релируют со степенью тяжести заболевания.

фильтром катионный белок в цитоплазме клеток имеет вид ярко-зеленых гранул.

Ли т е р а т у р а. Мазинг Ю. А., Старосель Во с п р о и з в о д и мо с т ь метода: ко- ская И. Я. Лаб. дело, 1981, № 10, стр. 582— эффициент вариации V = 2,9 % для нормальных 584;

Нагоев Б. С. Катионный белок лейкоцитов и его значение: Методические указания.— Наль- ТЕСТ ВОССТАНОВЛЕНИЯ НИТРОСИНЕ чик, 1982.— 67 с.;

Пигаревский В. Е., Ма- ГО ТЕТРАЗОЛИЯ (НСТ-тест) дает возмож зинг Ю. А. Лаб. дело, 1981, № 10, с. 579—582;

ность судить о фагоцитарной и метаболической Шубин М. Г. Цитология, 1974, № 10, с. 1321 — функции гранулоцитов по образованию в цито 1322. плазме гранул формазана.

Метод Парка с соавт. в модификации ЛИПИДЫ локализуются в цитоплазме кле Ю. И. Бажоры И соавт. Пр и н ц и п. Погло ток главным образом в мембранах органелл и щение гранулоцитами нитросинего тетразолия обнаруживаются преимущественно в нейтро и восстановление его в формазан, выявляемый фильных гранулоцитах. Играют важную роль, в виде гранул синего цвета.

в проницаемости мембран. Цитохимическое ис Ре а кт ив ы. 1. Гепарин (20—25 ЕД/мл).

следование основано на применении красящих 2. 0,15 М фосфатный буфер рН 7,2. 3. 0,2 % рас веществ, растворяющихся в жирах (судан III, твор нитросинего тетразолия. 4. Изотонический судан IV, черный судан и др.). Для выявления раствор хлорида натрия. 5. Метанол. 6. 2 % рас нейтрального жира пользуются судаком III, ок твор метилового зеленого.

рашивающим жир в оранжевый цвет. Липоиды С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а ние. 1.

выявляются лучше Суданом черным (черное ок Термостат. 2. Полистироловые пластинки (при рашивание).

меняемые для РТГА).

Окраска судаком 111 (метод Гольдмана).

Ход о п р е д е л е н и я. В лунку пластинки Пр и н ц и п. Растворение жиров и окраска су вносят 0,025 мл раствора гепарина и 0,1 мл кро даном III в оранжевый цвет.

ви, 0,05 мл фосфатного буфера и 0,05 мл рас Ре а кт ив ы. 1. Формалиновый спирт твора тетразолия. Содержимое лунки перемеши (1 часть формалина и 4 части 96% спирта).

вают с помощью пипетки. Пластинку накры 2. 70 % этиловый спирт (к 100 мл 96 % спирта вают фильтровальной бумагой, смоченной изо прибавить 39,18 мл дистиллированной воды).

тоническим раствором хлорида натрия и стек 3. сх-Нафтол. 4. Раствор Судана (к 100 мл 70 % лянной пластинкой соответствующих размеров.

спирта добавляют 20 мл дистиллированной Для создания влажной камеры стеклянную пла воды, 1,2 г а-нафтола и в избытке судан III.

стинку прижимают с помощью пружинных за Раствор кипятят в течение 10 мин и фильтруют).

жимов. Инкубируют в термостате при 37 °С в те 5. Краситель Романовского — Гимзы.

чение 15 мин, затем при комнатной температуре С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е не в течение 15 мин. После каждого этапа инку требуется.

бации смесь перемешивают пастеровской пипет Ход о п р е д е л е н и я. Мазки крови фик кой (продувая воздух). Готовят мазки, высуши сируют в формалиновом спирте в течение 1 — вают, фиксируют метанолом и докрашивают 3 мин. Красят в растворе Судана III в течение метиловым зеленым.

10 мин. Помещают в 70 % этиловый спирт на В о с п р о и з в о д и м о с т ь ме т ода. Ко 1 мин. Докрашивают красителем Романовско эффициент вариации у здоровых 9,2 %, у боль го — Гимзы или гематоксилином в течение 5— ных — 6,6 % (не превышает допустимый).

10 мин. Промывают дистиллированной водой.

Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. У здоро Липиды выявляются в виде оранжевых зерен.

вых гранулы формазана обнаруживают в 7,2 ± Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. В мазках + 1,2% нейтрофилов.

периферической крови липиды содержатся в ци Метод Стюарта и соавт. в модификации топлазме нейтрофилов в виде обильной зернис Б. С. Нагоева. Пр и н ц и п см. Метод Парка.

тости. Большинство нейтрофилов (69—80%) у Ре а к т и в ы. 1. Гепарин — 10 ЕД в 1 мл здоровых людей красятся интенсивно (+ + +).

0,9 % раствора хлорида натрия. 2. 0,1 % вод 18—36 % дают окраску средней интенсивности ный раствор нитросинего тетразолия. 3. 50 % ( + + ) и 10% слабо окрашены ( + ). СЦК раствор формалина в 0,9 % растворе хлорида липидов в неитрофилах 2,65±0,033. В мазках натрия. 4. 3,4 % раствор хлорида натрия. 5. 4 % костного мозга в миелобластах обнаружено не формалиново-спиртовой раствор. 6. 0,5 % раст большое содержание липидов, в промиелоцитах вор сафранина в 0,9 % растворе хлорида на их больше и по мере созревания нейтрофилов трия.

содержание липидов увеличивается.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. 1.

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Повыше Центрифуга. 2. Термостат или водяная баня ние содержания липидов в неитрофилах наблю на 37 °С.

дается при острых лейкозах и обострении хрони Ход о п р е д е л е н и я. Смешивают 0,1 мл ческих лейкозов. При острых лейкозах липиды крови из пальца с 0,1 мл раствора гепарина.

в властных клетках обнаружены у больных при Добавляют 0,1 мл раствора нитросинего тетра миелобластном и монобластном вариантах и не золия. Инкубируют смесь на водяной бане (или выявлены при лимфобластном остром лейкозе.

в термостате) при 37 °С в течение 10 мин.

При недифференцированном остром лейкозе Фиксируют смесь в растворе формалина 3 мин.

властные клетки лишь в небольшом количестве Добавляют 3 мл дистиллированной воды на 20 с (2,2±0,82 %) содержат липиды. Уменьшение (для лизиса эритроцитов). Добавляют 1 мл липидов в неитрофилах выявлено при ревматиз 3,4 % раствора хлорида натрия (для восста ме, воспалительных процессах.

новления изотонии) и оставляют при комнатной Ли т е р а т у р а. Роскин Г. И., Левин- температуре на 10 мин. Центрифугируют 5 мин сон Л. Б. Микроскопическая техника.— М., при 1000 об/мин. Удаляют пастеровской пипет 1957, с. 257. кой надосадочную жидкость, из осадка готовят мазки. Фиксируют мазки в формалиново-спирто- ных процессах, злокачественных новообразова вом растворе 30 с и докрашивают сафранином. ниях.

Но р ма л ь н ые в е л и ч и н ы. У здоровых Ли т е р а т у р а. Бажора Ю. И., Тимошев людей положительный НСТ-тест выявлен в ский В. Н., Протченко П. 3., Головченко А. Н.

9,34 ± 0,4 % нейтрофилов. У здоровых СЦК Лаб. дело, 1981, № 4, с. 198—200;

Нагоев Б. С., составляет 13,3 ± 0,6.

Лаб. дело, 1983, № 8, 7—11;

Park В. Н., Flr Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. НСТ-тест kig S. M., Smitwick E. M. Lancet, 1968, vol. 2, повышен при инфекционных заболеваниях бак p. 532—534;

Stuart J., Gordon K, Lee T. J. Histo териальной этиологии, при гнойно-воспалитель chem. Cytochem., 1975, vol. 7, p. 477.

3.5. ТРОМБОЦИТЫ Кровяные пластинки — тромбоциты — отно- рованная вода — 100 мл. 2. 1 % раствор окса сятся к третьей группе клеточных элементов лата аммония. Раствор кипятят и фильтруют.

крови. Обладают антигенными свойствами, Хранят в холодильнике. Сравнительный анализ основная роль их — участие в гемостазе (см. разных разводящих жидкостей позволил счи раздел 4). тать лучшим 1 % раствор оксалата аммония, так как он дает быстрый и полный лизис эритроцитов.

3.5.1. Подсчет количества Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а ние. I.

Микроскоп. 2. Фазово-контрастное устройство.

В практике при подсчете тромбоцитов ис- 3. Счетная камера Горяева. 4. Осветитель к пользуют методы, основанные на двух принци- микроскопу (ОИ-7, ОИ- 18).

пах: 1) непосредственный подсчет в крови (с по- Ход о п р е д е л е ни я. Разводят исследуе мощью счетной камеры или счетчика) и 2) под- мую кровь в 200 раз;

для этого в сухую пробирку счет в мазках крови на определенное количество набирают 4 мл реактива 1 или 2 и 0,02 мл эритроцитов с пересчетом на 1 мкл или 1 л крови. Перемешивают и оставляют на 25 — с учетом общего количества эритроцитов в кро- 30 мин для гемолиза эритроцитов. Подготавли ви. Каждая группа методов имеет преимущества вают счетную камеру (см. подсчет лейкоцитов).

и недостатки. Существенным преимуществом Перемешивают разведенную кровь и заполняют первой группы методов является их большая камеру;

подносят каплю ее с помощью стеклян точность. Непосредственный подсчет тромбоци- ной палочки или пастеровской пипетки к краю тов в крови удобен еще и потому, что не требует покровного стекла, следя за тем, чтобы кровь для расчета сведений о количестве эритроци- равномерно без пузырьков воздуха заполняла тов, но подсчет в камере более трудоемкий, всю поверхность сетки, не затекая в бороздки.

поскольку тромбоциты в нативном виде пред- Помещают счетную камеру во влажную камеру ставлены мелкими и плохо контрастированными на 5 мин для оседания тромбоцитов (чашка элементами. Недостатком этих методов является Петри с уложенной по краям смоченной водой необходимость подсчета тромбоцитов в ближай- фильтровальной бумагой). Подготавливают шие часы после взятия крови. Подсчет тромбо- фазово-контрастное устройство в соответствии цитов в мазках крови значительно уступает по с инструкцией, приложенной к нему. Произво своей точности методам непосредственного под- дят подсчет тромбоцитов в 25 больших квадра счета в камере или с помощью счетчиков и тах.

автоматов. Ошибки при подсчете в мазках крови Тромбоциты выглядят в счетной камере в могут быть обусловлены несколькими причина- виде мелких, хорошо преломляющих свет ми: плохое качество мазка и связанное с этим образований.

неравномерное распределение тромбоцитов, не- Расчет числа тромбоцитов проводят, исходя точный подсчет эритроцитов в крови. Суще- из разведения крови (200), числа сосчитанных ственное неудобство метода — необходимость квадратов (25) и объема одного большого ква одновременного подсчета тромбоцитов и эритро цитов в крови. Преимущество его — возможность подсчета тромбоцитов в любое время независимо от момента взятия крови. В качестве унифици рованных утверждены два метода, основанных на обоих принципах.

Унифицированный метод подсчета в камере (1972). Пр и н ц и п. Подсчет тромбоцитов в 1 мкл (или 1 л) с учетом разведения крови и объема квадрата счетной сетки с примене нием фазово-контрастного устройства для X — число тромбоцитов в 1 мкл крови;

а — контрастирования тромбоцитов. число тромбоцитов, сосчитанных в 25 больших Ре а к т ив ы. Применяют реактив 1 или 2. квадратах.

1. Кокаина гидрохлорид — 3 г, натрия хло- Практически число сосчитанных тромбоци рид — 0,25 г, фурацилин — 0,025 г, дистилли- тов умножают на 2000.

Во с п р о и з в о д и мо с т ь. По данным Подсчет в автоматическом счетчике. Исполь Т. А. Одесской и соавт., ошибка метода состав- зование счетчиков и автоматов существенно ляет 6,5 %. облегчает подсчет тромбоцитов в крови, повы Унифицированный метод подсчета в мазках шает точность и ускоряет процедуру подсчета.

крови (по Фонио). Пр и н ц и п. Метод основан Для автоматического подсчета количества на подсчете числа тромбоцитов в окрашенных тромбоцитов приспособлены отечественный ге мазках крови на 1000 эритроцитов с расчетом матологический комплекс КГ-2 и различные на 1 мкл (или 1 л) крови, исходя из содержания зарубежные счетчики: «Пикоскель» PS-4 фирмы в этом объеме количества эритроцитов. «Medicor» (ВНР), «Coulter» 431A фирмы Ре а к т ив ы. Применяют реактив 1 или 2. «LJC — Instrument» (Швеция), «Tromboco 14 % раствор сульфата магния. 2. 6 % раствор unter С» фирмы «Coultronics France SA» (Фран этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА). ция), автомат «Hemalog-8» фирмы «Technicon» Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а ние. Не (США) и др.

требуется. Принцип работы большинства счетчиков Ход о пр е д е л е ния. Смешивают кровь основан на кондукторометрическом методе с реактивом 1 или 2, для этого взятый капил- (см. 3.3.1.).

ляром Панченкова реактив до метки «75» вно- Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а ни е.

сят в пробирку, затем добавляют кровь, взятую Счетчик для тромбоцитов.

тем же капилляром, до метки «О». Содержимое Ход и с с л е д о в а н и я соответствует ин пробирки перемешивают и готовят тонкие мазки. струкции, приложенной к прибору.

Фиксируют и окрашивают по Романовскому — Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. По данным Гимзе (см. 3.3.2) в течение 2—3 ч (при исполь- В. В. Соколова и И. А. Грибовой, количество зовании реактива 1) и в течение 30—45 мин тромбоцитов у здоровых людей составляет.

6 6 (при использовании реактива 2).

180 • 10 — 320 • 10 /мкл (или 180 -10 Высохшие мазки микроскопируют с иммер- 320 • 10 /л).

сионным объективом, подсчитывая количество Кл и н и ч е с к о е з на ч е ни е. Снижение тромбоцитов в тонких местах препарата (эри- количества тромбоцитов в крови — тромбоцито троциты должны быть расположены изолиро- пения — является важным симптомом при не ванно). Тромбоциты в мазках выглядят в виде которых формах геморрагического диатеза.

фиолетовых округлых образований размером Наиболее выраженная тромбоцитопения (50 X 2—4 мкм с отчетливо видимой центрально рас- X 10 /мкл и ниже) наблюдается при обостре положенной зернистой частью — грануломером нии тромбоцитопенической пурпуры. Тромбоци и более светлой периферической незернистой топения обычно сопутствует острым лейкозам зоной — гиаломером. в развернутой стадии и особенно терминальной Подсчет производят следующим образом: в стадии хронических лейкозов. Умеренная тромбоци каждом поле зрения микроскопа считают число топения (100 • 10 /мкл и более) наблюдается эритроцитов и тромбоцитов, передвигая мазок при коллагенозах, циррозах печени. Повышение до тех пор, пока не будут просчитаны 1000 количества тромбоцитов в крови — тромбо эритроцитов. Для удобства счета и большей цитоз — характерно для миелопролифератив точности следует пользоваться специальным ных заболеваний, наблюдается при злокаче окуляром с уменьшенным полем зрения;

при ственных новообразованиях. Высокий тромбоци отсутствии окуляра можно уменьшить поле тоз (1000 • 10 /мкл и более) может быть у зрения простым приемом (см. 3.3.6.). больных после спленэктомии.

Ра с че т : количество тромбоцитов на Ли т е р а т у р а. Одесская Г. А., Шитико эритроцитов составляет А°/оо. Зная число эри ва А. С., Папаян Л. П. Лаб. дело, 1970, № 2, троцитов в 1 мкл (в 1 л) крови, легко подсчи с. 78—79;

Соколов В. В., Грибова И. А. Гемато тать количество тромбоцитов в 1 мкл крови логические показатели здорового человека.— (в 1 л).

М.: Медицина, 1972.— 104 с.;

Feissly R., Lu Например. А = 60%о;

число эритроцитов din H. Rev. Hemat., 1949, vol. 4, p. 481;

Fonio A.

6 | 5000000 в 1 мкл (5 • 10 /мкл или 5 • 10 /л).

Dtsch. Ztschr. Chir., 1912, Bd. 117, S. 176.

Составляют пропорцию:

60— 1000;

X — 5 000 000, откуда 3.5.2. Исследование функций тромбоцитов В клинической практике наиболее распро странены исследования агрегационных, адгезив ных и других свойств тромбоцитов (см. раз 3 = 300 • 1000 мкл (300 • 10 /мкл или 300 • 10 /л). дел 4).

3.6. ИЗМЕНЕНИЯ КРОВИ ПРИ ЛЕЙКОЗАХ Исследование крови имеет особоенно важное клеток может варьировать от единичных (5— диагностическое значение при гемобластозах. 10%) до значительного числа (70—80%).

Поэтому во всех случаях, когда клинически Соответственно резко сокращается число зрелых возникает подозрение на лейкоз (слабость, лихо- гранулоцитов. Количество незрелых грануло радка неясного генеза, геморрагический синд- цитов чаще небольшое или они вовсе отсут ром, увеличение печени, селезенки, лимфати- ствуют. К последним случаям применим термин ческих узлов, кожные поражения и др.), необ- «hiatus leukemicus».

ходим общий клинический анализ крови. Значительно реже встречаются так называе Показатели красной крови. Появление ане- мые алейкемические формы (стадии) острых мии — ранний лабораторный симптом острых лейкозов, когда в периферической крови бласт лейкозов. При этом анемия чаще нормохромно- ные клетки отсутствуют. Диагноз в этих случаях го типа. При наличии кровопотерь развивается может быть установлен после исследования гипохромная микроцитарная анемия. При хро- пунктата костного мозга (см. 3.7).

нических лейкозах анемия обычно развивается Помимо количественных сдвигов лейкоци уже в стадии развернутых клинико-гематологи- тарной формулы, важное диагностическое зна ческих проявлений, а в начале заболевания чение имеет изменение морфологических особен показатели красной крови обычно не изменены. ностей клеток. Так, при острых лейкозах власт Исключение составляют лейкозы миелопролифе- ные клетки могут иметь неправильную форму.

ративной природы, особенно эритремия, при Отличаются полиморфным ядром, с укрупнен которой ранними и основными лабораторными ными нуклеолами, включениями в цитоплазме.

симптомами являются эритроцитоз, повышение При разных формах острых лейкозов морфо содержания гемоглобина и гематокрита в крови. логия властных клеток различна. При остром Умеренный эритроцитоз может быть в начале миелобластном и миеломонобластном лейкозе доброкачественного сублейкемического миелоза ядра клеток круглые, иногда неправильной (миелофиброза), который затем снижается до формы, в цитоплазме содержат азурофильную нормальных цифр, а в дальнейшем, к терми- зернистость и нередко тельца Ауэра. При остром нальной стадии, сменяется анемизацией.

промиелоцитарном лейкозе отмечается выра При лимфопролиферативных заболеваниях женный полиморфизм властных клеток, ха в начальной стадии показатели красной крови рактерна крупная фиолетовая зернистость, нормальны, по мере прогрессирования процесса обильно заполняющая цитоплазму клеток, часто развивается анемия. Малокровие обычно бывает встречаются тельца Ауэра.

нормохромного, нормоцитарного или макроци- При остром монобластном лейкозе властные тарного типа, с небольшим повышением числа клетки крупные с бобовидным ядром и скудной ретикулоцитов, иногда умеренным нормобласто- мелкой зернистостью в цитоплазме. При остром зом. Следует иметь в виду возможность разви- лимфобластном лейкозе бласты меньших разме тия при хронических лейкозах, особенно при ров, ядро округлое с 1—2 нуклеолами, цито хроническом лимфолейкозе, аутоиммунной гемо- плазма обычно не содержит зернистости. Мор литической анемии. В этих случаях выявляется фологические черты властных клеток не всегда анемия нормохромного типа с высоким содержа- надежны для дифференциации различных форм нием ретикулоцитов в крови, нередко появле- острых лейкозов. С этой целью обычно проводят нием нормобластов в мазках периферической цитохимические исследования. Для практиче крови. ских целей может быть достаточным небольшой Лейкоциты и лейкоцитарная формула. Общее набор цитохимических реакций (PAS — ре количество лейкоцитов в крови резко изменяет- акция, исследование активности пероксидазы, ся при лейкозах. Особенно выраженные измене- неспецифических эстераз). В табл. 27 приведены ния в виде гиперлейкоцитоза (100-103/мкл, результаты исследования властных клеток при или 100-109 /л и выше) наблюдаются при наиболее часто встречающихся формах острых хроническом миелолейкозе, хроническом лимфо- лейкозов.

лейкозе. Умеренный лейкоцитоз (до 15 • 10 9 - Для хронических лейкозов миелопролифе 20- 109/л) может быть при эритремии, хро- ративной природы характерно наличие большо ническом моноцитарном лейкозе, сублейкеми- го числа гранулоцитов (до 80—90 %) в мазках ческом миелозе. В последнем случае может крови при уменьшении лимфоцитарных и моно наблюдаться и лейкопения. При парапротеине- цитарных элементов. При хроническом миело мических гемобластозах чаще развивается лейкозе в лейкоцитарной формуле находят все лейкопения, но может быть и нормальное число переходные формы от властных клеток до зрелых лейкоцитов в крови. Изменения числа лейкоци- нейтрофилов. Часто отмечают увеличение числа тов при острых лейкозах непостоянны;

наряду эозинофилов и базофилов. В развернутой клини с нормальным количеством может наблюдаться ко-гематологической стадии хронического мие лейкопения и умеренный лейкоцитоз. Наиболь- лолейкоза обнаруживают следующую лейко шее значение в лабораторной диагностике цитарную формулу: миелобласты 1—3 %, про лейкозов имеет исследование лейкоцитарной миелоциты 3—8 %, нейтрофильные миелоциты формулы (табл. 26). Важнейший признак острых 5—10 %, нейтрофильные метамиелоциты 10— лейкозов появление в мазках крови властных 15 %, нейтрофильные палочкоядерные 12— клеток — бластемия. Количество властных 15 %, нейтрофильные сегментоядерные 25— Т а б л и ц а 26. Изменения лейкоцитарной формулы при некоторых лейкозах Властные Незрелые Зрелые Форма лейкоза Лимфоциты Моноциты клетки гранулоциты гранулоциты Острые лейкозы В большом В небольшом Значительно Нормальны Снижены количестве количестве снижены или снижены » Хронический Единичные, В значитель- Несколько Снижены миелолейкоз при властном ном количест- снижены кризе — резко ве повышены Сублейкеми- Единичные В небольшом Иногда сни- Снижены или Снижены или ческий миелоз количестве жены нормальны нормальны Эритремия Обычно от- Отсутствуют Увеличены Нормальны Нормальны сутствуют или единичные или снижены или снижены Хронический Единичные Часто отсут- Резко сниже- Резко увели- Снижены лимфолейкоз ствуют ны чены Хронический Единичные Единичные То же Нормальны Резко увели моноцитарный или отсут- или отсут- или снижены чены лейкоз ствуют ствуют 35 %, эозинофилы незрелые 1—3 %, эозинофилы Хронический лимфолейкоз имеет типичные изменения лейкоцитарной формулы в виде выра зрелые 2—6 %, базофилы 1—3 %, лимфоциты женного лимфоцитоза, достигающего 80—90 %.

5—10 %, моноциты 2—3 %. Прогностически неблагоприятным признаком является увеличе- При этом лимфобласты не превышают 0,5—2 %, пролимфоциты — 3—5 %. Остальные лимфоид ние незрелых форм, базофилов и уменьшение ные элементы представлены зрелыми лимфоци зрелых нейтрофилов.

тами. Число зрелых нейтрофилов резко умень шено (8—15%), незрелые гранулоциты, как правило, отсутствуют или единичные (0,5—1 %).

Таблица 27. Цитохимическая характеристи Характерным морфологическим признаком лим ка властных клеток при острых лейкозах фопролиферации является наличие в мазках крови теней Боткина — Гумпрехта. Лейкемиче Активность ские лимфоциты нередко морфологически не а-наф- хлора- отличаются от нормальных, обычно узкоплаз Форма ШИК перок- тилаце- цетат- менные, иногда голоядерные формы, реже с би лейкоза реакция тат-эс- эсте сидазы полярно вытянутой цитоплазмой. Значительный теразы разы полиморфизм клеток выявляется при волосато клеточном лейкозе, когда клетки имеют неров _ _ Миело- ные контуры (как бы «фестончатые»), ци + + топлазма интенсивно и неравномерно окра бластный (диффуз ное рас- шена.

При плазмоцитоме и макроглобулинемии положе Вальденстрема изменения лейкоцитарной фор ние) мулы не столь постоянны, как при хроническом Промиело- То же + ± + лимфолейкозе. Они могут либо отсутствовать, цитарный Монобла- ± ± либо характеризоваться умеренным лимфоци + ± тозом, моноцитозом. При плазмоцитоме в маз стный (диффуз ках крови может быть небольшое количество ное рас плазматических клеток, значительное увеличе положе ние их наблюдается редко. Хронический моно ние) Лимфо- — — цитарный лейкоз отличается значительным + ± моноцитозом, в лейкоцитарной формуле мо бластный ( гра ну гут быть единичные монобласты и промо лярное ноциты.

располо Тромбоциты. Тромбоцитопения наблюдает жение) ся обычно при острых лейкозах и в развернутой, особенно терминальной стадии хронических лейкозов. При миелопролиферативных заболе ваниях в начальной стадии часто встречается В терминальной стадии при развитии власт тромбоцитоз. М. С. Дульцин отметил этот ного криза резко увеличивается количество симптом у 75 % больных в начальной стадии властных клеток. При эритремии отмечается хронического миелолейкоза. Тромбоцитоз, нейтрофилез обычно с палочкоядерным сдвигом.

иногда значительный, является постоянным ных для исключения миеломной болезни, симптомом эритремии. болезни Вальденстрема.

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ).

Небольшое увеличение СОЭ может быть при Ли т е р а т у р а. Абрамов М. Г. Гематоло острых и хронических лейкозах, хотя это далеко гический атлас.— М.: Медицина, 1979;

Воро не обязательный гематологический признак. бьев А. И. Бриллиант М. Д. Острые лейкозы.— При выраженной интоксикации СОЭ увеличена, В кн.: Руководство по гематологии / Под ред.

при гнойно-воспалительных осложнениях резко А. И. Воробьева, Ю. И. Лорие, М., 1979, с. 155;

увеличена. Характерно резкое увеличение СОЭ Дульцин М. С. Хронический миелоидный лей (50—70 мм/ч) при парапротеинемических гемо- коз.— В кн.: Лейкозы. М.: Медицина, 1965, бластозах. Этим симптомом часто манифести- с. 215;

Морозова В. Т. Лабораторная диагности рует заболевание и требует обследования боль- ка лейкозов.— Л.: Медицина, 1977.

3.7. КОСТНЫЙ МОЗГ Исследование костного мозга проводят с Ход о п р е д е л е н и я. Пунктат костного диагностической целью для подтверждения или мозга разводят в 200 раз, для чего в пробирку установления диагноза, главным образом раз- с 4 мл слабого раствора уксусной кислоты вносят личных форм гемобластозов и анемий. Диагно- пипеткой 0,02 мл пунктата (в таком виде пробир стическое значение имеет исследование костного ка должна быть для дальнейшего исследования мозга при поражении его лимфогранулемато- доставлена в лабораторию). Содержимое зом, туберкулезом, болезнью Гоше, Ниманна — пробирки тщательно перемешивают и заполняют Пика, метастазами рака. Широко проводят счетную камеру (заполнение камеры и ее под исследование костного мозга при острых лейко- готовку к работе см. 3.2.1). После оседания зах с прогностической целью, для контроля за форменных элементов (через 1—2 мин) под терапией. считывают миелокариоциты, т. е. все ядерные Для исследования костного мозга произво- элементы в 100 больших квадратах (аналогично дят пункцию грудины или подвздошной кости подсчету числа лейкоцитов в крови).

с последующим цитологическим анализом мазков Рассчитывают количество миелокариоцитов пунктата, а также трепанобиопсию подвздошной на 1 мкл пунктата по следующей формуле:

кости с последующим гистологическим исследо ванием срезов костного мозга.

3.7.1. Пункция костного мозга где X — число миелокариоцитов в 1 мкл пункта Пункцию грудины или подвздошной кости та;

п — количество миелокариоцитов в проводят в процедурном кабинете с соблюде- больших квадратах;

200 — разведение;

250 — нием правил асептики. Техника пункции подроб- множитель для приведения к 1 мкл, так как но описана. Для проведения качественного исследования необходимо обратить внимание на тщательное обезвоживание иглы Кассирского и шприца, так как примесь воды повреждает Практически число подсчитанных в 100 боль клеточные элементы.

Учитывая быструю свертываемость содержи- ших квадратах миелокариоцитов умножают мого пунктата, необходимо его по получении на 500.

тотчас развести (для подсчета кариоцитов) и Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. Количество быстро приготовить мазки. Дальнейшую обра- миелокариоцитов колеблется в широких пре ботку мазков пунктата производят так же, как делах (41600—195000;

отклонения 1,5 S) и и мазков крови. При необходимости клетки в большой степени зависит от разведения пунк костномозгового пунктата могут быть окрашены тата кровью.

цитохимическими методами (см. 3.4.5). Кл и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Количе ство миелокариоцитов дает ориентировочное представление о клеточности костного мозга.

3.7.2. Подсчет миелокариоцитов Увеличение количества миелокариоцитов ха рактерно главным образом для лейкозов миело Пр и н ц и п. Разведение пунктата, подсчет пролиферативной природы, особенно выражено клеток в счетной камере в определенном коли- оно при хроническом миелолейкозе. Умеренное честве квадратов с последующим пересчетом на увеличение наблюдается после кровопотери, 1 мкл пунктата. при гемолитических анемиях. Уменьшение коли Р е а к т и в ы. 3—5 % раствор уксусной кис- чества ядерных клеток свидетельствует об апла лоты. зии кроветворения, может быть при агрануло С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. цитозе, после лучевой и цитостатической те Счетная камера Горяева. 2. Микроскоп. рапии.

Лит е р а т у р а. Грибова И. А. Гематоло- ним симптомом хронических лейкозов миелопро гическая норма.— В кн.: Руководство по гема- лиферативной природы, особенно эритремии.

тологии / Под ред. А. И. Воробьева, Ю. И. Ло- Мегакариоцитоз костного мозга характерен рие. М.: Медицина, 1979, с. 54. также для геморрагической тромбоцитемии, может наблюдаться после кровопотери, при раке, циррозах печени с гиперспленизмом, 3.7.3. Подсчет мегакариоцитов тромбоцитопенической пурпуре. Уменьшение числа мегакариоцитов характерно для острых Количество мегакариоцитов можно оценить лейкозов, лимфопролиферативных заболеваний ориентировочно, просматривая под малым уве- и особенно в резкой степени — при апласти личением микроскопа мазки пунктата костного ческих анемиях.

мозга или срезы трепаната костного мозга, или Ли т е р а т у р а. Крылов А. А., Дмитриев подсчитывать число клеток в счетной камере.

В. И. Воен.-мед. журн., 1970, № 1, с. 80—81;

Подсчет в счетной камере. Пр и н ц и п.

Малаховский Ю. Е. Лаб. дело, 1964, № 12, Разведение пунктата и подсчет гигантских кле с. 729—733;

Ярустовская Л. Э. Пробл. гематол.

ток костного мозга в счетной камере в опреде и перелив, крови, 1966, № 11, с. 41—46.

ленном количестве квадратов с последующим пересчетом на 1 мкл пунктата.

Ре а к т и в ы. 3—5 % раствор уксусной кис 3.7.4. Морфологическое исследование лоты.

форменных элементов с подсчетом Сп е ц и а л ь н о е обору д ов а ние. Счет миелограммы ная камера Фукса — Розенталя. 2. Микроскоп.

Ход о пр е д е л е ния. Разводят пунктат костного мозга в 20 раз, для этого предвари- Проведению морфологического исследова тельно вносят в пробирку 0,4 мл раствора ук- ния пунктата костного мозга должны предше сусной кислоты и затем 0,02 мл пунктата (в та- ствовать подготовка предметных стекол, при ком виде пробирку доставляют в лабораторию). готовление и окраска препаратов аналогично приготовлению и окраске препаратов перифери Подсчет мегакариоцитов (гигантских клеток) производят во всей сетке;

при окончательном ческой крови (унифицированы — см. 3.3.2).

расчете на 1 мкл пунктата умножают на разве- В табл. 28—31 приведены характеристики дение пунктата (20) и делят на объем камеры и основные морфологические признаки эритро (3,2). кариоцитов, незрелых миеломоноцитарных эле Но р ма л ь н ые в е л и ч и н ы. У здоровых ментов и их предшественников, незрелых лим взрослых людей количество мегакариоцитов со- фоидных элементов и их предшественников и ставляет 63 ± 10 или 83 ± 13,86 в 1 мкл пункта- мегакариоцитарных элементов. Зрелые грануло та. У детей в возрасте 5 мес — З'/2 года коли- циты, лимфоциты, моноциты в мазках пунктата чество мегакариоцитов выше, чем у взрослых костного мозга не отличаются от таковых пери (116 ± 10,8 в 1 мкл пунктата). ферической крови (см. табл. 25).

Кл и н и ч е с к о е з на ч е ние. Увеличе- Метод Аринкина. Пр и н ц и п. Дифферен ние количества мегакариоцитов является ран- цировка форменных элементов в окрашенных Та б л и ц а 28. Характеристика эритрокариоцитов костного мозга Нормобласт Признаки Эритробласт Пронормобласт полихромато базофильный оксифильный фильный Размер, мкм 12—20 10—20 9—18 8—12 8- Ядро:

структура Сетчатая или Комковатая Крупные нити с Колесовидная Пикнотичная хроматина зернистая с без нуклеол тенденцией к нуклеолами колесовидной окраска Светло-фиоле- Светло-фиоле- Фиолетовая Темно-фиоле- Темно-фиолето товая товая товая вая расположение Центральное Центральное Центральное, Центральное Эксцентричное иногда эксцен- или эксцент тричное ричное Цитоплазма:

размер Узкая Узкая Относительно Широкая Широкая широкая окраска Интенсивно Синяя с более Светло-синяя Серовато-голу- Бледно-розо синяя со свет- светлой пери- бая или серо- вая, розовая лой перинукле- нуклеарной вато-розовая арной зоной зоной Та б л иц а 29. Характеристика незрелых миеломоноцитарных элементов и их предшественников Признаки Миелобласт Промиелоцит Миелоцит Метамиелоцит Монобласт Промоноцит Размер, мкм 15—20 18—25 10—18 10—16 15—20 16— Ядро: Круглое Круглое или Круглое, Бобовидное, Круглое, Круглое с форма крупное овальное овальное подковообраз- бобовидное волнистыми или с вдав- ное с волнисты- контурами, лением ми контура- иногда поли ми морфное структура Нежная, Мелкосет- Глыбчатая Неравномер- Мелко сет- Крупно-зер мелкосетча- чатая, иног- ная, глыбчатая чатая нистая тая да с утол щенными нитями нуклеолы 2 — 5, отчет- 1 — 3, отчет- Не видны Не видны 2—3, отчет- Не видны ливые ливые ливая окраска Светло- Светло- Фиолетовая Фиолетовая Светло- Светло фиолетовая фиолетовая фиолетовая фиолетовая Цитоплазма:

зона Узкая Узкая, иног- Относи- Относитель- Узкая Умеренно да широкая тельно ши- но широкая широкая рокая окраска Голубая, Голубая, Светло-ро- Светло-розовая Синяя, свет- Светло-си светло-си- сероватая зовая, свет- ло-синяя няя, серова няя ло-фиолето- тая вая зернистость Непостоян- Нейтрофи- Нейтрофи- Нейтрофиль- Непостоян- Непостоян но, одиноч- льные — льные — ные — мелкая но, иногда но, иногда ные мелкие обильная, бледно-фи- бледно-фиоле- одиночные, мелкая пы гранулы крупная, олетовая, товая;

эозино- мелкие левидная, фиолетовая;

мелкая с фильные — гранулы светло-фио эозинофиль- более круп- крупная;

розо- летовая ные — ными грану- вая, обильная;

обильная, лами;

эози- базофильные — крупная, нофильные — крупная, не фиолетовая, крупная ро- равномерная, с эозинофи- зовая, жел- необильная, льными гра- товатая с от- фиолетовая нулами;

ба- дельными зофильные базофиль с темно-фи- ными грану олетовыми лами;

базо гранулами фильные — неравномер ная, круп ная, нео бильная, фиолетовая мазках пунктата с выведением миелограммы, ческие клетки, клетки Березовского — Штерн т. е. процентного содержания различных миело- берга, клетки Гоше и др.). В случае выявления кариоцитов. таких (или других) патологических элементов Ре а кт ив ы. 1. Иммерсионное масло. 2. Ди- необходимо нанести каплю масла на препарат, этиловый эфир. перевести на иммерсионный объектив и рас Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е. 1. смотреть морфологию этих элементов.

Микроскоп. 2. 11-Клавишный счетчик для под- После просмотра мазков под малым увели счета лейкоцитарной формулы. чением наносят каплю иммерсионного масла Ход о пр е д е л е ния. Просматривают на мазок, погружают в него иммерсионный препараты под малым увеличением для ориенти- объектив и приступают к дифференцированию ровочного представления о клеточности костного форменных элементов. Для подсчета миелограм мозга, наличии и числе мегакариоцитов, для мы необходимо дифференцировать не менее исключения патологических элементов (компле- миелокариоцитов в разных участках препарата.

ксы атипических клеток или одиночные атипи- Подсчитывают все встречающиеся в поле зрения Та б л иц а 30. Характеристика незрелых лимфоидных элементов и их предшественников Признаки Лимфобласт Пролимфоцит Плазмобласт Проплазмоцит Размер, мкм 12—20 10—15 16—25 10— Ядро:

форма Круглое, овальное Круглое, овальное Круглое Круглое, эксцент рично расположено структура Нежная, мелко- Крупноглыбчатая Мелкосетчатая Крупноглыбчатая, комковатая иногда колесовид ная нуклеолы 1 — 2, отчетливы Непостоянны 1 — 2, отчетливы Непостоянны окраска Светло-фиолето- Светло-фиолето- Светло-фиолето- Фиолетовая вая вая, фиолетовая вая Цитоплазма:

зона: Узкая Относительно Узкая Широкая широкая окраска Синяя, светло- Светло-синяя Интенсивно синяя Интенсивно синяя, синяя с более свет- с перинуклеарным сероватая, иногда лой перинуклеар- просветлением с перинуклеарным ной зоной просветлением Та б л ица 31. Характеристика мегакариоцитарных элементов Мегакариоцит Мегакарио- Промега Признак полихромато бласт кариоцит базофильный оксифильный фильный Размер, мкм 18—20 20—25 30—40 40—50 60— Ядро:

форма Округлое С бухтообраз- Лопастное, с Многолопаст- Многолопаст ными вдавле- бухтообразны- ное, гиперсег- ное, гиперсег ниями ми вдавления- ментированное ментированное ми структура Мелкосетчатая, В виде клубка В виде клубка В виде клубка Плотная, пикно в виде клубка или шаров типичная с видимыми ну клеолами окраска Бледно-фиоле- Фиолетовая Фиолетовая Темно-фиоле- Темно-фиоле товая товая товая Цитоплазма: Узкая, иногда зона с отростками Узкая, иногда Неширокая Широкая Широкая с отростками окраска Синяя, светло- Синяя Голубая, свет- Светло-голубая Розоватая синяя ло-синяя зернистость Обычно отсут- Обычно отсут- Азурофильная, Обильная, не- Мелкая, обиль ствует ствует необильная равномерная, ная, светло местами скоп- фиолетовая ления напоми нают тромбоци ты, иногда пос ледние распо лагаются вне клеток элементы, откладывая их количество с помощью много элементов и для облегчения подсчета 11-клавишного счетчика, недостающие обозна- можно использовать окуляр с уменьшенным чения (например, все формы эритрокариоцитов, полем зрения (см. 3.3.6). После подсчета плазмоцитов и др.) отмечают отдельно на бума- клеток делят число клеток каждого вида на ге. При большом содержании миелокариоци- (при подсчете 1000 клеток делят на 10) и выдают тов в мазках в поле зрения обнаруживают ответ в процентах.

Но р м а л ь н ые в е л и ч и н ы. В соответ- мальных значений (X±1,5S %) миелограммы ствии с обобщенными данными пределы нор- следующие.

Недифференцированные бласты 0,1 — 1, Миелобласты 0,2—1, Нейтрофильные промиелоциты 1,0—4, » миелоциты 7,0—12, » метамиелоциты 8,0—15,0 52,7—68, » палочкоядерные 12,8—23, » сегментоядерные 13,1—24, Эозинофилы (всех генераций) 0,5—5, Базофилы 0—0, Эритробласты 0,2—1, Пронормобласты 0,1 — 1, Нормобласты базофильные 1,4—4,6 14,5—26, » полихроматофильные 8,9—16, » оксифильные 0,8—5, Лимфоциты 4,3—13, Моноциты 0,7—3, Плазматические клетки 0,1 — 1, Ретикулярные клетки 0,1 — 1, Лейкоэритробластическое отношение 2,1—4, Кл и н и ч е с к о е з на ч е ние. Увеличе- плазматических клеток часто может быть про ние властных клеток с появлением полиморф- явлением гипопластической анемии. Эти формы ных, уродливых форм с атипией ядер, укрупнен- малокровия могут протекать и с увеличением ными нуклеолами наблюдается при острых эритроидных клеток, появлением атипичных лейкозах. В миелограмме при этом снижено эритробластов (мегалобластоидных форм).

число зрелых неитрофилов и эритрокариоцитов. Обнаружение в миелограмме повышенного Увеличение миелоидных элементов главным количества эозинофилов свидетельствует об образом за счет незрелых форм, сочетающееся аллергии, может быть при глистной инвазии, с небольшим увеличением миелобластов, про- эозинофильных инфильтратах, злокачественных миелоцитов, повышением лейкоэритробласти- новообразованиях, эозинофильной гранулеме и ческого соотношения и уменьшением эритро- др. Увеличение моноцитоидных клеток наблю кариоцитов, является признаком миелопроли- дается при хроническом моноцитарном лейкозе, ферации и особенно выражено при хрониче- инфекционном мононуклеозе, при хронических ском миелолейкозе. инфекциях. Тучные клетки могут обнаруживать Увеличение миелоидных элементов и их ся в миелограмме при пигментной крапивнице незрелых форм нередко сопутствует интоксика- и в редких случаях тучно-клеточного лейкоза циям, острым воспалительным процессам, гной- (мастоцитома).

ным инфекциям, может быть при шоке, острой Для оценки реакций костного мозга предло кровопотере, гематосаркомах, туберкулезе, раке. жено пользоваться парциальными миелограм Увеличение лимфоидных элементов в основном мами, т. е. соотношением незрелых и зрелых за счет зрелых, появление голоядерных форм элементов одного ряда (эритрограмма, мега при значительной редукции эритрокариоцитов кариоцитограмма и пр.), однако в клинической являются признаком лимфопролиферативных практике эти исследования проводят редко.

заболеваний (хронический лимфолейкоз, макро Ли т е р а т у р а. Аринкин М. И. Методика глобулинемия Вальденстрема). Увеличение исследования при жизни костного мозга.— плазматических клеток с изменением их морфо В кн.: Клиника болезней крови и кроветвор логических черт (полиморфизм, двухъядерные ных органов. Л., 1928, с. 34;

Соколов В. В., формы, изменение окраски цитоплазмы и пр.) Грибова И. А. Гематологические показатели характерно для плазмоцитомы.

здорового человека.— М., 1972.

Изменение эритрокариоцитов с резким уве личением их числа и уменьшение лейкоэритро бластического соотношения наблюдаются при анемиях (постгеморрагические, гемолитиче ские). Изменение морфологических черт эри- 3.7.5. Трепанобиопсия костного мозга троидных элементов, появление мегалобластов разных генераций (табл. 32), крупных форм Трепанобиопсию костного мозга проводят нейтрофильных миелоцитов, метамиелоцитов, для диагностики алейкемических форм лейкозов, гиперсегментированных неитрофилов свидетель- эритремии, миелофиброза и других миелопроли ствуют о B12- или фолиево-дефицитных анемиях. феративных и лимфопролиферативных заболе Уменьшение эритроидных форм на фоне сниже- ваний, при подозрении на гипопластические ния общего числа миелокариоцитов с небольшим анемии, метастазы рака в костный мозг и при увеличением бластных клеток, лимфоцитов, неясных изменениях пунктата костного мозга.

Та б л иц а 32. Характеристика мегалобластических элементов Мегалобласт Признаки Промегалобласт полихромато базофильный оксифильный фильный Размер, мкм 18—25 18—24 16—22 15— Ядро:

форма Круглое, иногда с Круглое Круглое Круглое, эксцент неровными конту- рично расположе рами но структура Нежная, мелкозер нистая Крупнозернистая Крупнозернистая Крупнозернистая, иногда крупноком коватая окраска Бледно-фиолето- Бледно-фиолето- Бледно-фиолето- Фиолетовая вая вая вая Цитоплазма Сине-сиреневая с Светло-синяя, се- Широкая, серова- Широкая, розового перину клеарным роватая с перину- то-розового цвета цвета розоватым просве- клеарным про тлением светлением Трепанобиопсию костного мозга проводят а затем в хлороформ с парафином при 37 °С, по методу Мачульского. Приготовление срезов на 18 ч. Парафин I, парафин II — по 1—2 ч, костного мозга, их окраску осуществляют в парафин III — 1 '/2 — 1ч, заливают в парафин.

гистологической лаборатории по правилам Готовят среды и окрашивают их азур П-эози гистологической обработки костных тканей. ном. Для выявления ретикулиновых волокон Метод гистологической обработки трепана- проводят импрегнацию серебром по Гомори.

та (Ленинградский институт гематологии и Гистологическое исследование срезов кост переливания крови). Трепанат фиксируют в ного мозга дает возможность изучить архитекто ценкерформоле (9 частей жидкости Ценкера нику органа, соотношение кроветворной и жиро и 1 часть 40 % формалина) в течение 10—16 ч. вой ткани и выявить атипичные клетки.

Промывают водопроводной водой. Помещают в смесь, состоящую из равных частей 85 % му равьиной кислоты и 20 % цитрата натрия на Ли т е р а т у р а. Мачульский Л. М. Метод 18—20 ч. Помещают в 5 % раствор алюмо- трепанобиопсии в гематологии (методическое калиевых квасцов на 3—4 ч. Проводят через пособие).— Киров, 1965;

Теодорович В. П., спирты: 70 % — 24 ч, 96 % — 1—2 сут. Погру- Абдулкадыров К- М. Трепанобиопсия костного жают в жидкий целлоидин с гвоздичным маслом мозга при некоторых гематологических заболе на 2—3 сут. Помещают в хлороформ на 2—3 ч, ваниях.—Л., 1977, с. 11.

3.8. ЛИМФАТИЧЕСКИЕ УЗЛЫ Исследование лимфатических узлов широко тивным, однако, является сочетанное исследо применяется для диагностики гемобластозов, вание — биопсия лимфатического узла, приго особенно гематосарком (лимфогранулематоз, товление отпечатков из поверхности разреза лимфомы), метастазов рака, туберкулеза, сарко- с цитологическим исследованием отпечатков и идоза. Информативным является исследование дальнейшее приготовление срезов с гистологи лимфатических узлов при инфекционном моно- ческим их анализом. Такое сочетанное исследо нуклеозе, неспецифических лимфаденитах. вание позволяет изучить морфологию отдельных Для морфологического исследования про- клеточных элементов и гистологическую структу изводят пункцию узла с последующим цито- ру узла, что особенно важно при лимфогрануле логическим анализом мазков пунктата, а также матозе, различных лимфомах и других злока биопсию лимфатического узла с гистологиче- чественных опухолях.

ским исследованием срезов..

Хотя пункция лимфатического узла является 3.8.1. Цитологическое исследование чрезвычайно простой процедурой и может про водиться повторно с одновременной пункцией Для цитологического исследования лимфати узлов различной локализации, более информа- ческих узлов готовят мазки из пунктата или отпечатки узлов, полученных при биопсии. Пунк- Т а б л и ц а 33. Лимфаденограмма при неспе ция лимфатического узла проводится с соблюде- цифических лимфаденитах нием правил асептики. Техника пункции не сложная;

для этого необходимы высушенные обезвоженные шприц и игла. Подготовку пред метных стекол, их обработку, окраску препара тов проводят аналогично обработке препаратов периферической крови (см. 3.3.2).

Исследование лимфаденограммы. Прин цип. Подсчет клеток в мазках пунктата и выведение их процентного соотношения.

Ре а к т ив ы. 1. Иммерсионное масло. 2. Ди этиловый эфир.

Сп е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е.

1. Микроскоп. 2. 11 -Клавишный счетчик для под счета лейкоцитарной формулы.

Ход о п р е д е л е н и я. Просматривают препараты под малым увеличением для выявле ния патологических элементов (комплексы ати пических клеток, одиночные крупные атипи ческие клетки, клетки Березовского — Штерн берга, Пирогова — Лангханса и др.). В случае нахождения таких (или других) патологических элементов наносят каплю иммерсионного масла на данное место препарата, переводят на иммер сионный объектив и рассматривают морфологию патологических элементов (см. ниже).

После просмотра мазков под малым увеличе- При острых лимфаденитах в лимфадено нием приступают к микроскопии с помощью грамме увеличивается, а иногда и преобладает иммерсионного объектива. Наносят каплю им- количество нейтрофилов, появляются макрофа мерсионного масла на край препарата, погру- ги. Обнаружение в пунктате лимфатического жают в него иммерсионный объектив и диф- узла иммунобластов — крупных клеток с резко ференцируют форменные элементы. Для вы- базофильной цитоплазмой, большим округлым ведения лимфаденограммы дифференцируют не ядром гомогенной структуры с отчетливыми менее 500 клеток, отмечая их с помощью нуклеолами — является морфологическим вы 11-клавишного счетчика, и выдают ответ в про- ражением антигенной стимуляции и наблюдает ся при различных воспалительных процессах, центах.

Но р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы. Данные инфекциях (в частности, при инфекционном мо о нормальных величинах весьма ориентиро- нонуклеозе), аллергических реакциях, после вочны, так как они получены у людей с увели- вакцинации.

ченными лимфатическими узлами (в норме Ли т е р а т у р а. Бычкова Е. Н., Демидова увеличения лимфатических узлов не наблюдает Н. В. Цитологические критерии дифференциаль ся).

ной диагностики злокачественных лимфом и ре По данным М. Г. Абрамова, преобладающи активных лимфаденопатий (методические ре ми элементами (до 98 %) нормального лимфа комендации).— М., 1979, с. 9;

Яновский Д. Н., тического узла являются лимфоциты и про Чепелева М. А. Атлас цитологии пунктатов лимфоциты. Морфология лимфоцитов не отли лимфатических узлов.— Киев, 1969, с. 3.

чается от таковой периферической крови (см.

3.4.2). Пролимфоциты отличаются от лимфо цитов несколько большими размерами, более Исследование патологических элементов.

светлоокрашенным и менее компактным ядром. В клинической практике при цитологическом ис Единичные клетки (не более 1 %) относят к следовании препаратов чаще прибегают к по иску патологических элементов, имеющих диаг лимфобластам — крупные клетки с округлым большим ядром, имеющим нежную структуру ностическое значение.

Пр и н ц и п. Тщательный и целенаправлен хроматина и отчетливо видимые 1—2 нуклеолы;

цитоплазма базофильная в виде узкой зоны ный поиск патологических элементов под малым с перинуклеарным просветлением. В нормальной увеличением и затем с иммерсионным объекти лимфаденограмме встречаются единичные ткане- вом микроскопа.

Р е а к т и в ы и о б о р у д о в а н и е. См.

вые тучные клетки, макрофаги, плазматические Исследование лимфаденограммы.

клетки.

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е. Исследо- Ход о п р е д е л е н и я. Просматривают вание лимфаденограммы имеет определенное мазки (по возможности все мазки, полученные диагностическое значение при неспецифических при пункции) под малым увеличением микро лимфаденитах. По данным Е. Н. Бычковой, скопа. При обнаружении крупных одиночных при реактивных лимфаденитах отмечено увели- клеток или комплексов клеток детально ис чение ретикулярных клеток, появление иммуно- следуют их с иммерсионным объективом. При отсутствии видимых под малым увеличением бластов, макрофагов (табл. 33).

ских клеток тщательно просматри- плазии резко выражены и возникают трудности вают препараты с иммерсионным объективом. в дифференциации гистиоцитарной лимфомы и Эл е ме н т ы л и м ф о г р а н у л е м ы. Ди- метастатического поражения лимфатического агностическими клетками при лимфогранулема- узла недифференцированной формой рака.

тозе являются клетки Березовского — Штерн- Эл е ме н т ы т у б е р к у л е з н о й г ра берга — крупные (в среднем 40—50 мкм) элементы н у л е мы. Гигантская клетка Пирогова — с несколькими ядрами (иногда одноядерные), Лангханса (размер 30—50 мкм) характеризует отличающиеся полиморфизмом, гиперхромией, ся многочисленными эксцентрично расположен крупными или множественными мелкими нуклео- ными ядрами вытянутой формы с нежной струк лами. Цитоплазма широкая, окрашена в светлые турой хроматина и светлой цитоплазмой, или интенсивно-базофильные тона. В клетках окрашенной в голубоватый или серовато-голу отчетливо выявляются указанные признаки зло- бой цвет.

качественной анаплазии — полиморфизм клеток В препарате, кроме того, встречаются эпите и ядер, анизохромия, укрупненные нуклеолы, лиоидные клетки, отличающиеся вытянутой изменение ядерно-цитоплазменного соотноше- (овальной, бобовидной) формой ядер с нежной ния. При этом заболевании в мазках пунктата структурой хроматина, иногда с видимыми наряду с клетками Березовского — Штернберга нуклеолами и светло-синей цитоплазмой. Диаг обнаруживают плазматические клетки, эозино- ноз туберкулезного лимфаденита можно без филы, ретикулярные клетки, клетки Ходжкина — ошибочно ставить, если при пункции получен предшественники клеток Березовского — Штерн- творожистый пунктат, а в препарате скудное берга, отличающиеся от последних меньшими количество клеток на фоне бесструктурного размерами, наличием одного ядра, нежной детрита. В отличие от туберкулеза при саркои структуры. Клетки эти также характеризуются дозе, сифилисе отсутствует в пунктате детрит, атипией, наличием крупных нуклеол. По цитоло- но можно обнаружить, как и при туберкулезе, гической картине пунктата можно предполагать эпителиоидные клетки и гигантские клетки вариант лимфогранулематоза, но более досто- Пирогова — Лангханса.

верные данные получают при гистологическом Эл е ме н т ы ме т а с т а т и ч е с к о г о исследовании биопсированных лимфатических п о р а ж е н и я р а к о м. При метастазах рака узлов. в лимфатический узел обнаруживают комплексы Эл е ме нт ы з л о к а ч е с т в е н н ых атипических клеток с выраженным полимор л и м ф о м — замещение нормальных элементов физмом, стертостью клеточных границ, анизо лимфатического узла опухолевыми, морфология цитозом клеток и ядер, анизохромией их. Наряду которых зависит от варианта лимфомы (лимфо- с гигантскими клетками и интенсивно окрашен саркомы). ным ядром имеются более мелкие элементы Лимфобластная лимфосаркома. Пунктат с ядром нежной структуры и крупными нуклео состоит из однотипных клеток, морфологически лами. По морфологическим особенностям атипи напоминающих лимфобласты с явлениями ана- ческих клеток можно предполагать метастаз плазии и имеющих округлую форму с крупными плоскоклеточного, железистого или недиффе круглыми или полиморфными ядрами, нежную ренцированного рака. На основании цитологи структуру с единичными крупными нуклеолами;

ческой картины пунктата можно высказать цитоплазма обычно неширокая, базофильная предположение и о локализации первичного или более светлая: в препарате много голоядер- очага опухоли. Однако с уверенностью опреде ных форм. лить локализацию первичной опухоли удается в Пролимфобластная лимфосаркома. Преоб- тех случаях, когда опухоль имеет морфологи ладают опухолевые элементы с чертами пролим- ческие черты, свойственные тому органу, где фоцитов — клетки меньших размеров, чем в пре- образовалась опухоль. Это в первую очередь дыдущем варианте, ядра округлые, полимор- относится к гипернефроидному раку, раку щито физм выражен нерезко, структура ядер гомоген- видной железы, яичка. В отношении метастазов ная, видны 1—2 нуклеолы. Цитоплазма голубая, рака молочной железы, желудочно-кишечного неширокая;

много голоядерных форм.

тракта, легких, не имеющих характерных морфо Лимфоцитарная лимфосаркома (лимфоцито- логических особенностей, можно высказать ма). Преобладают опухолевые клетки с морфо- лишь предположение на основании определен логическими чертами, свойственными зрелым ных типов цитологической картины. При мета лимфоцитам,— мелкие клетки с плотным темно- стазе меланомы опухолевые клетки в пунктате окрашенным ядром без видимых нуклеол и с отличаются наличием гранул пигмента мелани базофильной цитоплазмой. Морфологическая на сероватого и серовато-черного цвета. Меланин анаплазия выражена умеренно. Много голо- может располагаться и внеклеточно, а в редких ядерных форм. При этом варианте цитологи- случаях беспигментной меланомы и вовсе от ческое исследование дает мало опорных пунктов сутствовать.

для диагностики.

Эл е м е н т ы л е й к е м и ч е с к о й ин Гистиоцит арная лимфома (ретикулосарко- фи л ь т р а ц и и. При острых лейкозах в маз ма). Преобладают крупные клетки с выражен- ках пунктата лимфатического узла обнаружи ной анаплазией гистиоцитарного или ретикуляр- вают тотальную властную инфильтрацию.

ного типа. Клетки отличаются резким полимор- Властные клетки отличаются полиморфизмом, физмом ядра с нежносетчатой структурой и по некоторым морфологическим, а особенно ци крупными нуклеолами, чаще неширокой цито- тохимическим показателям возможна идентифи плазмой. Иногда явления злокачественной ана- кация варианта острого лейкоза (см. 3.6). При хроническом миелолейкозе и других миелопро- 3.8.2. Гистологическое лиферативных заболеваниях в пунктате лимфа исследование тического узла обнаруживают наряду с неболь шим количеством властных клеток миелоидные Биопсию лимфатических узлов проводят элементы разной стадии зрелости (см. 3.6). При хирурги с соблюдением правил операционной лимфопролиферативных заболеваниях имеет техники.

место пролиферация в лимфатических узлах Для большей информативности удален опухолевых лимфоидных клеток, однако цитоло ный узел разрезают, из поверхности разреза гическое исследование их при этой патологии готовят отпечатки, которые направляют на цито малоинформативно. В неясных случаях, при логическое исследование (3.8.1). Всю ткань атипичном течении прибегают к биопсии лимфа удаленного лимфатического узла направляют тического узла с последующим гистологическим в гистологическую лабораторию, где производят анализом.

обработку ее с приготовлением и окраской сре Эл е ме н т ы г и с т и о ц и т о з а. При гис зов лимфатических узлов. Трактовка данных тиоцитозе X обнаруживают в мазках лимфа гистологического исследования лимфатиче тических узлов пролиферацию гистиоцитов. Для ских узлов представлена в специальной лите болезни Леттерера — Зиве характерно наличие ратуре.

крупных клеток (20—25 мкм) с нежным ядром и 1—3 нуклеолами. Цитоплазма широкая, голу бого цвета с выраженной вакуолизацией.

Ли т е р а т у р а. Бычкова Е. Н., Демидо В препарате, кроме атипичных гистиоцитов, име- ва Н. В. Цитологические критерии дифферен ются эозинофилы, плазматические клетки, циальной диагностики злокачественных лимфом лимфобласты, лимфоциты. При болезни Хенда — и реактивных лимфаденопатий (методические Шюллера — Крисчена в препаратах выявляют рекомендации). М., 1979, с. 32;

Вылков И. Пато патологические гистиоциты, содержащие в цито- логия лимфатических узлов.— София, 1980, плазме крупные капли липидов, когда цитоплаз- с. 156;

Лукина Т. А. Метастазы злокачественных ма клеток имеет пенистый вид. При эозинофиль- опухолей в лимфатических узлах.— В кн.: Руко ной гранулеме в редких случаях поражения водство по цитологической диагностике опухо лимфатических узлов выявляют большое коли- лей человека / Под ред. А. С. Петровой, чество эозинофилов на фоне некроза ткани. М. П. Птохова. М., 1976, с. 266.

Раз де л МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА В настоящем разделе выделены методы ис- вания свертывания крови (коагуляционного следования тромбоцитарно-сосудистого гемо- гемостаза) и методы исследования системы фиб стаза (первичного гемостаза), методы исследо- ринолиза.

4.1. ВЗЯТИЕ И ОБРАБОТКА КРОВИ Р е а к т и в ы. 1. 3,8% раствор цитрата термометром, реле и мешалкой. Используется натрия;

растворяют 3,8 г цитрата натрия для приготовления некоторых реактивов и (во (Na3C6H5O7 • 5,5 Н2О) в 100 мл дистиллиро- дяная баня на 37 °С) для проведения боль ванной воды. Хранят в холодильнике. Легко шинства анализов, описываемых в этом разделе.

подвергается бактериальному загрязнению, в 8. Современный холодильник с хорошо изоли связи с чем раствор хранят не более недели. рованной морозильной камерой (для хранения 2. 1,34 % (0,1 моль/л) раствор оксалата натрия. реактивов и исследуемых образцов).

Растворяют 1,34 г оксалата натрия (Nа2С2О2) Т е х н и к а в з я т и я. Кровь берут утром в 100 мл дистиллированной воды. Хранят в натощак путем пункции локтевой вены сухой холодильнике. 3. Этиловый спирт (для обработ- острой иглой с широким просветом без шприца.

ки кожи). Допускается создание кратковременного веноз Об о р у д о в а ни е. 1. Иглы стерильные ного стаза. В случае получения нативной и для венепункции. 2. Пластиковые или стеклян- стабилизированной крови первые капли веноз ные силиконированные пробирки (мерные центри- ной крови выпускают на ватный тампон, так фужные, а также немерные и нецентрифужные). как они могут содержать тканевый тромбо Для взятия крови удобнее всего использовать пластин. За редким исключением (см. описание пластиковые или стеклянные силиконированные методов), кровь стабилизируют 3,8 % раствором центрифужные пробирки вместимостью 5—10 мл, цитрата натрия, поскольку в цитратной крови а для хранения плазмы — пластиковые или (плазме) лучше сохраняются лабильные факто стеклянные силиконированные пробирки раз- ры свертывания крови и тромбоциты.

мером 8—10 X 60—100 мм. 3. Стеклянные При нормальном показателе гематокрита несиликонированные центрифужные и нецентри- кровь и антикоагулянт смешивают в соотноше фужные пробирки. Используют для хранения нии 9: 1, а при значительных отклонениях, от разрушенных тромбоцитов и сыворотки крови, нормы — в соотношениях, указанных в табл. а также для исследования различных показа- (составлена по данным Ingram, Hills, 1982).

телей системы гемостаза (для постановки проб).

Для проведения анализов удобнее всего пользо Та б л и ц а 34. Соотношение объемов 3,8 % ваться пробирками размером 8—10 X 80— раствора цитрата натрия и стабилизированной 100 мм. 4. Стеклянные силиконированные и крови в зависимости от показателя гематокрита несиликонированные пипетки вместимостью 0,1 —10 мл. Силиконированные пипетки исполь Раствор Объем крови Показатель ге зуют для отсасывания или взятия нужного антикоагу- вместе с анти матокрита, % лянта, мл коагулянтом, мл объема крови или плазмы, а несиликонирован ные — для отсасывания или взятия нужного объема суспензии разрушенных тромбоцитов, 20—21 1,4 10, сыворотки крови и химических реактивов. В на- 22—27 1,3 10, стоящее время в нашей стране налажен выпуск 28—33 1,2 10, автоматических пипеток со съемными пластико- 34—39 10, 1, выми наконечниками на 5—1000 мкл, которые 40—45 1,0 10, удобны и пригодны как для обработки крови, 46—51 0,9 10, так и для проведения анализов. 5. Центрифуги 52—57 0,8 10, на разное число оборотов (от 1000 до 10000 58—60 0,7 10, в 1 мин). В ряде случаев необходима рефриже- Более 65 0,5 10, раторная центрифуга (см. описание методов Для новорож исследования). 6. Ледяная баня (кружка со денных 0,25 5, льдом и водой). 7. Водяная баня с контактным Пр и г о т о в л е н и е с т а б и л и з и р о - ные или пластиковые пробирки. До исследо в а н н о й кр о в и. В пластиковую или стеклян- вания показателей свертывания и фибринолиза ную силиконированную мерную центрифужную их хранят в ледяной бане, причем тесты должны пробирку набирают антикоагулянт, ориенти- быть проведены в течение 1—3 ч после взятия руясь на данные табл. 34, и необходимый крови. До исследования функциональной актив для исследования объем крови. Отмечают ности тромбоцитов их хранят при комнатной стеклографом на пробирке уровень, до которого температуре, причем тесты должны быть прове должна быть набрана кровь. Пунктируют локте- дены в течение 1 ч.

вую вену, подставляют пробирку и собирают Пр и г о т о в л е н и е с ыв о р о т к и. Ве свободно вытекающую кровь до метки. Немед- нозную кровь набирают в простую стеклянную ленно перемешивают кровь с антикоагулянтом, пробирку без антикоагулянта и помещают ее не допуская образования воздушных пузырей. на 4 ч в водяную баню при 37 °С или оставляют Ставят пробирку до центрифугирования в ледя- при комнатной температуре на 24 ч. Отсасы ную баню (кровь для исследования функций вают супернатант, центрифугируют его при тромбоцитов охлаждать нельзя). 1500 об/мин в течение 5—10 мин и собирают Пр иг о т о в л е ни е б о г а т о й т ромбо- надосадочную жидкость.

ц и т а м и ( т ром б о ц и т а р н о й ) п л а з мы. Сыворотку для определения продуктов де Стабилизированную кровь центрифугируют при градации фибрина получают из крови, к которой 1000—1500 об/мин (около 300 g) в течение добавляют тромбин и ингибитор фибринолиза 5—7 мин и собирают супернатант. с целью обеспечения наиболее полного превра Пр и г о т о в л е н и е б е д н о й т р о мб о - щения фибриногена в фибрин и устранения ц и т а м и (б е с т ром боц и т а р ной) п л а з- возможности активации системы фибринолиза м ы. Стабилизированную кровь или тромбоци- после взятия крови. В расчете на 10 мл крови тарную плазму центрифугируют при 3000— добавляют 0,1 мл раствора тромбина актив 4000 об/мин (1000—1200 g) в течение 15— ностью 5—10 с и 0,1 мл трасилола. Вместо 20 мин и собирают супернатант. Тромбоцитар- трасилола можно использовать эпсилон-амино ную и бестромбоцитарную плазму отсасывают капроновую кислоту в концентрациях 4— стеклянными силиконированными или пласти- 10 мг/мл. Свернувшуюся кровь инкубируют при ковыми пипетками в стеклянные силиконирован- 37 °С в течение 30—60 мин.

4.2. ОБРАБОТКА ЛАБОРАТОРНОЙ ПОСУДЫ Р е а к т и в ы. 1. Моюще-дезинфицирующий колбы, пробирки, пипетки и иглы заполняют раствор — 4 % раствор перекиси водорода в (при необходимости с помощью шприца и груш) 0,5 % растворе синтетического моющего сред- 5 % или 10 % раствором дихлордиметилсилана ства («Астра», «Новость» и т. п.) (приказ № или трихлорметилсилана в толуоле (раствором МЗ СССР от 8.06.81 г. «Об усилении мероприя- силикона) на 5—10 мин. Силикон сливают (его тий по снижению заболеваемости вирусными можно использовать многократно). Посуду вы гепатитами»). 2. Толуол. 3. 5 % или 10 % раст- сушивают при температуре 180—200 °С. Од вор дихлордиметилсилана или трихлорметилси- нажды покрытую силиконом посуду используют лана в толуоле. 4. Дистиллированная вода. уже всегда как силиконированную, подвергая Об о р у д о в а н и е. 1. Вытяжной шкаф. ее повторной обработке после каждого проведен 2. Сушильный шкаф. 3. Эмалированные тазы, ного исследования.

кастрюли. 4. Шприцы. 5. Набор резиновых груш.

6. Пинцет (для обработки игл). 7. Штативы Лит е р а т у р а. Андреенко Г. В., Караба для пробирок. 8. Набор ершей для мытья по- сова М. А., Лютова Л. В. и др. Методы исследо суды. вания фибринолитической системы крови.— М.:

Мыт ь е з а г р я з н е н н о й посуды. За- Изд. Московск. ун-та, 1981, с. 61—68;

Балу грязненную стеклянную или пластиковую посуду да В. П., Баркаган 3. С., Гольдберг Е. Д.

отмывают с помощью ершей и груш от исследуе- и др. Лабораторные методы исследования систе мого материала и реактивов водопроводной мы гемостаза.— Томск, 1980, с. 55—61, 302— водой. Замачивают на 15—18 ч в моюще-дезин- 303;

Ingram G. I. С., Hills M. Цит.: Архипов фицирующем растворе. Хорошо промывают Б. Ф., Баркаган Л. 3. Показатели аутокоагу водопроводной водой и 3—4 раза дистиллиро- ляционного теста при эритремии.— Лаб. дело, ванной водой. Стеклянную посуду высушивают 1982, № 10, с. 33 (609) — 36 (612);

Ratky S. М., при температуре 180—200 °С, а пластико- Sykes A., Cooke Е. D. et al. Characterisation of вую — при комнатной температуре или в су- serum fibrinogen degradation products using шильном шкафу при температуре не выше 60 °С. gel chromatography and radioimtnunoassay.— С и л и к о н и р о в а н и е п о с у д ы (про- Thrombos. Haemostas., 1977, vol. 37, p. 471 — водится в вытяжном шкафу). Сухие чистые 476.

4.3. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ТРОМБОЦИТАРНО-СОСУДИСТОГО ГЕМОСТАЗА (ПЕРВИЧНОГО ГЕМОСТАЗА) В эту группу входят методы исследования цитопениях, болезни Виллебранда, тяжелых взаимодействия тромбоцитов и кровеносных формах некоторых тромбоцитопатий. При нару сосудов in vivo при стандартизированных по- шениях свертываемости крови (гемофилиях) вреждениях микрососудов кожи (разрез, про- оно обычно остается нормальным или удлиняет кол, венозный стаз) и разнообразные методы ся лишь слегка. Может быть удлинено при исследования тромбоцитов и сосудов in vitro. тяжелых формах тромбогеморрагического Наибольшее клиническое значение имеют синдрома и значительной гепаринемии.

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 13 |



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.